广州地区禽H9N2亚型流感病毒的发现及感染人调查

目的 了解广州地区禽流感病毒在家禽中的流行及感染人的情况，防止香港H5N1禽流感在广州地区流行。方法 对广州地区的主要鸡场和农贸市场的家禽和密切接触家禽的职业人群进行病原学和血清学的检测。病毒分离同时采用MDCK细胞和鸡胚双腔接种法；采用微量血凝抑制半致敏法进行血清学检测。结果 从54份鸡咽拭液中分离到1株H9N2亚型流感病毒；鸡及职业人群血对分离的H9N2毒株的血抑抗体阳性率分别为12．8％和15．1％。结论 广州地区鸡群中有H9N2，亚型流感病毒存在，禽H9N2亚型流感病毒能感染人。     

甲型流感病毒新宿主

美国圣吉德 (St .Jude)儿童研究医院传染病部病毒学分部 ,田纳西州孟菲斯罗德岱堡 32 2N .众多证据证实在鸡群中存在新的稳定流感病毒毒株。如欧亚地区发现的H9N2流感病毒亚型 ,亚洲和北美地区均发现的H3N2 ,H6N1和H 6N2亚型。中国中南地区南昌市活禽交易市场 16个月的监测结果显示 ,健康家禽排泄物标本中 1%可检测到流感病毒。带毒率前两位的是鸡 (1 3% )和鸭(1 2 % ) ,第三位是鹌鹑 (0 8% ) ,接着是鸽子(0 5 % )。其中多份标本分离到H3N6 ,H9N2 ,H2N9和H4N6亚型 ,而H1N1和H3N2亚型只在单一标本中分离到。用各病毒亚型的代表株…     

2011-2012年肇庆市禽流感职业暴露人群及外环境病毒分布监测分析

目的了解肇庆市禽类职业暴露人群禽流感病毒感染状况以及外环境禽流感病毒的分布情况。方法采集禽类职业暴露人员血清样本,用红细胞血凝抑制试验（HI）检测H5N1流感抗体;采集外环境样本,用荧光定量PCR法检测禽流感病毒FluA、H5、H7和H9核酸。结果2011-2012年共采集职业暴露人员血清样本400份,检测H5N1抗体均为阴性;共采集外环境有效样本202份,检出FluA阳性25份,阳性率为12．38％,其中AH9亚型阳性14份（56．00％）。AH7亚型阳性1份（4．00％）,A未分型10份（40．00％）,未检出AH5亚型。结论肇庆市职业暴露人群尚未发现感染高致病性禽流感H5N1病毒．夕h环境存在禽流感病毒的污染,H9亚型是主要的病原体。     

无锡市流感病毒抗体水平调查

目的调查无锡市人群中甲型、乙型流感病毒抗体水平和新甲型H1N1流感病毒传人前后人群中抗体水平,并对新甲型H1N1流感病毒传人1年后自然人群中成人抗体水平与接种新甲型H1N1流感疫苗后1年的成人抗体水平进行比较。方法收集2008年9月至2009年5月、2010年9月至2011年1月无锡市不同年龄段人群血清和接种新甲型HIN1流感疫苗1年的成人血清,用血凝抑制（HI）试验测定抗体,并比较不同时间段各人群中的流感抗体阳性率、保护率和几何平均滴度（GMT）。结果新甲型H1N1流感病毒传入前,无锡市自然人群的HI抗体阳性率为2．86％（4／140）,保护率为0．71％（1／140）,GMT为5．23。新甲型H1N1流感病毒传入1年后,自然人群的HI抗体阳性率为66．33％,保护率为37．76％、GMT为19．17;其中成人HI抗体阳性率、保护率和GMT分别为50．00％、19．44％和13．09。接种新甲型H1N1流感疫苗的成人1年后HI抗体阳性率、保护率和GMT分别为61．36％、22．73％和14．14,与自然人群中成人在流感病毒传入1年后的抗体水平差异无统计学意义（P均〉0．05）。无锡市人群中甲型与乙型流感病毒HI抗体水平分别为：H1N1病毒抗体阳性率为55．00％,保护率为35．00％,GMT16．90;H3N2抗体阳性率为86．40％,保护率为84．30％,GMT为58．56。结论新甲型H1N1流感病毒传入无锡市1年后,自然人群中新甲型H1N1流感病毒抗体阳性率、保护率和GMT均已达到季节性流感抗体水平。同时人群中已有一定水平的甲型、乙型流感病毒抗体,近期不会发生较大的季节性流感疫情。     

