雌激素与雌激素受体对血管内皮细胞一氧化氮生成的影响

目的探讨雌激素及其受体对血管内皮细胞一氧化氮表达的影响. 方法采用无酚红的 1 640培养基培养大鼠血管内皮细胞,给予不同浓度的 17β雌二醇( 17β-E2)用贴块法和无酚红的 1 640培养基建立肺血管内皮细胞模型,观察不同浓度的 17β-E2(伴或不伴有雌激素受体拮抗剂 tamoxifen)作用下血管内皮细胞一氧化氮合酶( nitric-oxide synthase,NOS)的活性及一氧化氮的产量. NOS的活性用血红蛋白酶法检测, Griess 法检测一氧化氮的产量,放射配体结合分析法检测血管内皮中的雌激素受体. 结果一定浓度的 17β-E2作用 8～ 24 h血管内皮细胞一氧化氮的产量显著增加 [1 nmol/L, 10 nmol/L , 17β-E2同对照组相比 (t=1.221;P< 0.05)]; NOS活性显著增加( t=1.722, P< 0.05, t=3.680- 4.174, P< 0.01);放射配体结合分析法在血管内皮中检测到雌激素受体;雌激素受体拮抗剂能显著抑制雌激素的上述作用. 结论 17β雌二醇能通过雌激素受体途径增强血管内皮细胞的活性,这是雌激素对动脉粥样硬化防治作用的机制之一.     

大鼠延髓内雌激素β受体表达变化对延髓神经元结构和功能的影响

目的：研究三羟基异黄酮与17-β雌二醇对大鼠延髓雌激素β受体表达的影响，探讨雌激素作用神经系统的机制。方法：30只去卵巢SD大鼠，随机分为去卵巢组(A组)、雌二醇组(B组)和三羟基异黄酮组(C组)，手术后10d起分别皮下注射生理盐水0．1mL／d,17-β雌二醇20μg／(kg&;#183;d)、三羟基异黄酮200μg／(kg&;#183;d)；10只假手术组(D组)大鼠，只切开腹膜不切除卵巢，手术后10d起每只动物皮下注射生理盐水0．1mL／d。各组动物连续用药6周后观察结果。结果：①血清雌二醇的浓度：A组(9.44&;#177;6．04)ng／L和C组(7．03&;#177;5．65)ng／L显著低于D组(19．4&;#177;8．37)ng／L，差异有非常显著性意义(t=2.97。3.77，P&;lt;0.01)，B组(15．52&;#177;8.54)ng／L与A组比较显著升高(t=2．74，P&;lt;0.01)，而与D组比较差异无显著性意义。②A组与D组比较大鼠延髓ER-β免疫阳性细胞数量下降、阳性细胞总面积和平均吸光度降低(P&;lt;0．01)。切除卵巢后补充17-β雌二醇和三羟基异黄酮的大鼠延髓雌激素β受体表达明显增加，与A组比较延髓雌激素β受体免疫阳性细胞数量增加、阳性细胞总面积和平均吸光度升高(P&;lt;0．01)，而与D组比较无统计学意义。结论：三羟基异黄酮和17-β雌二醇对延髓ER-β的表达有明显的调节作用，可能通过这一途径影响着延髓神经元的结构和功能。     

雌激素、促性腺激素与大鼠成骨细胞雌激素受体β的表达

目的：观察不同剂量雌激素，卵泡雌激素及黄体生成素对大鼠成骨细胞雌激素受体β表达的影响。方法：实验于2004-02／08在哈尔滨医科大学第二临床医学院科研中心完成。①取三四个月龄雌性Wistar大鼠28只用于大鼠成骨细胞体外培养。采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞。观察其形态、改良钙钴法碱性磷酸酶染色，培养上清碱性磷酸酶、骨钙素测定来鉴定成骨细胞。②取2代培养的成骨细胞用无血清培养基培养24h，分为10组：对照组，1&;#215;10^10，1&;#215;10^-8，1&;#215;10^-6mol/L 17β-雌二醇组，10，100，1000U／L黄体生成素组，1&;#215;10^-7,1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5g／L卵泡刺激素组。每组3个孔。对照组加入基础培养基，其他各组分别加入相应终浓度药物，培养24-48h。大鼠成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测应用免疫组织化学法测定，以细胞浆有棕黄色颗粒沉积为阳性。成骨细胞雌激素受体β表达检测应用半定量免疫印渍酶促底物染色法以及化学发光法，以A值越高，说明雌激素受体β表达越多。结果：①成骨细胞形态及特征性鉴定：成骨细胞随培养时间的延长，细胞呈指数增长，分泌碱性磷酸酶和骨钙素，碱性磷酸酶染色阳性率为90％，表现出旺盛的分泌功能。②成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测结果：不同剂量卵泡刺激素组和黄体生成素组对雌激素受体表达无明显影响；雌激素1&;#215;10^-8mol／L组和1&;#215;10^-6mol/L组显著高于对照组[(90．95&;#177;5．89)，(95．12&;#177;6．17)，(81．44&;#177;5.37)个数／100个细胞，τ=2．95，P&;lt;0．05；τ=3．50,P&;lt;0．01]。③成骨细胞雌激素受体β表达结果：不同剂量卵泡刺激素及黄体生成素对雌激素受体β的表达无明显影响；随雌激素浓度的增加成骨细胞雌激素受体β表达呈上升趋势。结论：雌激素能促进成骨细胞雌激素受体β的表达，且表现出剂量依赖性。而黄体生成素、卵泡刺激素对雌激素受体β表达无直接影响。     

