实时荧光RT-PCR检测喉鳞状细胞癌组织端粒酶逆转录酶mRNA

目的　建立一种实时荧光逆转录多聚酶链反应 (RT PCR) ,检测喉鳞状细胞癌组织人端粒酶逆转录酶 (hTERT)mRNA表达水平 ,并与传统的RT PCR进行比较。方法　采用TriZOL提取总RNA并将mRNA逆转录成cDNA ,然后利用TaqMan技术定量检测喉鳞状细胞癌组织hTERTmRNA。结果　实时荧光RT PCR检测癌组织的阳性率为 97.0 6 % ,癌旁组织的阳性率为 38.2 4 % ,差异显著 (χ2 =2 4 .2 5 ,P <0 .0 0 5 ) ,与癌旁组织比较 ,喉鳞状细胞癌组织hTERTmRNA表达水平平均上升 17.88倍 ;传统的RT PCR检测喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织的阳性率分别为 73.5 3%和 11 77% ,均显著低于实时荧光RT PCR的阳性率 (P <0 .0 1)。结论　实时荧光RT PCR是检测喉癌组织hTERTmRNA水平的一种快速有效、灵敏度和特异性更高的方法 ,hTERTmRNA表达的上调可能是导致喉鳞状细胞癌发生的重要因素。     

ZWINT和CDK2在乳腺癌中的表达及与临床病理特征的关系和诊断价值

目的 探讨ZW10结合因子（ZWINT）和细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)的相关性及其在乳腺癌病理诊断中的价值。方法 通过GEPIA数据库分析ZWINT在乳腺癌和正常乳腺组织之间的表达差异,以及在乳腺癌中ZWINT和CDK2表达的相关性。通过Kaplan-Meier Plotter数据库预测ZWINT的表达与乳腺癌患者预后的关系。收集84例乳腺癌及其配对癌旁组织石蜡包埋病理标本和20例乳腺癌及其配对的癌旁组织新鲜标本,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组织化学检测乳腺癌和癌旁正常乳腺组织中ZWINT和CDK2的mRNA及蛋白的表达,分析ZWINT和CDK2与乳腺癌临床病理特征的关系,并采用关联分析分析ZWINT和CDK2的相关性;采用受试者操作特征（ROC）曲线评估ZWINT和CDK2在乳腺癌病理诊断中的价值。结果 数据库分析结果显示,ZWINT在乳腺癌组织中高表达,在乳腺癌中ZWINT和CDK2的表达呈正相关（rs=0.600,P <0.001）,ZWINT的表达与乳腺癌患者的预后相关（P均<0.05）。84例病例检测结果显示,在乳腺癌组织中ZWINT和CD...     

细胞外基质蛋白1基因及蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的在基因和蛋白水平探讨细胞外基质蛋白1（ECM1）在乳腺癌中的表达及意义,并比较两种检测方法的应用价值。方法应用实时荧光定量PCR基因检测方法和免疫组织化学法分别检测乳腺组织（正常组织和癌组织）中ECM1基因（mRNA）和蛋白的表达,并比较正常乳腺组织和乳腺癌组织之间的ECM1表达差异。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析评估应用价值。结果乳腺癌组织中ECM1在基因和蛋白水平表达均明显高于正常组织（P〈0.01）,两者均有较好的诊断价值[实时荧光定量PCR基因检测曲线下面积（AUC）为0.834±0.038,免疫组织化学检测AUC为0.773±0.048]。结论 ECM1在乳腺癌组织中过表达,具有潜在的作为乳腺癌肿瘤标记物的应用价值。     

