miR-182激活PI3K/AKT信号通路促进肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的:探讨miR-182通过PI3K/AKT信号通路对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:将体外培养的HepG2细胞分为对照组(未转染)、阴性组(转染阴性对照)、模拟物组(转染miR-182模拟物)和模拟物+抑制剂组(转染miR-182模拟物后,加入PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002),采用RT-PCR检测各组细胞中miR-182的表达水平,Western blot检测各组细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达,采用MTT法、克隆形成实验和Transwell小室分别检测各组细胞的增殖、侵袭和迁移能力。结果:与对照组相比,模拟物组细胞的存活率、克隆形成率和侵袭细胞数、迁移细胞数均明显升高,细胞中p-PI3K、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达水平也均明显上升(P<0.05);而阴性组和对照组细胞相比无显著性差异(P>0.05)。与模拟物组相比,模拟物+抑制剂组细胞的存活率、克隆形成率和侵袭细胞数、迁移细胞数明显降低,细胞中p-PI3K、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达水平也均明显下降(P<0.05)。结论:miR-182可通过激活PI3K/AKT信号通路上调MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

lncRNA SUMO1P3诱导肝癌HepG2细胞对索拉菲尼耐药的分子机制

目的：探讨长链非编码RNA小泛素样修饰蛋白1假基因3（lncRNA SUMO1P3）促进肝细胞癌（HCC）HepG2细胞对索拉菲尼（SR）耐药的分子机制。方法：体外培养HCC细胞HepG2,采用持续接触浓度递增诱导法建立SR耐药细胞HepG2/SR,以HepG2细胞作为对照,qPCR 法检测 HepG2/SR 细胞中 SUMO1P3 的表达。利用脂质体转染技术,在 HepG2/SR细胞中分别转染si-SUMO1P3和si-NC;在HepG2细胞中分别转染pc-SUMO1P3和pc-DNA,后经5 μmol/L的SR处理24 h,qPCR法检测转染细胞中SUMO1P3表达水平,CCK-8法、Transwell实验和FCM分别检测转染细胞的增殖、迁移和侵袭能力和凋亡水平,WB法检测细胞中cyclin D1、Bcl2、BAX、MMP-2和MMP-9的表达。结果：成功构建SR耐药细胞HepG2/SR,HepG2/SR细胞中SUMO1P3表达水平显著高于 HepG2 细胞（P<0.01）。在 HepG2/SR 细胞敲减 SUMO1P3 后 ,与 si-NC 组比较 ,si-SUMO1P3 组细胞中SUMO1P3的表达与细胞增殖、迁移、侵袭能力及cyclin D1、Bcl2、MMP-2和MMP-9表达均显著降低,细胞凋亡率和BAX的表达均显著升高（P<0.05或P<0.01）。HepG2细胞过表达SUMO1P3后,与pc-DNA组比较,pc-SUMO1P3组细胞的增殖、迁移、侵袭能力及cyclin D1、Bcl2、MMP-2和MMP-9蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率和BAX的表达均降低（P<0.05 或 P<0.01）;与pc-DNA+SR组比较,pc-SUMO1P3+SR组HepG2细胞的增殖、迁移、侵袭能力及cyclin D1、Bcl2、MMP-2和MMP-9蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率和BAX的表达均显著降低（P<0.05或P<0.01）。结论：lncRNA SUMO1P3可通过调控HCC细胞的周期、凋亡等多种信号通路分子诱导细胞对SR的耐药,从而影响HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡与诱导细胞对SR的耐药。     

shRNA干扰BAMBI 基因对人结肠癌SW480 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的: 探讨shRNA 干扰骨形成蛋白和激活素的穿膜抑制剂(bone orphogenetic protein and activin membrane bound inhibitor, BAMBI)基因对人结肠癌SW480 细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法: 转染SW480 细胞sh-BAMBI成功后,实时定量PCR（qRT-PCR)和Western blotting 检测BAMBI mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测SW480 细胞增殖能力,Hoechst33258 染色检测细胞凋亡情况,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测SW480 细胞迁移能力,Western blotting检测TGF-β/Smad2 通路相关蛋白的表达水平。结果: 转染成功后sh-BAMBI组中BAMBI的mRNA和蛋白水平均低于对照组(P<0.05);与对照组相比,sh-BAMBI 组细胞增殖率明显降低(P<0.05)、细胞凋亡率显著升高(P<0.01),同时其侵袭和迁移能力明显减弱(均P<0.05)。sh-BAMBI组TGF-β 蛋白水平和p-Smad2/Smad2 比值明显高于对照组(P<0.05)。结论: shRNA干扰BAMBI可诱导人结肠癌SW480 细胞凋亡并抑制细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与激活TGFβ/Smad2 通路有关。     

