细胞色素P450 2E1活性的测定方法

细胞色素P450(cytochmme P450)是主要的肝细胞Ⅰ相代谢酶之一,其亚家族细胞色素：P450 2E1(CYP2E1)在外来化学物的代谢活化中起重要作用,CYP2E1活性的高低与毒物对机体的最终毒性大小直接相关。多年来,体内CYP2E1活性的测定一直是国内外学者颇感棘手的问题。本文从体外、体内以及淋巴细胞中CYP2E1活性的测定等几方面对该问题进行综述。     

微囊藻毒素-LR对活性氧产生及细胞色素P450各亚型表达的影响

[目的]探讨低剂量微囊藻毒素-LR（MCLR）诱导细胞内活性氧（ROS）产生的潜在来源。[方法]采用转染有机阴离子转运多肽OATP1B3的人胚肾细胞株HEK293-OATPIB3,设3个浓度的MCLR处理组（10、20、50nmol／L）和未处理对照组（0．1％二甲基亚砜）。染毒4、24h后,测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,用荧光探针法检测细胞内ROS水平,采用实时荧光定量聚合酯链反应检测细胞色素P4501A1（CYP1A1）、1A2、2E1 mRNA的表达水平。[结果]低浓度（10-50nmol／L）的MCLR作用HEK293-OATP1B3细胞4h未产生明显细胞毒性;24h后,LDH漏出率随着处理浓度的增加而增加。50nmol／LMCLR处理细胞4h后引起ROS水平明显升高（P〈0．01）。同时,MCLR还上调了CYP2E1的mRNA表达水平（P〈0．01）;但未影响CYP1A1 mRNA的表达;对照组和MCLR处理组的CYP1A2 mRNA表达水平均非常低。[结论]低剂量MCLR可诱导细胞内ROS产生和上调CYP2E1 mRNA表达,提示CYP2E1可能是MCLR诱导ROS产生的一个潜在来源。     

细胞色素P4502E1（CYP2E1）与胃癌遗传易感性

为探讨细胞色素P4502E1（CYP2E1）基因变化与胃癌易感的关系。采用病例-对照分子流行病学研究方法和多聚酶链反应技术-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP），对142例胃癌患者和167例正常对照者CYP2E1基因RsaI酶切位点进行多态性分析。结果显示胃癌患者和正常对照人群在基因型和等位基因频率上均无显著的统计学差异；我国人群CYP2E1RsaI酶切位点多态性的分布频率与日本人群相近，与欧美人群差异较大。     

细胞色素P450 2E1基因多态性与胃癌易患性

目的研究与前致癌物亚硝胺类代谢活化有关的细胞色素P450 2E1(cytochromeP450 2E1,CYP2E1)基因多态性与胃癌易患性的关系,探讨环境因素与遗传因素在胃癌发病中的作用.方法采用病例-对照分子流行病学方法,调查原发性胃癌患者和对照各48例,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)检测被调查者的CYP2E1基因RsaⅠ位点的多态性,条件Logistic回归模型进行资料分析.结果 CYP2E1 A、B和C 3种基因型在病例组中的构成比分别为68.8%,29.2%和2.1%,对照组分别为45.83%,47.92%和6.25%,2组差异无统计学意义(x2=5.389,P=0.068).而病例和对照组CYP2E1基因Rsa Ⅰ位点等位基因c1和c2频率分别为83.3%,16.7%和69.8%,30.2%,差异有统计学意义(x2=5.241,P＜0.05).环境因素中食盐、香肠和熟食的过多摄入以及肿瘤家庭史和c1等位基因作为胃癌的危险因素进入回归模型,而经常喝茶作为保护性因子可能降低胃癌的发生危险.结论 CYP2E1基因Rsa Ⅰ位点等位基因c1与胃癌易感性相关联;某些饮食因素与胃癌的发生有关.     

