lncRNA CASC2对结直肠癌细胞功能及血管生成的影响

目的 研究lncRNA CASC2过表达对结直肠癌细胞增殖、迁移、血管生成及Wnt/FZD/β-catenin信号通路的影响.方法 qRT-PCR检测lncRNA CASC2在正常结肠上皮细胞(NCM460)及结直肠癌细胞株(DLD-1、HT29、SW620、HCT116、RKO、LOVO、SW480)中的表达情况;H...     

长链非编码RNA AFAP1-AS1通过PTEN/p-AKT信号通路调控结直肠癌细胞增殖的分子机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(Actin filament-associatedprotein1-antisenseRNA1,AFAP1-AS1)调控结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)细胞增殖的分子机制。方法收集2014年7月—2018年6月深圳市第二人民医院消化内科和胃肠外科诊治的38例正常人及38例CRC患者的粪便标本,用Real time-PCR检测lncRNA AFAP1-AS1表达,同时检测人正常结肠上皮细胞株NCM460、人结直肠癌细胞株SW620和HCT116中lncRNA AFAP1-AS1的表达;将靶向siRNA转染到CRC细胞株SW620和HCT116中抑制AFAP1-AS1的表达;通过MTT测定si-AFAP1-AS1转染对CRC细胞增殖的影响;应用免疫印迹检测Cleaved caspase 3、Bcl-2、Bax、p-AKT、total-AKT和PTEN的水平。结果与正常人相比,CRC患者粪便中AFAP1-AS1的表达显著上升(P<0.01);与NCM460细胞相比,SW620和HCT11...     

SLC6A9对结直肠癌细胞生长和对5-FU药物敏感性的影响

目的:研究溶质载体家族6成员9(solute carrier family 6 member 9,SLC6A9)表达对结直肠癌细胞增殖、迁移和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)药物敏感性的影响。方法:TCGA数据库分析、实时荧光定量PCR和Western blot分析检测SLC6A9在结肠癌组织、正常结肠细胞系(NCM460)和结直肠癌细胞系(SW620、HCT116、HT29、Lovo和SW480)中的表达。将SCL6A9过表达质粒及阴性对照(SLC6A9 OE、 Vector)转染HT29细胞,将SCL6A9小干扰RNA及阴性对照(SLC6A9 siRNA1#、siRNA2#和Scramble)转染SW620细胞。划痕愈合实验和Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力。Western blot和细胞免疫荧光检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达水平。利用CCK-8法和构建裸鼠移植瘤模型检测SLC6A9过表达对结直肠癌细胞5-FU药物敏感性的影响。结果:与正常结肠组织和NCM460细胞相比,SLC6A9在结肠癌组织和结直肠癌细胞...     

长链非编码RNARUNX1-IT1通过靶向miR-21对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响

目的：探讨长链非编码 RNA(lncRNA)RUNX1-IT1在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响机制。方法：收集2017年1月—2019年1月于河北北方学院附属第一医院进行根治性手术切除的结直肠癌组织标本62例及其相应的癌旁正常组织标本,采用荧光定量PCR(qPCR)法检测结直肠癌组织和其相应的癌旁组织中lncRNA RUNX1-IT1的表达。并培养人结直肠癌细胞系(SW480、SW620、HCT-116)和人正常结直肠上皮细胞系(FHC),qPCR检测细胞系中 lncRNA RUNX1-IT1和 miR-21的表达水平,选择最适细胞系用于后续实验。通过上调或下调SW480细胞中lncRNA RUNX1-IT1和miR-21的表达后,采用qPCR检测lncRNA RUNX1-IT1和miR-21的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA RUNX1-IT1和miR-21的靶向关系,Transwell实验检测SW480细胞侵袭和迁移能力。结果：qPCR检测结果显示,与癌旁正常组织比较,lncRNA RUNX1-IT1在结直肠癌组织中表达降低(P<0.05),而miR-21在结直肠癌组织中表达升高(P<0.05),且lncRNA RUNX1-IT1与miR-21在结直肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.275,P=0.031)。与正常结直肠 FHC细胞相比,lncRNA RUNX1-IT1在 3种结直肠癌细胞系中的表达水平均显著降低(均为P<0.05),而miR-21均显著升高(均为P<0.05),且SW480细胞最明显,故后续采用SW480细胞系进行实验。双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA RUNX1-IT1靶向调节miR-21的表达;与对照组相比,过表达lncRNA RUNX1-IT1可抑制SW480细胞侵袭和迁移能力(P<0.05);抑制 miR-21表达可抑制 SW480细胞侵袭和迁移能力(P<0.05);上调 miR-21表达可逆转过表达 lncRNARUNX1-IT1对 SW480细胞侵袭和迁移的抑制作用(P<0.05)。结论：LncRNA RUNX1-IT1在结直肠癌中表达下调,lncRNARUNX1-IT1通过靶向miR-21调控SW480细胞侵袭和迁移。     

