SARS患者SARS冠状病毒RNA的动态检出特点及其意义

目的 观察SARS患者各种临床标本的带毒状况,分析SARS冠状病毒(SARS-CoV)在患者体内的动态变化及其临床意义。方法设计针对SARS-CoV区和N区的2套引物,应用巢式RT-PCR对84例SARS患者的血、尿、痰、粪便、咽拭子等494份不同发病时间收集的标本进行病毒定性检测,并将PCR产物直接进行DNA序列分析。结果两套引物均能较好地扩增出部分标本SARS-CoV基因的特异性片段。在所有标本中痰液阳性检出率最高,联合检测多种标本或同时应用两套引物进行PCR扩增可明显提高标本阳性检出率。跟踪观察发现,SARS患者发病第2周时PCR阳性检出率最高,第3～4周次之,但各种标本阳性检出率的动态变化不尽相同。结论应用巢式RT-PCR进行SARS早期诊断和检测是一种可行的方法,针对SARS-CoV基因组不同区域设计多对引物,联合检测多种临床标本可明显提高阳性检出率;研究SARS-CoV的检出变化特点将为SARS的临床治疗提供一定的依据。     

SARS病毒全基因组芯片在临床检测中的应用

目的：利用冠状病毒全基因组芯片检测SARS患者血、便和痰标本中的冠状病毒核酸，为SARS病毒核酸的诊断提供线索。方法：提取SARS患者血、便和痰样本中的冠状病毒RNA，经全基因组随机反转录和PCR扩增标记成荧光探针，与SARS病毒全基因组芯片进行杂交，同时用体外培养的病毒RNA和从健康人分离的白细胞的RNA分别做阳性和阴性对照，杂交后的芯片用Axon4100A扫描仪扫描和分析。结果：SARS患者的3种标本中都能检测到冠状病毒核酸的存在，与整个病毒基因组比较大都为一些不连续的片断。其中痰和便标本中的基因谱较为相似，并且发现编码S1蛋白的核酸在多数痰和便标本中是连续的。结论：冠状病毒全基因组芯片能够检测出SARS患者血、便和痰标本中的冠状病毒核酸，同时能够监测不同样本中该病毒全基因组变化的特点，初步显示该芯片用于临床检测的可行性。     

严重急性呼吸综合征康复者冠状病毒特异性抗体定量检测与分析

目的　检测SARS患者体内冠状病毒特异性抗体IgG、IgM的含量。方法　抽取 2 2例SARS康复者不同康复时期的血液 ,经病毒灭活后分离血清 ,用ELISA法对SARS病毒特异性抗体IgG、IgM进行检测。结果　IgG类抗体在所有康复者体内都呈阳性 ,且检测到康复 71天的患者该类抗体仍然没有衰减 ;IgM类抗体在康复 5 0天的部分患者 (5 / 2 2 ,2 2 73%)中仍呈阳性 ,而在 6 5天时则全部为阴性。对照组 2 2例 ,两类抗体全部为阴性。结论　可能所有SARS康复者体内都产生了冠状病毒特异的IgG类抗体 ,并且这种抗体可能持续较长时间。     

SARS多脏器穿刺组织病理学及超微结构的研究

目的　探讨严重急性呼吸综合征 (SARS)病理学改变和超微结构特点及其与临床病程的关系。方法　应用光镜、组织化学、透射电镜、免疫组化和间接免疫荧光法对病程为 3～ 5周的 4例中晚期SARS死亡病例多器官穿刺组织 (肺脏、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胰腺、胃)进行研究。结果　SARS死亡病例肺部病理改变以肺泡间质纤维增生和肺泡早期纤维化等机化性肺炎表现为主要特征 ,同时有弥漫性肺泡损伤和脱屑性肺炎改变。脾脏内CD3和CD2 0阳性淋巴细胞减少 ,CD6 8阳性的组织细胞和S 10 0阳性的树突状细胞增多。骨髓粒细胞系统增生减退。在肺泡Ⅱ型上皮细胞、血管内皮细胞和脾脏淋巴细胞胞质内可见多种类型的冠状病毒样颗粒 ,大小均为 6 0～2 2 0nm ,有包膜 ,表面似有纤突样结构 ,以具有同心圆外膜、低电子密度核心的A型病毒颗粒和具有高电子密度核心的C型病毒颗粒为多见。间接免疫荧光法血清检测 4例病人SARS病毒IgGAb均呈明确阳性反应。结论　SARS是由新型冠状病毒引起的急性呼吸道传染病 ,主要靶器官是肺脏和免疫器官。SARS不同病程死亡病人的肺部病理学改变有不同的特征。     

