从皮肤的细胞外基质(NECM)中制取可注射胶原

常规制取注射性胶原的方法是用酶降解法，经反复酸提、盐析、离心、交联等步骤，进行纯化，该法将胶原降解，酸提取分子片断，用交联剂组成可注射胶原。本法是从ＮＥＣＭ开始制取，ＮＥＣＭ已为胶原框架，因此步骤简化很多，仅需解裂胶原网状结构，酶解末端蛋白以消除特异性，最后降解成３００ｎｍ左右胶原。本法不用交联剂和稳定剂。生物原材料来源广泛，有利临床推广应用。经半年动物实验证明，本法制取的可注射胶原无排斥反应和炎性反应，也无包裹现象，半年时仍残留有部分胶原     

从NECM制取的可注射性胶原的生物学评价

从ＮＥＣＭ制取可注射胶原是从大分子降解为胶原分子，因此不需要交联剂和稳定剂。溶液中仅有胶原分子、无交联剂。本实验是将可注射胶原液注入大鼠尾部皮下组织内，共注射３０只，分三批杀死（１．５个月，３．０个月和半年），取注射部位的皮下组织作组织切片，染色（ＨＥ）、光镜观察（包括偏光显微镜）。     

从NECM制取的可注射性胶原的生物学评价

从ＮＥＣＭ制取可注射胶原是从大分子降解为胶原分子，因此不需要交联剂和稳定剂。溶液中仅有胶原分子，无交联剂。本实验是将可注射胶原液（１２０ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌ注入大鼠尾部皮下组织内，共注射３０只，分三批杀死（１．５个月，３．０个月和半年），取注射部位的皮下组织作组织切片、染色（ＨＥ）、光镜观察（包括偏光显微镜）。发现三组在注射部位皮下组织内均有胶原分散存在。半年时胶原量少而且排列有序，未见包裹现象。除１．５个月少数动物皮下组织内有轻度炎性反应外，其余均未见到炎性反应。无排斥反应。局部组织无坏死现象。实验认为：本法所制可注射胶原液在半年内未发现特殊的生物学反应，胶原未完全吸收。     

组织工程学研究中偏光显微镜的应用

偏光显微镜是地质界用来观察晶体矿物的重要仪器，其理论基础是结晶光学，特点是即可观察结构，又可根据光学性质（折光率值不同）来判断成分，通过在研究ＮＥＣＭ和注射性胶原制作的过程中，用偏光显微镜和光镜观察同一部位的组织片，加以对比分析。因为胶原是生物体内的特殊“晶体”，故认为偏光显微镜应用在组织工程研究中，不仅开阔了观察领域，而且是重要的观测手段和方法。用偏光显微镜观察了猪骨ＥＣＭ胶原框架，以及注射性胶     

组织工程学研究中偏光显微镜的应用

偏光显微镜是地质界用来观察晶体矿物的重要仪器。其理论基础是结晶光学，特点是即可观察结构，又可根据光学性质（折光率值不同）来判断成分。通过在研究ＮＥＣＭ和注射性胶原制作的过程中，用偏光显微镜和光镜观察同一部位的组织片，加以对比分析。因为胶原是生物体内的特殊“晶体”，故认为偏光显微镜应用在组织工程研究中，不仅开阔了观察领域，而且是重要的观测手段和方法。用偏光显微镜观察了猪骨ＥＣＭ胶原框架，以及注射性胶原制作过程中胶原变化特点。认为本方法简单不需染色，并可特异的观察到胶原的分布和走行。     

肾小球硬化及老年肾细胞外基质的变化研究

本文通过一侧肾切加重复阿霉素注射制作加速肾小球硬化大鼠模型，应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对分离的肾小球内细胞外基质［胶原Ⅲ、胶原Ⅳ、层粘连蛋白（ＬＮ）和纤维连结蛋白（ＦＮ）］进行了硬化过程动态的定量研究，并将正常鼠（３月）和老年鼠（２６月）作了比较。结果显示，胶原Ⅲ在正常鼠肾小球内用ＥＬＪＳＡ方法未检测到；疾病所致的肾小球硬化过程胶原Ⅲ持续增加，弥漫性肾小球硬化期，较正常肾增加１１．８倍。胶原Ⅳ、ＬＮ和ＦＮ为正常肾小球内存在的细胞外基质（ＥＣＭ），在肾小球硬化的早、中期明显增加；弥漫性肾小球硬化期分别为正常肾的１２．３、１６．３和５．１倍。老年鼠与正常鼠相比，胶原Ⅲ无显著性变化（Ｐ＞０．０５），胶原Ⅳ、ＬＮ和ＦＮ分别为正常鼠的９．１、１０．０和２．８倍。本研究证实，ＥＣＭ的积聚是肾小球硬化过程中重要的病理特征，胶原Ⅲ（一种间质胶原）似与疾病所致的肾小球硬化发展有更密切和直接的关系。     

