miR-455-3p调控Keap1/Nrf2信号对气道平滑肌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨miR-455-3p调控Keap1/Nrf2信号对气道平滑肌细胞凋亡的影响。方法 收集2021年1月至2023年1月我院普胸外科收治的60例COPD患者，作为COPD组；另选取60例无COPD病史的肺部良性肿瘤患者正常肺组织作为健康对照组（Control组）。分离气道平滑肌细胞（ASMCs），将COPD患者气道平滑肌细胞随机分为miR-455-3p组、miR-NC组、miR-455-3p+si-Nrf2组。RT-PCR检测Control组和COPD组患者中miR-455-3p的表达，并检测转染过不同质粒的各组COPD患者气道平滑肌细胞中miR-455-3p的表达。分别采用CCK-8、Transwell小室法及流式细胞仪检测COPD患者气道平滑肌细胞增殖、侵袭和凋亡能力；采用ELISA检测COPD患者气道平滑肌细胞培养上清液中IL-6、TNF-α水平；蛋白质印迹检测细胞中Keap1和Nrf2蛋白表达。结果 与Control组相比，COPD组患者ASMCs中miR-455-3p表达降低（P<0.05）；与NC组相比，miR-455-3p组ASMCs中miR-455-3p表达...     

miR-195靶向FOXK1介导Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌细胞侵袭转移的分子机制

目的 探究微小RNA(miR)-195靶向叉头盒蛋白K1(FOXK1)介导Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌细胞侵袭转移的分子机制。方法 选择140例胃癌组织和癌旁正常组织，其中男性77例，女性63例；年龄46～73岁，平均年龄55.34岁（标准差3.68岁）。检测其中miR-195、FOXK1和β-catenin的表达水平。通过Pearson检验分析相关性。通过双荧光素酶报告验证miR-195与FOXK1的相关性。将人胃癌细胞分为4组：对照组、miR-195组、FOXK1组和miR-195+FOXK1组。通过转染miR-195类似物和/或FOXK1质粒来提高miR-195和/或FOXK1的水平。检测各组细胞增殖、侵袭能力，以及β-catenin转录和蛋白表达水平。结果 胃癌组织中miR-195水平显著低于正常组织，而FOXK1和β-catenin表达水平显著高于正常组织（P <0.05）。FOXK1与β-catenin正相关，miR-195分别与FOXK1和β-catenin负相关（P <0.05）。验证结果显示miR-195与FOXK1的靶向结合（P <0...     

下调miR-199a-5p对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响和机制研究

目的:探讨下调miR-199a-5p对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响和机制。方法:将心肌细胞H9C2分成Control组(常规培养的对照细胞)、DOX组(经含1μM阿霉素的细胞培养液培养)、DOX+Anti-miR-NC组(转染inhibitor control,经含1μM阿霉素的细胞培养液培养)和DOX+Anti-miR-199a-5p组(转染miR-199a-5p inhibitor,经含1μM阿霉素的细胞培养液培养)、DOX+Anti-miR-199a-5p+DKK1组(转染miR-199a-5p inhibitor,经含1μM阿霉素和20ng/ml的Wnt/β-catenin信号抑制剂DKK1的细胞培养液培养)。各组细胞处理24h以后,Realtime PCR测定miR-199a-5p表达,CCK-8测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定C-Caspase-3、β-catenin、c-Myc蛋白表达。结果:与Control组比较,DOX组细胞中miR-199a-5p水平升高,细胞增殖活性下降,细胞凋亡和C-Caspase-3蛋白表达水平升高,β-catenin、c-Myc蛋白表达水平降低(P均<0.01)。与DOX+Anti-miR-NC组比较,DOX+Anti-miR-199a-5p组细胞中miR-199a-5p水平降低,细胞增殖活性升高,细胞凋亡水平和C-Caspase-3蛋白表达水平降低,β-catenin、c-Myc蛋白表达水平升高(P均<0.01)。与DOX+Anti-miR-199a-5p组相比,DOX+Anti-miR-199a-5p+DKK1组心肌细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3蛋白表达水平升高,β-catenin、c-Myc蛋白表达水平降低(P均<0.01)。结论:下调miR-199a-5p通过激活Wnt/β-catenin信号抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡。     

