蚯蚓中平喘蛋白组分的提取分离及其作用机制的初探

目的初步研究蚯蚓平喘蛋白组分(Eisenia foetidaprotein,EP₂)及其平喘活性。方法以新鲜赤子爱胜蚓为原料,通过蛋白质的硫酸铵沉淀和离子交换色谱法,分离得到一组平喘活性蛋白成分(EP₂)。采用经典的肺阻力(R_L)和动态肺顺应性(C_dyn)指标评价EP₂对致敏豚鼠抗原攻击前后的肺功能变化;采用体外试验观察EP₂拮抗白三烯D₄引起豚鼠离体气管平滑肌的收缩反应;同时应用双向凝胶电泳-质谱技术对蛋白组分EP₂进行了初步分析鉴定。结果在整体试验中,EP₂16.8mg·kg^-1口含吞服预处理能明显抑制致敏豚鼠抗原攻击后引起的RL增加和C_dyn下降,作用稍弱于阳性对照药孟鲁司特;在离体试验中,EP₂能明显拮抗白三烯D₄收缩气管平滑肌的作用,作用强度与孟鲁司特接近;双向凝胶电泳-质谱技术分析证明蛋白组分EP₂中含有蚯蚓种属中的蛋白F-I-0、F-I-1以及纤溶酶组分A,均为丝氨酸蛋白酶类胰蛋白酶家族成员。结论EP₂具有平喘作用,作用靶点可能通过拮抗白三烯受体,提示EP₂的有效成分可能是白三烯拮抗剂。     

蚯蚓总蛋白对豚鼠哮喘模型肺功能的影响

目的 研究蚯蚓总蛋白(Eisenia foetida protein,EP)对豚鼠哮喘模型支气管平滑肌收缩功能的影响,初步分析其作用机制.方法以新鲜赤子爱胜蚓为原料,经硫酸铵沉淀得到EP.采用经典的肺阻力(RL)和动态肺顺应性(Cdyn)指标评价EP对致敏豚鼠抗原攻击前后的肺功能变化;采用体外试验观察EP对豚鼠的离体气管平滑肌静息张力以及拮抗组胺、氨甲酰胆碱和白三烯引起的收缩反应.结果在整体试验中,EP10 g·kg-1(生药量,po)或EP5g·kg-1(生药量,im)预处理能明显抑制致敏豚鼠抗原攻击后引起的RL增加和Cdyn下降;在离体试验中,EP对离体豚鼠气管平滑肌静息张力无显著影响,对组胺或氨甲酰胆碱引起的气管平滑肌收缩反应无明显拮抗作用,但对白三烯D4引起的收缩反应呈现非常显著的拮抗作用(P<0.01).结论 EP抑制豚鼠哮喘模型肺功能下降可能与抗白三烯作用有关.     

蚯蚓总蛋白对豚鼠哮喘模型肺功能的影响

目的研究蚯蚓总蛋白(Eisenia foetida protein,EP)对豚鼠哮喘模型支气管平滑肌收缩功能的影响,初步分析其作用机制。方法以新鲜赤子爱胜蚓为原料,经硫酸铵沉淀得到EP。采用经典的肺阻力(R_L)和动态肺顺应性(C_dyn)指标评价EP对致敏豚鼠抗原攻击前后的肺功能变化;采用体外试验观察EP对豚鼠的离体气管平滑肌静息张力以及拮抗组胺、氨甲酰胆碱和白三烯引起的收缩反应。结果在整体试验中,EP10g·kg^-1(生药量,po)或EP5g·kg^-1(生药量,im)预处理能明显抑制致敏豚鼠抗原攻击后引起的R_L增加和C_dyn下降;在离体试验中,EP对离体豚鼠气管平滑肌静息张力无显著影响,对组胺或氨甲酰胆碱引起的气管平滑肌收缩反应无明显拮抗作用,但对白三烯D₄引起的收缩反应呈现非常显著的拮抗作用(P<0.01)。结论EP抑制豚鼠哮喘模型肺功能下降可能与抗白三烯作用有关。     