动物皮肤、肌腱、软骨和骨的ECM制作

细胞外基质（ＥＣＭ）研究是组织工程学的重要部分，即是重要基础研究内容，又是研究细胞外基质的替代物课题。针对目前临床上大量应用人工合成的ＥＣＭ存在的问题（炎性反应、排斥反应、相容性等），本研究试图用动物的组织（自然的）ＥＣＭ替代人工合成的ＥＣＭ。用组织工程学方法处理动物组织，获得的产物经ＨＥ、奥新蓝染色、光镜观察和不染色切片偏光显微镜观察，证实经处理后的动物组织ＥＣＭ仅剩下肌腱、皮肤、软骨和骨的胶原框架。     

免疫电镜技术研究肾小球硬化过程中细胞外基质的变化

为探讨肾小球硬化机制，应用胶体金免疫电镜技术对重复阿霉累注射加一侧肾切除所诱发的进行性肾小球硬化模型中细胞外基质（ＥＣＭ）成份－Ⅲ型、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白（ＬＮ）和纤维连结蛋白（ＦＮ）进行了定位、定量、定性的研究，并对肾小球基底膜（ＧＢＭ）和系膜区上述成份的正常分布及硬化过程中的变化作了比较。结果显示：正常鼠ＬＮ、ＦＮ在系膜区和ＧＢＭ中的含量有显著性差异（Ｐ＜０．０１），而Ⅳ型胶原则基本相同，这三种成份在ＧＢＭ分布有一定的规律。肾小球硬化过程中ＬＮ、ＦＮ、Ⅳ型胶原明显积聚，弥漫性肾小球硬化期与正常鼠相比，增加幅度为１．０～３．２倍（Ｐ＜０．０１）；肾小球硬化后期ＧＢＭ内不再显著增加，而系膜区内则持续增加．正常肾小球内不存在的Ⅲ型胶原在硬化早期无明显积聚，其后急聚增多至弥漫性肾小球硬化期。与对照组相比，ＧＢＭ与系膜区Ⅲ型胶原分别增加了１３．９及３２．３倍。我们用该技术证实了ＥＣＭ成份积聚是肾小球硬化的基本病理特征。Ⅲ型间质胶原从无至有，增加幅度最大，似提示与肾小球硬化有更直接、密切的关系。     

动物皮肤,肌腱,软骨和骨的ECM制作

细胞外基质研究是组织工程学的重要部分，即是重要基础研究内容，又是研究细胞外基质的替代物课题。针对目前临床上大量应用人工合成的ＥＣＭ存在的问题（炎性反应，排斥反应、相容性等），本研究试图用动物的组织（自然的）ＥＣＭ替代人工合成的ＥＣＭ。用组织工程学方法处理动物组织，获得的产物经ＨＥ、奥新蓝染色、光镜观察和不染色切片偏光显微镜观察，证实经处理后的动物ＥＣＭ仅剩下肌腱、皮肤、软骨和骨的胶原框架。     

注射胶原的临床应用

注射胶原的临床应用辽宁省人民医院整形外科（１１００１５）汪晓蕾，王志军，高景恒胶原是细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘＥＣＭ）中的主要结构蛋白［１］，广泛存在于人体及动物体内，目前主要来源是人和牛［２］，提取后的可注射胶原移植物（Ｉｎ...     

