lncRNA NEAT1通过抑制miR-let-7a激活BZW2促进喉乳头状瘤细胞的增殖和凋亡逃逸

目的 探讨长链非编码RNA核富集转录本1(lncRNA NEAT1)对喉乳头状瘤（LP）细胞的增殖和凋亡逃逸的调控作用和机制。方法 培养人喉乳头状瘤细胞Hs840. T,将正常人口腔上皮细胞（HOECs）作为对照。将Hs840. T分为lncRNA NEAT1过表达载体（pcDNA-NEAT1）组、pcDNA-NEAT1阴性对照（pcDNA-NC）组、沉默lncRNA NEAT1的小干扰RNA载体（siNEAT1）组、siNEAT1的阴性对照（siNC）组、miR-let-7a的模拟物（mimic）组、mimic阴性对照（mimic-NC）组、miR-let-7a抑制剂（inhibitor）组、inhibitor阴性对照（inhibitor-NC）组、沉默碱性亮氨酸拉链和W2结构域2(BZW2)的小干扰RNA载体（siBZW2）组、siBZW2的阴性对照（siBZW2-NC）组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2给药（pcDNA-NEAT1+siBZW2）组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2-NC给药（pcDNA-NEAT1+siBZW2-NC）组。qRT-PCR检测各组中l...     

lncRNA FGD5-AS1调节miR-129-5p/SOX4轴对子宫内膜癌细胞恶性生物行为的影响

目的 探讨lncRNA FGD5-AS1调节miR-129-5p/SOX4轴对子宫内膜癌（EC）细胞恶性生物行为的影响。方法 qRT-PCR、Westernblot分别检测人EC细胞HEC-1A以及人子宫颈内膜细胞End1/E6E7中lncRNAFGD5-AS1、miR-129-5p、SOX4蛋白表达；将HEC-1A细胞分为NC组、si-NC组、si-FGD5-AS1组、si-FGD5-AS1+inhibitor NC组、si-FGD5-AS1+miR-129-5p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测lncRNA FGD5-AS1、miR-129-5p、SOX4的关系；qRT-PCR检测HEC-1A细胞中lncRNAFGD5-AS1、miR-129-5p表达；CCK-8法检测HEC-1A细胞增殖情况；流式细胞术检测HEC-1A细胞凋亡；Transwell检测HEC-1A细胞侵袭、迁移数量；Westernblot检测HEC-1A细胞SOX4、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白水平。结果 与End1/E6E7细胞相比，HEC-1A细胞中lncRN...     

lncRNA PCGEM1通过靶向miR-155-5p抑制LPS诱导的气管平滑肌细胞增殖及炎症反应北大核心CSCD

目的研究lncRNA PCGEM1/miR-155-5p轴对LPS诱导的气管平滑肌细胞增殖和凋亡及炎症反应的影响。方法采用100μg/ml LPS刺激支气管平滑肌细胞BSMC 12 h以诱导细胞损伤。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞lncRNA PCGEM1和miR-155-5p表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞CyclinD1、Cleaved-caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA PCGEM1和miR-155-5p靶向关系。结果与NC组比较,LPS组细胞lncRNA PCGEM1表达水平显著降低,miR-155-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与pcDNA+LPS组比较,pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组lncRNA PCGEM1表达水平显著升高,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著降低(P<0.05)。与anti-miR-NC+LPS组比较,antimiR-155-5p+LPS组miR-155-5p表达水平显著降低,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著降低(P<0.05)。与miR-NC+pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组比较,miR-155-5p+pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组细胞miR-155-5p表达水平显著升高,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著升高,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著降低,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著升高(P<0.05)。结论lncRNA PCGEM1下调miR-155-5p降低LPS诱导的气管平滑肌细胞凋亡及炎症反应,抑制增殖。     