沉默B7-H3基因表达对人肝癌细胞侵袭能力的影响

目的 研究靶向沉默B7-H3基因表达对HepG2细胞侵袭能力的影响及可能机制。方法 设计针对B7-H3基因的shRNA沉默质粒,转染HepG2细胞,下调B7-H3的表达。划痕修复实验检测转染前后HepG2细胞移行能力的变化,Transwell实验检测基因沉默对细胞侵袭能力的影响,MST-1法和ELISA凋亡试剂盒分别检测细胞增殖和凋亡水平变化。通过Western blot实验和明胶酶谱实验检测侵袭相关分子MMP-2、MMP-9的表达和活性变化。结果 成功构建B7-H3 shRNA沉默质粒并转染HepG2细胞。与对照质粒转染组和未转染组比较,沉默B7-H3基因表达后,B7-H3 shRNA转染组HepG2细胞的移行（24 h: P=0.001; 48 h: P<0.001; 72 h: P<0.001）和侵袭（P<0.001）能力受到显著抑制,细胞的增殖和凋亡水平没有明显变化（P>0.05）。MMP-2、MMP-9的蛋白表达（MMP-2: P<0.001; MMP-9: P=0.007）和活性（MMP-2: P<0.001; MMP-9: P<0.001）均显著下降。结论 通过B7-H3 shRNA沉默质粒靶向沉默B7-H3的基因表达能抑制HepG2细胞的侵袭能力,其机制可能与抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性有关。     

沉默MCM7基因介导AKT信号通路参与黑色素瘤细胞增殖及凋亡的实验

目的 探讨MCM7基因沉默介导AKT信号通路参与人皮肤黑色素瘤细胞的增殖及凋亡。方法 构建MCM7基因和沉默MCM7基因表达的慢病毒RNA（LV-shRNA-MCM7）的表达载体;将A375细胞分为Control组、Empty vector转染组（空载质粒转染组）、siRNA（LV-shRNA-MCM7）转染组、siRNA NC（LV-shRNA-MCM7 negative control）转染组;MTT法检测每组细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡情况;划痕实验法检测细胞迁移能力;qRT-PCR法测定细胞中MCM7基因、AKT信号通路相关基因、Cyclin D1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、caspase-3的相对表达量;Western blot法测定蛋白相对表达量。结果 沉默MCM7后,黑色素瘤细胞中的MCM7基因、CyclinD1、Bcl-2、AKT信号通路相关基因AKT3的mRNA和蛋白相对表达量显著下调（P<0.05）;凋亡相关基因Bax、caspase-3的mRNA和蛋白表达量显著上调（P<0.05）;siRNA转染组凋亡率显著上升,G₀/G₁期细胞数目明显增多,S期细胞数目明显减少;细胞增殖、迁移能力显著下降（P<0.05）。结论 沉默MCM7基因抑制AKT信号通路的激活,从而抑制A375黑色素瘤细胞增殖、迁移,促进A375黑色素瘤细胞凋亡。     

去甲斑蝥酸钠注射液对人肝癌HepG2细胞侵袭迁移、黏附的影响

 目的 研究去甲斑蝥酸钠注射液对人肝癌HepG2细胞侵袭迁移、黏附的影响及相关的机制。方法 采用MTT法及Transwell实验检测去甲斑蝥酸钠注射液对HepG2细胞迁移、黏附及侵袭力的影响,及采用免疫组织化学法分析去甲斑蝥酸钠注射液处理HepG2细胞后MMP-9蛋白的表达情况。结果 与空白组对比药物作用后HepG2细胞黏附率、侵袭及侵袭细胞数较对照组明显下降(P<0.05)。0.25μg/ml药物浓度作用细胞30、60、90和120min后的黏附抑制率分别为48.11%、33.81%、28.97%和16.83%。HepG2细胞的迁移及侵袭细胞数明显减少,迁移、侵袭抑制率分别为64.19%和58.19%。MMP-9蛋白表达量随药物浓度的增加而逐渐减少。结论 去甲斑蝥酸钠注射液可明显抑制HepG2细胞细胞黏附、迁移和侵袭的能力;其机制可能与MMP-9蛋白的表达有关。     

