肝转铁蛋白受体mRNA在肝硬化及肝癌中的表达

目的了解体内转铁蛋白受体(TfR)mRNA表达的调节,为肝癌早期诊断和导向治疗提供依据。方法将大鼠随机分成肝硬化组和对照组,形成三种不同铁水平,分别采取部分肝切除后不同时相大鼠肝脏以及肝癌患者手术标本进行Northernblotting分析。结果无论分组,TfRmRNA表达在缺铁时最高,正常铁水平次之,高铁时最低;正常铁水平下硬化组表达高于对照组,在肝切除后不同时相TfRmRNA表达水平不同,而缺铁及高铁水平则无此变化;肝癌中癌组织表达最高,癌周组织次之,正常组织最低。结论体内调节TfRmRNA的最基本因素为铁,TfRmRNA在肝硬化及肝癌中有高表达。     

自制抗人雄激素受体单克隆抗体检测肝癌标本中AR的表达

目的：探讨原发性肝癌病人雄激素受体表达，进一步评价自行研制抗人雄激素受体(androgen receptor,AR)单克隆抗体(McAb)。方法：采用免疫组化法检测35例原发性肝癌病人雄激素受体。结果：原发性肝癌病人雄激素受体71％为阳性，癌组织与癌周围组织相比，AR表达有显著差异(P＜0．01)。自制AR McAb与进口AR多抗存在正相关r＝0．87，P＜0．001。结论：原发性肝癌病人雄激素受体表达与肿瘤大小及分化程度存在相关性，可为原发性肝癌激素治疗提供初步资料；自制抗AR McAb可代替进口AR多杭应用于临床及科研工作。     

肝转铁蛋白受体mRNA在肝硬化及肝癌中的表达

目的了解体内转铁蛋白受体(TfR)mRNA表达的调节,为肝癌早期诊断和导向治疗提供依据.方法将大鼠随机分成肝硬化组和对照组,形成三种不同铁水平,分别采取部分肝切除后不同时相大鼠肝脏以及肝癌患者手术标本进行Northernblotting分析.结果无论分组,TfRmRNA表达在缺铁时最高,正常铁水平次之,高铁时最低;正常铁水平下硬化组表达高于对照组,在肝切除后不同时相TfRmRNA表达水平不同,而缺铁及高铁水平则无此变化;肝癌中癌组织表达最高,癌周组织次之,正常组织最低.结论体内调节TfRmRNA的最基本因素为铁,TfRmRNA在肝硬化及肝癌中有高表达.     

肝硬化与肝癌患者外周血T淋巴细胞表面受体表达变化的研究

作者应用单克隆抗体检测肝硬化、肝癌病人外周血T淋巴细胞表面受体表达的变化。其中肝硬化(LC)、肝癌(PHC)组的CD_8的阳性细胞分别是34.72％、38.93％,正常对照组为27.30％,与正常组比较,P<0.01。两组CD_4/CD_8比值显著下降,其比值分别为1.29、1.31,正常组1.8,与正常组比较,P<0.01。PHA刺激前,转铁蛋白受体(TFR)和白细胞介素-2受体(IL-2R)在两组患者血中处于高表达状态(P<0.01)。结果提示:抑制性TC升高,TFR以及IL-2R的高表达则直接影响LC和PHC的预后。     

瘦素及其受体蛋白在肝癌细胞中的表达及意义

目的:研究瘦素及其受体在人肝细胞癌细胞株中的表达情况,探讨其在肝癌发生过程中的可能作用。方法:制备人正常肝细胞株L02及人肝细胞癌细胞株HepG2、SMMC7721的细胞爬片,采用免疫组织化学染色法检测上述细胞株中瘦素和瘦素受体蛋白的表达,以医学图文分析系统进行定量分析。结果:人正常肝细胞株L02及人肝细胞癌细胞株HepG2、SMMC7721中均存在瘦素及其受体蛋白的阳性表达,并且瘦素及其受体蛋白的表达水平均是人肝癌细胞株高于人正常肝细胞株,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:瘦素及其受体以双重表达方式存在于人肝细胞癌细胞中,可能在肝癌的发生中起到一定作用。     