植物雌激素染料木素对狗体外冠状血管的舒张作用及其机制

目的：以血管张力变化为指标，对染料木素和17β-雌二醇的心血管保护作用及相关机制进行探讨和比较。方法：①实验于2005—04／10在湖南学院机能实验室完成。选用雄性杂交家狗心脏，把狗心放在冰冷的K—H液中从屠宰场取回进行实验。染料木索（存在于大豆的植物雌激素），17β-雌二醇，吲哚美辛，Nω-L-硝基精氨酸。放线菌酮，前列腺索F2α和缓激肽，正矾酸钠，均购自Sigma公司；甲烯蓝由上海润捷化学试剂有限公司提供。用蒸馏水溶解，它莫西酚、染料术紊、17β-雌二醇用二甲亚砜溶解配制，吲哚美辛用体积分数0.2乙醇溶解。②制备狗冠状动脉血管环，固定于恒温肌槽内，观察染料木紊与17β-雌二醇对KCl预收缩离体冠状血管环的舒张作用：血管环稳定后，向浴槽中加入50mmol／LKCl。待血管环收缩张力达坪值后。用K-H液冲洗。然后，20min换液1次，平衡30min后重复上述实验，待血管环张力达高峰并稳定后，分别加入染料木索与17β-雌二醇，累积浓度为1，4，8，40和80μmol／L，观察血管环张力变化。观察阻断剂及内皮细胞对染料木紊与17β-雌二醇舒血管作用的影响：重复前述实验内容后，用K-H液冲洗，每20min换液1次，温育1,5h，血管环稳定后，向浴槽中分别加入Nω-L-硝基精氨酸1&;#215;10^-4mol／L，它奠西酚10^-5mol／L，吲哚美辛1&;#215;10^-5mol／L，正矾酸钠1&;#215;10^-5mol／L或放线菌酮1&;#215;10^-5mol／L，甲烯蓝1&;#215;10^-5mol／L，温育15min或用棉签擦除内皮细胞后，重复前述实验内容。对比染料木紊与17β-雌二醇对KCl50mmol／L预收缩血管平滑肌的舒张作用的变化，并随时记录张力的变化值。③用线性回归法计算染料木素与17β-雌二醇的使激动剂效应降低50％时所采用的拮抗剂的浓度。两组间计量资料差异比较采用t检验，3组或3组以上资料差异比较采用单因素方差分析。结果：①染料木素与17β-雌二醇作用相似，均可使50mmol／L KCl预收缩冠状动脉血管环产生剂量依赖性舒张作用（r=0．96，P〈0．01），使激动剂效应降低50％时所采用的拮抗剂的浓度分别为（16．37&;#177;5．19）μmol／L和（22．64&;#177;8．26）μmol／L。②除内皮细胞或加入一氧化氮合酶抑制剂Nω-L-硝基精氨酸1&;#215;10^-4mol/L，甲烯蓝1&;#215;10^-4mol／L或正矾酸钠1&;#215;10^-5mol／L温育，染料木素对50mmol／LKCl预收缩动脉血管环产生的量效舒张作用无明显改变（P〉0．05）。但17β-雌二醇对50mmol／LKCl预收缩动脉血管环产生的量效舒张作用有明显改变（P〈0．01），1&;#215;10^-5mol／L吲哚美辛，它莫西酚与放线菌酮对两者量效舒张血管的作用均无明显影响（P〉0．05）。结论：①染料木索和17β-雌二醇对冠状动脉毗管的舒张作用与前列腺素类物质的合成和血管壁传统雌激素受体无关，与雌激素经典核内作用途径无关。②17β-雌二醇的作用部分与内皮细胞释放的一氧化氮有关。③酪氨酸蛋白激酶系统可能参与了冠状动脉血管张力的调节。     