茯苓多糖对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、促凋亡的影响及其机制

目的 探讨茯苓多糖（Pachymaran）对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、促凋亡的作用及其相关机制。方法 MTT法检测细胞增殖率并筛选出适宜的茯苓多糖低、中、高浓度用于后续实验；不同浓度的茯苓多糖处理细胞后，倒置相差显微镜观察细胞形态学变化；Hoechst 33342染色观察细胞核的变化；平板克隆实验检测细胞克隆形成能力；细胞划痕实验检测细胞迁移能力；流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期；Western blot法检测凋亡、迁移及ERK通路相关蛋白的表达。结果 茯苓多糖浓度对HeLa细胞活力的影响实验得出，取30、40、50 mg/ml茯苓多糖作为低、中、高浓度进行后续实验；中、高浓度茯苓多糖处理细胞后，细胞和细胞核发生显著的凋亡形态学变化，低浓度下形态学变化不显著；不同浓度茯苓多糖均能降低细胞克隆形成能力；降低细胞迁移率（P<0.05）；使细胞凋亡率增加（P<0.05）；使S期细胞减少并阻滞于G₂/M期（P<0.05）；Cleaved Caspase 3、Cleaved Caspase 8、Cleaved Caspase 9、Bax表达较对照组明显增多，Bcl-2、MMP-9、VEGFA、p-ERK1/2表达明显减少（P<0.05）。ERK1/2表达无明显变化。结论 茯苓多糖能显著抑制HeLa细胞增殖，并诱导其凋亡。其促凋亡机制可能与下调p-ERK1/2表达，抑制ERK信号通路磷酸化有关。同时，茯苓多糖对抑制HeLa细胞的迁移也有一定的作用。     

miR-126-5p靶向Notch2 对结肠癌SW480 细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨miR-126-5p 对结肠癌SW480 细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法：用miR-126 mimic和pcDNA Notch2（pc-Notch2）等分别或同时转染结肠癌SW480 细胞,用qPCR法检测miR-126-5p 和Notch2 的表达;荧光素酶报告实验观察miR-126-5p 和Notch2 的靶向关系;CCK-8 法、划痕愈合实验、Transwell 小室法和Annexin V/PI 染色流式细胞术分别检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,Western blotting 检测Notch2、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）、cleaved Caspase-3、MMP-2 和MMP-9 的表达。结果：转染miR-126 mimic 能显著升高SW480 细胞miR-126-5p 的表达水平（P<0.01）和显著抑制SW480 细胞Notch2 的表达（P<0.01）,同时证实Notch2 上存在miR-126-5p 的结合位点。上调miR-126-5p 显著抑制SW480 细胞增殖并降低PCNA的表达水平（P<0.01）、升高细胞凋亡率和cleaved Caspase-9 的表达水平（均P<0.01）,pc-Notch2显著减弱miR-126 mimic 对SW480 细胞增殖和凋亡的调控作用;miR-126 mimic 显著降低SW480 细胞划痕愈合率和穿膜细胞数（均P<0.01）、抑制MMP-2 和MMP-9 的表达（P<0.01）;pc-Notch2 显著减弱miR-126 mimic 对SW480 细胞迁移、侵袭及MMP-2、MMP-9表达的抑制作用（均P<0.01）。结论：miR-126-5p 通过抑制Notch2 表达,降低结肠癌SW480 细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