IGF-ⅠR抑制剂联合西妥昔单抗对人肝癌细胞的体外抑制作用

目的探讨西妥昔单抗与胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(IGF-ⅠR)抑制剂aIR3对人肝癌细胞株HepG2细胞的作用。方法选用浓度递增的西妥昔单抗(5~500)mg/mL和aIR3(2.5～250.0)μmol/L,单独或联合作用于HepG2细胞,观察不同时间对细胞增殖的抑制作用以及联用时的两药协同系数。结果单药西妥昔单抗与aIR3对HepG2细胞增殖的抑制作用均呈浓度依赖性与时间依赖性,二药单独作用于HepG2细胞72 h最大抑制率分别为42.2%、82.3%,二药联合作用于HepG2细胞72 h最大抑制率达91.8%。西妥昔单抗与аIR3不同浓度在各时间点的协同系数均小于1。结论西妥昔单抗和aIR3在体外对HepG2细胞的增殖均具有一定的抑制作用,联合应用时具有明显的协同效应。     

肝癌细胞中EP3受体亚型表达及其调控肝癌细胞生长的研究

目的:研究肝癌细胞中EP3受体剪接体亚型的表达类型及其调控肝癌细胞生长的功能。方法:EP3受体激动剂Sulprostone处理肝癌细胞株观察其生长情况;二维电泳和质谱分析研究EP3受体激动与下游信号蛋白之间的关系;Real-TimePCR实验鉴定肝癌细胞株中EP3受体剪接体亚型的表达类型。结果:10μmol/L Sulprostone处理CCLP1细胞24 h后,细胞生长率上调了31.46%(P<0.01);给予CCLP1细胞10μmol/L Sulprostone处理24 h后,二维电泳和质谱实验的结果显示促进细胞增殖侵袭、与细胞代谢正相关的蛋白水平升高,降低细胞代谢速度、减慢细胞生长、抑制细胞侵袭转移的相关蛋白水平下降;Real-Time PCR实验检测肝癌细胞,结果表明肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7 4种剪接体亚型。结论:EP3受体通过上调促细胞生长代谢蛋白,下调抑制细胞生长代谢蛋白而发挥促进肝癌细胞增殖的作用。肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7 4种EP3受体剪接体亚型。     

肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体对肝癌细胞的杀伤作用

为研究抗肝癌单链抗体基因在肝癌细胞内表达对肝癌细胞的作用。采用脂质体转梁技术把含抗人肝癌ｓｃＦｖ基因的逆转录病毒载体导入人肝癌细胞系ＨＣＣ９２０４中，Ｇ４１８筛选阳性细胞克隆。ＲＮＡ ｄｏｔ ｂｌｏｔ杂交分析ｓｃＦｖ基因在ＨＣＣ细胞中的表达。光镜及电镜技术观察转染细胞结构的变化。     

抗血管内皮细胞生长因子受体单抗的制备及鉴定

目的：制备血管内皮细胞生长因子受体（ｋｉｎａｓｅｉｎｓｅｒｔｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＫＤＲ）的单克隆抗体并鉴定其特异性。方法：在大肠杆菌中表达重组ＫＤＲ融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞，用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ＥＬＩＳＡ双筛和ＳＰ免疫组化筛选并鉴定其亚类。结果：经ＥＬＩＳＡ双筛和组化筛选获得了一株能稳定分泌人ＫＤＲ单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为ＳＳＷ２），其分泌抗体亚类为ＩｇＧ１，产生的腹水效价可达１×１０－６。结论：ＳＳＷ２同血管内皮细胞尤其是肿瘤组织的血管内皮细胞有较强的阳性反应。     

