脑出血大鼠脑内bFGF蛋白和mRNA的表达

目的 探讨脑出血大鼠脑内bFGF蛋白和mRNA表达的规律，从而为脑出血后神经功能的修复提供理论依据。方法 用VII型胶原酶诱导大鼠脑出血模型、行为学计分、免疫组化及表达的光密度图像分析、Northern blot及光密度扫描。结果 在行为学计分方面，脑出血大鼠在出血7d时有明显降低，免疫组化结果显示，bFGF蛋白在脑内表达广泛，主要位于海马，皮质有少量表达。吸光度扫描结果显示，脑出血大鼠脑内bFGF蛋白和mRNA的表达在3d时达到高峰，7d时逐渐减弱。结论 随着脑出血大鼠脑内bFGF蛋白和mRNA表达的增强，其行为学得到改善，这可能是神经功能修复的主要机制之一。     

实验性大鼠脑出血脑内Bax、Bcl2表达的实验研究

目的 观察大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage, ICH)模型脑内Bax 、Bcl-2蛋白表达.方法 成年雄性SD大鼠随机分为3组:正常组(Nor组,n=12),生理盐水对照组(NS组,n=36),脑出血组(ICH组,n=36),免疫组织化学法检测各组6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d血肿周围脑组织Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 Nor组右侧基底节区未见Bax、Bcl-2阳性细胞表达;NS组进针点周围Bcl-2偶见表达,各时间点差异无统计学意义(P>0.05),而Bax未见表达;ICH组Bax、Bcl-2以出血灶周围表达为主,阳性细胞以胞浆有棕黄色颗粒为特点;Bax出血后6 h可见阳性细胞表达,24 h达高峰,48 h后逐渐减少;Bcl-2在12 h可见明显表达,48 h达高峰,7 d时仍有表达.结论 凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2参与了出血后脑损伤.     

大鼠脑缺血预处理后脑组织Caspase-3蛋白的表达

目的探讨凋亡相关基因caspase-3蛋白在脑缺血预处理过程中的表达和意义.方法用免疫组织化学染色技术分别检测假手术对照组(S组)、缺血预处理对照组(A组)、缺血组(B组)和缺血预处理组(C组)大鼠脑组织石蜡切片中caspase-3蛋白的表达情况.结果缺血组(B组)和缺血预处理组(C组)各组CA1区caspase-3蛋白免疫反应强度明显高于假手术对照组(S组)(P＜0.01);末次再灌注48h的B2组和C2组以及末次再灌注72 h的B3和C3组比较caspase-3蛋白表达均有显著性增高(P＜0.05,P＜0.01).结论脑缺血预处理的保护机理可能与抑制caspase-3蛋白表达、减少脑细胞凋亡有关.     

大鼠脑出血后脑内GDNF蛋白及mRNA表达变化

目的 观察脑出血模型大鼠脑内胶质细胞源性神经营养因子(glial-cell line derived neuro-trophic fac-tor,GDNF)蛋白和mRNA的分布规律.方法 苍白球注入Ⅶ型胶原酶0.4u建立脑出血模型,用免疫组织化学方法和原位杂交法分别观察脑出血后2h、6h、1d、4d、7d、14d共6个时间点GDNF蛋白及mRNA的表达变化,以阳性细胞计数作为观察指标.结果 脑出血后2hGDNF主要表达于血肿周围的反应性星型胶质细胞,1d达高峰,14d后恢复基础水平,在6h、1d、4d、7d4个时间点上,3组阳性细胞计数比较差异有显著性(P<0.01).GDNF mRNA主要表达于大脑皮质、海马、纹状体、基底前脑、黑质、胼胝体,血肿周围等区域的神经元,血肿中心区域未见表达;1d后达高峰,4d后表达开始减弱,14d后恢复至基础水平.在6h、1d、4d、7d 4个时间点上,3组阳性细胞计数比较差异有显著性(P<0.01).结论 脑出血后GDNF及mRNA的表达呈时段性增高.     