TRIB3激活Wnt/β-catenin信号通路对喉癌TU686细胞体外生长增殖及移植瘤小鼠外周免疫抑制分子表达的影响

目的：探讨TRIB3激活Wnt/β-catenin信号通路对喉癌TU686细胞体外生长增殖及移植瘤小鼠外周免疫抑制分子表达的影响。方法：分别在体外细胞（人永生化表皮细胞系HaCat及喉癌细胞TU686）及组织（喉癌及癌旁组织）中检测TRIB3蛋白及RNA表达，随后将TU686细胞分为阴性对照组（NC组）及敲低TRIB3组（sh-TRIB3组），提取细胞总蛋白及RNA，验证两组细胞中TRIB3表达水平。验证成功后，CCK-8、集落克隆实验及流式细胞术检测TU686细胞的增殖能力；Western blot检测两组细胞中Wnt、Cyclin-D1、C-myc、β-catenin、p-β-catenin蛋白表达水平，相关性分析验证TRIB3与Wnt、Cyclin-D1、C-myc、β-catenin、p-β-catenin蛋白表达的相关性。利用敲低TRIB3的核心质粒构建低表达TRIB3的裸鼠移植瘤模型（TRIB3 sgRNA组），并设置平行对照组（Control sgRNA组），观察瘤体的生长体积及重量，ELISA测定移植瘤小鼠血清免疫抑制分子表达。结果：与HaCat细胞及正常癌旁组织相比，...     

长链非编码SNHG1/miR-145/ADAM17轴在椎间盘髓核退变中的作用及其调控机制

目的 ：研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1（SNHG1）、miR-145及解整合素-金属蛋白酶17（ADAM17）在椎间盘退变（IDD）组织中的表达，探讨SNHG1调控miR-145/ADAM17轴对椎间盘髓核细胞退变的影响及机制。方法 ：采用qRT-PCR、免疫印迹检测30例IDD患者经手术摘除的髓核组织SNHG1、miR-145与ADAM17的表达；双荧光素酶报告基因、RNA免疫共沉淀等确定SNHG1、miR-145与ADAM17的关系；白介素（IL）-1β诱导髓核细胞建立细胞退化模型，SNHG1 siRNA或miR-145模拟物等转染后，CCK-8、流式细胞术等检测细胞增殖、凋亡以及相关分子指标的变化。结果 ：相比于对照髓核组织，IDD髓核组织中SNHG1与ADAM17表达上调，miR-145表达下调，均与Pfirrmann分级显著相关。SNHG1可通过海绵作用靶向miR-145,miR-145也可靶向ADAM17的3’-非编码区（3’-UTR）抑制ADAM17蛋白表达。SNHG1沉默逆转了IL-1β诱导的髓核细胞凋亡及基质酶（基质金属蛋白酶13、ADAMTS4）合成，上...     

lncRNA GAS5通过miR-26a靶向调控JAK1/STAT3信号通路对子宫内膜样癌细胞凋亡及侵袭的影响

目的 探讨lncRNA GAS5通过miR-26a靶向调控JAK1/STAT3信号通路对子宫内膜样癌（EC）细胞凋亡及侵袭的影响。方法 选取2018年4月—2021年5月经我院首次确诊并进行广泛性子宫切除及腹膜后淋巴结清扫术治疗的新鲜无菌EC患者癌灶及相对癌旁组织（距离肿瘤5 cm外）共45对。使用定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测EC患者癌灶及相对癌旁组织、人子宫内膜癌细胞系ISK（高分化）、HEC-1-B（中分化）、人EC细胞系KLE（低分化）、子宫内膜腺上皮细胞（正常细胞）中lncRNA GAS5的表达。依据转染不同分为NC组（阴性对照质粒）、lncRNA GAS5组（转染lncRNA GAS5过表达质粒）、anti-miR-26a组（转染miR-26a干扰质粒）、lncRNA GAS5+miR-26a组（转染lncRNA GAS5过表达质粒+miR-26a过表达质粒）。使用EdU实验、AnneinV-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞的凋亡、细胞活力和增殖能力;使用荧光素酶报告基因分析荧光素酶活性;通过qRT-PCR和Western blot分析各组细胞中lncRNA...     