肿瘤相关巨噬细胞对胃癌MGC-803 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophage，TAM）对胃癌MGC-803 细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：体外培养人单核细胞株THP-1，加入佛波酯（PMA）和IL-4 后，用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-12、IL-10 的水平。取对数生长期MGC-803 细胞和M2 型TAM，根据培养方式不同分为单独细胞培养组、非接触共培养组和接触共培养组，用MTT法、Transwell小室法分别检测MGC-803 细胞的增殖、迁移和侵袭能力，用AnnexinV-FITC/PI 双染流式细胞术检测MGC-803 细胞的凋亡和细胞周期变化，用qPCR、Western blotting 分别检测MGC-803 细胞中MMP-9、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与PMA组相比，PMA+IL-4 组细胞上清液中IL-12 水平显著降低、IL-10 水平显著升高（均P<0.05），成功将THP-1细胞诱导分化为M2型TAM。与单独细胞培养组相比，非接触共培养组、接触共培养组（: 1）MGC-803细胞的增殖率显著升高（均P<0.05）；（2）细胞的迁移、侵袭数量升高（均P<0.05）；（3）细胞凋亡率显著降低（均P<0.05）；（4）S、G2 期细胞的数量升高、G1 期数量降低（均P<0.05）；（5）细胞中MMP-9、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（均P<0.05）。结论：TAM可促进胃癌MGC-803 细胞增殖、迁移和侵袭，解除细胞G1期阻滞，减少细胞凋亡，其机制可能与上调胃癌细胞MMP-9、MMP-2表达有关。     

RNA干扰沉默ERK2基因体外诱导HepG2细胞凋亡的实验研究

目的：探讨RNA干扰技术对肝癌HepG2细胞ERK2基因表达的抑制作用及对HepG2细胞凋亡的作用.方法：实验分siRNA干扰质粒转染组、阴性质粒对照组和HepG2细胞空白对照组.应用DNA重组技术,制备针对ERK2基因的重组质粒pAAV-ERK2-siRNA-GFP,通过脂质体转染HepG2细胞.MTT细胞增殖实验,TUNEL法细胞凋亡染色及流式细胞仪凋亡细胞法检测体外诱导HepG2细胞凋亡的作用.结果：成功构建ERK2-siRNA重组质粒.MTT细胞增殖实验,TUNEL法细胞凋亡染色及流式细胞仪凋亡细胞检测法显示该重组质粒在体外能够有效抑制HepG2细胞生长,诱导HepG2细胞凋亡.结论：构建ERK2-siRNA重组质粒能抑制HepG2细胞增殖并诱导HepG2细胞凋亡,为肝癌治疗提供新思路.     

shRNA沉默HMGA2对食管癌ECA109细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨shRNA沉默HMGA2对食管癌ECA109细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并探究所涉及的相关机制.方法 构建针对人HMGA2基因的shRNA表达载体,瞬时转染至人食管癌细胞系ECA109中,24 h后应用蛋白免疫印迹法(WB)检测转染效率;应用MTT法比较转染后sh-HMGA2组与sh-NC组细胞增殖情况;应用流式细胞术检测HMGA2沉默对细胞凋亡的影响;应用Transwell测定评估HMGA2沉默对细胞迁移和侵袭能力的影响;应用WB检测HMGA2沉默对ECA109细胞内HMGA2、TGF-βRⅡ、Vimentin、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2/3、E-cadherin、N-cadherin、Bax、Bcl-xl、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响.结果 与sh-NC组相比,sh-HM-GA2组中HMGA2的蛋白表达水平降低(P﹤0.05).MTT结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组细胞增殖率明显降低(P﹤0.01).流式细胞术结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组细胞凋亡率增加(P﹤0.05).Tran-swell测定结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组中ECA109细胞迁移和侵袭数量均减少(P﹤0.05).WB结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组细胞内Bax和E-cadherin表达水平增加,而Bcl-xl、Vimentin、N-cadherin、MMP-2、MMP-9、TGF-β、Smad2、Smad3、p-Smad2/3蛋白表达水平均降低(P﹤0.05).结论 shRNA沉默HMGA2基因通过下调Bcl-xl表达、上调Bax表达水平来抑制食管癌细胞系ECA109细胞增殖并促进细胞凋亡,并通过抑制MMP及上皮间质转化来抑制细胞迁移和侵袭,这一过程涉及TGF-β/Smad信号通路.     