srGAP3在正常成年大鼠脑内的表达

目的 探讨slit—robo GTP激活蛋白3(slit-robo GTP activated protein 3，srGAP3)在正常成年大鼠中枢神经系统中的分布。方法 应用免疫组织化学ABC法研究了srGAP3蛋白在正常成年大鼠脑内的分布和定位。结果 srGAP3蛋白在正常成年大鼠脑中分布非常广泛，在脑内各主要结构如大脑皮质、海马、杏仁核、丘脑和下丘脑的部分核团、中脑、脑桥、小脑及延髓等均有表达。srGAP3免疫反应阳性物质位于神经元的细胞核周围。结论 srGAP3蛋白在正常成年大鼠脑中有很广泛的表达，提示srGAP3蛋白在成年大鼠中枢神经系统的功能活动中可能也起重要作用。     

安脑丸对实验性脑出血大鼠的保护作用

目的通过观察安脑丸对大鼠脑出血后NF-kBp65、GAP-43、Caspase3表达的影响,探讨安脑丸对脑出血的保护作用机制。方法将190只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、安脑丸组,后三组组内又随机分为术后12 h、1、2、4、7、10 d六个时间点;按Rosenberg法建立脑出血模型,安脑丸组每天上午下午各灌胃1mg/ml安脑丸10 ml/kg1次;采用免疫组化法观察NF-kBp65、GAP-43、Caspase3阳性细胞表达情况及Western blot法检测Caspase3蛋白表达情况。结果安脑丸组NF-kBp65阳性细胞数明显少于模型组(P<0.05);安脑丸组GAP-43阳性细胞数明显多于模型组(P<0.05);同时安脑丸组caspase3阳性细胞数及蛋白表达与模型组比较均明显降低(P<0.05)。结论安脑丸可能通过下调NF-kBp65、Caspase3表达,上调GAP43表达,从而发挥对脑出血的保护作用。     

实验性大鼠脑出血灶周围区内细胞因子IL-1β的表达

目的研究脑出血区白细胞介素-1 β(IL-1 β)表达的动态变化,探讨脑出血的病理生理过程,为临床治疗脑出血提供理论依据.方法纹状体内注入胶原酶造模,采用免疫组织化学亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法(ABC)观察细胞因子IL-1 β在脑出血后4、14、24、72 h和7 d的表达变化.结果大鼠脑出血后4 h病变局部即有明显的IL-1 β表达,阳性细胞呈胶质细胞形态;至脑出血后14 h,IL-1 β阳性的细胞数量比4 h组明显增多(P<0.05),染色更深,细胞形态相似;至24 h,IL-1 β蛋白的表达达到顶峰(P<0.05),阳性细胞密集,染色最深,形态仍然同前.24 h以后,IL-1 β蛋白的表达则逐渐下降,至脑出血72 h后局部几乎无IL-1 β阳性的细胞(P<0.05);一直至脑出血7 d时,局部仍未见到IL-1 β阳性的细胞.所有动物非出血侧纹状体均未见到明显的IL-1 β阳性细胞.结论 IL-1 β在脑出血区表达增高,脑出血后病变局部可能存在着与病程相关的炎性反应,在一定时间内采取有效的对抗炎性细胞因子的治疗可能对脑出血患者的预后有一定的意义.     

脑出血大鼠脑内bFGF mRNA和TNF蛋白的表达

目的 研究脑出血大鼠脑内碱性成纤维生长因子(bFGF) mRNA和肿瘤坏死因子(TNF)蛋白表达的规律，探讨脑出血后神经功能修复的内源性机制。方法 用Ⅵ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型，采用Northem blot、Western blot及吸光度扫描分析bFGF和TNF表达。结果 脑出血大鼠脑内bFGF‘mRNA和TNF蛋白的表达在3d时达到高峰，7d时逐渐减弱。结论 随着脑出血大鼠脑内损伤因子TNF蛋白表达的增强，保护因子bFGF mRNA的表达也相应增强，这可能是脑出血过程中神经功能修复的主要机制之一。     