雌、孕激素对去势雌大鼠血清NO、心肌NOS活性的影响

[目的]通过观测单纯补充雌激素，孕激素和雌孕激素联合治疗对去卵巢雌大鼠（去势大鼠）血清一氧化氮（NO0和心肌一氧化氮合酶（NOS）活性的影响，探讨雌激素保护绝经后妇女心血管系统的作用机制。[方法]采用放射免疫法检测各组血清雌二醇（E2）和孕酮（P）水平，用化学比色法测定血清NO和心肌NOS活性。[结果]血清E2水平和E2/P比值与血清NO水平和心肌NOS活性正相关，去势雌鼠16周后，随着血清E2/P水平和E2/P比值的下降，血清NO水平和心肌NOS活性降低；单纯补充孕激素和联合使用5雌孕激素时，E2/P比值低，血清NO水平和心肌NOS活性低；单纯补充雌激素可提高血清NO水平和心肌NOS活性。[结论]雌激素保护女性心血管系统的作用机制可能与提高NOS活性，增加NO释放量或合成量的作用有关，孕激素可能削弱雌激素的作用；雌激素水平下降和雌孕激素比例失衡可能都是绝经后妇女冠心病发病率升高的原因。     

氯沙坦对自发性高血压大鼠血管内氧化应激态的影响

目的：探讨氯沙坦对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertension rats，SHR)血浆一氧化氮、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和活性氧的影响。方法：30只实验动物分为3组，其中10只Wistar京都大鼠(WKY)为正常血压组，20只SHR随机分为SHR组和使用氯沙坦SHR组。氯沙坦灌胃8周后，取血浆采用化学比色法测定一氧化氮和活性氧的含量及NOS．SOD活性。结果：SHR组与正常血压组比较，血浆活性氧含量和NOS活性显著增高(t=52.15，6.87，P&;lt;0.001)，一氧化氮含量和SOD活性显著降低(t=4.60，6.60，P&;lt;0.001)；氯沙坦SHR组活性氧含量[(864.6&;#177;24.8)kU／L]比SHR组[(2134.8&;#177;87.6)kU／L]显著降低(t=44.11，P&;lt;0.001)，一氧化氮含量增高(t=3.09，P&;lt;0.05)，但SOD和NOS的活性变化，差异无显著性意义(P&;gt;0.05)。结论：高血压可能是血管内氧化应激态形成的重要因素之一，而氯沙     

血管舒张和收缩因子在曲张静脉形成过程中的作用

目的：测定曲张大隐静脉内血浆血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)、内皮素—1、一氧化氮和环鸟苷酸水平的变化，以期探讨血管舒张因子和收缩因子在大隐静脉曲张形成过程中可能发挥的作用。方法：取自解放军总医院2003—11／2004—08收治大隐静脉曲张患者，肝肾等其他脏器功能正常及外周血管、心血管系统没有明显病变，且单侧患肢者被纳入检测对象，其中60例被列入观察范围。患有可能影响血管活性因子水平疾病或双侧患肢患者被排除观察范围。纳入患者分为轻、重两组，轻症组32例，重症组28例；另外取30例健康献血者作为正常对照组。比较各组人群大隐静脉内血浆AngⅡ，内皮素—1、一氧化氮与环鸟苷酸的水平，用放射免疫法测定血浆中AngⅡ，内皮素—1和环鸟苷酸水平及亚硝酸盐比色法测定一氧化氮的水平。结果：在轻症组大隐静脉曲张患者AngⅡ较正常水平降低(均数差值为64．9440，P&;lt;0．01)、一氧化氮(均数差值为-23．0273，P&;lt;0．01)和环鸟苷酸水平较正常水平升高(均数差值为-2．3153，P&;lt;0．01)，内皮素水平无明显改变(均数差值为0．08023，P&;gt;0．05)；随着病情的加重，AngⅡ降低更明显(重症组与正常组均数差值为84．0208，P&;lt;0.01)，而一氧化氮(均数差值为17．8884，P&;lt;0．01)、环鸟苷酸(均数差值为0．8496，P&;lt;0．05)和内皮素—1(均数差值为3．1297，P&;lt;0．01)出现下降的改变。结论：血管内皮细胞分泌的缩血管活性物质和舒血管活性物质分泌失衡参与大隐静脉的形成和发展过程。     