壬基酚对F1子代大鼠脑组织P450表达的影响

目的利用芯片技术探讨壬基酚(nonylphenol，NP)对F1子代大鼠脑组织细胞色素P450基因表达的影响。方法NP染毒F0亲代母鼠，分别提取NP组和对照组F1子代2日龄雄性大鼠的脑组织mRNA，分别用cy5和cy3逆转录标记，与Mouse40S基因表达谱芯片杂交，并对cy3、cy5荧光信号做扫描分析。结果芯片结果显示，实验组已知功能差异表达基因有16条，其中细胞色素P450基因家族的有3条，2条上调，1条下调。结论NP可影响大鼠脑组织细胞色素P450基因的转录水平。     

细胞色素P450-2E1基因型对2-乙氧基乙醇代谢影响的研究

目的 探讨细胞色素P450－2E1（CYP2E1）不同基因型代谢2－乙氧基乙醇（EE）能力是否存在差异。方法 采用个体采样,毛细柱气相色谱分析技术及聚合酶链反应（PCR）检测方法,比较不同基因型个体累计接触EE剂量与2－乙在线性关系,B、C基因型回归系数大于A基因型。结论 CYP2E1B、C基因型代谢EE能力强于A基因型。     

二氧化硫对大鼠肝和肺细胞色素P4502B1和2E1 mRNA表达及活性的影响

目的探讨二氧化硫(SO2)对肝、肺微粒体细胞色素P450两种亚型CYP2B1和CYP2E1mRNA表达及活性的影响。方法采用SO2动式染毒技术使雄性Wistar大鼠染毒7天,每天6h,SO2的染毒剂量分别为14、28和56mg/m3。采用分光光度法测定大鼠肝、肺微粒体CYP2E1活性,采用荧光分光光度法测定肝、肺微粒体CYP2B1活性,采用RT-PCR方法测定各组大鼠肝、肺组织中CYP2B1和CYP2E1mRNA表达水平。结果在肝中,较高剂量的SO2(28和56mg/m3)可使CYP2B1活性及mRNA水平降低,肝微粒体CYP2E1活性及mRNA在各剂量组均未发生显著改变。肺组织中CYP2B1活性在56mg/m3剂量组显著降低,但其mRNA水平在28及56mg/m3剂量组均显著降低;肺微粒体CYP2E1活性及mRNA水平在28及56mg/m3SO2处理组均降低显著。结论SO2可降低大鼠肝中CYP2B1和2E1及肺中CYP2B1和CYP2E1的活性及mRNA水平。     

中国居民细胞色素P450 2E1基因多态性与胃癌易感性关系的Meta分析

目的探讨中国居民细胞色素P450 2E1(CYP2E1)基因多态性与胃癌易感性的关系。方法检索中国生物医学文献数据库和PubMed，并收集尚未发表的文章及毕业论文，获得有关中国居民CYP2E1基因多态性与胃癌易感性关系的文献进行Meta分析，以病例组和对照组CYP2E1基因型分布的比值比(OR)为效应指标。对文献进行评价筛选，异质性检验，然后应用Meta分析软件Rev Man4．2对各研究原始数据进行统计处理，计算合并OR值及95％可信区间。结果最终纳入系统评价进行Meta分析的共有6个病例．对照研究，其中胃癌患者881例，对照942例。Meta分析结果合并OR=1．21，95％可信区间为0．70-2．12，说明中国居民CYP2E1基因型频率分布与胃癌的关联无统计学意义。结论对目前相关研究结果的Meta分析显示尚无足够的证据证明中国居民CYP2E1基因多态性与胃癌易感性之间的关系，有必要开展更多设计实施良好的研究，将研究结果纳入该系统评价Meta分析以解决这一问题。     

中国居民细胞色素P450 2E1基因多态性与食管癌易感性关系的Meta分析

[目的]探讨中国居民CYP2E1基因多态性与食管癌易感性的关系。[方法]检索中国生物医学文献数据库（CBM）和PubMed,并收集相关文献进行Meta分析。以病例组和对照组CYP2E1基因型分布的比值比（OR）为效应指标,对文献进行评价筛选、异质性检验,应用Meta分析软件RevMan5对各研究原始数据进行统计。[结果]最终纳入系统评价进行Meta分析的共有8个病例对照研究,其中食管癌患者879例,对照1155例。Meta分析结果合并OR=2．07,95％CI=1．18～3．64。[结论]对目前相关研究结果的Meta分析显示中国居民CYP2E1基因多态性与食管癌易感性之间有关联,CYP2E1基因纯合子野生型C1／C1是食管癌的易感性基因。     