G-CSF对大鼠脑出血周边组织bcl-2、caspase-3表达的影响

目的研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠脑出血周边组织bcl-2、caspase-3表达的影响。方法 Wistar大鼠112只,随机分为脑出血组、脑出血+G-CSF组,两组各分为(出血前,出血后4 h、6 h、12 h、24 h、72 h、7 d)7个时间点。免疫组化法测定大鼠脑出血周边组织bcl-2、caspase-3的表达。结果大鼠脑出血周边组织bcl-2表达4 h开始升高(P<0.01),大约24 h左右bcl-2表达达峰值。G-CSF干预后,bcl-2表达与脑出血组对应时间点比较显著上升(P<0.01)。大鼠脑出血周边组织caspase-3表达4 h开始升高(P<0.01),大约24 h左右caspase-3表达达峰值。G-CSF干预后,caspase-3表达与脑出血组对应时间点比较显著下降(P<0.01)。结论 GCSF可上调大鼠脑出血后bcl-2蛋白表达,抑制caspase-3蛋白表达,从而抑制神经细胞凋亡。     

电针可增强大鼠脑内前脑啡肽原mRNA的表达：原位杂交组织化学研究

本文采用原位杂交组织化学技术，结合计算机图象处理系统，对电针后大鼠脑内前脑啡肽原（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ的表达进行半定量的观察。ＰＰＥｍＲＮＡ探针以半抗原的地高辛标记。电针１０小时之后，ＰＰＥｍＲＮＡ阳性信号的强度和神经元内合ＰＰＥｍＲＮＡ的面积在许多与痛和镇痛有关的核团明显增加，如尾核，伏核，视前区，中脑的脚间核，导水管周围灰质，黑质，红核等。表明电针促进了ＰＰＥｍＲＮＡ在大鼠脑内的表达。这可能是针刺具有累积和长期效应的机制之一。     

同型半胱氨酸对大鼠脑出血后血肿周围细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的本实验通过观察同型半胱氨酸(Hcy)对脑出血模型大鼠血肿周围神经细胞凋亡和Caspase-3的表达的影响,探讨实验性脑出血后Hcy的损伤作用及其机制,并为预防及治疗脑出血提供实验理论基础。方法应用立体定向技术制备脑出血模型,Hcy组于术后30min予血肿同侧颅内直接注射Hcy,固定后连续切片作TUNEL染色和Caspase-3免疫组化染色,数据用SPSS13.0统计分析。结果假手术组偶可见TUNEL细胞表达,Caspase-3少量表达;脑出血组6h血肿周边组织出现TUNEL阳性细胞,72h达高峰,Caspase-3在脑出血后6h表达开始增高,24h达到高峰,应用Hcy干预后自12h起各时间点TUNEL细胞和Caspase-3表达均较ICH组增加(P<0.05),以各自高峰时间最为显著(P<0.05),但未能改变TUNEL细胞和Caspase-3表达的高峰时间。结论脑出血后血肿周围细胞凋亡与Caspase-3表达有关,Caspase-3介导了细胞凋亡的发生。Hcy能够促进脑出血后的细胞凋亡,可能与诱导Caspase-3表达有关,进一步证实Hcy为脑血管疾病的独立危险因素之一。     

脑出血后血肿周围神经细胞凋亡与CasPase-3表达关系的实验研究

目的 研究脑出血后不同时期血肿周围神经细胞凋亡情况和Caspas-3蛋白表达，探讨脑出血后血肿周围神经细胞损伤机制。方法 用立体定向二次注入法向成年大鼠右尾核壳区注射自体动脉血60μl，制成大鼠脑内血肿模型，用相同方法注射等量无活性石蜡油作对照，于脑出血后4h，6h，ld，3d，5d，10d不同时间点断头，取脑，采用原位末端标记法(TUNEL法)和免疫组化法进行动态形态学观察，了解脑出血后不同阶段血肿周围神经细胞凋亡和Caspase-3蛋白的表达。结果 脑出血后4h血肿周围尚无凋亡细胞出现，6h有凋亡发生，以后随时间逐渐增多，3d达高峰后逐渐下降，10d仍可见凋亡细胞。在HE染色中病理改变明显的部位凋亡细胞比较集中，无改变的部位也有凋亡细胞存在。脑出血后6h血肿周围神经细胞Caspase-3开始表达，3d达高峰后逐渐恢复，对照组仅有少量TUNEL阳性细胞及Caspase-3阳性表达细胞。结论 脑出血后血肿周围神经细胞损伤有凋亡机制参与，在出血后6h发生凋亡，第3d达高峰，Caspase-3表达时相变化与血肿周围神经细胞凋亡相一致，Caspase-3表达增加与血肿周围神经细胞凋亡有关。     