miR-129-5p调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的机制研究

目的 研究微小RNA-129-5p(miR-129-5p)靶向调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的作用及机制。方法 采用RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD和正常胆管上皮细胞系HIBEpic中miR-129-5p的表达水平。选择miR-129-5p表达较低的胆囊癌细胞进行miR-129-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-129-5p过表达组(miR-129-5p mimic组),采用MTT实验检测各组细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组细胞的转移能力。Targetscan7.1预测软件及双荧光素酶报道基因试验检测miR-129-5p对Wnt5a基因的靶向调控作用。RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD及NC组、miR-129-5p mimic组中Wnt5a mRNA的表达水平。胆囊癌细胞分为NC组、miR-129-5p mimic组、miR-129-5p过表达与Wnt5a敲减质粒共转染组(miR-129-5p mimic+sh-Wnt5a组)和miR-129-5p过表达与Wnt5a过表达质粒共转染组(...     

lncRNA FGD5-AS1靶向miR-15a-5p调控LPS诱导的脓毒症细胞损伤

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对LPS诱导的脓毒症细胞损伤的影响及分子机制。方法:500 ng/ml脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞损伤。THP-1细胞分为对照组、LPS组、pcDNA组、pcDNA-FGD5-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-15a-5p组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-NC组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-15a-5p组。RT-qPCR检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平。双荧光素酶报告实验检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p的靶向关系。结果:与对照组相比,经LPS诱导的THP-1细胞中,lncRNA FGD5-AS1表达降低,miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。过表达lncRNA FGD5-AS1和下调miR-15a-5p均能够显著降低细胞凋亡以及炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达(P<...     

lncRNA RMRP通过JAK/STAT信号通路在子宫内膜癌细胞增殖和凋亡中的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA RMRP(lncRNA RMRP)在子宫内膜癌中的生物学功能及主要分子机制。方法 收集在我院接受手术治疗的30例子宫内膜癌患者的癌组织和癌旁组织标本,RT-qPCR法检测lncRNA RMRP在子宫内膜癌组织和癌旁组织、HESC细胞和HEC-1-A细胞中的表达。体外培养子宫内膜癌细胞系HEC-1-A,将空载体、pcDNA-RMRP、NC-siRNA、RMRPsiRNA、NCmimic、miR-580-3pmimic、pcDNA-RMRP+NCmimic、pcDNA-RMRP+miR-580-3pmimic、RMRP-siRNA+空载体、RMRPsiRNA+pcDNA-JAK2、NC inhibitor、miR-580-3p inhibitor分别转染至HEC-1-A细胞中,作为空载体组、pcDNA-RMRP组、NC-siRNA组、RMRP-siRNA组、NC mimic组、miR-580-3p mimic组、pcDNA-RMRP+NC mimic组、pcDNA-RMRP+miR-580-3p mimic组、RMRP-siRNA+空载体组、RMRP-siRNA...     

miR-194-5p通过靶向TLR4/NF-κB通路调控免疫因子IL-6/10对肾病综合征大鼠细胞凋亡的影响

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-194-5p通过靶向Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子(nuclear factor,NF)-κB通路调控免疫因子(interleukin,IL)-6/10对肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)大鼠肾细胞凋亡的影响。方法将通过嘌呤霉素氨基核苷构建的NS大鼠随机分为NS组、NS+miR-194-5p agomir组和NS+miR-194-5p antagomir组(n=15),通过腹腔内注射miR-194-5p agomir或antagomir(300μg)以提高或抑制miR-194-5p。检测各组大鼠肾功能指标、炎性因子、凋亡情况以及TLR4/NF-κB通路水平。通过双荧光素酶报告验证miR-194-5p和TLR4的靶向关系。将肾胚细胞293细胞分为miR-194-5p NC组和miR-194-5p mimic组,通过转染miR-194-5p mimic过表达miR-194-5p,通过RT-qPCR和Western blot检测各组TLR4 mRNA和蛋白水平。结果 NS组的...     