lncRNA LINC00909靶向miR-548-3p对结直肠癌细胞放射敏感性的研究

目的 探讨lncRNA LINC00909是否通过靶向miR-548-3p而影响结直肠癌细胞放射敏感性。方法 采用qRT-PCR检测结直肠癌组织、癌旁组织中LINC00909、miR-584-3p的表达量;体外培养结直肠癌细胞SW480、SW620,分别将si-NC、si-LINC00909、miR-NC、miR-584-3p mimics、si-LINC00909与anti-miR-NC、si-LINC00909与anti-miR-584-3p转染至SW480、SW620细胞,用4 Gy照射细胞;克隆形成实验检测细胞存活分数及放射增敏比;MTT检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证LINC00909、miR-584-3p的靶向关系。裸鼠皮下移植瘤实验检测干扰LINC00909表达或抑制miR-584-3p表达对照射后移植瘤重量的影响。结果 结直肠癌组织中LINC00909的表达水平显著升高(P<0.05),miR-584-3p的表达水平显著降低(P<0.05);干扰LINC00909表达或miR-584-3p过表达后细胞存活分数明显降低(P<0.05),放射增敏比分别为2.017、1.762,并可抑制增殖、迁移及侵袭(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实LINC00909可靶向结合miR-584-3p;干扰LINC00909表达后移植瘤重量显著降低(P<0.05)。共转染anti-miR-584-3p后移植瘤重量显著升高(P<0.05)。结论 干扰LINC00909表达可通过上调miR-548-3p的表达而减弱结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力从而增强细胞放射敏感性。     

miR-23b-3p在结直肠癌中的表达及其靶向KLF3抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的机制研究

目的:研究miR-23b-3p在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响机制。方法:收集2018年01月至2020年12月我院胃肠外科手术切除的58例结直肠癌组织及癌旁组织标本,以及结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT-29、Lovo和人正常结直肠黏膜细胞FHC,采用qPCR法检测miR-23b-3p和KLF3相对表达水平。采用脂质体转染技术将miR-23b-3p mimics、mimics-NC转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变。利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p和KLF3的结合位点。将KLF3过表达质粒（pcDNA3.1-KLF3）或空载质粒（Vector）单独或联合miR-23b-3p mimics转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用qPCR和Western Blot实验检测SW620细胞中KLF3 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,并与患者TNM分期和远处转移有关（均P＜0.05）;miR-23b-3p在结肠癌细胞系中的表达水平均显著低于FHC细胞,上调miR-23b-3p表达能显著抑制SW620细胞的侵袭和迁移能力。KLF3在结直肠癌组织和细胞中高表达,与miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关（r=-0.326,P=0.013）,双荧光素酶报告基因实验证实miR-23b-3p直接靶向调节KLF3的表达, KLF3过表达能促进SW620细胞的侵袭和迁移,同时转染miR-23b-3p mimics可下调KLF3蛋白和mRNA表达,逆转KLF3过表达对SW620细胞侵袭和迁移能力的促进作用。结论:miR-23b-3p在结直肠癌中低表达并与肿瘤患者TNM分期及远处转移相关,miR-23b-3p靶向调控KLF3表达抑制结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移能力。     