SARS康复期患者半年血清抗体、肺功能和影像学资料分析

目的了解SARS康复者SARS冠状病毒特异性IgG抗体、肺功能和肺部影像学的变化。方法293例北京地区SARS患者康复后半年内定期进行SARS冠状病毒特异性IgG抗体、肺功能和胸部影像学检查,合并有肺弥散功能异常的康复者定期进行肺功能和胸部影像学复查,动态观察肺功能的恢复情况。部分合并有骨关节疼痛的患者进行股骨头磁共振检查。结果293例中有233例SARS冠状病毒特异性IgG抗体阳性(79．5％),且半年内抗体水平有逐渐下降趋势。特异性IgG抗体阳性的康复者中56例合并有肺部影像学异常,57例(24．5％)合并有弥散功能(D1CO)异常,其中40例半年内进行了3次以上肺功能检查,发现其肺功能和肺部影像学变化均有不同程度的改善。60例进行股骨头磁共振检查的康复者中有15例发现有股骨头缺血性坏死改变(25％)。结论临床诊断为SARS的患者中可能有部分为误诊病例,SARS康复者合并的肺纤维化改变在一定时期内可明显吸收和好转,部分康复者合并有股骨头缺血性坏死改变。     

SARS病毒抗体间接免疫荧光检测方法的建立

目的　建立快速检测严重急性呼吸综合征 (SARS)患者血清中特异抗体的间接免疫荧光方法 ,为SARS的临床确诊提供参考依据。方法　用本实验室新分离的SARS冠状病毒BJ0 1和GZ0 1株感染Vero E6细胞 ,待 2 5 %细胞出现病变时 ,用胰蛋白酶消化细胞后以 2× 10 7/ml浓度 4 0 μl的细胞滴到 10孔镀膜的玻片上 ,CO2 温箱培养 4h后丙酮固定。利用制备的抗原片通过间接免疫荧光检测了从北京和广州地区采集的 15 4例临床诊断为SARS的患者和 14例非SARS呼吸系统疾病和 10 0份健康人血清。结果　成功地建立了检测SARS冠状病毒抗体的间接免疫荧光染色方法 ,并对 15 4例临床诊断为SARS的患者的血清标本进行检测 ;SARS冠状病毒抗体阳性 14 2例 ,阳性率为 92 3% ,而 14例非SARS呼吸系统疾病患者和 10 0名健康人血清检测均为阴性。结论　本方法具有良好的特异性和灵敏度 ,可作为SARS实验室诊断的可靠方法     

两种酶联免疫法检测SARS病毒特异性抗体的比较

严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome,SARS)是由新型冠状病毒引起的以呼吸道传播为主的急性传染病。目前用于检测SARS病原抗体的酶联免疫吸附 (ELISA)法是世界卫生组织 (WHO)推荐的临床检测抗体的主要方法。ELISA法测抗体又分为间接法和双抗原夹心法 ,本文就这两种方法的检测情况进行了比较。1　材料与方法1 1　血清标本　按常法分别抽取 2 0例健康人 ,2 0例发热非SARS患者和 87例住院不同时期的SARS患者静脉血 ,2h内离心分离血清 ,— 2 0℃冻存 ,1周内检测抗SARS病毒特异性抗体。1 2　试剂　间接ELISA法使…     

SARS的临床及影像学诊断

“传染性非典型性肺炎”是一种传染性较强并进展快的呼吸系统疾病，又叫严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome，SARS)。发热及随后发生的呼吸功能进行性损害是主要症状和体征，本病与已知的肺炎发病及临床过程不同。     

