McAb检测囊虫病人循环抗原的研究

应用ＭｃＡｂ双抗体夹心－ＥＬＩＳＡ检测脑囊虫病人血清和脑脊液（ＣＳＦ）中循环抗原（ＣＡＧ）。血清经ＰＥＧ沉淀浓缩沸浴和ＣＳＦ经沸浴处理后，ＣＡｇ的阳性率分别为９２．７３％和９０．７４％，总阳性率为９２．０７％，灵敏度６８．７ｎｇ／ｍｌ。对照组中除２例包虫病人血清有交叉反应外，其余均为阴性。平行检测病人ＣＳＦ的ＣＡｇ和ＣＡｂ，以及同步检测血清和ＣＳＦ中的ＣＡｇ，表明它们之间有互补和相互验证的作用，可提高阳性率。对囊虫病人治疗前后血清ＣＡｇ的动态检测，表明血清ＣＡｇ的阴转率随疗程的增加而提高。这些结果说明ＣＡｇ检测不仅可用于囊虫病的诊断，而且可作为疗效考核的重要手段。也说明ＭｃＡｂ双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ＣＡｇ具有敏感性高、特异性强、重复性好等优点。     

基于纳米抗体和石墨烯/金复合材料的免疫传感器检测日本血吸虫循环抗原的研究

将抗日本血吸虫SEA纳米抗体固定于镀金的石墨烯薄膜上,制备一种新型的阻抗型免疫传感器检测日本血吸虫循环抗原。使用扫描电镜、原子力显微镜和拉曼光谱对石墨烯薄膜及石墨烯/金复合材料进行了表征,并对制备的免疫传感器的特异性和灵敏度进行了测试。结果显示,所制备的免疫传感器具有较好的特异性和灵敏度,与曼氏裂头蚴、刚地弓形虫、颚口线虫、简单异尖线虫、华支睾吸虫和卫氏并殖吸虫抗原没有交叉反应,检测日本血吸虫可溶性虫卵抗原达到0.01 ng/m L水平;血吸虫病患者血清的阳性检出率为66.7%,优于现有试剂盒ELISA法56.7%的检出率,与ELISA的符合率为90%。该免疫传感器检测日本血吸虫循环抗原具有较高的灵敏度和特异性,制作方法简便、快速等优点,具有较好的应用潜能。     

应用单克隆抗体Dot—ELISA检测血吸虫循环抗原的初步研究

检测感染宿主体内的循环抗原和循环免疫复合物可以确诊寄生虫感染和考核疗效。国内已有多篇检测血吸虫循环抗原方法的报道,但应用单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究尚未见诸国内文献。作者应用抗日本血吸虫排泄分泌抗原(S·ESA)单克隆抗体进行斑点酶联免疫吸附试验 (Dot-ELISA)检测感染宿主血清循环抗原,结果表明:本法具有较高的敏感性和特异性。 材 料 和 方 法     

抗日本血吸虫SEA纳米抗体制备与分析

利用制备的日本血吸虫虫卵抗原(SEA),免疫健康双峰驼Bactrian camel,分离其外周血淋巴细胞提取总RNA,利用RT-PCR扩增骆驼重链抗体IgG可变区(VHH)基因片段,将VHH片段与载体pMECS连接后电转入大肠杆菌TG1构建纳米抗体文库.经亲和筛选、phage-ELISA以及测序分析后,挑取阳性克隆,抽提质粒,电转入大肠杆菌WK6诱导表达纳米抗体.通过间接ELISA分析纳米抗体VHH-1的敏感性和特异性.结果显示,纳米抗体文库容量为2.3 ×108,测序分析显示,所获得的纳米抗体文库具有良好的多态性.经NI-NTA和AKTA纯化后获得高纯度纳米抗体.ELISA分析表明所获得的纳米抗体VHH-1具有较好的敏感性和特异性.为进一步开展纳米抗体在日本血吸虫诊治研究中的应用奠定一定基础.     