不同抗原性甲3 (H3N2) 亚型流感病毒的鉴定及分子生物学研究

目的：对不能用当年标准血清进行鉴定的甲3（H3N2）亚型流感病毒进行抗原性分析及分子生物学研究。方法：用交互血凝抑制试验对毒株进行抗原性分析,提取病毒RNA,用一步法逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）扩增HA1（血凝素重链区）基因片段,产物纯化后测序并分析结果。结果：发现两株从鸡胚分离到的甲3（H3N2）亚型“D”相毒株与2株从MDCK细胞分离到的“0”相毒株抗原性已明显不同;其中1999年分离的“D”相与“0”相2毒株的抗原比大于256,氨基酸序列同源性为93％,抗原决定簇A区和B区氨基酸位点相差分别为50％及35％;受体结合部位（RBS）有6个氨基酸位点发生变异（左侧壁1个、前壁3个、右壁2个）。结论：人群中存在没有发生“0”相变异的甲（H3N2）亚型“D”相毒株,其抗原性与当前流行的“O”相变异株已明显不同,提示今后在鉴定甲3（H3N2）亚型毒株时,需根据毒株的来源和相特性选择适合的标准血清进行鉴定。     

重组禽流感疫苗株rH5N3的生物学特性与免疫效果

目的评价重组禽流感疫苗株rH5N3的生物学特性和免疫效果。方法将rH5N3注射SPF鸡胚和SPF鸡，观察其致病性；rH5N3及其亲本毒株A／Goose／HLJ／QFY／04分别在MDCK细胞单层和SPF鸡胚中增值，研究其生长特性；rH5N3在SPF鸡胚中连续传代，测定第10代rH5N3的核酸序列，评价其遗传稳定性；制备油包水型灭活rH5N3疫苗接种SPF鸡，免疫后不同时间采血测HI抗体滴度；rH5N3灭活疫苗接种SPF鸡，免疫后3周采血测定HI抗体滴度，同时进行H5N1亚型强毒株攻击，观察其保护作用。结果rH5N3疫苗株对鸡和鸡胚均无致病性；其在鸡胚尿囊液和细胞培养上清液的HA效价极大提高，分别为1：2048和1：512；第10代rH5N3的核酸序列与其亲本毒株相同；灭活rH5N3疫苗免疫鸡后2周即可诱导产生高效价HI抗体，且免疫后18周依然保持较高水平；该疫苗对强毒株包括国内早期分离的A／Goose／Guangdon∥1196和近期分离的A／Goose／HLJ／QFY／04都能产生完全的保护作用，免疫鸡攻毒后不发病、不排毒、不死亡。结论rH5N3疫苗株具有安全、高产、稳定等特点，且具良好的免疫原性，免疫动物完全能够抵抗强毒株的致死性攻击。该疫苗株的成功研制为H5N1亚型高致病性禽流感的防控提供了新的技术保障。     

禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体的研制和初步应用

目的：获得特异针对禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体。方法：以H9N2亚型病毒制成疫苗免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0细胞融合，取细胞上清用HI筛选。结果：共获得9株稳定分泌针对血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞；经广谱性和特异性鉴定，所有单抗株均能与所有检测的82株不同年代不同地方不同禽源H9亚型流感病毒大部分分离株反应，且所有单抗株均不与非AIV-H9病毒反应，而其中一株（8E6）能与所有检测的H9亚型病毒株反应。进行Western blot分析显示，其中8株单抗能与AIV的Mr为75000处反应，表明是针对AIVH9HA的单抗。结论：本试验获得9株广谱性特异性很好的单抗，特别是8E6株；这些单抗株为以后作病毒抗原性位点分析、临床检测和流行病学调查提供了良好试剂。     

2010—2011年北京市四次甲型H1N1流感病毒抗体水平动态变化分析

目的了解和掌握北京市不同人群对甲型H1N1流感的免疫水平。方法在2010年1月-2011年4月期间,四次采用多阶段分层随机抽样方法,在北京市六个区分年龄组随机选取调查对象进行问卷调查,并采集血清标本进行甲型H1N1流感病毒抗体检测。结果共选取调查对象18264名。5456名（28．9％）调查对象体内甲型H1N1流感病毒抗体为阳性。总体人群甲型H1N1流感抗体滴度主要集中在1：40—1：320,其中抗体滴度为1：40的人数占总体阳性数的比例达41．61％。同一时间点不同年龄组问、同一年龄组的不同时间点间,血凝抑制（HI）保护性抗体阳性率、抗体GMT水平比较的差异均有统计学意义（P〈0．05）。HI保护性抗体阳性率和抗体GMT存在地区差异（P〈0．05）。不同职业人群间HI保护性抗体阳性率和抗体GMT水平比较差异存在统计学意义（P〈0．05）。结论目前北京市人群中已有超过25％的人群具有甲型H1N1流感病毒保护性抗体,甲型H1N1流感疫苗接种与HI抗体阳性存在相关性,普通人群中已经建立了一定的免疫屏障,但抗体滴度水平较低。     

深圳市龙岗区2010年人群血清流感抗体水平监测

目的了解深圳市龙岗区部分健康人群的流感病毒抗体水平,为预防和控制疫情提供依据。方法应用血凝集抑制试验对深圳市龙岗区不同年龄组健康人群的血清进行流感病毒抗体检测。结果人群中各型及亚型病毒株的抗体阳性率均在50%以下,对新H1N1、H1N1、H3N2、BV和BY毒株的抗体阳性率分别37.4%、35.7%、36.9%、21.7%和39.8%,抗体几何平均滴度分别为43.3、47.5、42.0、33.2和29.5。结论应继续加强流感病毒抗原变异株和人群流感病毒抗体水平的监测,预测流感流行趋势,为预防和控制流感疫情提供科学依据。     

2015-2016年度中国甲型H1N1亚型流感病毒疫苗候选株的制备及鉴定CSCD

目的 为获得2015-2016年度中国流行的甲型H1N1亚型流感病毒疫苗候选株,制备流感病毒重配株并对其进行鉴定.方法 采用经典重配的方法,将H1N1亚型流感病毒流行株与H3N2亚型的鸡胚高产重配母本株（X-157株）在鸡胚上进行混合培养.用H3亚型的HA蛋白抗血清和X-157株全病毒抗血清对混合培养病毒进行阴性筛选.阴性筛选后HA滴度较高的病毒用Real-Time PCR法对表面蛋白基因型进行鉴定.对表面蛋白基因型正确的毒株用限制性内切酶酶切鉴定法鉴定其内部基因组成.进一步对HA和NA基因进行Sanger法测序,并用表面基因无氨基酸位点突变的毒株免疫雪貂,进行双向血凝抑制（Two-way hemagglutination inhibition test,HI）试验.结果 Real-Time PCR筛选出5株表面蛋白基因型正确的毒株.经内部基因鉴定其中4株为6＋2组成,1株为5＋3组成.5株重配株的HA和NA基因均未发生氨基酸位点突变.5株重配株HA滴度均维持在1 024以上.最终选取的12号重配株免疫原性良好,HI滴度达5 120,双向HI试验均通过.重配后疫苗株在鸡胚上的产量是重配前野毒株的64倍.结论 成功制备了2015-2016年度中国流行的甲型H1N1亚型流感病毒疫苗株,为疫苗贮备和疾病防控奠定了基础.     