miR-433-3p靶向HP1BP3抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力

目的：探究微小RNA-433-3p(miR-433-3p)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，以及miR-433-3p靶向异染色质蛋白1结合蛋白3(HP1BP3)对胃癌细胞的调控作用。方法：将人胃癌细胞系HGC-27和AGS分为阴性对照（NC）mimic组、miR-433-3p mimic组、NC siRNA (si-NC)组和HP1BP3 siRNA (si-HP1BP3)组，分别转染NC mimic、miR-433-3p mimic、si-NC和si-HP1BP3。RT-qPCR检测miR-433-3p在HGC-27和AGS细胞中的表达；CCK-8法和细胞集落形成实验检测细胞增殖；划痕愈合实验检测细胞迁移；Traswell实验检测细胞侵袭；Western blot检测HP1BP3蛋白表达。结果：与NC mimic组相比，miR-433-3p mimic组HGC-27和AGS细胞中miR-433-3p表达升高。过表达miR-433-3p抑制HGC-27和AGS细胞的增殖、迁移和侵袭，抑制HP1BP3蛋白表达；敲减HP1BP3抑制HGC-27和AGS细胞的增殖和迁移。结论：miR-433...     

miR-218-5p靶向HMGB1参与脂多糖诱导的足细胞损伤

目的探究miR-218-5p、高迁移率蛋白B1(HMGB1)在脂多糖(LPS)诱导的小鼠足细胞损伤中的作用。方法将小鼠足细胞分为4组:正常对照组、LPS诱导组、HMGB1 shRNA+LPS组、miR-218-5p mimics+LPS组。Western blot和Real-time PCR分别检测各组HMGB1、TLR4、MyD88、TNF-α、IL-6、synaptopodin、ZO-1蛋白和mRNA表达水平;免疫荧光检测synaptopodin、ZO-1的表达和定位;Transwell检测足细胞迁移能力;双荧光素酶报告基因验证miR-218-5p和HMGB1的关系。结果 LPS刺激后,HMGB1、TLR4、MyD88表达明显升高,炎性因子TNF-α、IL-6表达升高,而足细胞标记蛋白synaptopodin、ZO-1表达降低,同时足细胞迁移能力明显增强。沉默HMGB1或过表达miR-218-5p可降低TLR4、MyD88,TNF-α、IL-6表达,增加synaptopodin、ZO-1表达,抑制足细胞迁移能力,缓解足细胞损伤。荧光素酶报告基因检测提示miR-218-5p可直接作用...     

LncRNA NEAT1对垂体瘤细胞系GH3侵袭和迁移的作用机制研究

目的 探讨lncRNA NEAT1对垂体瘤细胞侵袭、迁移的作用及机制。方法 qRT-PCR检测lncRNA NEAT1、miR-134和ITGB1表达；Transwell检测侵袭和迁移；双荧光素酶报告基因实验检测miR-134与lncRNA NEAT1、ITGB1的调控关系；Western blot检测ITGB1/FAK/PI3K通路相关蛋白表达。结果 敲低lncRNA NEAT1抑制GH3细胞侵袭和迁移（P<0.05）；抑制miR-134可逆转下调lncRNA NEAT1对GH3细胞侵袭、迁移的抑制作用（P<0.05）。miR-134与lncRNA NEAT1和ITGB1存在负靶向调控关系（P<0.05）。上调miR-134抑制GH3细胞侵袭和迁移，抑制ITGB1/FAK/PI3K通路激活（P<0.05）;ITGB1过表达削弱上调miR-134对GH3细胞的影响（P<0.05）。结论 下调lncRNA NEAT1靶向miR-134可能通过抑制ITGB1/FAK/PI3K通路激活抑制垂体瘤细胞侵袭、迁移。     

LncRNA MINCR靶向miR-223抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞系A549损伤和炎性反应

