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目的:研究血浆外泌体来源microRNA(miRNA),作为前列腺癌骨转移的潜在标志物。方法:选取3例初诊为前列腺癌骨转移患者和3例局限性前列腺癌患者,收集患者外周静脉血10 mL,使用超速离心法及透射电子显微镜对血浆外泌体提取和鉴定。应用高通量测序分析血浆外泌体miRNA的差异表达谱。通过基因数据库GEO和已发表文章对差异miRNA筛选,选取测序结果中差异表达miRNAs,对7例局限性前列腺癌患者和10例前列腺癌骨转移患者的血浆外泌体进行qRT-PCR验证,同时结合GEO数据库样本进行验证。结果:高通量测序结果显示,从患者外周血浆外泌体中平均检测到740种miRNAs,通过R软件计算差异miRNA,得出61种差异miRNA;与对照组相比,hsa-miR-885-5p、hsa-miR-1255a、hsa-miR-122-5p、hsa-miR-141-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-1224-5p等在骨转移组中差异表达,通过靶基因功能及数据库表达选取miRNA进行PCR验证,发现hsa-miR-423-5p表达差异具有统计学意义(P=0.033)。通过数据库对60例局限性前列腺癌患者和40例骨转移患者统计发现,hsa-miR-423-5p在前列腺癌骨转移中显著下调(P=0.001<0.05)。结论:血浆外泌体来源miR-423-5p在前列腺癌骨转移中显著下调,有望成为前列腺癌骨转移患者中新的标志物。 相似文献
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目的:探讨外泌体hsa-miR-522-3p在卵巢癌发生发展中的作用及其潜在机制。方法:采用荧光实时定量PCR检测hsa-miR-522-3p在组织和细胞中的表达水平。使用EdU、Transwell和流式细胞术检测外泌体hsa-miR-522-3p对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。通过荧光素酶测定和蛋白质印迹评估hsa-miR-522-3p对CDK6表达的调控作用。进一步构建裸鼠成瘤模型验证外泌体hsa-miR-522-3p对肿瘤生长的影响。结果:本研究发现hsa-miR-522-3p在卵巢癌组织、血浆外泌体及卵巢癌细胞的外泌体中表达显著升高。与NC组比较,hsa-miR-522-3p模拟物组细胞的迁移和侵袭能力显著增高且差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,hsa-miR-522-3p抑制剂组可以促进caspase3和Bax的表达并抑制Bcl2的表达。荧光素酶报告结果显示,hsa-miR-522-3p能够靶向结合CDK6的3′-非翻译区(3′-UTR)来抑制其表达。裸鼠成瘤结果表明,外泌体hsa-miR-522-3p可增加瘤的体积及重量。结论:外泌体hsa-miR-... 相似文献
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摘 要:[目的] 分析Ⅲ期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)自适应放疗中不同放射敏感性患者的血浆外泌体微小RNA (microRNA,miRNA)差异表达谱,并应用生物信息学分析外泌体miRNA的作用。[方法] NSCLC患者接受自适应放疗20次时的胸部增强CT进行肿瘤评估,划分为放射敏感组与放射抵抗组,从中筛选出5对进行下一步研究。 通过QIAseq建库方法构建稳定的 miRNA 特异文库,并利用Illumina高通量测序技术检测miRNA差异表达谱。对差异miRNA靶基因进行生物信息学分析,分析其涉及的主要生物学功能及信号通路。[结果] 与放射敏感患者相比,放射抵抗患者血浆外泌体中共有 142个miRNA异常表达,其中下调 42个,上调 100 个。通过基因本体富集及京都基因与基因组百科全书的通路富集分析,上述差异表达miRNA的靶基因功能主要富集于TGF-β、Hedgehog、mTOR、p53等信号通路,涉及RNA聚合酶、泛素样蛋白转移酶等多种细胞生化代谢途径,并参与细胞黏附、细胞周期、衰老等多种生物学过程。 [结论] 不同放射敏感性NSCLC患者血浆外泌体miRNA表达谱发生了明显变化,可能通过TGF-β等信号通路在NSCLC放射敏感性调控中发挥重要作用。 相似文献
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目的:分析胰腺癌组织和正常组织差异表达的miRNA,筛选与胰腺癌预后相关的生物标志。方法:下载并整理基因芯片表达汇编数据库(GEO)中GSE32678和GSE71533芯片数据集原始数据,应用R语言筛选差异表达miRNA,结合GSE24279数据集,获得差异表达的miRNA并取交集。应用生物信息学分析工具对交集miRNA进行靶基因预测,进而对靶基因进行功能分析,构建蛋白互作网络(PPI)、miRNA-mRNA调控网络、miRNA-mRNA-pathway调控网络,结合肿瘤基因组图谱数据库(TCGA)中胰腺癌样本的miRNA表达及预后数据,筛选出胰腺癌预后相关标志物。结果:共筛选出胰腺癌组织和正常组织22个交集miRNA,其中hsa-miR-30a-5p、hsa-miR-551a、hsa-miR-375与胰腺癌患者的生存预后密切相关。hsa-miR-125b-5p、hsa-miR-221-3p、hsamiR-31-5p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-10a-5p是miRNA-mRNA调控网络中的核心miRNA。结论:通过对GEO和TCGA数据库胰腺癌相关数据的分析发现hsa-miR-30a-5p、hsa-miR-551a、hsa-miR-375显著影响胰腺癌患者的预后,可以作为判断预后的标志。 相似文献