雌二醇对骨形态发生蛋白受体表达的影响

目的：研究骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中，雌二醇对其骨形态发生蛋白受体(BMPR)IA，IB mRNA表达的影响，探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用，试阐明绝经后高转换骨代谢始动环节的可能机制。方法：SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代培养后，用1，25(OH)2D3和地塞米松(DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化，17β-雌二醇(E2)处理培养细胞，观察E2对骨髓基质细胞分化过程中骨形态发生蛋白受体IA、IB mRNA、碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原合成的影响，β-actin作内对照半定量RT-PCR分析骨形态发生蛋白受体IA，IB mRNA的表达，以α-磷酸奈酚为底物，测定细胞碱性磷酸酶的活性，Van Gieson染色法显示Ⅰ型腔原的含量。结果：E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-IA mRNA的表达，且呈剂量依赖性，随E2浓度增加(0～1&;#215;10^3nmol／L)BMPR-IA mRNA从(27．0&;#177;3．4)％降至(17．0&;#177;1．8)％(t=5．2，P&;lt;0．01)和(9．3&;#177;1．6)％(t=9．2，P&;lt;0．01)；BMPR-IB mRNA随E2浓度增加而增加，从(2．0&;#177;0．8)％增至(4．8&;#177;1．5)％(t=3．3，P&;lt;0．05)和(17．2&;#177;2．2)％(t=13，P&;lt;0．01)。Northernblot结果显示在上述E2浓度时BMPR-IA mRNA的表达从4．21&;#177;0．36降至1．24&;#177;0．10(t=18．2，P&;lt;0．01)；BMPR-IB mRNA的表达从1．72&;#177;0．11增至3．73&;#177;0．31(t=12．2，P&;lt;0．01)。ALP活性随E2浓度增加而降低，从(42．6&;#177;2．5)U／g蛋白降至(17．9&;#177;2．0)U／g蛋白(t=15，P&;lt;0．01)，(10．8&;#177;1．5)U／g蛋白（t=22，P&;lt;0．01)和(3．6&;#177;0．7)U原蛋白(t=30，P&;lt;0．01)；细胞I型胶原的含量随E2浓度增加而减少。VanGieson染色由鲜红、淡红到黄色，红色越深，表明胶原越多。绪论：E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-IA mRNA的表达，降低ALP的活性和Ⅰ型胶原含量，增加BMPR-IB mRNA的表达)。     

植物雌激素染料木素对狗体外冠状血管的舒张作用及其机制

目的:以血管张力变化为指标,对染料木素和17β-雌二醇的心血管保护作用及相关机制进行探讨和比较。方法:①实验于2005-04/10在湖南学院机能实验室完成。选用雄性杂交家狗心脏,把狗心放在冰冷的K-H液中从屠宰场取回进行实验。染料木素(存在于大豆的植物雌激素),17β-雌二醇,吲哚美辛,Nω-L-硝基精氨酸,放线菌酮,前列腺素F2α和缓激肽,正矾酸钠,均购自Sigma公司;甲烯蓝由上海润捷化学试剂有限公司提供,用蒸馏水溶解,它莫西酚、染料木素、17β-雌二醇用二甲亚砜溶解配制,吲哚美辛用体积分数0.2乙醇溶解。②制备狗冠状动脉血管环,固定于恒温肌槽内,观察染料木素与17β-雌二醇对KCl预收缩离体冠状血管环的舒张作用:血管环稳定后,向浴槽中加入50mmol/LKCl,待血管环收缩张力达坪值后,用K-H液冲洗。然后,20min换液1次,平衡30min后重复上述实验,待血管环张力达高峰并稳定后,分别加入染料木素与17β-雌二醇,累积浓度为1,4,8,40和80μmol/L,观察血管环张力变化。观察阻断剂及内皮细胞对染料木素与17β-雌二醇舒血管作用的影响:重复前述实验内容后,用K-H液冲洗,每20min换液1次,温育1.5h,血管环稳定后,向浴槽中分别加入Nω-L-硝基精氨酸1×10-4mol/L,它莫西酚10-5mol/L,吲哚美辛1×10-5mol/L,正矾酸钠1×10-5mol/L或放线菌酮1×10-5mol/L,甲烯蓝1×10-5mol/L,温育15min或用棉签擦除内皮细胞后,重复前述实验内容。对比染料木素与17β-雌二醇对KCl50mmol/L预收缩血管平滑肌的舒张作用的变化,并随时记录张力的变化值。③用线性回归法计算染料木素与17β-雌二醇的使激动剂效应降低50%时所采用的拮抗剂的浓度。两组间计量资料差异比较采用t检验,3组或3组以上资料差异比较采用单因素方差分析。结果:①染料木素与17β-雌二醇作用相似,均可使50mmol/LKCl预收缩冠状动脉血管环产生剂量依赖性舒张作用(r=0.96,P<0.01),使激动剂效应降低50%时所采用的拮抗剂的浓度分别为(16.37±5.19)μmol/L和(22.64±8.26)μmol/L。②除内皮细胞或加入一氧化氮合酶抑制剂Nω-L-硝基精氨酸1×10-4mol/L,甲烯蓝1×10-5mol/L或正矾酸钠1×10-5mol/L温育,染料木素对50mmol/LKCl预收缩动脉血管环产生的量效舒张作用无明显改变(P>0.05),但17β-雌二醇对50mmol/LKCl预收缩动脉血管环产生的量效舒张作用有明显改变(P<0.01),1×10-5mol/L吲哚美辛,它莫西酚与放线菌酮对两者量效舒张血管的作用均无明显影响(P>0.05)。结论:①染料木素和17β-雌二醇对冠状动脉血管的舒张作用与前列腺素类物质的合成和血管壁传统雌激素受体无关,与雌激素经典核内作用途径无关。②17β-雌二醇的作用部分与内皮细胞释放的一氧化氮有关。③酪氨酸蛋白激酶系统可能参与了冠状动脉血管张力的调节。     