乳腺癌组织中PSAmRNA的表达及临床意义

目的　探讨PSAmRNA在乳腺癌组织、癌旁乳腺组织和乳腺纤维瘤组织中的表达及其在乳腺癌发生发展中的意义。方法　以β actin作为内部参照半定量RT PCR方法检测 35例乳腺癌组织、12癌旁乳腺组织和 10例乳腺纤维瘤中PSAmRNA的表达。结果　在乳腺癌组织中PSAmRNA阳性表达率为 5 4 2 8% ,癌旁乳腺组织中为 83 3% ,乳腺纤维瘤中为 90 0 %。乳腺癌组织中PSAmRNA阳性表达率明显低于癌旁乳腺组织和乳腺纤维瘤者 ,差异有显著性 (P =0 0 4 1)。而且PSAmRNA在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁乳腺组织和乳腺纤维瘤组织 ,差异有显著性 (t=5 394、4 6 32 ,P均 =0 0 0 0 )。结论　乳腺癌组织中PSAmRNA的表达水平低于癌旁乳腺组织和乳腺纤维瘤 ,表达下调。     

miRNA-21在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义

目的探讨miR-21在乳腺浸润性导管癌的表达及其与乳腺癌临床病理特征之间的相关性。方法选取自2009年3月至2011年3月于我院乳腺外科行手术治疗的48例乳腺浸润性导管癌及其周围癌旁组织（距离癌灶2cm）标本、25例乳腺良性病变组织标本,应用实时定量RT-PCR检测miR-21在乳腺浸润性导管癌组织、癌旁组织及乳腺良性病变组织样本中的表达情况;应用免疫组化检测分析乳腺浸润性导管癌中ER、PR、Her-2表达状况,并分析检测结果之间的相关性。结果 （1）miR-21在乳腺浸润性导管癌中的表达明显高于乳腺良性病变组织和癌旁组织（P=0.000,0.007）,乳腺良性病变与癌旁组织比较未见明显差异;（2）miR-21的表达增高与TNM分期、淋巴结转移、Her-2表达正相关（P〈0.05）。结论 miR-21在乳腺浸润性导管癌中呈高表达,可作为乳腺癌诊断及判断预后的指标。     

乳腺组织中钠/碘转运体基因及蛋白的表达与乳腺疾病发生的关系

目的:研究正常和良/恶性乳腺肿瘤组织中钠-碘转运体(sodium-iodidesymporter,NIS)基因和蛋白的表达情况,探讨NIS与乳腺疾病之间的关系。方法:乳腺组织取自4例乳腺纤维瘤患者,3例乳腺小叶增生患者,8例乳腺癌患者,5例癌旁正常乳腺组织,运用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术检测NIS的基因与蛋白表达情况。结果:癌旁正常乳腺组织和良性乳腺肿瘤组织未检出NIS基因和蛋白的表达,而乳腺癌组织NIS基因均见NIS基因表达,且NIS蛋白主要表达在胞浆中。结论:正常乳腺组织中未检测到NIS基因,而乳腺癌组织NIS基因表达明显增加,而NIS蛋白翻译和翻译后水平的缺陷可能是乳腺癌组织摄碘率降低的原因之一。     

乳腺组织中钠／碘转运体基因及蛋白的表达与乳腺疾病发生的关系

目的：研究正常和良／恶性乳腺肿瘤组织中钠-碘转运体(sodium-iodide symporter，NIS)基因和蛋白的表达情况，探讨NIS与乳腺疾病之间的关系。方法：乳腺组织取自4例乳腺纤维瘤患者，3例乳腺小叶增生患者，8例乳腺癌患者，5例癌旁正常乳腺组织，运用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术检测NIS的基因与蛋白表达情况。结果：癌旁正常乳腺组织和良性乳腺肿瘤组织未检出NIS基因和蛋白的表达，而乳腺癌组织NIS基因均见NIS基因表达，且NIS蛋白主要表达在胞浆中。结论：正常乳腺组织中未检测到NIS基因．而乳腺癌组织NIS基因表达明显增加，而NIS蛋白翻译和翻译后水平的缺陷可能是乳腺癌组织摄碘率降低的原因之一.     