miR-320调节人慢性髓系白血病细胞系K562的增殖

目的探讨miR-320对人慢性髓系白血病细胞系K562增殖和细胞周期的影响。方法采用正常人及初诊的慢性髓系白血病患者外周血病单个核细胞,用实时定量PCR检测miR-320和β-catenin mRNA的表达;用miR-320模拟物转染K562细胞,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞计量术检测细胞周期;双荧光报告基因试验和Western blot检测β-catenin mRNA表达;实时定量PCR检测miR-320模拟物对Wnt/β-catenin信号通路下游基因的转录。结果 miR-320在慢性髓系白血病患者中的表达水平显著低于正常人,而β-catenin表达水平显著高于正常人(P0.05);过表达miR-320可以抑制K562细胞的增殖(P0.05)和细胞周期的运行;miR-320可抑制靶基因β-catenin的表达,进而抑制Wnt/β-catenin信号通路下游基因c-Myc、cyclin D、VEGF和Cox-2 mRNA的表达(P0.05)。结论 miR-320通过调节β-catenin的表达,在慢性髓系白血病中发挥抑癌功能。     

circDCUN1D4调节miR-18a-5p/FBP1轴对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的 探讨环状RNA(circRNA)DCUN1D4调节微小RNA(miR)-18a-5p/果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法 选取人肺癌细胞系（H1975、H1650、A549、SPCA-1）和人正常肺表皮细胞（HPL-1）,qRT-PCR检测各种细胞中circDCUN1D4、miR-18a-5p、FBP1 mRNA表达水平。取对数生长期的A549细胞并分为空白组、circDCUN1D4过表达质粒（circDCUN1D4）组、过表达质粒阴性对照（NC）组、circDCUN1D4+miR-18a-5p模拟物阴性对照（circDCUN1D4+mimics NC）组、circDCUN1D4+miR-18a-5p模拟物（circDCUN1D4+miR-18a-5p mimics）组。CCK-8法检测各组A549细胞活力,流式细胞术检测各组A549细胞凋亡水平,qRT-PCR检测各组A549细胞中circDCUN1D4、miR-18a-5p、FBP1 mRNA表达水平,Western blot检测各组A549细胞中FBP1、caspase-3、Ki...     

miRNA27a 靶向GOLM1 对非小细胞肺癌生物行为学的影响

目的:探讨miR-27a在非小细胞肺癌中的生物学功能及其作用机制。方法:构建miR-27a过表达和阴性对照慢病毒A549稳定细胞系,分别为miR-27a OE组和miR-27a NC组,采用生物信息学和双荧光素酶报告系统分析miR-27a与GOLM1靶向关系。采用Western blot检测miR-27a NC组、miR-27a OE组以及未转染Control组细胞GOLM1的蛋白表达水平;采用CCK-8法检测各组细胞在24、36、48和72 h时的增殖活力;采用Transwell检测各组细胞的侵袭能力;采用TUNEL染色检测各组细胞的凋亡水平;采用体内移植瘤实验分析各组细胞肿瘤生长状态和转移情况。结果:生物信息学分析显示GOLM1可能是miR-27a的作用靶点;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与转染GOLM1-WT的miR-27a NC组细胞相比,转染GOLM1-WT的miR-27a OE组细胞的荧光素酶相对活性显著降低(P0.05);Western blot结果表明miR-27a OE组(0.54±0.05)GOLM1的蛋白表达水平显著低于Control组(1.35±0.08)和miR-27a NC组(1.31±0.09)(P0.05);与Control组和miR-27a NC组相比,miR-27a OE组细胞的增殖活力均受到显著抑制(P0.05);Transwell结果显示,miR-27a OE组(39.66±5.74)细胞的侵袭能力显著低于Control组(80.26±8.03)个和miR-27a NC组(77.51±10.18)个(P0.05);TUNEL染色表明,与Control组(49.17±6.56)个和miR-27a NC组(44.84±7.01)个相比,miR-27a OE组(82.49±9.70)个细胞凋亡水平显著增加(P0.05);体内移植瘤实验结果显示miR-27a OE组肿瘤生长速度和腹膜内转移病灶数量(8.85±1.57)均显著低于Control组(14.25±3.04)和miR-27a NC组(14.69±2.73)(P0.05)。结论:miR-27a可能通过靶向下调GOLM1的蛋白表达,抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭,并诱导其凋亡,从而抑制非小细胞肺癌的发生发展。     