雌激素替代疗法对去卵巢大鼠血清一氧化氮及骨显微结构的影响

目的：探讨骨质疏松症及雌激素替代疗法与血清一氧化氮和骨显微结构变化的关系。方法：2002—05／2003—07在郑州大学第一附属医院骨科实验室完成。4月龄雌性大鼠随机分为假手术组和骨质疏松模型组，其中骨质疏松模型组待造模成功1周后，再随机分为骨质疏松组和雌激素替代治疗组。全部大鼠于灌胃给药12周后测量全身骨密度，取血清测量一氧化氮水平及雌激素含量，并做左侧股骨的扫描电镜观察。结果：骨质疏松组血清一氧化氮水平(67．25&;#177;8．28)μmol／L和雌激素含量(34．79&;#177;4．21)μg／L分别低于假手术组[(75．36&;#177;7．49)μmol／L，(66．68&;#177;3．39)μg／L](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；雌激素替代治疗犬鼠骨密度升高，其血清一氧化氮水平(75．22&;#177;7．66)μmol／L和雌激素含量(72．25&;#177;3．52)μg／L高于骨质疏松组(P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)。电镜观察雌激素替代治疗组和假手术组在骨小梁数量、连续性等方面均明显优于骨质疏松组。结论：一氧化氮与骨质疏松症的发生有密切关系，雌激素可通过改变血清一氧化氮水平治疗骨质疏松症。     

参麻益智胶囊对痴呆大鼠一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

目的：证实参麻益胶囊治疗血管性痴呆的药效以及探讨其作用机制。方法：采用颈内动脉注射同种大鼠微血栓悬液制作大鼠血管痴呆(多发性脑梗死)动物模型，设立参麻益智胶囊高、中、低剂量组和阳性药、模型及正常对照组，连续给药6周后，测定血浆、脑组织的一氧化氮含量及一氧化氮合酶(NOS)活性。结果：①模型对照组大鼠血浆中的一氧化氮含量(71．6&;#177;24．3)μmol／L和NOS活性(135．9&;#177;35．8)nmol／(L&;#183;S)明显高于正常对照组[(45．5&;#177;17．0)μmol／L和(59．3&;#177;322)nmol／(L&;#183;s)，P&;lt;0．01]。②模型对照组大鼠脑组织中的一氧化氮含量(261．0&;#177;30．0)μmol／g和NOS活性(66．8&;#177;7．2)nmol／(g&;#183;S)明显高于正常对照组((191&;#177;39)μmol／g和(52．2&;#177;2．8)nmol／(g&;#183;s)，P&;lt;0．05]。③参麻益智胶囊高、中、低剂量组大鼠血浆中的一氧化氮含量[分别为(52．6&;#177;15．3)，(56．0&;#177;17．9)．(56．3&;#177;12．3)μmol／L]和NOS活性[(71．9&;#177;31．2)，(99．7&;#177;26．5),(93．0&;#177;35．7)nmol／(L&;#183;s)]明显低于模型对照组(P&;lt;0．01)。④参麻益智胶囊高、中、低剂量组大鼠脑组织中的一氧化氮含量和NOS活性明显低于模型对照组(P&;lt;0．01)。结论：参麻益智胶囊可降低血管性痴呆大鼠血浆、脑组织中一氧化氮含量及NOS活性。     

一氧化氮合酶抑制剂对退行性变腰椎问盘基质代谢的影响

目的：探讨一氧化氮合酶(mtrie，oxide synthase，NOS)抑制剂S-甲基异硫脲(S-methylisothiourea，SMT)对退行性变腰椎间盘基质代谢的影响，为NOS抑制剂的临床应用提供理论依据。方法：实验于2003-03／2004-01在卫生部小儿先天畸形重点实验室完成无菌条件下，取20例腰椎间盘突出症患者的椎间盘组织(髓核和纤维环)，置入体外培养系统，随机分为对照组：不加药物干预；SMT组：加入1mmol／L SMT干预培养72h后，通过检测硝酸盐和亚硝酸盐的含量来观察椎间盘组织一氧化氮的释放量及NOS的活性：原位杂交法检测椎间盘组织诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)mRNA和基质金属蛋白酶(matrix metalloplotease，MMR)mRNA的表达。培养10d后，化学比色法观察椎间盘蛋白多糖含量和羟脯氨酸释放量的变化。结果：SMT组髓核和纤维环一氧化氮释放量较对照组明显减少，NOS活性明显降低(P&;lt;0.01)培养10d后，SMT组髓核组织中蛋白多糖含量比对照组明显增加(t=8.52，P&;lt;0.01)，羟脯氨酸释放量比对照组显著减少(t=6．58，P&;lt;0．01)；同时，未检测到iNOS mRNA和MMP3 mRNA的表达。结论：NOS抑制剂SMT能抑制过量一氧化氮的释放，对延缓椎间盘退行性变具有积极的作用。     