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MINCR靶向调节微小RNA(miR)-223对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系损伤和炎性反应的影响。方法 将人肺泡上皮细胞系A549随机分为对照组、LPS组、LPS+转染组(Si NC组、Si MINCR组、miR-223 NC组、miR-223 mimic组、Si NC+miR-223 NC组、Si NC+miR-223 antagomir组、Si MINCR+miR-223 NC组、Si MINCR+miR-223 antagomir组)。RT-qPCR检测MINCR、miR-223表达水平；流式细胞仪检测细胞凋亡率；ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平；生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证MINCR与miR-223的靶向关系；Western blot检测细胞中活化的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果 MINCR和miR-223存在靶向关系。LPS组与对照组比较，细胞凋亡率、TNF-α、IL-6水平、MINCR、...     

lncRNA MALAT1通过miR-128-3p靶向SALL4调控人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 分析lncRNA MALAT1通过miR-128-3p/SALL4调控人绒毛膜癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 选取2020年9月至2022年6月期间海口市妇幼保健院妇产科收治的83例绒毛膜癌患者作为研究对象，其癌组织与癌旁组织分别作为绒毛膜癌组与对照组，体外培养人绒毛膜滋养细胞HTR-8/Svneo、人绒毛膜癌JEG-3细胞、JAR细胞，取JEG-3细胞，分为对照组、si NC组、sh lncRNA MALAT1组、sh SALL4组、sh lncRNA MALAT1+inhibitor NC组、sh lncRNA MALAT1+miR-128-3p inhibitor组、sh SALL4+inhibitor NC组、sh SALL4+miR-128-3p inhibitor组，qRT-PCR法测定组织、细胞中lncRNAMALAT1、miR-128-3p、SALL4mRNA水平；CCK8法检测细胞OD450值，Transwell法测定细胞侵袭细胞数与迁移细胞数，双荧光素酶报告基因测定miR-128-3p与lncRNA MALAT1、SALL4靶向关系，WB试验测定SALL4...     

miR-328-5p通过调控RAGE对异位子宫内膜细胞生物学功能的影响

目的 探讨miR-328-5p在异位子宫内膜细胞生物学功能中的作用及潜在机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blot检测异位子宫内膜组织中miR-328-5p、RAGE mRNA和蛋白的表达。分离并培养异位子宫内膜基质细胞，将其分为NCmimic组、miR-328-5pmimic组、miR-328-5pmimic+Vector组、miR-328-5p mimic+pcDNA-RAGE组，RT-qPCR检测细胞中miR-328-5p和RAGE mRNA的表达；CCK-8实验检测细胞增殖能力；Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力；Westernblot实验检测RAGE蛋白的表达；生物信息学和双荧光素酶报告基因实验用来预测和验证miR-328-5p和RAGE的靶向关系。结果 与正常子宫内膜组织比较，异位子宫内膜组织中miR-328-5p表达显著降低，RAGE mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.05）。与NC mimic组比较，miR-328-5p mimic组细胞中miR-328-5p表达显著升高，RAGE mRNA和蛋白表达显著降低，细胞...     

长链非编码RNA NEAT1对人白血病HL-60细胞增殖和侵袭的影响

目的 探索长链非编码RNA NEAT1对白血病HL-60细胞增殖和侵袭的影响,并初步分析其机制。方法 体外培养人白血病HL-60细胞,将lncRNA NEAT1模拟物转染白血病HL-60细胞,高表达NEAT1后,MTT方法检测HL-60细胞增殖能力,Transwell实验检测HL-60细胞侵袭能力。实时定量PCR检测各组细胞NEAT1和miR-181a-5p的表达,双荧光素酶报告基因实验分析NEAT1和miR-181a-5p的靶向关系。结果 转染NEAT1模拟物后,HL-60细胞的增殖和侵袭能力下降（P<0.05）,HL-60细胞中NEAT1的表达升高,miR-181a-5p的表达下降（P<0.05）,双荧光素酶实验表明NEAT1是miR-181a-5p的靶基因。结论高表达lncRNA NEAT1使白血病细胞HL-60的增殖和侵袭能力下降,其机制可能与下调miR-181a-5p表达有关。     