禽H9N2亚型流感病毒能感染人的发现

目的了解禽（Ｈ９Ｎ２）亚型流感病毒是否能感染人。方法对人、鸡和猪进行Ｈ９亚型毒株血清流行病学调查。对流感样患者和鸡咽喉部采样,用常规鸡胚双腔法分离流感病毒并进行毒株鉴定。对分离出Ｈ９Ｎ２亚型毒株的患者进行个案调查。结果约１９％的人含有对Ｈ９Ｎ２毒株的抗体,其ＨＩ滴度为≥２０,从流感样患者中分离到５株Ｈ９Ｎ２病毒。结论Ｈ９Ｎ２亚型毒株能自然感染人。     

从我国人群中再次分离到H9N2亚型流感病毒

目的 了解分离流感病毒毒株表面抗原亚型和特性及其来源。方法 病毒通过ＭＤＣＫ细胞分离,用红细胞凝集抑制（ＨＩ）和神经氨酸酶抑制（ＮＩ）测定对病毒株表面抗原进行鉴定和特性分析,人血清中抗体测定采用ＨＩ和中和实验。对患者进行个」案调查。结果 分离物为甲型流感病毒Ｈ９Ｎ２亚型,属Ｇ９类似毒株,它的ＨＡ抗原特性与已经从人、鸡和鸽分离到的Ｈ９Ｎ２亚型毒株均有差异。患者恢复期血清对分离物的ＨＩ抗体滴度为４００     

季节性流感裂解疫苗在小鼠中半数有效剂量ED50a的测定

目的探讨季节性流感疫苗在小鼠中的免疫原性及其使50％小鼠血凝抑制抗体滴度（HI）达到40的血凝素（HA）有效剂量（ED50。）。方法以我国2008—2009年度季节性流感裂解疫苗为模式,将该疫苗中针对甲型流感病毒HlNl与H3N2两种组分按照HA不同剂量免疫小鼠,通过比较1针免疫与2针免疫所产生的Hl抗体强度探讨季节性流感疫苗在小鼠中的免疫原性,确定疫苗免疫程序;此后,观察两种疫苗组分免疫小鼠后的HI抗体动力学,确定HI抗体产生的高峰期;最后,使用HA不同剂量免疫小鼠,在HI抗体高峰期测定使50％小鼠HI抗体滴度达到40的HA有效剂量（ED50。）。结果季节性流感疫苗1针与2针免疫结果显示,两种疫苗组分1针免疫可在小鼠中产生HI抗体滴度范围为10～120,2针免疫可以使HI抗体滴度为1针免疫的10～100倍;HI抗体动力学研究表明,两种疫苗组分1针免疫后第28～35天为HI抗体产生的高峰期;该高峰期的ED50‘测定结果表明,两种疫苗组分使50％小鼠HI抗体滴度达到40的HA有效剂量（ED50。）均为1．5μg。结论季节性流感疫苗在小鼠中具有良好的免疫原性,1针免疫后第28～35天为抗体产生的高峰期,使50％小鼠HI达到40的HA有效剂量为1．5μg,为建立以季节性流感疫苗为参考的免疫保护评价体系奠定了基础。     