人脑出血后海马神经元损伤与Caspase-3的关系

目的　研究人脑出血后海马神经元损伤与凋亡促进因子Caspase- 3之间的关系。方法　选取10例因脑出血而死亡的尸检脑标本,应用HE染色,Caspase- 3免疫组织化学染色和Caspase- 3m RNA原位杂交,观察脑出血时海马CA1 区神经元损伤变化与Caspase- 3表达之间的关系。结果　海马CA1 区,出血5 h可检测Caspase- 3免疫组化染色的阳性细胞(10 .4个/高倍视野) ,2 2～4 8h时达高峰(2 1.7～2 4 .3个/高倍视野)。Caspase- 3m RNA原位杂交阳性表达始于5 h(6 .75个/高倍视野) ,2 4 h达高峰(14 .6 0～18.30个/高倍视野) ;二者均在72 h后呈明显下降趋势。出血2 4 h,可检测到TUNEL阳性细胞,持续至72 h。Caspase- 3m RNA与Caspase- 3呈正相关,相关系数为0 .717(P<0 .0 5 )。4～16 h受损神经元形态基本正常,2 4～4 8h细胞凋亡特征明显,72 h后,几乎所有神经元形态呈现严重病理变化。结论　人脑出血后海马神经元发生一系列形态学变化,其演变规律与凋亡促进因子Caspase- 3有密切相关性。     

脑出血后灶周组织形态和焦亡相关蛋白表达水平的研究

目的 观察自发性脑出血后血肿周围脑组织内神经胶质细胞的组织形态学特点及焦亡相关蛋白caspase-1、IL-18和IL-1β的表达水平变化。方法 高血压性脑出血死亡者(发病后3Symbol～A@33h死亡)的全脑标本5例,出血侧为实验组,非出血侧为对照组; 血肿周围的脑组织(1×1×0.3 cm³)的石蜡切片行常规H&E染色及caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白的免疫组化染色,光学显微镜下观察脑组织内神经胶质细胞的组织形态特点及caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白的表达水平变化,计数阳性细胞的数量,析因设计的方差分析和费舍尔最小显著差异确定显著性水平。结果 血肿周围脑组织内的神经胶质细胞胀大,核质凝集、碎裂和溶解; caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达在神经胶质细胞、血管内皮细胞和壁细胞的胞浆内,IL-18和IL-1β蛋白还同时表达在上述细胞的细胞外基质内; caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达明显增强,阳性细胞显著增多(P Symbol|@@0.01)。结论 自发性ICH后血肿周围脑组织内的神经胶质细胞胀大,核质凝集、碎裂和溶解; caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达水平显著上调。这提示神经胶质细胞的焦亡途径被启动,其可能是脑出血后脑组织继发性损伤的机制之一。     

实验性脑出血急性期灶周组织水肿及炎性细胞因子的表达

目的 研究脑出血血肿周围脑组织炎性细胞因子的表达,探索其动态变化规律及与脑水肿的关系.方法 采用Wistar大鼠脑内缓慢注入自体血的方法建立实验性脑出血动物模型;随机分为6组,测定实验性脑出血6h、12h、24h、3d、5d、7d时间点血肿周围脑组织的含水量;应用免疫组化法及免疫印迹法(Western Blot)观察血肿周围脑组织中细胞因子IL-6、TNFα的表达.结果 脑出血后血肿周围脑组织的含水量逐渐增加,于3d达高峰;免疫组化染色显示血肿周围组织中神经细胞、血管内皮细胞均有IL-6及TNFa的阳性表达.免疫印迹半定量分析显示脑出血后6h血肿周围脑组织中即可见IL-6、TNFα较高水平的表达,24h达高峰,此后逐渐下降.结论脑出血急性期(6h)II-6及TNFα参与了血肿周围脑组织的损伤过程.IL-6变化曲线与脑水肿曲线呈现出一致性,推测其参与了血肿周围水肿的形成.     