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目的 探讨调节性T细胞(Treg)联合血清外泌体ZFPL1在非小细胞肺癌诊断中的价值。方法 收集2022年1月至2022年10月收治的非小细胞肺癌患者67例为观察组,选择同期健康体检者61例为对照组。采用流式细胞仪测定Treg细胞标志物CD3+CD8+和CD4+Foxp3+水平;采用实时荧光PCR(qPCR)测定血清外泌体ZFPL1水平,分析Treg及血清外泌体ZFPL1表达水平与临床病理特征的关系;绘制受试者特征工作曲线(ROC)评价Treg联合血清外泌体ZFPL1诊断非小细胞肺癌的效能。结果 观察组Treg细胞标志物CD3+CD8+水平为0.48±0.11,低于对照组的0.59±0.16(P<0.05);观察组血清外泌体ZFPL1水平和Treg细胞标志物CD4+Foxp3+水平分别为3.62(1.44,7.62)和0.76±0.06,高于对照组的0.91(0.17,3.43)和0.67±0.19,差异均... 相似文献
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目的: 探讨miR-338基因簇在食管癌组织中的表达模式及其与食管癌发病风险的关系。方法: 选取86例经病理确诊的食管癌患者,分别提取食管癌和癌旁组织总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测hsa-miR-338-3p、hsa-miR-338-5p与hsa-miR-657的表达,应用配对样本t检验分析癌和癌旁组织中miRNA表达差异,Pearson相关分析检验基因簇各miRNA表达的相关性,logistic回归分析miRNA异常表达对食管癌发病风险的影响。结果: hsa-miR-338-3p与hsa-miR-338-5p在食管癌组织中的表达均较癌旁组织降低(P均<0.05),hsa-miR-657在食管癌和癌旁组织中表达的差异无统计学意义(P>0.05),hsa-miR-338-3p与hsa-miR-338-5p表达显著相关(r=0.754,P<0.05),hsa-miR-338-5p的低表达增加了食管癌的发病风险(OR=1.264,P<0.05),可能是食管癌的危险因素。结论: miR-338基因簇可能抑制了食管癌的发生,hsa-miR-338-5p可能成为食管癌诊断的潜在标志物。 相似文献
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目的:分析非小细胞肺癌患者预后相关的外泌体miRNA的临床意义,并通过实验验证其功能,作为肺癌诊断和治疗的生物标志物。方法:从公共数据库下载非小细胞肺癌患者血清外泌体和肺癌组织的miRNA表达谱及临床数据;分别利用R语言“limma”“survival”和“survminer”包进行miRNA的差异表达分析和生存分析;通过靶基因富集分析预测miRNA生物学功能并分析其与免疫细胞浸润的相关性;在两种肺癌细胞中敲低miRNA,通过CCK-8、EdU和Transwell实验分析其对细胞增殖和迁移的影响;收集过表达miRNA肺癌细胞的外泌体,处理人正常支气管上皮细胞BEAS-2B并分析生物学功能变化。结果:基于差异分析和单因素COX分析,选定has-miR-539-5p(miR-539)进一步探究其与多个肿瘤相关信号通路和免疫系统相关;相关性分析表明miR-539表达与多种免疫细胞浸润显著相关;敲低miR-539能够显著降低肺癌细胞增殖和迁移能力,而过表达miR-539肺癌细胞外泌体处理正常肺细胞能够使其获得恶性细胞特征,包括增殖和迁移能力的增强。结论:miR-539能够调控肺癌细胞增殖和迁移... 相似文献
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目的 研究miR-455-5p在上皮性卵巢癌中的表达情况,分析其表达对上皮性卵巢癌发生发展的影响。方法 从GEO数据库中下载正常卵巢上皮组织与上皮性卵巢癌组织miRNA表达数据GSE83693,通过差异表达分析获得上皮性卵巢癌中miRNA差异表达数据,分析miR-455-5p在正常卵巢上皮与上皮性卵巢癌组织中的表达是否存在差异,应用qRT-PCR验证差异表达预测结果;应用生物信息学软件对miR-455-5p靶基因进行KEGG通路富集分析及GO基因功能注释,探究miR-455-5p表达失调在上皮性卵巢癌发生发展过程中的作用。