实时定量RT—PCR检测临床肝组织标本中CXCL16及其受体的表达

[目的]建立实时定量RT—PCR方法并检测不同病理状态的肝脏组织中CXCL16趋化因子及其受体CXCR6的表达变化。[方法]建立外参照标准和灵敏的荧光实时定量RT—PCR方法，检测人正常肝组织、癌旁肝组织及癌组织标本中的趋化因子CXCL16及其受体的表达变化，进一步测定和比较其它相关的趋化因子表达谱的表达情况。[结果]获得了灵敏特异的实时定量RT—PCR方法，CXCL16及其受体在癌旁肝损伤组织中显著上调表达，显著高于趋化因子表达谱中其它趋化因子的表达变化，提示它在淋巴细胞尤其是T细胞介导的肝脏损伤过程中可能发挥重要作用。[结论]简便可靠的实时定量RT—PCR适用于检测病理组织中特异基因的表达变化，趋化因子表达谱改变尤其是CXCL16及其爱体CXCR6的显著变化可能与肝脏疾病的病理发生发展密切相关。     

组织GLUD1表达与乳腺癌分子分型及临床病理学特征的关系

目的 探讨组织谷氨酸脱氢酶1(GLUD1)与乳腺癌分子分型、临床病理学特征的关系。方法 回顾性分析2014年3月—2017年10月期间在联勤保障部队第九八七医院接受乳腺癌手术的145例患者临床资料,采用实时荧光定量PCR法检测组织GLUD1mRNA表达,采用免疫组化法检测组织GLUD1蛋白表达;比较所有患者肿瘤组织中GLUD1mRNA、蛋白表达与乳腺癌分子分型及临床病理学特征之间的相关性。结果 基于美国公共癌症基因数据库（TCGA）中的数据,乳腺癌组织中GLUD1mRNA表达量显著低于正常乳腺组织中的表达量（P<0.05）;雌激素受体（ER）阳性组乳腺癌组织中GLUD1mRNA表达量显著高于ER阴性组组织中的表达量（P<0.05）;孕激素受体（PR）阳性组乳腺癌组织中GLUD1mRNA表达量显著高于PR阴性组组织中的表达量（P<0.05）。在本研究中,乳腺癌组织中GLUD1mRNA表达量显著低于癌旁乳腺组织（1.00±0.17vs.0.63±0.27,P<0.05）,同时肿瘤组织中GLUD1蛋白高表达率显著低于癌旁乳腺组织[28.28%(41/145)vs.53...     

miR-455-5p在乳腺癌组织中表达及对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察miR-455-5p在乳腺癌组织中表达变化及对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,探讨其在乳腺癌进展中的作用及可能的下游调控机制.方法 取30例乳腺癌患者手术切除的癌组织及癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-445-5p相对表达量.取对数生长期正常乳腺细胞MCF-10A及乳腺癌MCF-7...     

实时荧光定量RT-PCR检测食管癌Survivin mRNA的表达

SurvivinmRNA是近年来发现的一种新的凋亡抑制因子,属于凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisproteins,IAP)家族的新成员,具有抑制细胞凋亡和调节细胞增殖的双重作用[1]。Survivin选择性地表达于胚胎组织和人类大多数肿瘤组织,而在正常人终末分化组织中不表达[2,3]。对Survivin的     

乳腺癌组织KLK5 mRNA的转录及其与临床病理特征的关系

目的对正常乳腺组织和癌组织KLK5 mRNA进行定量,分析其表达与临床病理特征的关系,探讨其临床意义。方法用实时荧光定量PCR检测48例乳腺癌切除的组织中KLK5基因mRNA的表达量,分析其表达量与年龄、TNM分期、组织学类型、淋巴结转移、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)等临床病理特征的关系。结果79%(38/48)的乳腺癌组织KLK5 mRNA表达下降。KLK5 mRNA在正常乳腺组织的相对表达水平为0.338±0.324,在乳腺癌组织为0.088±0.128,明显低于正常组织(P<0.01)。KLK5 mRNA在有淋巴结转移的乳腺癌患者组织中的表达水平明显高于未转移组(P<0.01);在Ⅲ~Ⅳ期患者乳腺癌组织中高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.01);ER( )阳性乳腺癌组织明显低于ER(-)乳腺癌组织(P<0.01)。KLK5 mR-NA表达水平与患者年龄、组织分类以及PR状态无相关性(P>0.05)。结论乳腺癌组织KLK5 mRNA表达水平降低,并与TNM分期、ER状态及淋巴结转移与否相关。     

Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白在结直肠癌中的表达意义

目的探讨结直肠癌Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(FLIP)(S)mRNA的表达水平及其临床意义。方法建立检测FLIP(S)mRNA荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),用该方法检测结直肠癌组织及其癌旁正常组织FLIP(S)mRNA表达水平。结果 FLIP(S)mRNA在结直肠癌组织和癌旁正常组织都有表达,在结直肠癌组织表达水平为0.23±0.19,明显高于癌旁正常组织0.13±0.10(P<0.05)。FLIP(S)mRNA表达水平与结直肠癌组织学分级密切相关(P<0.05),肿瘤分化程度越低,FLIP(S)mRNA的表达水平越高。结论 FLIP(S)在结直肠癌组织中表达升高;在分化越低组织中其表达水平越高;为揭示结直肠肿瘤的发生、发展提供新的理论依据,并为结直肠癌的有效治疗提供新的思路。     

实时荧光定量PCR检测DHX32 mRNA方法的建立及初步应用

目的建立实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测DHX32 mRNA的方法并研究其在结直肠癌中的表达。方法用Taq-Man探针建立检测DHX32 mRNA的FQ-RT-PCR方法,评价其特异性、重复性及扩增效率,并用该法检测DHX32 mRNA在结直肠癌中的表达水平。结果批内变异系数1.1%～1.9%,批间变异系数1.2%～2.5%;扩增效率为0.85,相关系数为0.9990。癌组织DHX32 mRNA表达水平中位数为1.90×10-3(四分位间距5.47×10-3),明显高于癌旁组织0.09×10-3(四分位间距1.41×10-3),两者差异有统计学意义(P<0.05)。DHX32 mRNA表达水平与结直肠癌癌栓形成、淋巴结转移、组织学分级以及Dukes分期关系密切(P<0.05)。肿瘤的恶性程度越高,DHX32 mRNA表达水平越高。结论FQ-RT-PCR检测DHX32 mRNA的方法特异性好,重复性高,操作简单,无污染。DHX32 mRNA表达上调可能在结直肠癌发生、发展中起重要作用,其表达水平可作为结直肠癌恶性程度的评价指标。     

乳腺癌组织KLK7 mRNA的表达及其与临床病理特征的关系

目的建立人KLK7mRNA荧光定量检测方法,对正常乳腺组织和癌组织KLK7 mRNA进行定量,分析其表达与部分临床病理特征的关系,探讨其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR检测48例乳腺癌切除的组织中KLK7基因mRNA的表达量,并分析KLK7 mRNA的表达量与年龄、TNM分期、组织学类型、淋巴结转移、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）等临床病理特征的关系。结果KLK7 mRNA在乳腺正常组织相对表达水平为0．091±0．139,在乳腺癌组织中的相对表达水平为0．107±0．122,无统计学意义（P〉0．05）。但KLK7 mRNA在有淋巴结转移的患者乳腺癌组织中的表达水平高于未转移组（P〈0．05）;在Ⅲ-Ⅳ期患者乳腺癌组织中高于Ⅰ．Ⅱ期患者（P〈0．05）;ER（＋）阳性乳腺癌组织明显低于ER（-）乳腺癌组织（P〈0．05）。KLK7 mRNA表达水平与患者年龄、组织病理分类以及孕激素受体状态无相关性（P〉0．05）。结论乳腺癌组织KLK7 mRNA表达与TNM分期、ER状态及肿瘤转移情况有关。     