大鼠脑出血早期脑组织神经元型一氧化氮合酶mRNA表达及中药抵当汤干预对其的影响

目的 探讨大鼠脑出血（ICH）早期脑组织神经元型一氧化氮合酶（nNOS）mRNA表达,以及中药抵当汤干预对其的影响。方法 将72只大鼠随机分为ICH组、抵当汤组、NOS抑制剂组和对照组,采用立体定向技术注入自体不凝血建立实验性ICH模型,对照组注入等量的生理盐水;术后6h、24h及72h用Bederson3级标准法对大鼠进行神经功能障碍评定;然后断头取脑,以原位杂交方法检测脑组织中nNOS mRNA阳性细胞的表达。结果 神经功能缺损程度评分术后72h时ICH组与抵当汤组均见明显改善（均P〈0.05）,但抵当汤组的改善明显优于ICH组（P〈0．05）;ICH后6h血肿侧大脑皮质nNOS mRNA阳性细胞的表达较对照组已有明显增高,24h达高峰,72h时下降,但仍明显高于对照组（均P〈0．05）;抵当汤组血肿侧大脑皮质nNOS mRNA阳性细胞表达在各时间点较ICH组明显减少（均P〈0．05）,且与NOS抑制剂组变化规律一致。结论 抵当汤具有与NOS抑制剂相似的作用,通过抑制ICH后脑组织中nNOS mRNA的表达而产生脑保护作用。     

实验性脑出血血肿周围血流量变化的研究

目的　建立实验性脑出血的动物模型 ,探讨血肿周围的脑血流量变化。方法　采用犬脑内缓慢注入非肝素化自体血的方法建立实验性脑出血动物模型。用 1 4C- iodoantipyrine微示踪技术测定实验性脑出血 6 h、2 4 h、72 h血肿周围皮质、白质及对侧相应部位的脑血流量。结果　注血 6 h组、2 4 h组血肿周围白质的 CBF与对照组相比有所下降 ,但无统计学差异 ;而注血 72 h组血肿周围白质的 CBF较对照组降低了 19.8% (P<0 .0 5 ) ;注血 72 h组血肿对侧相应部位白质的 CBF较对照组升高了 14 .8% (P<0 .0 5 )。结论　犬脑内缓慢注入非肝素化自体血可建立可靠、重复性好的实验性 ICH动物模型 ,脑出血后 72 h,血肿周围白质的血流量下降 ,脑出血早期的脑损伤非缺血所致。     

实验性脑出血后水通道蛋白-4的表达变化

目的　研究出血性脑水肿病理过程中水通道蛋白 4 (aquaporin 4 ,AQP4 )的表达与脑水肿形成之间的关系。方法　采用胶原酶制作大鼠脑出血模型 ,原位杂交和免疫组化法检测AQP4mRNA和蛋白质的表达变化 ,并用电镜技术和微血管灌注法观察脑水肿区的超微结构和微血管的变化。结果　与对照组相比 ,脑出血后 6h ,AQP4mRNA和蛋白质在脑水肿区表达增强 ,AQP4mRNA(吸光度值 ,A)由 0 2 9上升到 0 5 7(P <0 0 1) ,AQP4蛋白A值由 0 0 6上升到 0 15 (P <0 0 1) ,电镜下可见脑组织轻度水肿 ;至 72h ,AQP4mRNA和蛋白质的表达达到高峰 ,AQP4mRNA的A值为 0 88,AQP4蛋白A值为 0 2 5 ,此时脑组织严重水肿 ,神经元、胶质细胞和内皮细胞明显肿胀 ,毛细血管造影可见毛细血管开始增生 ;第 7天 ,AQP4的表达已减少 (尤以mRNA明显 ) ,但仍显著高于对照组 ,此时脑水肿已减轻。在整个脑水肿的形成过程中 ,AQP4mRNA和蛋白的表达呈高度正相关 (rs>0 82 ,Ps<0 0 1)。结论　脑出血后AQP4表达明显增强 ,提示AQP4参与了出血性脑水肿的发生发展过程 ,在出血性脑水肿的形成过程中起重要作用。     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后caspase-3、Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达。方法将动物随机分为假手术组及缺血组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,各组大鼠分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元中caspase-3、Bcl-2和Bax的表达通过免疫组化法来测定。结果缺血组大鼠脑皮质caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bax的表达较假手术组显著增强(P<0.01)。结论短暂性脑缺血再灌注上调脑皮质神经元中caspase-3和Bax的表达促细胞凋亡,上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达抗细胞凋亡。