抗旋毛形线虫单克隆抗体的制备和抗原定位研究

BALB/c mice were infected per os with the infective larvae (L1) of Trichinella spiralis, and challenged by injecting 0.2ml soluble L1 antigen 3 days before cell fusion. SP2/0 myeloma and immune spleen cells were fused at the ratio of 1:5 in the presence 30%PEG (MW 4,000). The fusion rate and antibody positive rate were 92.1% and 16.6% respectively using ELISA. Among these the chromosomes of 4 strains were 2n greater than 100 and that of the SP2/0 myeloma cells 2n less than or equal to 70. The titer of McAb in the ascites was found to be 1/640 or 1/1,280. Eight strains were of IgG1, 1 IgG2a and 3 IgM in an agar system. Three strains of McAbs, which could recognize specifically the L1 antigen fractions by immuno-blotting technique, were used as probes to localize the target antigens in sections of T. spiralis L1. Staining was performed using an indirect technique consisting of goat anti-mouse IgG-conjugated horseradish peroxidase on de-paraffin sections, and substrate DAB. The results revealed that the antigens reacted most strongly with the specific McAbs were located in the cuticle and stichosome, followed by the lining of gut. Among the 3 strains of McAbs used, 2E5F11A5 reacted most strongly with the antigen, followed by 2E5E9E4. 2E5E9G5 was the weakest.     

抗旋毛形线虫单克隆抗体的制备和抗原定位研究

作者用旋毛形线虫感染期幼虫免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与SP2/0骨髓癌细胞进行杂交。融合率92.1％,抗体阳性率16.6％,通过克隆化已初步建立分泌抗幼虫可溶性抗原的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞18株。采用间接过氧化物酶法,以证实能特异地识别此虫感染期幼虫抗原组分的3株McAb定位抗原,揭示相关抗原组分主要位于幼虫的角度层、杆状体,其次为肠道。     

猪蛔虫与人蛔虫体壁蛋白组分可溶性抗原及同功酶的电泳分析

报告猪蛔虫与人蛔虫体壁蛋白组分,可溶性抗原及乳酸脱氢酶和脂酶同功酶的电泳分析结果。猪蛔虫体壁有3条(PAGE)、18条(SDS-PAGE)和10条(IEF)考马斯亮蓝染色带;人蛔虫体壁相应有11、15、8条染色带,两者的等电点范围为pH3.5～6.4。猪蛔虫体壁至少含9种抗原;人蛔虫体壁至少含7种相关抗原,两种蛔虫体壁脂酶电泳结果表明在酶带的数目及相对迁移率方面均有差异,而两种蛔虫乳酸脱氢酶的电泳结果则无明显差异。     

三种蛔虫感染小鼠后嗜酸细胞增多的比较研究

猪蛔虫,似蚓蛔线虫和犬弓首线虫虫卵经口感染小鼠均可使其末梢血嗜酸细胞增多。嗜酸细胞增多的峰值和图形相似,达峰值所需时间没有明显差异,感染所用虫卵个数对嗜酸细胞的增多无影响。     

广州管圆线虫抗原IF的中间纤维蛋白组织来源分析和定位

目的 对广州管圆线虫抗原IF进行中间纤维蛋白家族分类和细胞组织定位.方法 IFTG诱导重组基因pET-IF在大肠杆菌中表达广州管圆线虫抗原IF,用组氨酸亲和层析纯化表达产物,用Western blot方法鉴定抗原IF的中间纤维蛋白类型;小鼠皮下多点注射法制备抗IF抗体血清,用免疫组织化学方法检测抗原IF在虫体组织和细胞上的定位.结果 广州管圆线虫抗原IF在体外成功表达并纯化,其属于中间纤维蛋白家族的角蛋白,定位于广州管圆线虫成虫肠管壁,存在于细胞质中.结论 广州管圆线虫抗原IF分布于虫体肠管壁,同时从组织学角度证明广州管圆线虫存在中间纤维结构.     