miR-152调控Wnt通路对CRC细胞生物学行为和免疫功能的影响北大核心CSCD

目的:探究微小RNA(miR)-152调控Wnt通路对大肠癌(CRC)细胞生物学行为和免疫功能的影响。方法:将人CRC细胞系SW116分为3组:NC组、mimic组和inhibitor组。通过转染miR-152 mimic或inhibitor上调或抑制miR-152水平,NC组转染等量的NC空载质粒作为对照组。检测各组细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡能力。Western blot检测免疫抑制蛋白TNF-α、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)和Wnt通路中蛋白水平。结果:与NC组比较,mimic组细胞增殖、迁移、侵袭能力被显著抑制,凋亡率显著升高(P<0.05)。Inhibitor组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著高于NC组,凋亡率显著低于对照组(P<0.05)。此外,mimic组TNF-α、sIL-2R、Wnt1、β-catenin、c-myc水平显著低于NC组(P<0.05),inhibitor组上述蛋白水平显著高于NC组(P<0.05)。结论:miR-152缓解CRC细胞的免疫抑制状态,抑制增殖、转移并促进凋亡,其作用机制可能与Wnt通路有关。     

miR-7-5p和miR-152-3p联合调控Wnt/β-catenin通路对乳腺癌细胞上皮-间质转化及化疗耐药的影响

目的探讨miR-7-5p和miR-152-3p协同抑制乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)进程及紫杉醇耐药的分子机制。方法采用生物信息学软件预测miR-7-5p和miR-152-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测两者与TCF4的靶向关系;Western blot法检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键调控因子β-catenin及TCF4蛋白的表达;在转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics基础上给予Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl处理后,Western blot法检测MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和EMT相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达,Transwell小室实验检测MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力;MTT实验检测激活Wnt/β-catenin信号通路对MCF-7/TAX细胞紫杉醇耐药性的影响。结果 TCF4 3′UTR区域存在能够与miR-7-5p及miR-152-3p互补的结合位点;转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后可使TCF4野生型(TCF4-WT)报告基因载体的荧光素酶活性较NC组明显降低(P0.05)。Western blot结果显示,与NC组相比,转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后各组紫杉醇耐药MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平明显降低(P0.05),且两者共同转染后MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平较miR-7-5p组或miR-152-3p组进一步降低(P0.05)。Western blot结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和vimentin蛋白表达水平明显升高,而E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P0.05)。Transwell小室结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力明显增强(P0.05)。MTT结果显示,不同浓度紫杉醇作用下,miR-7-5p+LiCl组细胞增殖活力较miR-7-5p组明显升高;同时miR-152-3p+LiCl组和miR-7-5p/152-3p+LiCl组细胞的增殖活力较NC组均明显升高(P0.05)。结论 TCF4是miR-7-5p和miR-152-3p的共同靶标。miR-7-5p和miR-152-3p可共同抑制MCF-7/TAX细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活化。     