lncRNA BLACAT1靶向LEMD1促进结直肠癌细胞的增殖和转移

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)BLACAT1在结直肠癌细胞发生发展过程的作用机制。方法 starBase分析TCGA数据库中lncRNA BLACAT1分别在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达水平,采用qPCR分别检测10例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中lncRNA BLACAT1的表达水平;检测结直肠癌细胞系SW620、SW480、HT-29、LoVo、HCT116和正常结直肠上皮细胞FHC中lncRNA BLACAT1的mRNA表达水平,筛选lncRNA BLACAT1高表达细胞系;敲低lncRNA BLACAT1验证对高表达细胞系增殖、迁移和侵袭的影响;starBase在线预测与lncRNA BLACAT1靶向作用的基因,qPCR和Western blot实验验证结果;starBase分析lncRNA BLACAT1与作用基因相关性,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA BLACAT1的靶基因;检测lncRNA BLACAT1作用靶基因对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果 TCGA数据库分析和结直肠癌患者检测结果均表明癌组织中lncRNA BLACAT1表达明显高于癌旁组织(P＜0.001);结直肠癌细胞系SW620中lncRNA BLACAT1的mRNA表达水平最高(P＜0.001);敲低lncRNA BLACAT1能够抑制SW620细胞的增殖(P＜0.001)、迁移(P＜0.001)和侵袭能力(P＜0.001);qPCR和Western blot实验及数据库分析结果表明lncRNA BLACAT1与LEMD1的表达存在正相关关系(r=0.778,P＜0.001),双荧光素酶报告基因实验证明LEMD1是lncRNA BLACAT1的靶基因;lncRNA BLACAT1上调LEMD1的表达,促进SW620细胞的增殖(P＜0.001)、迁移(P＜0.001)和侵袭(P＜0.001)。结论 lncRNA BLACAT1靶向LEMD1促进结直肠癌细胞SW620的增殖和转移。     

miR-145-5p靶向TAGLN2调控结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的机制探讨

目的:探究微小RNA-145-5p（miR-145-5p）在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其靶向调控肌动蛋白凝胶蛋白2（TAGLN2）对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术对48例结直肠癌患者癌组织、配对癌旁组织、结直肠癌细胞株（HCT8、SW620、HCT116、HT-29）及结直肠黏膜细胞FHC中的miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达进行定量分析。将SW620细胞设为空白对照组、miR-145-5p mimics组、mimics-NC组、pcDNA3.1-TAGLN2组、pcDNA3.1-Vector组和miR-145-5p mimics+pcDNA3.1-TAGLN2组,采用qPCR检测miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达,采用Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力,采用免疫印迹法（Western blot）检测TAGLN2蛋白及EMT相关蛋白表达,采用双荧光素酶报告实验检测miR-145-5p和TAGLN2间的靶向关系。结果:miR-145-5p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05）,并与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）;TAGLN2在结直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,并与miR-145-5p表达呈负相关（P<0.05）;miR-145-5p和TAGLN2在结直肠癌HCT8、SW620、HCT116和HT-29细胞中的表达水平显著低于或高于FHC细胞（均P<0.05）。miR-145-5p过表达可降低SW620细胞的侵袭和迁移能力。miR-145-5p靶向调控TAGLN2表达,单独转染TAGLN2阳性质粒可增加SW620细胞的侵袭和迁移能力,与miR-145-5p mimics同时转染后,TAGLN2蛋白、波形蛋白（Vimentin）和神经钙黏素（N-cadherin）表达降低,上皮钙黏素（E-cadherin）表达升高,TAGLN2对SW620细胞侵袭和迁移能力的增强作用被显著抑制。结论:miR-145-5p在结直肠癌中呈低表达状态,其表达水平与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移密切相关,miR-145-5p靶向调控TAGLN2抑制结直肠癌细胞的侵袭和迁移能力。     

环状RNA circUGGT2对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨环状RNA circUGGT2在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）中的表达及其对CRC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 收集粤北人民医院胃肠外科2018年9月至2019年3月45例手术切除的CRC组织及相应癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测组织及人正常结肠上皮细胞株NCM460和CRC细胞株HT29、HCT116、SW480、SW620中circUGGT2的表达水平。绘制受试者工作特征（ROC）曲线并计算曲线下面积（AUC）评估circUGGT2的诊断效能。将si-circUGGT2和si-NC分别转染至SW480细胞,采用CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果 与癌旁组织比较,circUGGT2在CRC组织中高表达（P<0.001）,且与患者肿瘤大小、浸润深度和TNM分期有关（均P<0.05）;circUGGT2诊断CRC的AUC为0.702。circUGGT2在4种CRC细胞中的表达水平均高于NCM460细胞（均P<0.001）,尤其在SW480细胞中的表达水平最高。与si-NC组比较,沉默circUGGT2后SW480细胞增殖速率和划痕愈合速率降低（均P<0.05）,克隆形成数目及迁移、侵袭细胞数明显减少（均P<0.05）。结论 circUGGT2在CRC中高表达,沉默circUGGT2可抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭。circUGGT2可能是CRC诊断和治疗的潜在分子靶点。     