感染犬弓首线虫鼠血清抗弓首线虫幼虫抗体和循环抗原检测

采用间接 ELISA 和双抗体夹心 ELISA 检测感染犬弓首线虫小鼠血清抗弓首线虫幼虫抗体和循环抗原。间接 ELISA 用犬弓首线虫幼虫排泄分泌抗原(TES-Ag)包板,二抗用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠 IgG。夹心 ELISA 用豚鼠抗 TES-Ag 的 IgG 包板,第二抗体用辣根过氧化物酶标记的兔抗TES-Ag 的 IgG。结果表明,感染后第1天血清循环抗原即为阳性,第15天血清抗体出现阳性,第87天实验结束时,血清抗体和循环抗原均是阳性。     

广州管圆线虫Mr32000抗原的免疫诊断效果评价

目的 评价广州管圆线虫Mr32000抗原(AC32)的诊断价值。方法 利用切胶纯化法从广州管圆线虫成虫抗原中获取AC32,用Westernblotting和ELISA方法检测61例广州管圆线虫感染大鼠血清、5例正常鼠血清、1例广州管圆线虫病人血清、50例其他寄生虫体阳性患者血清和50例献血员血清。结果 AC32和成虫粗抗原包被的ELISA检测61份感染大鼠血清和1例临床诊断为广州管圆线虫病人血清均为阳性;AC32-ELISA检测的50例献血员、20例急性血吸虫病人、11例弓形虫病人和所检测的其他寄生虫抗体阳性患者血清均为阴性。结论 AC32在广州管圆线虫病的血清学诊断中具有较高的敏感性和特异性。     

广州管圆线虫抗原IF的体外表达系统的建立和分析

【目的】建立广州管圆线虫特异性抗原中间纤维(IF)基因的体外表达系统,研究IF蛋白的结构和功能关系。【方法】将IF基因亚克隆入原核表达载体pET-30a-c(+)并在原核中诱导表达,Westernblot鉴定融合表达产物的免疫特性,用组氨酸(His)亲合层析柱分离纯化表达产物,鉴定表达体系效率。生物信息学分析目的蛋白结构和功能关系。【结果】抗原基因IF在原核中与6个组氨酸进行了融合表达,以可溶性表达为主,并能在该系统中大量、稳定表达,其相对分子质量Mr=48×103,该表达产物具有较好的抗原性,可被大鼠感染血清识别,抗原IF具有典型的中间纤维家族特征,该蛋白具有多个抗原表位存在。【结论】建立了IF的有效原核表达系统,IF抗原蛋白的结构决定了它的属性和功能。     

单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的制备抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,用于广州管圆线虫循环抗原（CAg）的检测。方法广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB／c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／0）融合,用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,双抗体（单抗3F1和4H2）夹心ELISA法检测实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠和广州管圆线虫病人血清中的CAg。结果获得了3株稳定分泌抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单抗的杂交瘤细胞株,经鉴定2株为IgG1（3F1、4H2）,1株为IgM（2A2）,杂交瘤细胞培养上清效价分别为1：25600、1：25600和1：12800,诱生腹水ELISA效价分别为1：80000、1：80000和1：40000。3株单抗均识别广州管圆线虫成虫相对分子量约为15000的蛋白。实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠血清CAg检出率分别为84．2％（48／57）和87．2％（41／47）,广州管圆线虫病人血清CAg检出率为86,4％（19／22）,与日本血吸虫、囊虫、肺吸虫、旋毛虫病人血清无交叉反应。实验感染小鼠血清CAg第2周即呈阳性反应,第4周A。。值达到高峰。结论建立了敏感性高、特异性强的3P1、4H2双抗体夹心ELISA检测广州管圆线虫循环抗原法,可用于广州管圆线虫病的临床诊断、疗效考核和流行病学调查。     