转铁蛋白受体基因表达及其抗体诊断肝癌的研究

目的　研究肝癌转铁蛋白受体(TfR)的基因表达及其单克隆抗体免疫诊断肝癌的价值。方法　对20例肝癌手术标本包括癌巢组织、癌旁组织及周围正常组织进行Northern blot分析,了解三种组织TfR mRNA表达情况;通过间接免疫荧光及免疫组织化学ABC法了解肝癌细胞和正常肝细胞膜上TfR表达情况。结果　 TfR mRNA表达癌组织最高,癌旁组织次之,周围正常组织最低,后两者间无显著差异;肝癌细胞膜转铁蛋白受体荧光阳性率明显高于正常肝细胞,两者有显著差异。免疫组织化学ABC法中19例强阳性染色,1例阴性。结论　转铁蛋白受体的基因表达在肝癌组织中明显增高,其单克隆抗体有希望成为肝癌免疫诊断的理想载体。     

转铁蛋白受体基因表达及其抗体诊断肝癌的研究

目的：研究肝癌转铁蛋白受体（ＴｆＲ）的基因表达及其单克隆抗体免疫诊断肝癌的价值。方法对２０例肝癌手术标本包括癌巢组织、癌旁组织及周围正常组织进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析,了解三种组织ＴｆＲ ｍＲＮＡ表达情况;通过间接免疫荧光及免疫组织化学ＡＢＣ法了解肝癌细胞和正常肝细胞膜上ＴｆＲ的表达情况。结果ＴｆＲｍＲＮＡ表达癌组织最高,癌旁组织次之,周围正常组织最低,后两者间无显著差异,肝癌细胞膜转铁蛋     

抗乳腺癌人单克隆抗体的制备及其应用的实验研究

用乳腺癌术后腋下淋巴结淋巴细胞与人鼠骨髓瘤细胞ＳＨＭ－Ｄ_（３３）融合，获得分泌抗乳腺癌人单克隆抗体杂交瘤细胞株ＣＭ－１。用ＰＡＰ免疫组化法分析，ＣＭ－１与被检乳腺癌均呈阳性反应，但与乳腺纤维瘤和被检其他肿瘤组织及正常组织均无反应。ＣＭ－１用于裸鼠移植瘤放免显像（ＲＩＩ）能进行肿瘤定位。ＲＩＩ对乳腺癌志愿者能初步达到乳腺癌腋下淋巴结转移灶定位。ＣＭ－１－药物（平阳霉素；ＰＹＭ）偶联物对裸鼠移植乳腺癌生长的抑瘤率为９５％，而同等剂量的游离药物为５８％。显示了抗乳腺癌人单抗ＣＭ－１的特异性及其在临床诊断和治疗乳腺癌中的光明前景。     

抗HER2/neu单克隆抗体的制备及其对乳腺癌细胞生长的抑制性

目的 制备抗HER2／neu的特异性单克隆抗体，筛选出能够分泌抑制p185 HER2／neu蛋白过表达的肿瘤细胞生长的单抗杂交瘤细胞株。方法 原核表达含全长neu蛋白的融合蛋白，免疫Balb／c雌性小鼠后取效价高的小鼠尾静脉加强后行脾细胞与SP2／0细胞进行细胞融合。以ELISA、免疫细胞化学、免疫组织化学、细胞免疫荧光和MTT法进行筛选。结果 共获得8株稳定分泌HER2／neu单抗的杂交瘤细胞株，其中5株细胞产生的抗体体外实验能够抑制乳腺癌细胞HBT133的生长。结论 能够抑制HBT133细胞生长的5株杂交瘤细胞株可以用作人源化，具有较高的临床应用价值。     