miR-203在结直肠癌中的表达及其功能分析

目的 探讨microRNA-203（miR 203）在结直肠癌中的表达情况及其临床意义,并在结直肠癌细胞中验证其功能。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测52例结直肠癌及对应癌旁组织中miR-203的水平,分析miR-203表达与临床病理参数及术前癌胚抗原的关系;检测miR 203在3种结直肠癌细胞株SW480、Lovo和HT 29及人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460中的表达情况,选取miR-203水平最低的细胞分别转染miR-203模拟物（mimics）和miR-203 control,采用MTT法、流式细胞仪PI／Annexin V双染法和Transwell法检测转染miR 203对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。结果 结直肠癌组织中miR-203的相对表达量为0.372±0.019,低于癌旁组织的miR-203水平,且其表达与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小及术前癌胚抗原水平均有关（P＜0.05）;与NCM460细胞相比（其miR-203表达水平设为1.00）,结直肠癌细胞SW480、Lovo和HT-29的miR 203相对表达量依次为0.26±0.07、0.44±0.05和0.32±0.04,选取SW480细胞进行后续实验。MTT检测显示,转染miR-203 mimics 48、72和96 h的SW480细胞吸光值均低于转染miR-203 control组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;且转染miR-203 mimics 48和96 h的SW480细胞凋亡率高于转染miR-203 control组,但穿膜细胞数低于转染miR-203 control组（P＜0.05）。结论 miR-203在结直肠癌组织和细胞中低表达,上调miR 203水平可抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭并诱导凋亡。     

阻断CLC-3 氯通道对结直肠癌细胞株生存率和侵袭转移能力的影响及其分子机制*

目的:通过研究CLC-3 在结直肠组织中的表达,探讨CLC-3 对结直肠癌细胞株SW480、SW620 的细胞生存率、侵袭转移能力的影响及其潜在的机制。方法:采用RT-PCR 方法测定不同分期结直肠癌组织和正常结直肠组织中CLC-3 的mRNA 表达水平。运用CLC-3 阻断剂DIDS、NPPB阻断SW480、SW620 细胞的CLC-3 表达后,采用CCK-8 法实验检测细胞生存率,细胞侵袭实验检测细胞侵袭转移情况;并采用免疫印迹法测定阻断CLC-3 表达后SW480、SW620 细胞Wnt/ β -catenin 信号通路相关蛋白表达。结果:结直肠癌组织中CLC-3 mRNA 表达水平高于结直肠炎黏膜组织和正常结直肠组织（P < 0.05）,且CLC-3 mRNA 表达和结直肠分期相关。抑制CLC-3 表达后,SW480、SW620 细胞的生存率和侵袭转移能力降低（P < 0.05）,且β -catenin、C-myc 、cyclinD 1、Ki-67、survivin表达降低（P < 0.05）。 结论:CLC-3 高表达与结直肠的发生发展有潜在联系,其机制可能与Wnt/ β -catenin 有关,为CLC-3 作为治疗结直肠癌的潜在新靶点提供实验基础。      

结直肠癌长链非编码RNA CASC11和原癌基因c-myc的表达及其与复发转移的关系

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）CASC11和原癌基因c-myc在结直肠癌中的表达及其与复发转移的相关性。方法:收集2016年2月至2018年7月河北省唐山市协和医院收治的90例结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养正常结肠上皮细胞株CCD841及结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT...     

PHF1在结直肠癌中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:探讨PHF1在结直肠癌(CRC)中的表达以及对结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:将SW480和HCT 116细胞分别分为阴性对照组(si-PHF1-NC组,转染si-PHF1-NC)和实验组(si-PHF1组,转染si-PHF1),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测CRC组织和细胞中PHF1的mRNA水平;免疫组化法检测CRC组织中PHF1蛋白表达;MTT法检测CRC细胞增殖活性;克隆形成实验检测CRC细胞克隆数量;流式细胞术检测CRC细胞凋亡;Transwell小室法检测CRC细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹(Western blot)检测CRC细胞EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的表达。结果:与癌旁组织相比,CRC组织中PHF1的mRNA水平和阳性细胞数均显著升高(P<0.05);与正常细胞NCM460相比,CRC细胞SW480和HCT 116中PHF1的mRNA水平也显著升高(P<0.05);与si-PHF1-NC组相比,si-PHF1组SW480和HCT 116细胞存活率、迁移...     