miR-200a对人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡、成血管分化的作用机制

目的 探讨miR-200a对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSC)增殖、凋亡、成血管分化的作用机制。方法 将hBMSC分为3组，对照组；阴性对照组(NC组),NC组转染NC质粒；试验组，试验组转染MIR-200a inhibitor质粒，MTT法检测各组细胞24、48h和72h细胞活力，流式细胞法检测各组细胞凋亡水平，Western blot检测细胞凋亡关键蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)和Caspase3表达水平，通过miRDB软件对miR-200a的靶向基因进行预测，双荧光素报告实验验证靶基因，Western blot实验检测靶基因转化生长因子β₂(TGF-β₂)及成血管分化关键分子血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素-1(Ang-1)的表达水平。结果 与对照和NC组相比，试验组细胞增殖受到显著抑制，并且随着时间增加抑制能力增强(r=0.63);细胞凋亡显著增加，凋亡相关蛋白Bcl-2表达显著降低，Caspase3表达显著增加，结果均具有显著的...     

miR-140在人胃癌组织中的表达及对SGC-7901胃癌细胞功能的影响

 目的: 研究microRNA-140(miR-140)在人胃癌和正常胃组织中的表达水平,以及调控miR-140表达后对SGC-7901胃癌细胞功能的影响。方法: 采用实时荧光定量PCR检测miR-140在人胃癌和正常胃组织中的表达水平;将miR-140 mimics(miR-140上调表达)和miR-140 inhibitors(miR-140下调表达)分别通过脂质体转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置未转染对照组(control组)和miRNA无义序列转染对照组(NC组)。实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR-140的表达变化;MTT方法检测各组细胞的生长活力和顺铂(DDP)作用下的生长抑制率;流式细胞术检测各组的细胞周期和凋亡率;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;Western blot检测各组细胞中组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)蛋白表达。结果: miR-140在人胃癌组织中表达水平显著低于正常胃组织(P<0.05)。与control和NC组相比,miR-140 mimics组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力下降,细胞周期被阻滞,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率上升,且HDAC4蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);而miR-140 inhibitors组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力上升,细胞周期被促进,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率下降,且HDAC4蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-140在胃癌组织中低表达,可作为抑癌因子调控胃癌细胞活力、细胞周期变化、凋亡、侵袭并通过下调HDAC4发挥作用。miR-140可能作为胃癌诊断和治疗的新靶点。     

miR-129-5p调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的机制研究

目的 研究微小RNA-129-5p(miR-129-5p)靶向调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的作用及机制。方法 采用RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD和正常胆管上皮细胞系HIBEpic中miR-129-5p的表达水平。选择miR-129-5p表达较低的胆囊癌细胞进行miR-129-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-129-5p过表达组(miR-129-5p mimic组),采用MTT实验检测各组细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组细胞的转移能力。Targetscan7.1预测软件及双荧光素酶报道基因试验检测miR-129-5p对Wnt5a基因的靶向调控作用。RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD及NC组、miR-129-5p mimic组中Wnt5a mRNA的表达水平。胆囊癌细胞分为NC组、miR-129-5p mimic组、miR-129-5p过表达与Wnt5a敲减质粒共转染组(miR-129-5p mimic+sh-Wnt5a组)和miR-129-5p过表达与Wnt5a过表达质粒共转染组(...     

牙髓干细胞外泌体来源的miR-150对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导内皮细胞损伤的影响

目的 探讨牙髓干细胞（DPSC）外泌体来源的miR-150对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）诱导的内皮细胞损伤的影响。方法 培养DPSC,转染miR-150模拟物后分离并鉴定外泌体。培养内皮细胞HUVEC,分为Blank组、Pg-LPS组、NC exosome组、miR-NC exosome组和miR-150 exosome组。qRT-PCR检测外泌体和各组HUVEC细胞中miR-150表达水平;ELISA检测各组HUVEC细胞中炎症因子IL-6和IL-8水平;CCK-8和流式细胞术检测各组HUVEC细胞增殖、凋亡;划痕愈合实验和Transwell实验检测各组HUVEC细胞迁移、侵袭。结果 成功从DPSC细胞中分离出外泌体,并诱导miR-150表达上调（P<0.05）;Pg-LPS诱导后,HUVEC细胞中miR-150水平降低,IL-6和IL-8水平增高,细胞活力降低,凋亡率增高,划痕愈合率和侵袭细胞数量降低（P<0.05）;添加DPSC外泌体和外泌体来源的miR-150可在一定程度上减少Pg-LPS对HUVEC细胞的影响,且后者的效果要优于前者（P<0.05）。...     