异尖线虫四种抗原的酶免测定法检测抗体的比较

以异尖线虫幼虫(Anisakis type Ⅰ)实验感染家兔,用不同方法制备四种抗原,按不同感染强度和不同时期进行ELISA测定。四种抗原不同感染强度所得血清内均可测到特异性IgG抗体,但存在特异性抗体出现时间快慢和抗体水平高低问题。SEC抗原在其敏感性和制备等方面均优于其它三种抗原,感染1周时出现强阳性反应,且维持时间长,当阳性判断标准定为0.987(X±3SD)时,所有感染后血清对于SEC抗原和WWE抗原敏感性分别为75％和62.5％,感染早期(7d)开始OD值明显上升,维持时间短的为2周,长的为5周,当10周时恢复到感染前水平,说明具有早期诊断意义。     

广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原分析及其诊断价值的探讨

目的分析广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原,探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫成虫匀浆后沉渣经尿素溶解,与成虫水溶解性抗原同时进行SDS-PAGE和Western-blot,分析蛋白谱与抗原谱;用ELISA检测不同样本中相应抗体。结果SDS-PAGE结果显示尿素抗原蛋白条带少于水溶解性抗原;尿素抗原与感染大鼠血清、免疫兔血清和广州管圆线虫病患者血清在32000Mr处均出现强反应带,尿素抗原的反应带条数较水溶性抗原少。两种抗原包被ELISA检测广州管圆线虫病疑似病人血清和感染大鼠血清的阳性率相同;尿素抗原用于检测血吸虫感染小鼠血清的交叉阳性率明显低于水溶性抗原,检测正常大鼠血清、献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较水溶性抗原少。结论广州管圆线虫成虫尿素抗原含有32000Mr抗原;广州管圆线虫尿素抗原用于诊断时,与水溶性抗原有同样的敏感性,而特异性高于水溶解性抗原。     

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性.方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原.分别以SDS-PAGE和Western blot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较.结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原.SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr 37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带.AWA-f见15条蛋白带,其中Mr 26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带.AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带.SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带.结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠.该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白.     

旋毛虫肌蚴可溶性抗原与日本血吸虫病患者血清的交叉反应

应用ＥＬＩＢ技术观察旋毛虫肌蚴抗原（ＴｓＭＬＳＡ）与６种寄生虫病人血清的交叉反应。结果表明：ＴｓＭＬＳＡ中３１～１００ＫＤａ内的蛋白大部分可被急性血吸虫病人血清所识别，而慢性血吸虫病人血清仅识别其中的４４／４５，５１／５３，６２／６４及１００ＫＤａ蛋白；小于６０ＫＤａ者可与丝虫病、钩虫病、肺吸虫、蛔虫病和肝吸虫病人血清呈不同程度的交叉反应，以前三者为最明显；４５ＫＤａ蛋白可被部分正常人血清识别。提示，旋毛虫肌蚴抗原与多种寄生虫有共享成分，但与血吸虫的交叉可依据４组区带用以鉴别诊断此二种寄生虫病。     

肿瘤可溶性抗原和金葡菌超抗原构建肿瘤疫苗的基础研究及临床应用

目的 探讨肿瘤疫苗在临床应用效果,分析有效成分,为进一步纯化肿瘤疫苗打下良好基础.方法 提取肺部肿瘤临床标本的可溶性抗原,和金葡菌超抗原等共同构建肿瘤疫苗,对112例肺癌术后患者(治疗组56例,对照组56例),经3～10年随访,观察临床效果;分离提取肿瘤标本中的膜蛋白、DNA、RNA、HSP70以及多肽,分析其有效成分.结果 治疗组患者5年生存率高于对照组,其差异有统计学意义(P＜0.01);治疗组患者未见全身及局部明显毒副作用;该疫苗的主要有效成分是多肤,膜蛋白也具有免疫活性.结论 用该方法构建的肿瘤疫苗用于肺癌术后患者可提高5年生存率,患者耐受性好;该疫苗的主要有效成分是多肤和膜抗原.     

恶性疟原虫体外短期无血清培养上清可溶性抗原的纯化和分析

本实验对恶性疟原虫(FCC—1/HN)裂殖体体外短期无血清培养上清可溶性抗原进行了纯化,并用CIE及ELISA法检测和分析上清可溶性抗原的免疫学活性.结果表明,恶性疟原虫体外短期无血清培养上清中有可溶性抗原存在,抗原特异性与恶性疟原虫虫体抗原相似:经亲和层析纯化的上清抗原中不含可测水平的红细胞膜抗原成分.     