叉头转录因子O亚族6对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的作用

目的探讨叉头转录因子O亚族6(FoxO6)对结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其分子机制。方法将FoxO6 siRNA转染结直肠癌细胞HCT116和SW480, 干扰FoxO6表达。构建过表达载体pcDNA.3.1-c-Myc, 转染FoxO6沉默的HCT116和SW480细胞, 过表达c-Myc。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法检测HCT116和SW480细胞中FoxO6、c-Myc、p21的mRNA和蛋白表达量, 溴脱氧尿苷(BrdU)法检测细胞增殖能力, Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。将FoxO6 shRNA慢病毒(LV-FoxO6)转染的SW480细胞注射至BAL b/c裸鼠右侧腋窝皮下构建荷瘤模型, 注射后第10、13、16、19、22、25天测量瘤体体积。结果正常结肠细胞FHC、结肠癌细胞系HCT116和SW480中FoxO6的mRNA表达水平分别为0.91±0.04、1.72±0.07和2.03±0.06, 蛋白表达水平分别为0.7±0.04、1.35±0.08和1.56±0.07, 结肠癌细胞系HCT116和SW480中...     

PRL-3表达载体构建及其对结直肠癌细胞生长的影响

目的:构建PRL-3过表达载体,研究其对结直肠癌细胞系SW620生长的影响。方法:提取Hela细胞总RNA并反转为cDNA,以cDNA为模板通过PCR反应扩增PRL-3基因,将扩增产物克隆至表达载体pcDNA3.1,通过转染让SW620细胞过表达PRL-3,空载体组和空白组作为阴性对照。qPCR、Western blot实验用来检测PRL-3在SW620细胞的表达水平,CCK-8实验、平板克隆形成实验用来检测SW620细胞的增殖状况,流式细胞术用来检测SW620细胞的周期分布。结果:成功构建了PRL-3过表达载体。与空载体组和空白组相比,PRL-3过表达载体转染结直肠癌细胞系SW620后,qPCR检测PRL-3表达水平上调数倍。CCK-8实验表明过表达PRL-3能够促进SW620细胞增殖。平板克隆形成实验表明上调PRL-3能够增强SW620细胞增殖能力。流式细胞术结果表明过表达PRL-3能够加快SW620细胞周期进程。结论:PRL-3能够促进结直肠癌细胞系SW620生长,为结直肠癌早期诊断和靶向治疗提供实验依据。     

miR-7调控结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的机制研究

目的 研究microRNA-7(miR-7)和5氟尿嘧啶(5-FU)联合对5-FU耐药结直肠癌(SW620/5-FU)细胞增殖、凋亡的影响,探讨miR-7表达对结直肠癌细胞5-FU敏感性的调控机制。方法 收集2019年5月—2021年7月手术切除的结直肠癌组织和癌旁组织;培养结直肠癌细胞系(HCT116、SW1116、DLD1、SW620)和正常结肠上皮细胞(NCM460),培养SW620细胞并构建5-FU耐药结直肠癌细胞(SW620/5-FU)。用RT-qPCR检测细胞和组织中miR-7的表达量。对SW620细胞和SW620/5-FU细胞均瞬时转染miR-7 mimic、miR-7 inhibitor和vector,分为miR-7 vector组(空载体组)、miR-7 mimic组(过表达组)和miR-7 inhibitor组(抑制组),以及与5-FU联合处理的miR-7 mimic+5-FU组和control组(空细胞组)。采用CCK-8法检测细胞增殖和5-FU半数抑制浓度(IC₅₀),流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测各组的cle...     