miR-7-5p、ABCC1在子宫内膜癌组织中的表达及对Ishikawa细胞增殖、EMT的影响

目的 探讨微小RNA-7-5p(miR-7-5p)、ATP结合盒亚家族C成员1(ABCC1)在子宫内膜癌（EC）组织表达及其对EC细胞（Ishikawa）增殖及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 选取2018年6月至2021年12月期间在保定市妇幼保健院进行手术治疗的120例EC患者作为观察对象，手术取癌组织及癌旁组织，检测EC组织与癌旁组织miR-7-5p、ABCC1 mRNA及蛋白表达水平，分析miR-7-5p、ABCC1与EC临床病理特征的关系。将Ishikawa细胞随机分为Control组、miR-NC组、miR-7-5p mimics组、si-NC组，si-ABCC1组、miR-7-5p mimics+pcDNA组、miR-7-5p mimics+ABCC1组，RT-qPCR检测各组细胞miR-7-5p、ABCC1mRNA表达水平，MTT法与流式细胞仪分别检测细胞增殖与凋亡，Western blot检测ABCC1、E-cadherin、α-catenin、Vimentin蛋白表达，双荧光素酶报告实验验证miR-7-5p与ABCC1的靶向关系。结果 与癌旁组织比较，EC组织中m...     

下调miR-21 抑制PI3K / AKT 信号通路对白血病细胞增殖凋亡的影响

目的:探讨miR-21 对白血病K562 细胞增殖凋亡的影响及对PI3K/ AKT 信号通路的调控作用。方法:将K562 细胞分为对照组、miR-21 NC 组和miR-21 干扰组,对照组不做处理,后两组采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000 转染miR-21 inhibitor 和miR-21 negative control。转染48 h 后,利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-21 mRNA 的表达情况,采用MTT 比色法检测miR-21 对细胞增殖率的影响,流式细胞仪检测miR-21 对细胞周期和凋亡率的影响,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测miR-21 对各组细胞中PI3K/ AKT 信号通路相关蛋白PI3K、AKT 和p-AKT 表达的影响。结果:miR-21 干扰组中细胞的miR-21 mRNA 表达水平和细胞的存活率较对照组和miR-21 NC 组均明显降低;与对照组和miR-21 NC 组比较,流式细胞仪检测miR-3 干扰组中G0/ G1 期所占细胞比例明显升高,S 期细胞所占比例明显下降,细胞的凋亡率明显升高。Western blot 检测p-AKT 的表达水平较对照组和miR-21 NC 组明显下降,但PI3K 和AKT 蛋白的表达水平变化不大。结论:下调miR-21 能够抑制白血病K562 细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可以与抑制PI3K/ AKT 信号通路有关。     