四氯化碳对乙醇对3种细胞色素P450酶基因表达的影响

目的 探讨四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4)和乙醇（ethanol,EtOH)对人体淋巴细胞瘤细胞株（MCL－5）中3种细胞色素P450酶基因（CYP1A1，CYP2E1，CYP3A4）表达的影响，并研究剂量与效应的关系。方法 用常规的细胞培养方法，用DMSO，0.05,0,10,0.15,0.20mmol/L,CCl4和50，100，150，200mmol/L EtOh处理细胞48h，利用提纯RNA和合成cDNA的药盒，合成cDNA，然后通过逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）表达3种CYP450酶基因,以β－Actin作为内对照，分析不同处理剂量时基因表达强度。结果 3种CYP450 MCL－5细胞株中都有基本表达，CYP2E1和CYP3A4表达在用0．05，0．10，0．15，0．20mmol/l CCl4和50，100，150，200mmol/L EtOH处理细胞48h后有被上调的趋势。结论 本研究结果提示，CCl4和EtOH对CYP450酶系统中的CYP2E1，CYP3A4基因有明显的诱导作用；这些基因被诱导后，可能会导致相对应酶活性的增加，同时加强对CCl,EtOH的代谢，使他们的毒性代谢产物增加。     

细胞色素P450 2E1基因PstⅠ多态、腌制品与大肠癌关系的病例对照研究

目的：研究代谢酶细胞色素P450 2E1基因(CYP2E1)Pst Ⅰ多态性和腌制品与大肠癌易感性的关系。方法：采用人群基础的病例对照分子流行病学研究和PCR—RFLP技术,对126例大肠癌和343名健康对照Pst Ⅰ识别的CYP2E1基因型进行检测。结果：健康对照组CYP2E1基因野生型(C1／C1)为61．8％,杂合子(C1／C2)为35．8％,突变纯合子(C2／C2)为2．4％。调整年龄性别后,结肠癌病例中突变基因型频率54．9％(52．9％ C1／C2和2．0％ C2／C2)高于对照(OR 1．979,95％ CI 1．090—3．595),但直肠癌病例与对照比较,无统计学意义。分层分析发现,突变基因型、每周1或2次和隔天或每天吃腌制品单因素作用的大肠癌OR值分别1．935、2．122和2．315,而每周1或2次 突变型、隔天或每天吃 突变型联合作用后大肠癌OR值分别为2．272和3．127。分别分析结、直肠癌,腌制品对直肠癌的危险性在食用频率为每周1或2次时,差异有统计学意义,野生型和突变型的OR值分别为2．646和2．297,两者差异无统计学意义;而结肠癌危险性只有在Pst Ⅰ突变者隔天或每天吃腌制品时才剧增,OR值4．262(1．395～13．017),为野生型的2．69倍,差异有统计学意义。结论：CYP2E1 PstⅠG→C点突变是大肠癌的遗传易感性因素,与腌制品有协同作用,该作用在结肠癌尤为明显。     

细胞色素P450同工酶2C9和3A4基因多态性及其功能意义

细胞色素P450同工酶2C9(CVP2C9)和P450同工酶3A4(CYP3A4)是人类肝脏中重要的药物代谢酶,催化超过60％的临床常用药物。CYP2C9和CYP3A4基因具有高度多态性,到目前为止发现并命名的有CYP2C9*1 ～ *30和CYP3A4*1～*19。此文从基因结构、突变等位基因、与药物代谢的关系、与H...     