一氧化氮介导雌激素的骨形成增加作用

背景：雌激素的具体骨保护机制目前尚不清楚，一氧化氮可能在雌激素促进骨形成增加中起到一定的作用。目的：探讨雌激素治疗对卵巢切除大鼠血浆硝酸盐／亚硝酸盐水平的影响。设计：随机对照的试验。单位：上海市杨浦区中心医院骨科和同济医院大学附属协和医院骨科。材料：实验在同济医科大学动物实验中心完成，选用3个月龄清洁级健康雌性SD大鼠36只，体质量220～245g，由同济医科大学动物实验中心提供。干预：12只SD大鼠完整切除双侧卵巢，设为卵巢切除组；另12只暴露双侧卵巢而不予以切除，设为对照组；雌激素治疗组12只切除双侧卵巢后即刻及后每隔2周皮下注射苯甲酸雌二醇125μg。主要观察指标：通过免疫组织化学染色方法检测一氧化氮合成酶在骨组织中的表达，双能X射线测定骨矿密度值，图象分析系统进行骨形态学计量学测量，光密度法测定血浆硝酸盐／亚硝酸盐水平。结果：卵巢切除导致血浆硝酸盐／亚硝酸盐水平及骨矿密度值、小梁骨体积等骨形态学计量学参数显著下降。手术后6周，对照组和卵巢切除组平均血浆硝酸盐／亚硝酸盐水平分别为(22．4&;#177;1.7)，(16．2&;#177;3．7)μmol／L；骨矿密度值分别是(0．245&;#177;0．030)g／cm^2和(0．189&;#177;0．030)g／cm^2；小梁骨体积分别为(31．97&;#177;3．50)％和(17．14&;#177;4．20)％，两组之间差异均有显著性意义(P&;lt;0．01)。雌激素治疗抑制了卵巢切除导致的这些变化，雌激素治疗组平均血浆硝酸盐／亚硝酸盐水平为(21．9&;#177;3．5)μmol／L，骨矿密度值为(0．234&;#177;0．020)g／cm^2。，小梁骨体积为(26．53&;#177;1．63)％，与卵巢切除组比较，均有显著性升高(P&;lt;0．01)；与对照组比较，差异均无显著性意义(P&;gt;0．05)。一氧化氮合成酶免疫活性信号在成骨细胞内测得，雌激素治疗组一氧化氮合成酶信号较卵巢切除组也显著性增强(P&;lt;0．01)。结论：雌激素通过诱导一氧化氮的产生而刺激骨形成，一氧化氮是雌激素诱导骨形成增加的介导剂。     

淀粉样β蛋白对神经组织一氧化氮水平的影响及褪黑素的拮抗作用

目的：观察淀粉样β蛋白(β-amyloid，Aβ)对体内神经组织和培养神经元一氧化氮水平的影响以及褪黑素的拮抗作用。方法：实验于2000-06／09在四川大学华西医院精神科实验室进行。①原代大鼠神经元培养，暴露不同剂量Ag和褪黑素。②AB25-35海马内定向注射，褪黑素腹腔内注射。③比色法测定脑组织匀浆和神经细胞培养液一氧化氮水平和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)活力。结果：Aβ可使脑组织和培养神经元一氧化氮水平增高，暴露Aβ浓度为0．5，1．0，10．0，20．0μmol／L组一氧化氮水平分别为(7．9&;#177;1．3)，(9．2&;#177;1．5)，(12．6&;#177;2．4)，(14．1&;#177;1．4)μmol／L，与对照组(5．9&;#177;1．4）μmol／L比差异有显著性意义(P&;lt;0．01)，同时Aβ使NOS活力升高(P&;lt;0．01)；细胞培养液中一氧化氮水平和NOS活力与暴露Aβ剂量呈显著正相关(r=0．786，P&;lt;0．01)；褪黑素可降低Aβ诱导的一氧化氮水平增加和NOS活力升高。结论：Aβ的神经毒性作用有一氧化氮途径参与，褪黑素可通过降低一氧化氮产生和NOS活力来部分对抗Aβ的毒性作用。     

大鼠小肠移植术后血清一氧化氮及小肠组织一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶活性的变化

目的：研究同种大鼠小肠移植后内源性一氧化氮、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)的变化及一氧化氮与急性排斥反应的关系。方法：以大鼠小肠移植为研究对象，16只SD大鼠进行同系移植作为对照组．8只SD大鼠和8只Wistar大鼠进行同种移植作为实验组，两组移植后分别于第3，5，7天同时取血液及小肠组织，病理为常规苏木精一伊红染色观察，血清一氧化氮采用硝酸还原酶法测定，NOS和iNOS采用分光光度法测定。结果：在急性排斥反应发生的早期实验组血清一氧化氮水平与对照组比较显著升高(术后第3，5，7天t值分别为9．7900，9．0073，6．3159，P&;lt;0．01)，小肠组织NOS及iNOS活性亦显著高于对照组(NOS术后第3，5，7天t值分别为5．9318，9．1237，3．0457，iNOS术后第3，5，7天t值分别为3．2008，5．4930，4．8170，P&;lt;0．01)。结论：大鼠小肠移植后NOS及iNOS变化与排斥反应相关，血清一氧化氮水平的检测可作为干预移植措施始动的指标之一。     