日本血吸虫循环抗原与抗独特型抗体的检测及其比较

以日本血吸虫肠相关ＭｃＡｂ－Ｇ３及单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０致敏红细胞，建立ＲＩＨＡ诊断血吸虫病。结果是正常人、急、慢性及晚期血吸虫病人Ｇ３－ＲＩＨＡ阳性率分别为２．１７％、９８．７９％、８４．０％、３２．１４％；ＮＰ３０－ＲＩＨＡ阳性率各为１．４５％、９７．５８％、８１．３％、２８．５７％。７５例慢性感染人群中，两者与Ｋａｔｏ阳性符合率分别为８４．０％、８１．３％；而阴性符合率各是３１．５％、３７．０％轻、中、重感染度人群循环抗原／抗独特型抗体阳性率：Ｇ３－ＲＩＨＡ分别为８０．３３％、１００．０％、１００．０％；ＮＰ３０－ＲＩＨＡ为８０．３３％、８８．８９％、８０．０％，显示慢血病人血清中循环抗原及／或抗独特型抗体与ＥＰＧ无相关性。本文提示循环抗原、抗独特型抗体在免疫调变及／或免疫网络系统中呈竞争与抑制状态。     

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的诊断价值

为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原（sjAWA67)对血吸虫病的诊断价值。本研究通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔。进行常规ELISA检测。结果对急,慢性血吸虫病患血清的检出率分别为100%和95%,与正常人血清,肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的变叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45.7%,75.0%和90.09%。表明SjAWA67蛋白具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

抗咽喉细菌复合抗原的IgY抗体活性研究

目的：应用咽喉分离的细菌混合抗原免疫母鸡，提取鸡蛋黄中IgY，通过ELISA方法证实IgY抗体的特异活性。方法：采取咽喉炎相关的多种细菌作抗原免疫产蛋母鸡，收集鸡蛋，从蛋黄中提取IgY，经纯化后进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和抗体活性的ILIAS测定。结果：电泳呈现12条带，证明IgY抗体中至少有12种抗体成分，ELISA结果表明IgY抗体效价为1：512。热稳定性试验结果显示，在37℃温度下，IgY抗体活性无改变。结论：应用多种混合的细菌抗原免疫母鸡，其鸡蛋黄中含有相应的IgY抗体成分，对热具有高度稳定性。     

抗HBs的双抗原夹心BA-ELISA检测和应用

<正> 血清抗HB_s效价的测定是考核乙肝疫苗效果和判断人体有无抗乙型肝炎免疫力的重要指示。因此寻找一种较为理想的抗HB_s测定方法正在引人注目。现有PHA和ELISA等方法敏感性较差,阳性检出率低。近年来建立的ABC-ELISA(以下简称ABC法)用以检测人血清中抗HBs,阳性检出率有所提高。但该法使用非特异性第二抗体,使在特导性放价放大的同时,非特异性效应也随之增大,从而影响该法的使用效果。双抗原夹心BA-ELISA是以抗原固相化,以生物素化HBsAg和亲和素-辣根过氧化物酶结合物为指示。从而在克服单纯双抗原夹心法(以下简称夹心法)阳性检出率低的同     

检测抗伤寒杆菌抗体的双抗原夹心ELISA法

<正>目前肥达氏试验结果仍作为伤寒的诊断依据,缺点是敏感性低和特异性差。国内学者对此曾作改进,但仍欠理想。我们应用超声粉碎法制备的伤寒杆菌可溶性抗原,建立了双抗原夹心ELISA法用于检测血清中抗伤寒杆菌抗体,现报告如下。     

丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用

目的 探讨丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用.方法 利用重组融合HCV抗原分别标记生物素及吖啶酯,建立起双抗原夹心法化学发光检测试剂盒,与间接法同时检测了866例阴性标本,440例阳性标本,3套BBI阳转血清盘.结果 双抗原夹心法与间接法灵敏度分别为100％、100％,特异性分别为99.9％、98.7％,特异性差别1.2％(95％可信区间:0.5％～2.1％),BBI阳转血清相对敏感性系数为-1.33.结论 双抗原夹心法特异性及早期感染检测能力优于间接法,将会成为丙型肝炎病毒抗体检测的主要方法.     