麻辛平喘口服液对豚鼠体外气管平滑肌的舒张作用

［摘要］目的探讨麻辛平喘口服液缓解哮喘症状的作用机制。方法通过正常和哮喘豚鼠的体外气管平滑肌实验,观察麻辛平喘口服液对磷酸组胺或氯化乙酰胆碱致豚鼠气管平滑肌收缩、卵蛋白致敏引起的豚鼠气管平滑肌的收缩和对静息状态下气管平滑肌的影响。结果麻辛平喘口服液对磷酸组胺和氯化乙酰胆碱引起的豚鼠气管平滑肌收缩和卵蛋白致敏引起的豚鼠气管平滑肌的收缩都有明显拮抗作用,且麻辛平喘口服液在3～12 g&#8226;L 1对气管平滑肌的舒张作用存在明显的量效关系。结论麻辛平喘口服液可能通过非竞争性抑制,降低磷酸组胺和氯化乙酰胆碱对H1和M受体的兴奋作用,或通过拮抗某些炎性递质对气管平滑肌的收缩作用。     

硫酸寡糖对豚鼠气管平滑肌的作用

目的 观察硫酸寡糖对组胺(His)、乙酰胆碱(Ach)引起的正常豚鼠离体气管平滑肌收缩的影响、对卵白蛋白(OVA)致敏豚鼠离体气管平滑肌受到OVA攻击时引起收缩的影响及对吸入His引起的正常整体豚鼠哮喘的影响。方法 采用豚鼠离体气管片法、致敏豚鼠离体气管Schultz-Dale法和整体动物引喘法。结果 硫酸寡糖能显著抑制His引起的正常豚鼠离体气管平滑肌收缩,但对Ach引起的正常豚鼠离体气管平滑肌收缩无显著抑制作用;能显著抑制OVA诱发的致敏豚鼠离体气管平滑肌的收缩;能显著延长His引喘潜伏期,使抽搐动物数减少。结论 硫酸寡糖具有抗His、抗过敏和平喘作用。     

吡布特罗胶囊对豚鼠支气管平滑肌的影响

目的:研究吡布特罗胶囊(PirbuteroI Capsules)对正常及致敏豚鼠支气管收缩的影响及平喘作用。方法:通过离体和整体实验,观察 Pributerol Capsules 对以组胺和乙酰胆碱引起正常豚鼠支气管的收缩和以卵白蛋白诱发的致敏豚鼠支气管收缩的影响。结果:离体实验,PirbuterolCapsules 52mg·L~(-1)对组胺致正常豚鼠气管片的收缩具有对抗作用,对卵白蛋白所致的致敏豚鼠支气管平滑肌收缩有极显著的抑制作用(P<0.01)。对乙酰胆碱所致气管片收缩作用明显;整体实验,Pirbuterol Capsules 18mg·kg~(-1)可显著延长卵白蛋白所致的致敏豚鼠呼吸困难,抽搐和跌倒的潜伏期(P<0.01)。结论:Pirbuterol Capsules 能拮抗组胺刺激引起的正常豚鼠和卵白蛋白引起的致敏豚鼠离体气管片的收缩,抑制致敏豚鼠哮喘的发生。     

消咳喘片对豚鼠支气管平滑肌的影响

目的:研究消咳喘片(Xiaokechuan Tablets)对正常及致敏豚鼠支气管收缩的影响及平喘作用。方法:通过离体和整体实验,观察消咳喘片对以组胺和乙酰胆碱引起的正常豚鼠支气管的收缩和以卵蛋白诱发的致敏豚鼠支气管收缩的影响。结果:离体实验,消咳喘片52mg·L-1对组胺致正常豚鼠气管片的收缩具有对抗作用,对卵白蛋白所致的致敏豚鼠支气管平滑肌收缩有极显著的抑制作用(P<0．01)。对乙酰胆碱所致气管片收缩作用明显;整体实验,消咳喘片18mg·kg-1可显著延长卵白蛋白所致的致敏豚鼠呼吸困难,抽搐和跌倒的潜伏期(P<0．01)。结论:消咳喘片能拮抗组胺刺激引起的正常豚鼠和卵白蛋白引起的致敏豚鼠离体气管片的收缩,抑制致敏豚鼠哮喘的发生。     

硝普钠平作喘用的观察

确普钠能直接松驰豚鼠离体气管平滑肌;能非竞争性拮抗组胺引起的豚鼠离体肺条收缩;对组胺诱发的豚鼠肺条收缩有解痉作用;气雾吸入或吞下给药对豚鼠药物性哮喘有保护作用;气雾吸入对猪蛔虫蛋白抗原诱发的犬过敏性哮喘具有保护作用。确普钠能提高豚鼠离体气管平滑肌cAMP的含量,这可能是它平喘作用的机制。     