抗转铁蛋白受体单链抗体原核表达载体的构建和表达

目的 构建抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体原核表达载体，为进一步研究其效应奠定基础。方法 从抗TfR单克隆抗体重链和轻链可变区基因的克隆载体pGEM-T-VH和pGEM-T-VL中扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因，用重叠延伸PCR的方法，在VH和VL基因间引入连接短肽(Linker)，构建VH-Linker-VL的单链抗体(single chain Fv，scFv)基因。经NcoⅠ和NotⅠ酶切后亚克隆到原核分泌型表达载体pUCl9／119上，转化和筛选后，阳性细菌经IPTG诱导表达。间接免疫荧光法(IFA)及抗体封闭试验鉴定其抗体活性。结果 凝胶电泳可见重叠延伸PCR扩增产物约700bp条带，SDS-PAGE鉴定表达产物的分子量为27kD左右，与scFv的理论值一致，IFA及抗体封闭试验证明表达产物有抗人TfR的活性。结论 本研究成功地构建并表达了抗人TfR scFv，为抗人TfRscFv的应用奠定了基础。     

单克隆抗体连接表阿霉素导向治疗胃癌的实验研究

作者首次报道了胃癌单克隆抗体MGb_2-表阿霉素结合物的制备及其对胃癌细胞的体外杀伤作用。首先用高碘酸钠氧化葡聚糖,使其成为多醛基葡聚糖,并以此为中间载体将表阿霉素与MGb_2连接。经测定,每一抗体能携带45个药物分子,且其抗体活性保存良好。该结合物对胃癌细胞SGC-7901杀伤作用优于游离药物及无关抗体结合物,且对非靶细胞(Hep-2)毒性作用很弱。说明表阿霉素-葡聚糖-MGb_2对胃癌细胞具有较强选择性杀伤作用,并可能成为胃癌导向治疗的免疫抗癌药物。     

抗人转铁蛋白受体单克隆抗体增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌的抑制效应

目的检测抗人转铁蛋白受体单克隆抗体(TfR mAb)对雄激素非依赖性前列腺癌细胞生物学行为的影响,了解抗人TfR mAb对姜黄素抗瘤作用的协同效应。方法利用杂交瘤细胞株制备抗人TfR mAb,分别采用CFSE染色、AnnexinⅤ-PI染色和PI染色法流式细胞仪检测抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。采用FITC标记的鼠抗人TfR mAb检测姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达的影响。采用流式细胞仪进一步检测抗人TfR mAb联合姜黄素对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期无明显影响(均P>0.05)。姜黄素能够显著上调雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达(P<0.05)。抗人TfR mAb可显著增强姜黄素对PC-3细胞凋亡的诱导作用(P<0.05),而不影响姜黄素对PC-3细胞增殖和细胞周期的影响(均P>0.05)。结论姜黄素可导致雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达增高。抗人TfR mAb单独作用对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生物学行为无显著影响,但抗人TfR mAb可以增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的凋亡效应。     

单克隆抗体与血卟啉衍生物交联物的制备及其对胃癌靶细胞的杀伤作用

以碳二亚胺(EDCI)为连接剂,将血卟啉衍生物(HPD)与抗胃癌单克隆抗体18M(McAb18M)共价交联。经ELISA法测定及溶血试验表明,该交联物保留了McAb的反应特性及HPD的光故活性。体外试验表明,交联物对靶细胞的光动力杀伤效率提高了11.2倍,对非靶细胞的杀伤作用微弱,表明HPD—McAb具有特异杀伤作用。对游离HPD及交联HPD的吸收光谱,荧光激发光谱及发射光谱的分析比较表明,二者均有一定的差异。     

胃癌单克隆抗体MG7相应抗原在不同型肠化组织中的表达

应用抗人胃癌单克隆抗体MG7及ABC免疫酶标技术,检测了胃癌相关抗原在110例手术切除胃癌标本及343例胃粘膜活检肠化标本的表达。应用粘液组化方法将肠化分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。110例胃癌中,有92例(83.6％)MG7染色阳性。在不同类型肠化中,Ⅲ型肠化中MG7相应抗原的阳性率(46.7％)显著高于Ⅱ型(25.6％)和Ⅰ型肠化(18.6％)(P<0.01)。结果表明,Ⅲ型肠化与胃癌的发生有密切关系,应作为癌前病变对待;单克隆抗体MG7对筛选肠化患者中胃癌高危病例可能有重要价值。