同种异体兔耳软骨ECM复制兔耳软骨的实验研究──软骨组织工程的实验研究预试验报告

我们这项研究旨在寻求一种能够避免组织移植和人工材料的缺点，又能获得自体组织移植相同的效果的移植材料。选用１０只纯种新西兰大耳白兔，异体兔耳软骨细胞外基质（ＥＣＭ）。兔耳软骨缺损分别以下列四组方式修复：①兔耳软骨ＥＣＭ＋兔耳软骨骨膜，②兔耳软骨ＥＣＭ，③兔耳软骨膜，④空白。术后６、１２、２４、４８周分别切取修复区域标本，做ＨＥ、奥新蓝两种染色。结果显示，ＥＣＭ植入体内后６周有轻度的炎症反应，术后１２周炎症异物反应消失，ＥＣＭ周边无包裹现象，术后１２周骨膜细胞长入ＥＣＭ，但细胞排列不规则。术后２４周、４８周ＥＣＭ仍然存在，无吸收现象，软骨膜与ＥＣＭ覆着处细胞长入ＥＣＭ，排列较１２周时规则，呈奥新蓝反应强阳性。结论：①ＮＥＣＭ可以作为组织充填物而长期存在并有较好的组织亲和性和相容性，因此有希望成为新一代的组织替代物。②ＮＥＣＭ可以诱导软骨膜细胞向其中生长而重建软骨，因此软骨ＮＥＣＭ有可能是复合生长因子。③软骨膜可以作为软骨ＮＥＣＭ复制软骨组织的细胞来源。④根据本实验观察一年的结果证明应用兔耳软骨ＥＣＭ，可以复制出新的软骨。     

血吸虫病鼠肝纤维化早期肝脏细胞外基质的改变

以免疫组化法（ＬＳＡＢ法），辅以电镜，观察感染血吸虫尾蚴６、８周小鼠肝脏细胞外基质（ＥＣＭ）中Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤粘连蛋白（ＦＮ）、层粘连蛋白（ＬＮ）的表达与分布。发现肝门管区、肝窦壁及中央静脉壁有ＥＣＭ异常聚积，电镜可见Ｄｉｓｓｅ腔有纤维束，可形成门管区纤维化、肝窦毛细血管化和中央静脉硬化。表明ＥＣＭ在血吸虫病性肝纤维化的形成与发展中起重要作用。     

动物NECM的稳定性评价

“动物ＮＥＣＭ的制作”文章发表近半年，已制作好的动物皮肤、肌腱、软骨和骨的ＮＥＣＭ已在保存液中保存了１３个月，为了观察ＮＥＣＭ和保存液的稳定性，本文做了如下几个方面的研究：（１）保存液：未放置ＮＥＣＭ新配制的和已放置１年的保存液；放置ＮＥＣＭ的保存液（１９９７年２月）。上述保存液均细菌培养，镜下观察和成分分析。（２）电镜和组织学光镜观察；１９９７年和２月制作的ＮＥＣＭ的光镜观察；放置１３个月后的Ｎ     

血液透析患者微量元素锌与免疫功能的相关性研究

血液透析患者微量元素锌与免疫功能的相关性研究于文慧，马腾骧，陈璋，杨希峰，汤美华ＳＴＵＤＹＯＮＣＯＲＲＥＬＡＴＩＯＮＢＥＴＷＥＥＮＴＲＡＣＥＥＬＥＭＥＮＴＺＩＮＣＡＮＤＩＭＭＵＮＥＦＵＮＣＴＩＯＮＩＮＣＨＲＯＮＩＣＨＥＭＯＤＩＡＬＹＳＩＳＰＡＴＩＥＮ...     

肾癌异型性的免疫组化研究

为了探讨肾癌的异型性，对４２例肾癌应用抗ＣＤ_（１５）、抗上皮细胞膜抗原（抗ＥＭＡ）、抗神经元特异性烯醇化酶（抗ＮＳＥ）三种单抗，采用免疫组化ＡＢＣ法联合检测进行分类。肾癌Ａ型（＋、－、－）表达９例，分化好、异型性小、预后最好；肾癌Ｃ型（－、＋、＋）表达１３例，分化差、异型性大、预后最差；其余为Ｂ型，介于Ａ型和Ｃ型之间。结果提示肾癌ＣＤ_（１５）、ＥＭＡ、ＮＳＥ的表达与否，可表明癌细胞是否保留近曲小管上皮细胞的抗原性，可作为判断肾癌异型性的一个指标，与患者预后有关。     

肾病患儿免疫细胞对肾小球上皮细胞合成基质的影响

目的为了明确免疫细胞对肾小球上皮细胞（ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌＧＥＣ）合成功能的直接作用。方法应用肾小球细胞体外培养，同位素掺入及放射免疫技术，以总胶原，层粘连蛋白，Ⅲ型前胶原及Ⅳ型胶原的合成为观察指标，动态研究了不同病理类型原发性肾病综合征（ＩＮＳ）患儿外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌＰＢＭＣ）对ＧＥＣ生物功能的影响。结果（１）肾病极期未经激素治疗组（未治组）ＰＢＭＣ上清明显促进了ＧＥＣ合成层粘连蛋白；（２）未治ＰＢＭＣ上清抑制了ＧＥＣ合成总胶原；（３）未治组ＰＢＭＣ上清促进了Ⅲ型前胶原的合成，而对Ⅳ型胶原的合成无明显影响；（４）肾病患儿ＰＢＭＣ的上述作用与是否足量激素治疗有关，而与尿蛋白能否阴转、肾组织病理类型、肾病临床类型等无直线相关关系。结论原发性肾病患儿循环免疫细胞可影响ＧＥＣ合成细胞外基质的功能。免疫细胞的这种活性可被激素治疗改变。     