酶联法抗-HCV和HCV-cAg联检对丙型肝炎实验室诊断的应用价值

目的 探讨联合丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)及抗-HCV抗体酶联免疫检测对丙型肝炎实验室诊断的应用价值.方法 289份血清标本按抗-HCV阳性、弱阳性、阴性及HCV-cAg阳性、弱阳性及阴性分组,用PCR扩增法检测其HCV RNA含量.结果 单项抗-HCV阳性及弱阳性标本其HCV RNA检测阳性符合率分别为87...     

单克隆抗体AU_（14－1）测定人血清宫颈癌抗原

本研究应用抗小鼠宫颈癌单克隆抗体ＡＵ_１４－１所建立的夹心ＥＬＩＳＡ法，测定了人血清宫颈癌抗原．以４０例正常妇女血清的Ａ４９０均值加３个标准差之和（０．２０Ａ４９０Ｕ）作为阳性阈值，对２５例宫颈癌、５２例宫颈炎和１２例其他妇科疾患病人血清进行检测，结果宫颈癌为２５／２５阳性，宫颈炎２／５２阳性（其中１例阳性者为重度宫颈糜烂），其他妇科疾患均为阴性．此外，１例卵巢癌腹水亦为阴性．经统计学分析，ＡＵ１４－１确定的宫颈癌抗原存在于宫颈鳞癌和腺癌病人血清中，其阳性率均为１００％，敏感性１００％，特异性９６．２％．与目前研究的宫颈癌血清标志物ＳＣＣ和ＣＡ—１２５比较，ＡＵ１４－１—ＥＬＩＳＡ对人血清官颈癌抗原的检测，具有较高的敏感性和特异性以及较好的临床应用前景，并进一步证明了肿瘤“进化抗原”的理论．     

卵巢癌患者接受抗CEA鼠单克隆抗体C_（50）放射免疫显像后血清中人抗鼠抗体的检测

我们用ＥＬＩＳＡ对２２例接受抗ＣＥＡ单抗Ｃ（５０）放射免疫显像的卵巢癌病人进行了血清人抗鼠抗体（ＨＡＭＡ）产生的动态检测。４５．５％（１０／２２）的患者产生ＨＡＭＡ，人抗鼠抗体在给药后２～３周即可出现，４～５周达高峰，并在体内持续至少９个月。所产生的ＨＡＭＡ在双向琼脂扩散中仅与抗人ＩｇＧ有沉淀线，且与标准ＩｇＧ的沉淀线相连，与抗人Ｉｇ轻链ｋ、λ单抗、葡萄球菌Ａ蛋白、羊抗人ＩｇＧ均起反应，证明该抗体属于ＩｇＧ。     

99Tcm标记抗PSMA单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的生物分布

目的研究99Tcm-抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)抗体(J591)对前列腺癌细胞体外结合性能、在荷人前列腺癌裸鼠体内生物分布。方法用改进的Schwarz方法进行99Tcm标记,经Sephadex G-50柱分离纯化;用纸层析法和三氯醋酸法测定标记率与放化纯;用流式细胞术测定抗体与肿瘤细胞在体外的结合性能;PSMA阳性的C4-2前列腺癌裸鼠为实验组,PSMA阴性的PC3前列腺癌裸鼠为对照组,裸鼠静脉注射7.5 MBq(25μg/只)99Tcm-J591,分别于2、6、12及24h测定体内放射性分布,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及T/NT比值。结果表明99Tcm–J591标记率为(78.9±6.2)%,放化纯90%。J591与99Tcm–J591在体外能结合PSMA阳性的C4-2细胞,与PSMA阴性的PC3细胞不结合,显示出J591具有良好的特异性。生物分布实验显示:实验组裸鼠肿瘤部位出现99Tcm浓聚,对照组则没有。肿瘤组织百分注射剂量率(%ID/g)在12h达高峰,为(15.91±5.16)%ID/g,与对照组(3.22±1.33)%ID/g相比差异有统计学意义(P0.05),其余组织和器官的百分注射剂量率在两组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 J591具有良好的免疫活性和对前列腺癌的靶向定位性能,可望用于前列腺癌的导向诊断及导向治疗。     

Biotin-labeled antigen sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (BLA-S-ELISA) for the detection of Japanese encephalitis antibody in human and a variety of animal sera