腰椎髓核组织中缺氧诱导因子1α的表达:与凋亡率正相关

背景:缺氧诱导因子1α在缺氧的环境下对细胞凋亡起着双重调控作用。缺氧的严重程度决定细胞是出现凋亡还是适应缺氧生存。当细胞暴露于慢性或极度缺氧时由缺氧诱导因子1α引起的保护机制不足而发生凋亡。目的:观察缺氧诱导因子1α和凋亡在人不同突出类型腰椎髓核组织中的表达,判断两者有无相关性。方法:腰椎髓核组织标本取自腰椎间盘突出症行腰椎后路椎板开窗髓核摘除患者60例,41例取自L4-5髓核组织,19例取自L5-S1髓核组织。将髓核组织分为突出组、游离组各30例,同时选取腰椎骨折脱位患者腰椎髓核组织标本10例作为对照组。采用免疫组织化学技术,观察各组突出腰椎髓核组织缺氧诱导因子1α的表达;采用Tunel技术,观察不同突出类型腰椎髓核细胞凋亡程度;分析各组髓核组织缺氧诱导因子1α的表达与髓核细胞凋亡率有无相关性。结果与结论:游离组、突出组和对照组都可观察到缺氧诱导因子1α的表达,游离组缺氧诱导因子1α在髓核的表达显著高于突出组和对照组(P0.01)。3组都可观察到髓核细胞的凋亡,游离组髓核细胞凋亡的表达显著高于突出型和对照组(P0.01)。髓核细胞缺氧诱导因子1α表达和凋亡呈正相关(P0.01)。结果提示,腰椎间盘突出症髓核组织中缺氧诱导因子1α的表达与突出类型有关,在脱垂游离型中表达最高。腰椎髓核组织中缺氧诱导因子1α的表达与凋亡率呈正相关。     

miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤北大核心CSCD

目的:探究miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤的机制。方法:进行PC12细胞培养并分组:Normal组(正常PC12细胞)、NC组(缺血性处理的PC12细胞,转染阴性对照质粒)、Model组(缺血性处理的PC12细胞)、miR-410-3p mimic组(缺血性处理的PC12细胞,转染miR-410-3p过表达质粒)、HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,转染HMGB1过表达质粒)、miR-410-3p mimic+HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,共染miR-410-3p过表达和HMGB1过表达质粒)。双荧光素酶报告实验验证miR-410-3p和HMGB1靶向关系。Western blot检测各组细胞中HMGB1、NF-κB p65的蛋白表达情况,qRT-PCR检测miR-410-3p表达情况。CCK8和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。ELISA检测各组细胞炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量。结果:miR-410-3p与HMGB1存在靶向关系。与Normal组相比,其余组细胞中miR-410-3p表达显著降低,HMGB1表达显著升高(均P<0.05)。与Normal组对比,其余各组细胞的增殖率明显下降,细胞凋亡率,炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量,HMGB1、NF-κB p65水平均明显升高(均P<0.05)。miR-410-3p可促进细胞增殖,降低细胞凋亡率、炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量及NF-κB p65水平,且miR-410-3p可通过负向调控HMGB1的表达,从而影响HMGB1/NF-κB通路对缺血性神经元的调控。结论:miR-410-3p过表达后,可通过抑制HMGB1/NF-κB通路表达,从而影响脑缺血性神经元细胞增殖、凋亡以及炎症损伤。     

UNC5A基因过表达对膀胱癌T24细胞增殖、转移的影响及其机制探讨

【摘要】　目的　探究UNC5A 基因过表达对膀胱癌T24 细胞增殖、转移及Wnt/ β-catenin 信号通路的影响。方法　选取T24 细胞, 转染UNC5A-pcDNA 和pcDNA-NC, 将细胞随机分为Control 组、pcDNA-NC 组和UNC5A-pcDNA 组。RT-PCR 检测UNC5A mRNA 表达水平; 克隆形成实验检测细胞克隆形成率; 流式细胞术检测细胞凋亡率; Transwell 检测细胞侵袭细胞数; Western 印迹检测UNC5A、Wnt1、β-catenin 蛋白表达水平; 加入Wnt/ β-catenin 信号通路激活剂LiCl 检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭情况。结果　与Control 组比较, UNC5A-pcDNA 组UNC5A mRNA 和蛋白表达水平升高(P< 0. 05), 克隆形成率降低(P< 0. 05), 细胞凋亡率升高(P<0. 05), 侵袭细胞数降低(P<0. 05), Wnt1、β-catenin 蛋白表达水平降低(P< 0. 05)。加入Wnt/ β-catenin 信号通路激活剂LiCl 则能逆转过表达UNC5A 对T24 细胞增殖、侵袭的抑制作用, 凋亡促进作用。结论UNC5A 基因过表达可能通过抑制Wnt/ β-catenin 信号通路的活化抑制T24 细胞增殖、侵袭, 并诱导细胞凋亡。