动物NECM的稳定性评价

“动物ＮＥＣＭ的制作”文章发表近半年，已制作好的动物皮肤、肌腱、软骨和骨的ＮＥＣＭ已在保存液中保存了１３个月。为了观察ＮＥＣＭ和保存液的稳定性，本文做了如下几个方面的研究：①保存液：未放置ＮＥＣＭ新配制的和已放置１年的保存液；放置ＮＥＣＭ的保存液（１９９７年２月）。上述保存液均做细菌培养、镜下观察和成分分析。②电镜和组织学光镜观察：１９９７年２月制作的ＮＥＣＭ的光镜观察；放置１３个月后的ＮＥＣＭ电镜和光镜观察（包括偏光显微镜）；新鲜的正常相应组织的电镜和光镜观察。实验结果证明：猪皮肤和牛肌腱的ＮＥＣＭ已无细胞成分，基质为平行排列的胶原纤维丝或松散的胶原纤维网。而正常组织中细胞完整，胶原纤维呈致密交叉的网状编织结构。保存液清晰，无细菌生长，成分未变。     

蝮蛇抗栓酶治疗肾病综合征高粘血症近期疗效观察

蝮蛇抗栓酶治疗肾病综合征高粘血症近期疗效观察徐刚，钱桐荪，徐学康ＯＢＳＥＲＶＡＴＩＯＮＯＮＳＨＯＲＴＴＩＭＥＥＦＦＥＣＴＯＦＦＵＳＨＥＫＡＮＧＳＨＵＡＮＭＥＩＩＮＴＲＥＡＴＩＮＧＢＬＯＯＤＨＹＰＥＲＶＩＳＣＯＳＩＴＹＯＦＮＥＰＨＲＯＴＩＣＳＹＮＤＲＯ...     

臂丛根性损伤两种神经电图—肌电图检测方法的诊断符合率

目的比较两种神经电图－肌电图检测方法对臂丛根性损伤的诊断符合率。方法１９９７年前，对８２例臂丛根性损伤用上肢五大神经代表肌肉及肩胛带肌群肌电图（ＥＭＧ）、复合肌肉动作电位（ＣＭＡＰ）、运动神经传导速度（ＭＮＣＶ）、感觉神经诱发电位和传导速度（ＳＮＡＰ、ＳＮＣＶ）及体感诱发电位（ＳＥＰ）进行分析诊断。１９９７年起，对１１８例臂丛根性损伤加测颈椎旁肌ＥＭＧ、双侧膈肌的ＣＭＡＰ和斜方肌的ＥＭＧ、ＣＭＡＰ进行诊断。结果１９９７年至今，臂丛根性损伤神经电图－肌电图的诊断和术中发现相比，诊断完全符合率为８０％，完全及基本符合率为９５．４％，比１９９７年前分别提高１４．１％和１０．３％。结论臂丛神经根性损伤加测椎旁肌ＥＭＧ、膈神经、副神经肌电可提高臂丛根性损伤尤其是Ｃ５节后损伤的肌电诊断正确率。     

内皮素受体反义寡聚核苷酸抑制血管平滑肌细胞增殖

血管移植或动脉腔内成形术后 ,常因内膜增厚致血管再狭窄。内皮素 (ＥＴ)在内膜增生中有重要的促分裂效应。我们设计合成含 18ｂｐ的内皮素Ⅰ型受体(ＥＴＡ)和内皮素Ⅱ型受体 (ＥＴＢ)反义寡聚核苷酸 (ＯＤＮｓ) ,探讨ＯＤＮｓ对平滑肌细胞 (ＳＭＣ)上ＥＴ受体 (ＥＴＲ)蛋白表达和ＳＭＣ增殖的影响。1.材料与方法 :主要试剂有ＤＭＥＭ细胞培养液 ;胰蛋白酶 ;12 5Ｉ ＥＴ 1;抗α ａｃｔｉｎ单抗 ;小牛血清 ;ＥＴＡ ＯＤＮｓ和ＥＴＢ ＯＤＮｓ。实验方法 :(1)细胞培养 :无菌状态取 3只家兔主动脉段 ,按文献 [1]方法培养ＳＭＣ ,取 4～ 6代细胞…