β丁香烯醇的药理研究

β丁香烯醇是艾叶油的平喘有效成分β丁香烯经胃-肠液转化后的化合物。它对豚鼠药物性哮喘具有保护作用,作用强而持久。对豚鼠离体气管平滑肌有直接松弛作用。能抑制致敏豚鼠肺组织SRS-A的释放和拮抗SRS-A作用,并有镇咳、祛痰作用。本品是一平喘作用强而持久的新平喘化合物。     

白屈菜总生物碱对豚鼠的平喘作用

目的:观察白屈菜总生物碱的平喘作用。方法:采用磷酸组织胺-氯化乙酰胆碱、卵蛋白引喘诱发豚鼠喘息模型,观察药物对出现喘息性抽搐的潜伏期及抽搐跌倒动物数的影响;采用豚鼠离体肺支气管灌流和离体完整豚鼠气管毛细管试验,测定药物对气管张力的影响。结果:TACM可明显延长引喘潜伏期(P<0.05),减少抽搐跌倒动物数;明显增加肺支气管的灌流量(P<0.05);松弛离体完整气管平滑肌,并可抑制组织胺收缩气管平滑肌效应。结论:TACM有显著的平喘作用。     

2016年至2018年南京各级医院抗哮喘药物利用和可获得性分析

目的分析南京2016年至2018年抗哮喘药物的使用情况,促进临床合理使用。方法根据江苏省医药情报研究所提供的2016年至2018年南京56家医院抗哮喘药物的销售数据,采用金额排序法和用药频度分析法,回顾性分析抗哮喘药物的销售金额;所有抗哮喘药物用药频度(DDDs)和限定日费用(DDC)等,同时评价抗哮喘药物的可获得性。结果共涉及19个品种,销售金额排名前3位的药物分别为布地奈德、孟鲁司特钠和布地奈德福莫特罗;DDDs排名前3位的药物分别为沙美特罗替卡松、异丙托溴铵和孟鲁司特钠,总销售金额和总DDDs均呈增长趋势;除沙美特罗替卡松和异丙托溴铵外,其余药物销售金额与DDDs序号的比值均在0.17~2.00范围内;DDC排名前3位的药物分别为多索茶碱、特布他林和倍氯米松;各类抗哮喘药物在二、三级医院的可获得性均较高,在一级医院的可获得性极低。结论南京抗哮喘药物用量增长稳定,类别结构较完善,总体上可满足不同层次和类型哮喘患者的用药需求,但一级医院抗哮喘药物可获得性较低。为满足用药需求,应提高一级医院抗哮喘药物的可获得性。     

一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶酶学性质的研究

目的研究蚯蚓组织中1种新型脱氧核糖核酸酶(EWD1)的主要酶学性质。方法用SDS-PAGE凝胶电泳、质谱分析、毛细管等点聚焦电泳法和酶活性测定等方法。结果EWD1的相对分子质量约为157000。Mn2+、Ca2+是该酶的抑制剂,Mg2+对酶的活性基本上没有影响。该酶的最适温度为37℃,最适pH值为5.2,等电点为6.12。以小牛胸腺DNA为底物,测得Km为1.58 mg/mL,Vmax为5.36 mg/(mL.min)。结论蚯蚓组织中发现的此种脱氧核糖核酸酶EWD1具有特殊的酶学性质,明显区别于已知的脱氧核糖核酸酶类。     

蚯蚓新型脱氧核糖核酸酶的相对分子质量测定

目的测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶(EWD3)的相对分子质量。方法采用凝胶过滤层析法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳法(SDS-PAGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)3种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD3)的相对分子质量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其相对分子质量分别为55080、58270和63460。结论凝胶过滤层析法和SDS-PAGE法可以常规粗略测定蛋白的相对分子质量,质谱法可以比较准确测定蛋白的相对分子质量,EWD3为单亚基蛋白,其相对分子质量约在55000￣65000之间。     

10种常用平喘中药对磷酸二酯酶4抑制作用的研究

目的研究10种常用平喘中药桑白皮、枇杷叶、百部、马兜铃、紫菀、款冬花、苦杏仁、苏子、葶苈子、银杏叶提取物对磷酸二酯酶4（PDE4）的抑制作用。方法分别采用水煎煮、95%乙醇回流提取法提取药材,采用放射性3H标记液体闪烁计数法检测提取物对靶标PDE4的抑制活性。结果 10种平喘中药的水提物、95%乙醇提取物均显示一定的抑制PDE4活性。总体而言,平喘中药95%乙醇提取物对PDE4抑制活性高于水提取物。相同浓度下,桑白皮、枇杷叶、款冬花、马兜铃活性较高。结论平喘类中药对PDE4靶标具有一定的抑制作用,可能与其平喘作用相关。     