微小RNA-128-3p通过调控锌指盒同源结合蛋白1抑制卵巢癌细胞上皮-间充质转化

目的 探讨微小RNA(miR)-128-3p对卵巢癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响及其对锌指E盒同源结合蛋白1(ZEB1)的调控机制。方法 通过Real-time PCR技术检测上皮性卵巢癌组织(EOC)及癌旁正常组织(各30例)中miR-128-3p的表达量并观察其是否存在差异;选取2种人卵巢癌细胞系SKOV3和A2780,分别转染miR-128-3p模拟物(miR-128-3p mimic)组和阴性对照模拟物(NC mimic)组,利用Real-time PCR技术检测4组miR-128-3p的表达量并验证干扰效果,用Transwell实验观察4组细胞的迁移及侵袭能力。通过双荧光素酶实验验证miR-128-3p与ZEB1的调控关系,用Western blotting检测过表达miR-128-3p后ZEB1蛋白的表达水平;在SKOV3和A2780细胞系中转染pcDNA-ZEB1使其过表达ZEB1,分为NC mimic组,miR-128-3p mimic组,miR-128-3p mimic+pcDNA-ZEB1组,用Western blotting检测6组细胞中EMT相关蛋白E-...     

薄荷脑通过miR-1247-3p/PI3K/Akt通路影响LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡和炎症反应的分子机制研究

目的：探讨薄荷脑对脂多糖（LPS）诱导的Ⅱ型肺泡上皮（AT-Ⅱ）细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法：以5、10、15 mg/L的LPS处理AT-Ⅱ细胞，CCK-8法检测细胞活性；将AT-Ⅱ细胞随机分为对照（NC）组、15 mg/L LPS组、1、5、10μmol/L薄荷脑+15 mg/L LPS组、anti-miR-NC+15 mg/L LPS组、anti-miR-1247-3p+15 mg/L LPS组、miR-NC+10μmol/L薄荷脑+15 mg/L LPS组、miR-1247-3p+10μmol/L薄荷脑+15 mg/L LPS组；采用流式细胞术检测细胞凋亡；ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β水平；Western blot检测蛋白表达；RT-qPCR检测miR-1247-3p表达水平。结果：不同浓度LPS处理后AT-Ⅱ细胞活性降低（P<0.05）。LPS诱导的AT-Ⅱ细胞中Cleaved-caspase-3表达水平及细胞凋亡率升高，TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高，miR-1247-3p表达水平升高，p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平降低（P...     

人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠NF-κB磷酸化水平及炎症相关通路的影响北大核心CSCD

目的：探究人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠核因子-κB(NF-κB)磷酸化水平及炎症相关通路的影响。方法：盲肠结扎穿孔法（CLP）构建大鼠脓毒症心肌损伤模型,60只大鼠随机分为假手术（sham）组、CLP组、人参皂苷Rg1低剂量（CLP+Rg1L）组、人参皂苷Rg1中剂量（CLP+Rg1M）组、人参皂苷Rg1高剂量（CLP+Rg1H）组、瑞沙托维（CLP+TAK-242）组,每组10只。LPS构建体外脓毒症心肌细胞模型,H9C2细胞分为对照（control）组、LPS组、LPS+Rg1L组、LPS+Rg1M组、LPS+Rg1H组、LPS+TAK-242组。右颈总动脉插管法检测各组大鼠平均动脉压（MABP）、心率×左心室发展压（LVDP×HR）、左心室压力最大上升/下降速率（±dp/dtmax）水平;HE染色观察心肌组织病理学改变;Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌组织和H9C2细胞凋亡;ELISA检测大鼠血清和H9C2细胞肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、天冬氨酸转氨酶（AST）、肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-1β含量;CCK-8及EdU染色检测H9C2细胞增殖能力;RT-qPCR检测心肌组织Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK） mRNA表达;Western blot检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p38MAPK、p-p38MAPK、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达。结果：人参皂苷Rg1能够提高MABP、LVDP×HR、±dp/dtmax水平,降低CK、LDH、AST活力,降低cTnⅠ、TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、NF-κB p65、p38MAPK mRNA与TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38MAPK/p38MAPK、NLRP3蛋白水平（P<0.05）,促进心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡与炎症水平,改善心肌损伤。结论：人参皂苷Rg1能够抑制心肌组织细胞凋亡及炎症水平,提高心功能,从而减轻脓毒症所致心肌损伤,其机制可能与TLR4/NF-κB、p38MAPK信号通路有关。     