抑制LINC00958表达调控miR-422a促进结直肠癌细胞凋亡及放射敏感性的机制

目的 探讨lncRNA LINC00958对结直肠癌细胞凋亡及放射敏感性的影响以及其作用机制。方法 将pcDNA、pcDNA-LINC00958、si-NC、si-LINC00958、miR-NC和miR-422a质粒分别转染到SW480细胞中,并分别记为pcDNA组、pcDNA-LINC00958组、si-NC组、si-LINC00958组、miR-NC组和miR-422a组;将anti-miR-NC和anti-miR-422a质粒分别与si-LINC00958共转染到SW480细胞中,并分别记为si-LINC00958+anti-miR-NC组和si-LINC00958+anti-miR-422a组;分别将miR-NC和miR-422a分别转染到WT-LINC00958和MUT-LINC00958组细胞中,检测荧光活性;转染均用脂质体法。采用qRT-PCR检测miR-422a和LINC00958的表达;Western blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞克隆形成实验检测对结直肠癌细胞放射敏感性的影响;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果 结直肠癌细胞中LINC00958高表达,miR-422a低表达;抑制LINC00958表达和过表达miR-422a,可促进结直肠癌细胞凋亡,并增加细胞放射敏感性。LINC00958可靶向调节miR-422a表达;抑制miR-422a,逆转了抑制LINC00958表达对结直肠癌细胞的放射增敏和细胞凋亡促进的作用。结论 抑制LINC00958表达,增加结直肠癌细胞的放射敏感性,并促细胞凋亡,其机制可能与调控miR-422a有关,将为结直肠癌治疗提供新靶点和新思路。     

FBXW7基因点突变对结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移、侵袭和抗 凋亡能力的影响

目的： 探讨FBXW7基因点突变对结直肠癌细胞株HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。 方法： 通过构建FBXW7 基因野生型及突变型过表达的重组载体,并将其转染HCT-116细胞,应用Western blotting检测转染后FBXW7蛋白表达情况。 CCK-8检测细胞增殖能力,平板细胞克隆形成实验(HTCA)检测肿瘤细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕及 Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移和侵袭能力。 结果： 转染野生型FBXW7基因的HCT-116细胞中FBXW7蛋白表达水平高 于对照组（转染突变型FBXW7基因的HCT-116细胞）、阴性对照组（转染空质粒载体pEZ-M90的HCT-116细胞）及空白对照组（未 进行任何特殊处理的HCT-116细胞） （均P<0.05）。转染野生型FBXW7的HCT-116细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力相较 于其余各组均显著下降（均P<0.05）,且细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。 结论： FBXW7基因点突变可使其蛋白表达水平降低,从 而促进结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。     

沉默长链非编码RNA HOTAIR对直肠腺癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨沉默长链非编码RNA HOTAIR对直肠腺癌细胞株SW480和HCT116细胞增殖、放射敏感性和凋亡的影响。方法 通过实时荧光定量PCR检测直肠腺癌细胞株中lncRNA HOX转录反义RNA (lncRNA HOTAIR)的表达水平。应用RNA干扰技术沉默HOTAIR的表达,分析其在细胞增殖、细胞放射敏感性和凋亡中的作用。对细胞株进行梯度剂量照射后,检测其放射敏感性和细胞凋亡情况。结果 直肠腺癌细胞株SW480和HCT116中的lncRNA HOTAIR的相对表达水平明显高于直肠黏膜细胞系。克隆形成试验结果显示,与对照siRNA转染组比较,在细胞株SW480和HCT116中siRNA-HOTAIR的放射增敏比分别为1.58和1.33。沉默直肠腺癌细胞中的lncRNA HOTAIR可增加直肠腺癌SW480细胞株的凋亡率及放射敏感性。结论 直肠腺癌中lncRNA HOTAIR的表达水平与细胞放射敏感性之间存在相关性,其有可能是预测直肠腺癌细胞放射敏感性的指标之一。放射联合应用siRNA-HOTAIR对直肠腺癌细胞株SW480和HCT116有抑制细胞增殖、诱导凋亡和放射增敏的作用。     

高迁移率族蛋白B1介导癌症相关成纤维细胞促进结直肠癌转移的机制研究

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)介导癌症相关成纤维细胞(CAFs)活化在结直肠癌转移中的作用。方法 从结直肠癌及癌旁组织中,分离提纯癌旁正常成纤维细胞(NFs)和CAFs,分别与人结直肠癌细胞SW480共培养,划痕实验和Transwell侵袭实验检测NFs和CAFs对SW480迁移、侵袭的作用。免疫组化法检测HMGB1在结直肠癌、癌旁正常结直肠组织中表达。蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测NFs、CAFs中HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平。ELISA法检测上清液中HMGB1表达。应用小干扰RNA (siRNA)技术抑制CAFs细胞内HMGB1基因表达,qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测阴性对照转染组(CAFs-siNC组)与HMGB1-siRNA转染组(CAFs-siHMGB1组)中HMGB1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因和蛋白的表达情况,2组细胞分别与SW480细胞共培养后,划痕实验和Transwell侵袭实验验证HMGB1表达对SW480迁移和侵袭的影响。结果 NFs与SW480细胞共培养迁移率为(25.51±46.96)%,侵袭细...