流行性感冒病毒裂解疫苗的安全性和免疫原性研究

目的 研究流行性感冒(流感)病毒裂解疫苗的安全性和免疫原性。方法 根据国家食品药品监督管理局2002SL0043号《新药临床研究申请批件》的要求，选择876例观察对象按随机双盲法分成试验组和对照组，观察局部反应和全身反应。用微量血凝抑制(H1)试验检验抗体应答反应，计算抗体阳转率、保护率及几何平均滴度(GMT)增长倍数。结果 试验疫苗和对照疫苗间全身和局部不良反应发生率差异无显著意义；两组间H1抗体阳转率、保护率及H3N2亚型和B型H1抗体GMT增长倍数差异无显著意义；然而，两种疫苗H1N1亚型的H1抗体GMT增长倍数间差异有显著意义。结论 两种疫苗均具有很好的安全性和免疫原性。     

1994～1997年深圳地区流感病毒活动及H3N2亚型毒株HA1基因演变特点

目的　了解近几年流感病毒在深圳地区活动的特点及甲３（Ｈ３Ｎ２） 亚型毒株ＨＡ１ 基因演变概况。方法　病毒分离采用常规的鸡胚双腔接种,毒株检定用常量半加敏ＨＩ测定。新鲜收获含病毒粒的鸡胚尿囊液用来提取ＲＮＡ,经逆转录合成ｃＤＮＡ,经聚合酶链反应（ＰＣＲ） 扩增,产物纯化,采用双脱氧链末端终止法进行核苷酸序列测定。结果　近几年来深圳地区流感活动概况与全国情况相一致：在人群中仍同时流行Ｈ３Ｎ２,Ｈ１Ｎ１ 亚型和乙型毒株,当甲型毒株活动减弱时,乙型毒株活动就增强,反之,甲型毒株增强时,乙型毒株就减弱。随着时间的推移,Ｈ３Ｎ２ 亚型毒株ＨＡ１ 基因不断地发生点突变,这种突变严重受人群免疫压力所影响,１９９６ 年的毒株与１９９５ 的毒株相比,不仅氨基酸替换点中多数是位于抗原决定簇区或受体结合部位上,并增加两个糖基化位点,故导致Ｈ３Ｎ２ 毒株於１９９６ 年活动明显增强。结论　近来在深圳地区人群中仍同时流行着Ｈ３Ｎ２,Ｈ１Ｎ１ 亚型和乙型流感病毒。然而,不同年其优势毒株是不一样的。１９９６ 年Ｈ３Ｎ２ 毒株活动增强是由于其ＨＡ１ 区氨基酸序列发生替换所造成。     

A/PR/8/34(H1N1)病毒株血清流行病学调查

目的了解当今人群中是否仍有Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）这类毒株的活动。方法从全国８个不同地区采集１９７５年之后出生人的血清，用常量半加敏ＨＩ测定Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）毒株的抗体，然后凡ＨＩ效价≥１０的血清，一律按同法对Ａ／Ｓｗｉｎｅ／Ｉｏｗａ／１５／３０（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／桂富／１０／１９４（Ｈ１Ｎ１）和Ａ／京防／５３／９７（Ｈ１Ｎ１）毒株进行复核测定。结果有２４份血清ＨＩ效价≥２０，分布于８个不同地区。结论当今我国人群中存在有Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）毒株的活动     

Human antibody to influenza C virus: its age-related distribution and distinction from receptor analogs.

Sera from persons of four age groups (1 to 2 years, 2 to 5 years, 20 to 30 years, and 65 to 85 years) were analyzed for hemagglutination inhibition (HI) activity for influenza C virus. Significant HI activity was found in 66% of the 237 sera tested, and titers ranged from 8 to 512. In the yoiung adult group, 96% had antibody and the highest mean titer (74.7) of any age group. Positive sera were far less common in young children (36 to 47%), and relatively low titers (18.3) were common among adults over 65. The high percentage of sera with antibody to influenza C virus suggests that infections with this virus occur at a rate greater than previously recognized. The high percentage of young adults with elevated levels of HI antibody suggested either that an immune response to influenza C infections is common or that the observed HI activity might be attributable, in part at least, to nonspecific inhibitors in the sera. We showed both directly and indirectly that most if not all the inhibitory activity in the human sera we examined was due to specific antibody, mostly immunoglobulin G. This conclusion is based on the finding that the single serum protein fraction with HI activity was found to have a molecular weight equivalent to that of 7S antibody (150,000) and that the HI activity was removed by absorption to staphyloccal protein A. Moreover, immunoglobulin from only HI-positive sera bound specifically to cells infected with influenza C virus, as shown by inhibition of hemadsorption and immunofluorescence. These findings were supported by similar results obtained with chicken antisera to C virus.     