SARS恢复期患者特异性IgG抗体滴度观察与分析

目的探讨SARS恢复期患者特异性IgG抗体滴度水平及变化趋势,完善SARS感染后免疫的资料。方法采用口。ISA法检测23例SARS患者发病后6个月、12个月2个时间点血清中特异性IgG抗体滴度。以单克隆抗体标记23例患者的PBMC,用流式细胞仪检测HLA-A2的阳性率。结果6个月时IgG抗体滴度的最高值为1：160阳性(4／23),最低值为1：10阴性(1／23),平均滴度为1：57;12个月时IgG抗体的最高滴度仅为1：80阳性(6／23),最低值为1：10阴性(2／23),平均滴度为1：27。2个时间点抗体滴度之间的差异有统计学意义(P=0．002)。23例患者中HLA-A2阳性14例,阳性率60．9％。结论SARS恢复期患者的抗体滴度在半年以后已呈现明显的下降趋势,目前所依据的SARS-IgG抗体诊断标准是合理可行的。HLA-A2抗原肽疫苗可以治疗和预防50％左右的SARS病毒感染。     

重症SARS患者应用甲基强的松龙注射剂时机对疗效和不良反应影响

目的　研究甲基强的松龙注射剂的应用时机 ,对重症SARS患者疗效和不良反应的影响。方法　回顾性分析北京市小汤山医院临床确诊的 37例使用甲基强的松龙注射剂重症SARS患者的病情、用药纪录及药品不良反应发生情况 ,根据用药时机分为 3组 ,描述性分析各组病例基本病情、疗效和不良反应。结果　用药时机 >19d组的治愈率高于其他 2组 ,同时死亡率低于其他 2组 ;用药时机 0～ 9d组药物不良反应发生率为 35 .8% ,大于其他 2组 ,出院血糖高于入院血糖。结论　在重症SARS患者的治疗中 ,甲基强的松龙注射剂有着确切的疗效 ,掌握好应用时机对于重症SARS患者的治疗至关重要。     

SARS冠状病毒对心脏及其传导系统影响的病理学研究

目的 探讨严重急性呼吸综合征(SARS)对心脏、尤其是心脏传导系统的影响。方法 应用HE、组织化学及核酸原位杂交等方法,对6例SARS死亡患者的心脏组织及其中1例死者的心脏传导系统进行病理研究。结果 SARS患者的心脏损伤表现为心肌细胞空泡变性、萎缩和少数心肌细胞肌浆溶解,心肌问质轻度水肿、少量炎细胞浸润及轻度小血管炎;Macchiavello染色示心肌细胞胞质内偶见病毒包涵体;核酸原位杂交示少部分心肌细胞及心脏传导系统特化心肌细胞内呈现明确的冠状病毒(SAPS-CoV)阳性杂交信号。结论SARS-CoV不仅能够感染心肌细胞,而且可感染心脏传导系统中的特化心肌细胞,可引起心脏轻度病毒性心肌炎性改变。该研究结果为解释临床上SARS患者心律失常和心肌酶谱异常提供了重要的病理学依据。     

SARS冠状病毒的多组织嗜性及其全基因序列的测定

目的研究SARS冠状病毒对不同组织的感染情况,了解SARS流行初期病毒的基因组序列。方法用Trizol RNA抽提试剂提取因SARS病毒感染而死亡的3例死者不同组织中的总RNA,并逆转录为cDNA,然后用针对SARS病毒不同基因区间的引物进行PCR扩增,并对其中1例肺组织中病毒全序列进行了测定。结果3例病例中有2例仅在肺组织中扩增到病毒序列,另1例除在肺组织中检测到病毒外,还在气管、肾、淋巴结及肝组织中检测到病毒的存在。病毒全序列分析结果显示,该序列全长为29760个碱基,具有典型的冠状病毒序列特征,除具有RNA聚合酶基因和s、E、M和N4种结构蛋白基因外,还有另外8个蛋白编码框。经与GenBank上登录的部分其他SARS冠状病毒全序列进行比对,发现该序列除存在少量的SNP外,还多出一段29个核苷酸的序列,这段序列的存在完全改变了ORF10和ORF11两个蛋白编码框,使得在此终止的蛋白翻译能够继续进行下去,从而使ORF10和ORF11两个读框成为一个读框。结论SARS病毒具有多组织嗜性;该序列有可能是病毒从动物传到人的原始序列。     