不同浓度外源性内皮素1刺激大鼠脑皮质神经元增加释放一氧化氮：首次国内实验直接证实

目的：观察不同浓度内皮素1刺激大脑皮质神经元增加释放一氧化氮的作用。方法：实验于2002-03／2003-02在暨南大学医学院病理教研室、生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心实验室进行。①取新生SD大鼠大脑皮质细胞，神经元体外原代培养至第7天，以10，100nmol的内皮素1刺激神经元，对照组加入等体积磷酸盐缓冲液，以硝酸还原酶法测定间接反映一氧化氮的含量，检验内皮素1对神经元释放一氧化氮的累积效应。分别检测加药前、加药后30min，6h培养基中的一氧化氮浓度。②将培养的神经元分成5组，对照组，10nmol／L内皮素1组、10nmol／L内皮素l+3μmol／L选择性内皮素受体一抗拮剂BQ123组、10nmol／L内皮素1+3μmol／L选择性内皮素受体n抗拮剂BQ788组、10nmol／L内皮素1+3μmol／L非特异性内皮素受体抗拮剂PD145065组。测定加药后6h各培养液中一氧化氮浓度。结果：①10nmol／L，100μmol／L内皮素1组在加药后30min一氧化氮浓度与对照组基本一致，加药后6h培养液中一氧化氮浓度高于对照组(P&;lt;0．05)。②10nmol／L内皮素1组和100nmol／L内皮素l组在加药30min和6h时一氧化氮浓度基本一致(P&;gt;0．05)。③不同内皮素受体拮抗剂对外源性内皮素1刺激神经元释放一氧化氮的影响：10nmol／L内皮素1组、10nmol／L内皮素1+3p．mol／L选择性内皮素受体A抗拮剂BQl23组一氧化氮浓度高于对照组(P&;lt;0．05)。10nmol／L内皮素1+3p．mol／L选择性内皮素受体n抗拮剂BQ788组、10nmol／L内皮素1+3p．mol／L非特异性内皮素受体抗拮剂PD145065组明显低于10nmo|／L内皮素1组(P&;lt;0．01)。结论：10nmol／L和100nmol／L内皮素1对培养液中一氧化氮的影响基本接近，提示内皮素l对皮质培养神经元释放一氧化氮增加的作用在10-100nmol／L间无剂效关系。选择性内皮素受体B抗拮剂BQ788或非特异性内皮素受体抗拮剂PDl45065可完全阻断内皮素1刺激神经元释放一氧化氮的作用，选择性内皮素受体A抗拮剂BQ123对内皮素1刺激神经元释放一氧化氮无影响，提示内皮素1是通过内皮素受体B刺激神经元释放一氧化氮。     

雌激素对兔血管平滑肌细胞AT1受体基因表达的影响

[目的]观察雌激素对培养血管平滑肌细胞AT1受体表达的影响。[方法]10nmol／L雌激素处理兔血管平滑肌细胞3,6、12、或24h，或先经雌激素受体拮抗剂他莫西芬（Tamoxifon）处理兔血管平滑肌细胞再用雌激素处理6h后，提取总RNA，RT-PCR法对AT1受体进行半定量分析。[结果]雌激素可以下调兔血管平滑肌细胞AT1受体的表达，并在6h时作用最强，24h后恢复正常；雌激素受体拮抗剂他莫西芬对兔血管平滑肌细胞表达AT1，受体无影响，但可消除雌激素的作用。[结论]雌激素可以下调兔血管平滑肌细胞表达AT1受体，且这一作用与雌激素的胞内受体有关。     