Biochemical responses of earthworm (Eisenia foetida) to the pesticides chlorpyrifos and fenvalerate

The effects of chlorpyrifos and fenvalerate on the activity of the cellulase, superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) of the earthworm (Eisenia foetida) were studied. Earthworms were exposed to chlorpyrifos and fenvalerate at a final concentration of 10, 20, and 40 mg/kg dry soil, respectively. Tissues from each treatment were collected on days 1, 3, 5, and 7. Compared to the controls, the cellulase activity of E. foetida was inhibited by treatments with chlorpyrifos and fenvalerate. The SOD activity of earthworms exposed to chlorpyrifos was significantly inhibited compared to the control after 1 day of incubation, whereas SOD activity increased on day 3. As exposure to the pesticide progressed, the SOD activity recovered from the stimulative effect and reached the level of the control. The SOD activity of E. foetida in the presence of fenvalerate stress was significantly inhibited at the initial stage of exposure and increased after day 3, whereas the SOD activity continued to decrease in response to increasing exposure to fenvalerate. The CAT activity of E. foetida during pesticide stress first increased and then decreased, after day 5, compared to the controls. Alterations of the enzyme activity under environmental stresses are suggested as indicators of biotic and abiotic stress.     

以趋化因子受体为靶点的抗哮喘小分子药物研究进展

哮喘是一种以气道炎症、气道高反应性及气道重塑为特征并伴随支气管炎性细胞浸润的慢性呼吸道疾病。趋化因子通过与趋化因子受体结合介导炎性细胞向支气管迁移,在哮喘发病中起着重要的作用。以趋化因子及其受体为靶点是目前抗炎、抗哮喘药物研究的热点。本文主要针对近年来趋化因子受体的小分子拮抗剂在抗哮喘方面的研究成果予以综述,将有助于抗哮喘药物设计,为进一步研究提供参考。     

还阳参醇提物止咳祛痰平喘及抗炎作用的实验研究

目的探讨还阳参醇提物对实验动物的止咳、祛痰、平喘及抗炎作用。方法分别采用氨水引咳法、气管酚红排泄法、组织胺致喘息法观察还阳参醇提物的止咳、祛痰、平喘作用;采用二甲苯致小鼠耳肿胀和蛋清致大鼠足趾肿胀法观察还阳参醇提物抗急性炎症的作用;气管内注入脂多糖法建立大鼠慢性支气管炎模型,观察受试物对模型大鼠肺组织的病理学改变。结果还阳参醇提物能显著减少小鼠的咳嗽次数、增加小鼠气道酚红排泄量、延长组织胺所致豚鼠喘息的潜伏期、可减轻蛋清所致的大鼠足趾肿胀度,与对照组比较差异具有显著性（P〈0.05或0.01）;还阳参醇提物能减轻慢性支气管炎大鼠黏膜上皮细胞的坏死和脱落,抑制黏膜层和黏膜下层炎性细胞浸润。结论还阳参醇提物有明确的止咳、祛痰、平喘及抗炎作用,对慢性支气管炎大鼠模型的支气管黏膜有保护作用。     

Inhibition of lysenin-induced hemolysis by all-E-lutein derived from the plant Dalbergia latifolia

Lysenin is a pore-forming toxin derived from coelomic fluid of the earthworm Eisenia foetida. The model of lysenin-induced hemolysis includes the specific binding of lysenin to sphingomyelin, oligomerization of the pore proteins, and pore formation. Although the mechanism of lysenin-induced hemolysis is unique, its precise mechanism of action and its inhibitors are poorly understood. In the present study, we screened for inhibitors of lysenin-induced hemolysis by using an optimized screening system and found a methanolic extract of Dalbergia latifolia leaves to be a potential candidate. After isolation and identification, all-E-lutein was identified as the hemolysis inhibitor with an effective dose of 0.025-2.5 ng/mL without any toxicity. The inhibition by all-E-lutein is likely to occur during the receptor binding and/or pore-forming protein oligomerization.