结果 筛选出明显差异表达miRNA 101例,34例表达上调,67例表达下调;其中miR-455-5p呈明显下调(P<0.01),差异倍数为-2.9019;qRT-PCR验证结果显示,上皮性卵巢癌细胞(SKOV-3,OVCAR-3,A2780)中miR-455-5p表达量明显低于正常卵巢上皮细胞(IOSE-80),差异均有统计学意义(P<0.05);KEGG通路富集分析结果显示,miR-455-5p调控的靶基因主要参与的通路共5个,包括有TGF-β信号通路,Hippo信号通路,ECM-受体相互作用,癌症中的转录失调通路,慢性粒细胞白血病,这些通路均与肿瘤相关。GO功能注释分析结果显示上述通路中miR-455-5p调控的靶基因主要参与蛋白质磷酸化,促进细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡,促进上皮-间充质转化,转录调节及调控细胞周期等与肿瘤发生相关的功能。结论 miR-455-5p在上皮性卵巢癌中表达下调,miR-455-5p靶基因参与上皮性卵巢癌肿瘤相关通路与功能,与上皮性卵巢癌发生发展相关。 相似文献
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目的 筛选不同海拔地区生活的藏族患者的胃癌组织微小RNA(miRNA)差异表达,探讨高原地区外环境缺氧是否参与调控肿瘤的发生、侵袭和转移等.方法 选择5对不同海拔地区生活的藏族胃癌患者作为研究对象(其中海拔﹥3500 m者5例,海拔﹤2450 m者5例),对胃癌组织及其配对癌旁组织进行miRNA芯片检测,分析差异miRNA,查询差异miRNA-靶基因,预测的靶基因应用DAVID数据库进行功能富集分析(GO分析)和pathway富集分析.结果 在5对不同海拔地区生活的藏族胃癌患者的胃癌组织及其配对癌旁组织中找出16个差异表达的miRNA,在海拔﹥3500 m组均上调,仅有hsa-miR-1260b、hsa-miR-130b-3p、hsa-miR-3648、hsa-miR-4284预测到验证的靶基因,其中hsa-miR-1260b预测118个,hsa-miR-130b-3p预测151个.这些靶基因富集在细胞增殖、基因表达调控、转录调控、细胞周期、细胞内信号传导等生物学过程和功能上;pathway富集到癌症通路上.结论 在高原藏族胃癌患者的肿瘤生长、侵袭、转移及肿瘤耐药等过程中,hsa-miR-1260b、hsa-miR-130b-3p可能发挥着重要的作用. 相似文献
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目的 探究卵巢癌细胞源性外泌体对人外周血树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法 从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠从中分选出CD14+的细胞;采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白介素-4(rhIL-4)联合刺激的办法诱导CD14+/PBMC分化为未成熟树突状细胞(iDCs),光镜确认细胞形态;超速离心提取卵巢癌顺铂耐药细胞外泌体(A2780cis-外泌体),蛋白质印迹法检测其特征性蛋白标志物,透射电镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)检测外泌体粒径分布;iDCs与A2780cis-外泌体共培养后给予重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)诱导,流式细胞术检测CD83+/HLA-DR+/CD1a+细胞比例变化。结果 超速离心提取的卵巢癌顺铂耐药细胞外泌体,TEM下可检测到直径约为60 nm的“杯盏状”外泌体颗粒。蛋白质印迹法结果显示A2780cis细胞各蛋白表达均为1,A2780cis-外泌体中CD9、CD8... 相似文献
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目的 探讨术前血清甲状腺球蛋白(Preoperative serum thyroglobulin,PS-Tg)与甲状腺乳头状癌(Papillary carcinoma of thyroid,PTC)淋巴结转移(Lymph node metastasis,LNM)的关系。方法 本研究纳入2021年10月—2022年10月行甲状腺切除术并经术后病理证实的PTC患者,并收集其临床及病理资料283份。单因素、多因素logistic回归分析PS-Tg与PTC LNM的关系,绘制列线图将两者关系量化,通过ROC曲线确定最佳截断值。结果 PTC合并LNM组PS-Tg水平高于单纯PTC组(P<0.05),单因素与多因素logistic回归分析发现PS-Tg水平升高可能是PTC发生LNM的独立危险因素,且PS-Tg水平升高可解释约15%的PTC LNM风险。结论 PS-Tg水平升高可能是PTC患者颈部LNM的危险因素,对术前LNM诊断有一定的预测价值。 相似文献