miR-21靶向CCL20及PDCD4对脓毒症大鼠心肌中细胞凋亡及炎症反应的调节作用

目的:研究miR-21靶向CC趋化因子配体20(CCL20)及程序性细胞死亡因子4(PDCD4)对脓毒症大鼠心肌中细胞凋亡及炎症反应的调节作用.方法:成年雄性SD大鼠随机分为对照组、脓毒症组、脓毒症+NC组、脓毒症+miR-21组,后三组采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型,尾静脉注射NC mimic或miR-21 mim...     

MicroRNA-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应

 目的: 探讨microRNA-132(miR-132)通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法: 向大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中转染miR-132 mimic、mimic阴性对照(NC)、miR-132 inhibitor或inhibitor NC,转染后用脂多糖(LPS)和(或)乙酰胆碱(ACh)处理细胞;采用real-time PCR检测乙酰胆碱酯酶(AChE)的mRNA表达;采用Western blot检测细胞中AChE、信号转导及转录激活因子3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3),以及细胞浆和细胞核中核因子κB(NF-κB)蛋白的改变;采用AChE活性测试盒检测细胞上清液中AChE活性的改变;采用免疫荧光检测NF-κB的核移位变化。结果: 上调或下调miR-132不影响AChE的mRNA相对表达水平;上调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著降低(P < 0.05),下调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著升高(P < 0.05)。当给予LPS+ACh作用时,miR-132 mimic组对NF-κB p65核移位的抑制作用较mimic NC组更强(P < 0.05),miR-132 inhibitor组较inhibitor NC组更弱(P < 0.05);miR-132 mimic组对STAT3及p-STAT3蛋白的抑制作用较mimic NC组更强(P < 0.05)。结论: miR-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制可能是miR-132靶向作用AChE,抑制AChE对ACh的水解作用,从而增强ACh的抗炎作用,抑制NF-κB及STAT3的活化。     

lncRNA NEAT1靶向miR-497-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化的影响北大核心CSCD

目的:探讨长链非编码RNA核富集转录体1(lncRNA NEAT1)靶向miR-497-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养PANC-1细胞株,对其转染并分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(siRNA-NC组)、沉默NEAT1组(NEAT1-siRNA组)、共转染组(NEAT1-siRNA+miR-497-5p-inhibitor组)。采用实时荧光定量PCR法检测NEAT1、miR-497-5p水平;CCK-8法、流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;Western blot检测增殖细胞核抗原(Ki-67)、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及EMT标志蛋白E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(Ncadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达情况;应用TargetScan数据库预测NEAT1与miR-497-5p靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。结果:与NG组、siRNA-NC组比较,NEAT1-siRNA组PANC-1细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-497-5p及Bax、E-cadherin蛋白表达均显著升高(P<0.05),NEAT1水平、Ki-67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NEAT1-siRNA组比较,NEAT1-siRNA+miR-497-5p-inhibitor组PANC-1细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-497-5p及Bax、E-cadherin蛋白表达均显著降低(P<0.05),Ki-67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-497-5p是NEAT1的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-497-5p-inhibitor-NEAT1-WT组荧光素酶活性显著高于miR-497-5p-inhibitor-NC-NEAT1-WT组(P<0.05)。结论:沉默lncRNA NEAT1表达能够靶向上调miR-497-5p表达,抑制胰腺癌细胞增殖及EMT过程,并诱导细胞凋亡,有望成为胰腺癌新的潜在治疗靶点。