新生小鼠肺微血管内皮细胞的培养和抗原制备

目的:建立简单有效的新生小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)的培养和抗原制备的方法.方法:用1 wk龄内BALB/c小鼠的肺组织进行PMVEC的原代培养并传代,通过倒置显微镜、免疫组织化学鉴定,并用冻融、煮沸、超声等方法比较制备抗原.结果:体外培养的新生小鼠PMVEC呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的铺路石样排列,并可见管腔形成,获得的血管内皮细胞纯度较高,第Ⅷ因子相关抗原(ⅧF-AS)和CD31表达阳性,成功建立了PMVEC的原代培养方法.通过几种方法比较出超声破碎法制备抗原方法简单浓度高.结论:PMVEC的原代培养方法简便、可靠,保持了血管内皮细胞的结构和功能,且运用超声破碎法获得纯度较高的抗原,为进一步研究PMVEC在抗肿瘤血管治疗中奠定了基础.     

一组抗人髓系细胞分化抗原单克隆抗体的制备和初步应用

用新鲜白血病细胞或细胞株免疫BALB/c小鼠,经细胞融合技术制备得6株能稳定分泌抗人髓系细胞分化抗原单克隆抗体(以下简称单抗)的杂交瘤株.经鉴定该组单抗各自所识别的特异性抗原分子量为46～150kd.这些抗原在粒单系细胞膜上均有程度不等的表达,6种单抗中有5种具有结合兔补体的能力,其对白血病细胞株补体依赖的特异性细胞毒为73%～94%.两种单抗(Zh_(820),Zh_(114))对正常CFU-GM生长有抑制作用外,余4种单抗无明显影响.6种单抗均与FAB M_1～M_5型急性髓系白血病细胞有不同程度的阳性反应.     

广州管圆线虫V期幼虫cDNA表达文库中优势诊断抗原的筛选、鉴定和克隆

目的筛选与广州管圆线虫感染小鼠血清具有较强免疫反应性的优势诊断抗原。方法用感染广州管圆线虫21d的小鼠感染血清做免疫探针筛选广州管圆线虫v期幼虫cDNA表达文库,对筛选得到的阳性克隆进行插入片段的测序和生物信息学分析,再根据测序结果设计引物扩增该基因并将其克隆入PET-30a（＋）载体中。结果共获得6个阳性克隆,经DNA测序及同源性分析表明,发现其中2个与广州管圆线虫髓鞘转录因子1（MYT1）高度同源,1个与广州管圆线虫胶原蛋白家族基因（alpha-collagen）高度同源,且均为全长cDNA。克隆出广州管圆线虫MYT1全长cDNA序列．构建的新基因重组质粒经双酶切后证明含有与目的片段长度相符合的目的片段。结论用感染小鼠血清作为探针初步筛选到2个广州管圆线虫基因,并成功构建MYT1的原核表达重组质粒PET30a（＋）-MYT1。     

广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA表达文库中优势诊断抗原的筛选、鉴定和克隆

目的 筛选与广州管圆线虫感染小鼠血清具有较强免疫反应性的优势诊断抗原.方法 用感染广州管圆线虫21 d的小鼠感染血清做免疫探针筛选广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA表达文库,对筛选得到的阳性克隆进行插入片段的测序和生物信息学分析,再根据测序结果设计引物扩增该基因并将其克隆入PET-30a(+)载体中.结果 共获得6个阳性克隆,经DNA测序及同源性分析表明,发现其中2个与广州管圆线虫髓鞘转录因子1(MYTl)高度同源,1个与广州管圆线虫胶原蛋白家族基因(alpha-collagen)高度同源,且均为全长cDNA.克隆出广州管圆线虫MYT1全长cDNA序列,构建的新基因重组质粒经双酶切后证明含有与目的片段长度相符合的目的片段.结论 用感染小鼠血清作为探针初步筛选到2个广州管圆线虫基因,并成功构建MYT1的原核表达重组质粒PET30a(+)-MYT1.