胸部CT检查早期诊断疑似SARS疾病的价值

目的评估早期CT检查对确诊SARS患者的意义.材料和方法2003-03～06在发热门诊就诊患者中选取12例临床疑诊SARS患者,8例于发病后1天就诊,4例于发病后2天就诊.12例患者均于就诊当日行胸X线检查及薄层CT检查.结果追踪调查12例患者,均于发病10天后,在"非典型肺炎"定点专科医院确诊为SARS.8例(8/12)发病后1天就诊胸部X线示正常;4例(4/12)发病2天后就诊,示有淡薄渗出病变;CT薄层检查示9例(9/12)有单个或多个部位的模糊点片渗出影,呈现毛玻璃样改变,4例胸X片有渗出病变者,CT检查均异常;另有3例胸X片检查正常者,CT检查亦未见异常.结论对于有SARS相关症状和体征的患者,即使早期胸部X线正常,如有条件也应尽早行胸部CT检查,这对于疑诊SARS患者早期诊断、治疗、隔离,防止疫情的扩散具有重要价值.     

SARS冠状病毒结构蛋白在大肠杆菌中的表达

目的构建SARS冠状病毒主要结构蛋白原核表达载体,并探讨各结构蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达情况及其病毒致病机制。方法从SARS病人组织中抽提出RNA,经RT-PCR获得SARS冠状病毒刺突蛋白(S)、核衣壳蛋白(N)和膜蛋白(M)基因,将S基因的两个区段、N基因和M基因分别克隆至表达载体pET-32和pET-28上,转化大肠杆菌13121,利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况。结果成功构建了SARS冠状病毒重组蛋白的表达载体pET32-S1、pET32-S2、pET32-N、pET32-M、pET28-S1、pET28-S2和pET28-N;N蛋白表达量最高,S2蛋白表达量次之,S1蛋白和M蛋白表达不明显。结论SARS病毒的N蛋白较容易在原核细胞中表达,而S蛋白和M蛋白可能由于有较多的半胱氨酸或跨膜区而不易在体外表达。N蛋白和S蛋白均有较好的抗原性。前者更适用于SARS的早期诊断。     

SARS合并糖尿病死亡原因分析

目的 :研究SARS合并糖尿病死亡原因。方法 :以我院 2 0 0 3年 4～ 6月收治的SARS合并糖尿病的 4 6例患者为研究对象 ,分为死亡组 (A组 )及治愈组 (B组 )。比较两组的生化指标、血氧饱和度 (SpO2 )、胸片、多器官功能衰竭 (MODS)、二重感染、激素用量、血常规以及CD3+ ,CD4 + ,CD8+ T淋巴细胞计数等。结果 :①A组丙氨酸转氨酶(ALT) ,尿素氮 (BUN) ,血清肌酸激酶 (CK) ,乳酸脱氢酶 (LDH)显著高于B组 (P <0 .0 1)。②A组SpO2 <95 % ,合并MODS ,二重感染及糖皮质激素日均用量≥ 16 0mg/d的例数均明显多于B组 (P <0 .0 5 )。③A组血小板 ,淋巴细胞 ,CD3+ ,CD4 + ,CD8+ T淋巴细胞计数显著低于B组 (P分别 <0 .0 1,0 .0 5 ,0 .0 0 1)。结论 :SARS合并糖尿病患者的死亡原因与肺损害、低氧血症、MODS、二重感染及激素用量密切相关。     

SARS冠状病毒多聚酶区抗原在感染诊断中的作用探讨

目的原核表达严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-COV）非结构蛋白RNA多聚酶表位区,了解其在SARS-COV感染诊断及作为病毒复制指标方面的意义。方法通过PCR扩增获得RNA多聚酶表位区基因,与原核表达载体pET32a＋连接,转化大肠杆菌BL-21表达获得重组融合蛋白。经切胶透析纯化后,应用ELISA检测SARS患者及动物模型血清标本的IgG抗体。结果获得原核表达的RNA多聚酶表位区。ELISA检测正常人血清均阴性,SARS患者血清阳性率为95％;检测SARS病毒感染实验动物血清阳性率100％,灭活纯化病毒接种恒河猴均为阴性。结论RNA多聚酶表位区具有很好的免疫原性,可用于感染诊断的检测及作为病毒复制的指标。