荧光定量RT-PCR检测Rac1 mRNA基因及其与胃癌转移的关系

目的 探讨肿瘤转移相关基因Rac1水平与胃癌转移的相关性,并评价分析Rac1 mRNA基因在胃癌转移和区分胃良、恶性病变中的价值.方法 用荧光定量RT-PCR TaqMan探针技术,选择Rac1基因目的 片段,与pET-20b(+)载体连接构建重组质粒,建立Rac1 mRNA荧光定量RTPCR标准曲线,并用于检测52份胃癌、癌旁组织及12份胃良性病变组织标本中Rac1 mRNA的含量,分析评价其与胃癌转移的关系.结果 胃癌组织中Rac1 mRNA表达阳性率和含量为100.0%,7.41×103 (3.50×105 ～4.36×106)拷贝/μl,癌旁组织为46.2%,0(0～1.73×104)拷贝/μl,良性病变组织为33.3%,0(0～3.55×103)拷贝/μl,3组间阳性率和Rac1 mRNA含量水平差异均有统计学意义(x2=43.16,x2k-w=64.19,P均＜ 0.01).当ROC曲线确定荧光定量RT-PCR检测Rac1含量的最佳临界值为1.73×104 拷贝/μl时,诊断胃癌组织标本的敏感度为88.5%,特异度为100.0%;当最佳临界值为7.49×103 拷贝/μl时,诊断胃癌是否发生淋巴结转移的敏感度为57.9%,特异度为78.6%.结论 荧光定量RT-PCR检测Rac1 mRNA对鉴别胃良、恶性病变及评价胃癌转移均有参考价值.     

人类激肽释放酶基因6在卵巢恶性肿瘤中的表达及其机制研究

目的 研究人组织激肽释放酶基因6（KLK6）mRNA和蛋白在卵巢肿瘤组织中的表达水平,探讨其在卵巢恶性肿瘤中的作用机制.方法 应用RT-PCR和免疫组化SP法分别检测在正常的卵巢组织、卵巢的良性肿瘤、卵巢的交界性肿瘤及卵巢的恶性肿瘤组织中KLK6的mRNA表达及蛋白的表达,探讨该基因的表达与卵巢恶性肿瘤患者的临床病理特征关系.结果 本研究显示,在卵巢癌组织中,KLK6 mRNA的表达水平与正常卵巢组织相比,显著增高;卵巢癌组织中KLK6蛋白的阳性表达率为69.4%,与正常卵巢组织（13.3%）、良性卵巢肿瘤（16.6%）和交界性卵巢肿瘤（44.0%）相比,差异有统计学意义（χ2=25.843,P＜0.001）.结论 KLK6可能参与了卵巢癌的侵袭和转移.     

血管内皮细胞生长因子及受体在乳腺癌组织的表达研究

目的 探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体在乳腺癌组织中表达的意义.方法 使用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及计算机条带分析半定量方法检测了VEGF异构体及受体mRNA在乳腺癌组织及癌周组织的表达水平.对VEGF121 mRNA及KDRmRNA表达水平和肿瘤大小,淋巴结转移及绝经前后的关系进行统计学分析.结果 在乳腺癌组织及癌周组织均检测到VEGF121和KDR,flt-1的mRNA表达,VEGF121和KDR在癌组织表达水平明显高于癌周组织,在癌组织及癌周组织,VEGF121 mRNA表达和KDR121 mRNA表达之间有明显直线正相关及回归依存关系,VEGF121,KDR的mRNA表达在肿瘤≥2cm;淋巴结阳性及绝经前组病人明显高于淋巴结阴性、肿瘤＜2cm和绝经后组病人.结论 VEGF、KDR在乳腺癌组织的表达水平明显高于癌周组织,VEGF积极参与乳腺癌的新生血管增殖过程.