Increased sensitivity and reduced specificity of hemagglutination inhibition tests with ether-treated influenza B/Singapore/222/79

Hemagglutination inhibition (HI) tests against whole virus (WV) influenza B/Singapore/222/79 antigen detected prevaccination serum antibody in only 15 (20%) of 50 predominantly elderly volunteers and fourfold or greater titer rises in only three (6%) after they received 1981-1982 trivalent influenza vaccine containing antigens of this virus. HI titers against ether-treated (ET) B/Singapore/222/79 were about eightfold higher than those against WV antigen and were comparable to microneutralization titers against this virus. The ET HI detected prevaccination antibody in 84%, a postvaccination titer rise in 32%, and a final titer of 80 or higher in 66%. Among 51 additional persons with known or presumed influenza B virus infections early in 1982, ET B/Singapore/222/79 was also more sensitive than WV for serodiagnosis (69 versus 49%), but eight persons with both WV and ET B/Singapore/222/79 HI responses also had an HI titer rise to WV A/Brazil/11/78 (H1N1) antigen. Conversely, among 14 college students with febrile, culture-proven influenza A (H1N1) infections early in 1982, 6 (43%) developed HI titer rises to ET B/Singapore/222/79 with no other serological evidence of influenza B virus infection. Moreover, young adult volunteers with mild experimental influenza A (H1N1) infections also exhibited a 17% (3 of 18) incidence of ET B/Singapore/222/79 HI titer rises, versus none in matched, uninfected volunteers. These data indicate that ET B/Singapore/222/79 virus has increased sensitivity but reduced specificity compared to WV as an HI antigen and that caution is needed in interpretation of a single HI test for serodiagnosis, whether with WV or ET antigen.     

Comparison of hemagglutination inhibition assay, an ELISA-based micro-neutralization assay and colorimetric microneutralization assay to detect antibody responses to vaccination against influenza A H1N1 2009 virus

The hemagglutination inhibition (HI) assay has been the main method used to investigate immune responses to vaccination against influenza H1N1 (2009) virus. However microneutralization tests (MNT) have been shown to be more sensitive and more specific. In this study, the three methods of choice: (i) the HI assay, (ii) an ELISA-based conventional MNT and (iii) a colorimetric MNT in terms of their ability to detect antibody responses in serum pairs collected from 43 healthy individuals before and 21 days after vaccination were compared. The colorimetric MNT was established yielding intra- and inter-run imprecisions of 7.5% and 12.4%, respectively. Testing of antisera to seasonal influenza viruses demonstrated the assay to be specific for antibodies to influenza H1N1 (2009) virus. A good correlation between the three methods was found, being highest for the ELISA-MNT and the colorimetric MNT (r = 0.714 for geometric mean titers (GMT) and r = 0.695 for titer increases). Similar rates of fourfold titer increases were detected: 95.3% in the ELISA-MNT vs. 93.0% in colorimetric MNT and 95.3% in HI assay. The ELISA-based MNT demonstrated the highest titer range leading to the highest postvaccination GMT and the highest titer increase (>50-fold). The lowest GMTs were measured with the HI assay, while the colormetric MNT detected the highest GMT in prevaccination sera. Taken together, similar seroconversion rates were obtained with the three assays. The ELISA-MNT appeared to be the best method to compare absolute pre- and postvaccination GMTs. The colorimetric MNT, being less labour-intensive than the ELISA-MNT, seems to be a suitable tool in vaccination studies.