绝经后女性冠心病与非冠心病患者雌激素水平与凝血及纤溶功能分析

背景：绝经后女性冠心病发病率及死亡率升高多认为与雌激素降低有关，但确切机制不明。目的：探讨绝经后女性冠心病与非冠心病患者血中内源性雌激素水平与凝血及纤溶功能的变化。设计：以诊断为依据，非随机对照试验。地点、对象和方法：选择2001-09／2002-05，以因胸闷痛收住本院的正常绝经≥1年的妇女为研究对象。纳入标准：均为绝经后妇女；2周内未用抗凝剂；未服用免疫抑制剂、雌激素。排除标准：肝、肾、内分泌、神经及生殖系统疾病。根据冠状动脉造影结果，将62例绝经后的妇女分为冠心病(32例)与非冠心病(30例)两组。清晨空腹取静脉血，抽提血浆和血清后测定雌二醇、孕酮、促卵泡刺激素和促黄体生成素，凝血系统的纤维蛋白原、血管性血友病因子抗原(von Willebrand factor antigen，vWF：Ag)及纤溶系统的组织纤溶酶原激活剂(tissue plasminogena ctivator，tPA)、纤溶酶原激活剂抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)和D-二聚体等。主要观察指标：两组患者凝血及纤溶系统指标比较及雌激素水平。结果：冠心病组血中雌二醇[(39．97&;#177;9．73)ng／L]。孕酮[(6．42&;#177;1．14)nmol／L]明显低于非冠心病组[(64．92&;#177;9．77)]ng／L,(7．01&;#177;0．85)nmol／L(t=10．6860，2．3960，P&;lt;0．01,0．05)；冠心病组患者凝血系统的纤维蛋白原，vWF：Ag，PAI-1，D-二聚体明显高于非冠心病组(t=2．3377～4．3560，P&;lt;0．05)；冠心病组患者纤溶系统的tPA水平明显低于非冠心病组(t=2．4307，P&;lt;0．05)。结论：绝经后女性冠心病较非冠心病组血中雌二醇水平明显降低，凝血功能亢进及纤溶功能低下。     

电针对去卵巢大鼠脑内雌激素受体mRNA的影响

目的探讨雌激素降低对脑内雌激素受体基因表达的影响以及电针刺激足三里穴对去卵巢大鼠脑内雌激素受体基因表达的调整作用。方法选用成年Wistar雌性大鼠，将动物分为正常对照组（INT）、去卵巢组（OVX）和去卵巢针刺组（OVX＋EA）。用放射免疫分析方法测定血中雌二醇和睾酮的含量，采用RT-PCR方法获得大鼠雌激素受体α（ERα）和雌激素受体β（ERβ）mRNA的逆转录表达产物cDNA，用琼脂糖凝胶电泳方法检测，计算机图像分析系统进行统计分析。结果与对照组比较，去卵巢组大鼠血中雌二醇水平明显降低（P〈0．01），同时伴有睾酮升高，脑内ERα mRNA的RT-PCR表达产物减少（P〈0．01），ERβ mRNA的RT—PCR表达产物增加（P〈0．01）；与去卵巢组相比，去卵巢针刺组大鼠血中雌激素水平明显升高（P〈0．01），睾酮水平下降（P〈0．01），脑内ERα mRNA的RT-PCR产物升高（P〈0．01），ERβ mRNA的RT—PCR产物降低（P〈0．01）。结论去卵巢大鼠血中雌激素水平降低，睾酮水平升高，脑内ERα和ERβ mRNA的表达发生了明显的变化；电针足三里穴对体内雌激素和睾酮水平及脑内雌激素受体基因表达有明显的调整作用，这可能是电针调节神经内分泌功能的机制之一。     

雌激素、促性腺激素与大鼠成骨细胞雌激素受体β的表达

目的:观察不同剂量雌激素,卵泡雌激素及黄体生成素对大鼠成骨细胞雌激素受体β表达的影响。方法:实验于2004-02/08在哈尔滨医科大学第二临床医学院科研中心完成。①取三四个月龄雌性Wistar大鼠28只用于大鼠成骨细胞体外培养。采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞。观察其形态、改良钙钴法碱性磷酸酶染色,培养上清碱性磷酸酶、骨钙素测定来鉴定成骨细胞。②取2代培养的成骨细胞用无血清培养基培养24h,分为10组:对照组,1×10-10,1×10-8,1×10-6mol/L17β-雌二醇组,10,100,1000U/L黄体生成素组,1×10-7,1×10-6,1×10-5g/L卵泡刺激素组。每组3个孔。对照组加入基础培养基,其他各组分别加入相应终浓度药物,培养24～48h。大鼠成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测应用免疫组织化学法测定,以细胞浆有棕黄色颗粒沉积为阳性。成骨细胞雌激素受体β表达检测应用半定量免疫印渍酶促底物染色法以及化学发光法,以A值越高,说明雌激素受体β表达越多。结果:①成骨细胞形态及特征性鉴定:成骨细胞随培养时间的延长,细胞呈指数增长,分泌碱性磷酸酶和骨钙素,碱性磷酸酶染色阳性率为90%,表现出旺盛的分泌功能。②成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测结果:不同剂量卵泡刺激素组和黄体生成素组对雌激素受体表达无明显影响;雌激素1×10-8mol/L组和1×10-6mol/L组显著高于对照组[(90.95±5.89),(95.12±6.17),(81.44±5.37)个数/100个细胞,t=2.95,P<0.05;t=3.50,P<0.01]。③成骨细胞雌激素受体β表达结果:不同剂量卵泡刺激素及黄体生成素对雌激素受体β的表达无明显影响;随雌激素浓度的增加成骨细胞雌激素受体β表达呈上升趋势。结论:雌激素能促进成骨细胞雌激素受体β的表达,且表现出剂量依赖性。而黄体生成素、卵泡刺激素对雌激素受体β表达无直接影响。