A biotin-labeled antigen (BLA) was adapted to a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (S-ELISA) for detection of Japanese encephalitis (JE) antibody in a variety of animal sera. JE antigen was fixed on the wells of a microplate and became bound to the specific antibody which could react with a peroxidase-labeled avidin conjugate and azino-di-(3-ethylbenzthiazolin sulfonic acid) (ABTS) as a substrate. The BLA-S-ELISA could simultaneously defect JE antibody in all hemagglutination inhibition (HI) positive sera from man, swine, monkey, horse, cattle, rabbit, rat, mouse and pigeon by using the same reagents under the same test conditions. The antibody titers obtained by BLA-S-ELISA in human and swine sera corresponded well with HI antibody titers. The sensitity of BLA-S-ELISA appeared to be higher for IgM antibody than for IgG antibody. Since the non-specific reaction was extremely low in BLA-S-ELISA, the cut-off titer for the assay could be set as low as 1:2.5 of serum dilution for positive antibody.     

DHEAS和SHBG联检在PCOS中的应用

目的：探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者血清硫酸脱氢表雄酮（DHEAS）与性激素结合球蛋白（SHBG）的变化。方法：检测了373例PCOS患者血清DHEAS、SHBG、FSH、LH。结果：PCOS患者血清DHEAS水平明显较对照组高（P〈0.05）,其DHEAS与SHBG浓度呈负相关关系（P〈0.05）,LH与FSH的比值升高。结论：DHEAS和SHBG联合检测在PCOS的诊断中具有一定的指导意义。     

流式细胞仪检测粒细胞抗体在白细胞减少症中的应用

目的：为探讨白细胞减少症患者粒细胞相关抗体水平,分析其临床应用价值。方法：采用流式细胞术（FCM）测定了345例白细胞减少症患者及60名正常人粒细胞相关免疫球蛋白（Ig）。结果：发现,初治345例白细胞减少症患者中粒细胞相关抗体（IgG、IgM、IgA）在粒细胞表面阳性百分率均高于正常对照组（P〈0．01）,约82．02％的白细胞减少症患者粒细胞抗体阳性。结论：FCM用于白细胞减少症患者的粒细胞相关抗体的检测,具有快速灵敏、简便、用血量少和结果准确的特点,对临床治疗白细胞减少症提供依据。关键词白细胞减少症粒细胞流式细胞术粒细胞抗体（GAA）     

ELISA检测心磷脂抗体在胎儿发育方面的应用

目的:探讨胎儿生长迟缓(IUGR)与抗心磷脂抗体(ACA)的相关性。方法:用酶免疫吸附法ELISA检测5330例正常孕妇血清的ACA,同时对IUGR合并ACA阳性产妇产后胎盘进行免疫荧光检查,了解其结构改变。结果:正常孕妇ACA阳性发生率为2.70%,其中IUGR发生率15.28%,ACA阴性的孕妇IUGR发生率为1.77%,两者比较,差异有极显著性(P<0.01)。新生儿IUGRIgG阳性5例,胎盘免疫荧光检查发现胎盘组织均出现免疫球蛋白荧光抗体和补体阳性着色。结论:ACA阳性是IUGR发生的病因之一,ACA检测给IUGR的病因诊治提供了新的研究途径。     

免疫胶体金检测不孕症患者血清抗精子抗体

目的:建立快速测定抗人精子抗体(AsAb)的新方法。方法:采用人精子膜抗原,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体,根据免疫胶体金技术原理,建立斑点金免疫渗滤法(DIGFA)检测人血清AsAb。共测检137份不孕者血清并与酶联吸附试验(ELISA)作对比。结果:人精子膜抗原与患者血清中的特异性AsAb通过渗滤法在硝酸纤维素膜上反应, 6min内即可直接观察结果。在137份血清标本中,不孕女方阳性21 9%,不孕男方阳性13 19%。与ELISA的结果基本一致。符合率为96 1%,特异性为95 4%,敏感性为90 2%,交叉试验与重复试验结果显示,DIGFA具有良好的特异性及稳定性。结论:DIGFA可快速测定AsAb,具有推广使用的价值。