乙肝病毒X蛋白对不同肝细胞系凋亡的诱导作用

目的:研究乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBX)通过核转录因子NF-κB信号通路对不同肝细胞系凋亡的诱导作用。方法:建立稳定转染PEGFP-N1-HBX质粒的人正常肝细胞系L02(L02/HBX)和人肝癌细胞系HepG2(HepG2/HBX),用特异性NF-κB阻断剂吡咯二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)阻断NF-κB信号通路,流式细胞术检测PEGFP-N1-HBX转染前后及加入PDTC前后L02和HepG2细胞的细胞周期与凋亡,Western blotting检测NF-κB的表达。结果:成功构建了稳定转染PEGFP-N1-HBX的L02/HBX和HepG2/HBX细胞。与对照组L02细胞相比,L02/HBX细胞凋亡率明显增加[(31.31±0.51)%vs(14.05±0.09)%,P<0.05];其G0/G1期细胞比例显著增加,S期和G2/M期细胞比例减少。与对照组HepG2细胞相比,HepG2/HBX细胞凋亡率显著降低[(1.21±0.04)%vs(10.26±0.10)%,P<0.05];其G0/G1期细胞比例显著减少,S期和G2/M期细胞比例增加。PDTC作用后,L02/HBX/PDTC组凋亡率[(40.33±0.07)%]及G0/G1期细胞比例较L02/HBX组显著增加,G2/M期细胞比例明显减少,而HepG2/HBX/PDTC组凋亡率[(5.45±0.07)%]及G0/G1期细胞比例较HepG2/HBX组显著增加,S期和G2/M期细胞比例明显减少,但其凋亡率仍低于对照HepG2细胞。West-ern blotting结果显示,L02/HBX细胞NF-κB表达显著下调,而HepG2/HBX细胞NF-κB表达显著增加,L02/HBX/PDTC和HepG2/HBX/PDTC细胞NF-κB几乎不表达。结论:HBX可下调正常肝细胞L02 NF-κB蛋白的表达,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡;而HBX可增加肝癌细胞系HepG2中NF-κB蛋白的表达,加速细胞周期,抑制肝癌细胞凋亡。     

慢病毒载体介导 CDK2 基因沉默对黑素瘤B16-F1细胞生物学行为的影响

目的:探讨由慢病毒载体pUL介导的pUL-CDK2-shRNA3 (CDK2-shRNA)沉默CDK2基因后对小鼠黑素瘤B16-F1细胞恶性生物学行为的影响,初步探索其作用机制.方法:利用重组慢病毒载体CDK2-shRNA转染B16-F1细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,DAPI染色、AnnexinV-FITC/PI双染流式术检测细胞凋亡情况,流式术检测细胞周期变化,细胞黏附实验、transweU小室实验分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞周期信号通路上RB蛋白(成视网膜细胞瘤蛋白)、pRB蛋白、细胞周期相关转录因子E2F1及侵袭迁移相关蛋白基质金属酶-2(MMP-2)、基质金属酶-9(MMP-9)的表达水平.结果:与空白对照组和阴性对照组相比,CDK2-shRNA组细胞相对增殖率、细胞黏附率、细胞侵袭和迁移能力均显著下降(均P＜0.05).细胞凋亡率显著增加(均P＜0.05);G1期细胞显著增加而S期和G2期显著降低(P＜0.05).细胞周期相关蛋白pRB、E2F1明显降低而RB显著升高(P＜0.05),细胞侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9明显降低(P＜0.05).结论:慢病毒载体pUL介导的shRNA沉默CDK2基因对B16-F1细胞恶性生物学行为有显著的抑制作用,其机制主要与细胞周期和细胞侵袭迁移相关蛋白表达变化有关.     

XIAP基因对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨沉默X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因表达对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:参照LipofectamineTM2000说明将设计合成的XIAP特异性siRNA（si-XIAP）转染人食管癌EC9706细胞,将转染阴性对照siRNA(NC组）和仅加入脂质体的空白细胞作为两个对照组,siRNA转染48 h,通过Western blotting检测XIAP、AKT、p-AKT、E-cadherin和MMP-2蛋白表达;通过MTT法、Transwell法分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力;MTT法检测转染siRNA后24 h、48 h和72 h的细胞增殖。结果:XIAP特异性siRNA转染后,EC9706细胞XIAP表达明显降低,与空白组比较差异有统计学意义（P<0.05）。与空白组比较,si-XIAP组细胞增殖明显降低,黏附率明显升高,侵袭和迁移能力明显降低,p-AKT和MMP-2表达明显降低,E-cadherin表达明显升高（P<0.05）。结论:沉默XIAP基因可增强食管癌细胞黏附率,抑制侵袭和迁移能力,机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