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目的 检测正常卵巢、化疗敏感上皮性卵巢癌(EOC)及化疗耐药EOC组织及血清外泌小体中p53相关miR-214、miR-503的表达差异,初探p53相关miRNA与EOC耐药的关系.方法 采用免疫荧光法检测正常卵巢、化疗敏感EOC及化疗耐药EOC组织中p53的表达;RT-PCR法检测血清外泌小体及上述3种组织中p53相关miR-214、miR-503表达的差异.结果 免疫荧光法发现,与正常组织相比,p53在EOC组织中荧光较弱,其中化疗耐药EOC组织与化疗敏感EOC组织间比较差异无统计学意义(P﹥0.05).与敏感组相比,耐药组血清外泌小体中miR-214上调3倍,miR-503下调3倍,与组织中变化一致.结论 p53相关miR-214及miR-503由外泌小体携带进入血液循环,并可能在EOC化疗耐药中发挥重要作用. 相似文献
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蔡启轩赵昕王雁冰孙钰王金成 《肿瘤防治研究》2017,(9):601-606
目的探讨骨肉瘤潜在的miRNA分子调控网络,为解析骨肉瘤发生发展的分子机制提供理论支撑。方法通过差异表达分析获得骨肉瘤组织表达水平发生显著性改变的miRNA,并找到具有显著差异的miRNA靶基因;再通过KEGG代谢通路富集分析以及GO基因功能注释,探究骨肉瘤组织与正常组织相比表达水平发生显著性改变基因的功能,构建分子共调控网络。结果筛选差异表达miRNA52例,其中31例miRNA上调表达,21例miRNA下调表达;参与肿瘤通路的miRNA共有5例,其关联靶基因共有314个。KEGG代谢通路富集分析结果与GO基因功能分析结果显示,差异表达基因主要参与肿瘤相关的代谢通路。基于差异表达基因及TRED数据库中所收录的人类转录因子信息,对差异表达基因进行分子偶联,构建了分子共调控网络。结论基于分子共表达网络,对骨肉瘤发生发展的分子作用机制进行了系统性挖掘。 相似文献
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目的:探讨miRNA调控食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖的潜在机制。方法:纳入2019年06月至2020年06月在我院接受治疗的食管癌患者6例,采集其食管癌组织和癌旁组织后抽取总RNA进行miRNA高通量测序。在食管癌细胞CaES-17中过表达食管癌组织和癌旁组织中的差异miRNA,检测食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖情况。通过TargentScan7.2在线分析和荧光素酶报告实验分析miRNA的靶标mRNA。结果:6例患者的食管癌组织和癌旁组织通过高通量测序发现hsa-miR-30d-5p、hsa-miR-6818-5p、hsa-miR-525-5p、hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-212-5p、hsa-miR-586、hsa-miR-1286、hsa-miR-365b-3p、hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-4317在食管癌组织和癌旁组织中的表达差异在8倍以上,并且食管癌组织均高于癌旁组织。干扰上述miRNA后,发现干扰miR-586能够抑制食管癌细胞CaES-17的增殖水平和迁移水平,提高凋亡水平。过表达miR-586后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平下降,增殖水平和迁移水平上升。TargentScan7.2在线分析和荧光素酶报告实验发现miR-586靶向TLR7的3' 端非编码区。敲低TLR7后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平下降,增殖水平和迁移水平上升。过表达TLR7后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平上升,增殖水平和迁移水平下降。但是,同时干扰miR-586和敲低TLR7后,相比于对照食管癌细胞,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平和增殖水平无显著差异。结论:miR-586通过靶向TLR7的3' 端非编码区,降解了TLR7的mRNA,抑制了TLR7的蛋白翻译,最终抑制了食管癌细胞CaES-17的凋亡、促进了食管癌细胞CaES-17的增殖。 相似文献
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目的:体外实验研究人体甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中miRNA在碘、TSH影响下的表达变化。方法:体外培养PTC细胞,Western blot法半定量分析p27kip1、AKT、AP-1的表达,RT-PCR法定量分析miRNA-21、miRNA-221、miRNA-222的表达。结果:经不同浓度碘和TSH分别处理PTC细胞,3种miRNA的表达量较对照组均上调;所对应的蛋白p27kip1表达均减少,AP-1及AKT表达较对照组均增加,增加程度与处理因素的浓度未见明显关联。结论:碘、TSH对甲状腺乳头状癌细胞中PI3K/AKT信号通路起到上调作用,从而对甲状腺乳头状癌的发展起到了一定促进作用,且其作用程度与处理浓度无关。 相似文献