慢病毒介导RNF2基因表达对食管癌细胞X线照射后增殖与迁移等影响

目的 利用RNA干扰技术抑制人食管癌细胞中RNF₂基因表达,观察其X线照射对细胞增殖活性、迁移能力、凋亡和细胞周期的影响。 方法 培养人食管癌细胞ECA-109,RT-PCR检测RNF₂ mRNA水平表达;MTT法检测ECA-109食管癌细胞细胞增殖;蛋白印迹法检测ECA-109-R细胞中RNF₂蛋白表达变化;流式细胞技术检测照射后不同时间细胞周期和凋亡变化。Transwell侵袭小室模型检测转染对食管癌细胞迁移能力的影响。重复测量设计资料方差分析。 结果 照射组食管癌细胞中RNF₂ 在mRNA水平和蛋白表达水平均较未照射组明显增加(P<0.01),且存在剂量-效应关系;MTT结果显示食管癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(P<0.01);ECA-109-R组细胞中BMI₁、RNF₂蛋白表达水平较ECA-109组和ECA-109-N组细胞明显降低(P<0.01),ECA-109组与ECA-109-N组比较差异无统计学意义(P>0.05);Transwell侵袭小室模型检测结果显示照射后3.5 h ECA-109-R组穿膜细胞数明显低于ECA-109组和ECA-109-N组(P<0.01)。6 Gy照射后各实验组处于G₂+M期比例明显高于相应未照射组(P<0.01),且ECA-109-R组处于G₂+M期的比例均明显低于照射后的ECA-109组和ECA-109-N组(P<0.05)。照射后ECA-109-R组细胞凋亡率明显高于ECA-109组和ECA-109-N组(P<0.01)。 结论 采用RNA干扰技术降低食管癌细胞中RNF₂的表达,降低细胞增殖和迁移能力,解除照射后G₂+M期阻滞,促进细胞凋亡,增加放射敏感性。     

miR-195 靶向TLR4 并阻断NF-κB通路抑制肝癌细胞HepG2 增殖和转移

[摘要] 目的：探讨miR-195/Toll样受体4（TLR4）分子轴通过调控NF-κB通路对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：收集2016 年3 月至2017 年1 月昆明医科大学第二附属医院外科手术切除的25 例肝癌组织以及对应的癌旁组织标本;肝癌HepG2 细胞培养完成后分为4 组,即对照组（NC）、miR-195 mimic组(miR-195组)、TLR4 敲降组(si-TLR4 组)和miR-195 inhibitor 联合TLR4 敲降组（si-TLR4+miR-195 inhibitor 组）。采用qPCR检测miR-195 在肝癌组织和细胞系中的表达水平;采用CCK-8 法检测上述各组细胞的增殖活力,Transwell法检测各组细胞的侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,双荧光素酶报告基因验证miR-195和TLR4的靶向调控关系,WB检测TLR4 和NF-κB p65 蛋白的表达。结果：miR-195 在肝癌组织中低表达（P<0.01）。相比于人肝上皮细胞（THLE-3）,miR-193 在肝癌细胞系（HepG2 和Huh-7）中低表达（P<0.01）,且HepG2 细胞中的表达水平最低。过表达miR-195 后HepG2 细胞增殖活力明显低于对照组（P<0.01）,穿膜细胞明显减少（P<0.01）,HepG2 细胞迁移能力明显下调（P<0.01）。过表达miR-195可明显抑制TLR4蛋白的表达水平（P<0.05）,且TLR4与miR-195的表达呈负相关（R2=0.602,P<0.0001）。过表达miR-195可靶向下调TLR4 并阻断NF-κB通路抑制HepG2 细胞增殖、侵袭和迁移能力（P<0.05 或P<0.01）。结论：miR-195 能够抑制HepG2 细胞增殖、侵袭及迁移能力,其机制可能与靶向调控TLR4 并阻断NF-κB 通路影响细胞生物学行为有关。     

水蛭素对肝细胞癌HepG2细胞抑制作用机制探讨

目的 研究水蛭素对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC,简称肝癌）HepG2细胞抑制作用及其抗肝癌的分子机制。方法 将含不同浓度（1 U/mL、2 U/mL、4 U/mL和8 U/mL）水蛭素的培养液作用于肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测水蛭素对肝癌HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测水蛭素对肝癌HepG2细胞凋亡的影响,Transwell法检测水蛭素对肝癌HepG2细胞迁移、侵袭的影响,荧光定量PCR检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因的mRNA表达水平,Western blot检测VEGF基因的蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,肝癌HepG2细胞增殖抑制率随水蛭素浓度（1 U/mL、2　U/mL、4 U/mL和8 U/mL）增加及作用时间（24　h、48　h、72　h）延长而增加,呈剂量-时间依赖效应（P<0.05）。不同浓度（2 U/mL、4 U/mL和8 U/mL）水蛭素作用48 h后,肝癌HepG2细胞凋亡率分别为（28.37±1.16）%、（40.27±0.97）%、（76.17±1.5）%,细胞侵袭个数分别为（204±9）个、（163±6）个、（94±4）个,细胞迁移个数分别为（86±5）个、（54±7）个、（20±5）个,细胞凋亡率、侵袭及迁移个数随水蛭素浓度增加而增加,呈浓度依赖性（P<0.05）。VEGF mRNA、蛋白的表达量随水蛭素浓度增加而明显下调（P<0.05）。结论 水蛭素能抑制肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭,其机制可能是通过下调VEGF表达。     

miR-495通过抑制RNF113A的表达调控食管鳞癌细胞恶性表型

目的：探讨微小RNA-495(miR-495)对食管鳞癌细胞恶性表型的影响及分子机制。方法：在食管鳞癌细胞Eca109中转染miR-495模拟物、miR-495抑制剂及相应的随机对照序列，分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-495的表达，CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期及凋亡率变化，Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移情况，并用qPCR和Western blot检测下游靶基因RNF113A mRNA和蛋白的表达。结果：与对照组比较，转染miR-495模拟物组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著升高(P<0.05)，转染miR-495抑制剂组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著降低(P<0.05)；各组间细胞增殖能力无显著变化(P>0.05)；与对照组比较，转染miR-495模拟物组细胞凋亡增多(P<0.01)，迁移和侵袭能力下降(P<0.01)，细胞被阻滞在G0/G1期(P<0.01)；转染miR-495抑制剂组细胞凋亡减少(P<0.01)，迁移和侵袭能力升高(P<0...     

UHRF1高表达对膀胱癌细胞Keap-1/Nrf2通路的调控作用分析

目的探讨与分析泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)高表达对膀胱癌细胞Keap-1/Nrf2通路的调控作用。方法分别用针对UHRF1的mimic及对照mimic转染膀胱癌细胞系UMUC3,标记为A组、B组,同时以PBS代替转染试剂的为C组。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,qRT-PCR检测mRNA表达,Western blot检测Keap-1/Nrf2通路蛋白表达。结果转染后48 h与72 h,与B组与C组相比,A组UHRF1 mRNA表达量显著增加(P<0.05)。转染后48 h与72 h,与B组与C组相比,A组的细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低,细胞侵袭数目显著增加(P<0.05)。转染后48 h,与B组与C组相比,A组的Keap-1、Nrf2相对表达量显著增加(P<0.05)。结论UHRF1高表达能激活膀胱癌细胞Keap-1/Nrf2通路,从而促进细胞增殖与侵袭,抑制细胞凋亡。     

FOXC2对人食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及相关机制研究

目的: 探讨叉头框（FOX）C2对食管癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制。方法: 选择人食管癌细胞CaES-17,Eca-109,TE13及人食管上皮细胞（HEEC）,选择FOXC2较高表达的食管癌细胞（CaES-17）作为转染细胞,设siRNA FOXC2组、pcDNA-FOXC2组及未转染组和转染阴性对照组。采用qRT-PCR检测细胞FOXC2表达;CCK-8检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;WB检测MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Wnt3a、β-catenin、p-β-catenin的蛋白表达水平。结果: 食管癌细胞FOXC2蛋白表达明显高于食管上皮细胞;与对照组相比,上调FOXC2表达可使MMP9、Snail表达明显升高,下调FOXC2表达可抑制食管癌细胞增殖,并抑制食管癌细胞的迁移和侵袭能力及降低Wnt3a蛋白表达。结论: 下调FOXC2抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,作用机制可能与调控MMP-9、Snail水平及Wnt/β-catenin通路有关。