玉米赤霉烯酮调节细胞色素P450 3A4转录表达的研究

目的研究真菌性雌激素玉米赤霉烯酮(ZEA)是否能通过活化人甾体激素和外源化学物受体(SXR)诱导细胞色素P4503A4(CYP3A4)的转录表达。方法在人肝肿瘤细胞株细胞中,用瞬时共转染报告基因试验即共转染含人SXR序列质粒和含CYP3A4外源化学物反应元件的报告基因质粒来检测ZEA对SXR介导的CYP3A4的转录调节作用。结果ZEA能通过活化SXR诱导CYP3A4的转录表达,并具有剂量效应关系和时间效应关系。在剂量效应关系研究中,ZEA浓度分别为001、010、100和1000μmol/L时,其诱导倍数分别为01%二甲基亚砜处理细胞的(150±021)倍、(166±027)倍、(304±082)倍和(396±116)倍。在时间效应关系研究中,100和1000μmol/L的ZEA处理细胞48h后,诱导能力分别为01%二甲基亚砜处理细胞的(369±134)倍和(518±150)倍。在浓度为10μmol/L,处理时间为48h时诱导能力最大,为用01%二甲基亚砜处理细胞的(518±150)倍。结论ZEA能通过活化SXR诱导CYP3A4的转录表达。ZEA对CYP3A4的诱导可能影响其他CYP3A4底物,尤其是药物在体内的代谢。     

漏芦对细胞色素P450酶活性及mRNA表达影响

目的研究漏芦对CYP2E1酶活性及其mRNA表达水平的影响。方法以大鼠原代肝细胞为研究对象,实验组分别加入不同浓度漏芦（15.6,31.2,62.4 mg/ml）处理48 h,用苯胺羟化酶（aniline hydroxylase,ANH）活性反映CYP2E1酶活性,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测CYP2E1mRNA表达水平。结果漏芦作用后,CYP2E1酶活性及相应mRNA的表达呈浓度依赖性抑制。漏芦在15.6,31.2,62.4 mg/ml浓度下对CYP2E1酶活性的抑制率分别为22.5%,55.8%,64.7%;对CYP2E1mRNA表达水平的抑制率分别为36.6%,51.7%,61.4%。结论漏芦浓度依赖性抑制CYP2E1酶活性,在转录水平下调大鼠肝细胞CY2E1的表达。     

细胞色素P4501A1基因多态性在胃癌发生中的交互作用

目的：探讨CYP1A1突变基因型与吸烟、饮酒因素对胃癌发生的交互作用及作用方式。方法：以社区为基础的病例对照研究,病例为胃镜及病理确诊的肠型胃癌,共112例,以同期上消化道肿瘤病例的“健康”同胞、配偶和配偶的同胞为对照组,共676例,用多聚酶链反应和限制性片段长度多态性法检测其基因型,多基因logistic回归模型分析与胃癌的相关性。结果：在调整混杂因素的影响后,未见CYP1A1突变基因型与胃癌危险性之间有统计学关联;但CYP1A1基因型与吸烟对胃癌发生有明显交互作用,显增加胃癌的危险性,交互作用系数γ为2．82,OReg值为5．00,为2型交互作用中的超相乘模型,进一步分析剂量反应关系显示;突变基因型与吸烟量,开始吸烟年龄均呈“低暴露－基因效应”方式。即随着暴露剂量的增加,交互作用的强度逐渐降低。CYP1A1突变基因型与饮酒史的交互作用有减弱效应,OReg值为2．22,γ为0．46,但呈“高暴露－基因效应”。结论CYP1A1突变基因型与吸烟、饮酒对胃癌均有交互作用,但交互作用的方式不同。这些结果提示CYP1A1突变基因型的个体应完成戒烟、限制大量饮酒、以预防胃癌的发生。     

CYP4502E1基因多态型对青海藏族男性饮酒行为的影响

目的分析细胞色素P450 2E1(CYP450 2E1)不同基因型及等位基因频率,探讨其与藏族男性饮酒行为之间的关系。方法采用自评式问卷,对325名藏族男性进行调查分析,其中饮酒者193人,不饮酒者132人,另选取266名汉族男性作为对照,采用聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)对基因的多态型进行分析,探讨其与饮酒行为之间的相关性。结果不同职业﹑文化程度﹑经济收入﹑婚姻情况﹑吸烟情况人群组中的饮酒率差异具有显著性(P<0.05)。藏汉族男性基因型及等位基因频率分布差异无显著性(P>0.05)。藏族男性饮酒组和不饮酒组比较,CYP450 2E1三种基因型c1/c1、c1/c2和c2/c2的分布差异具有显著性(χ2=10.101,P<0.05),c1/c2基因型频率在饮酒组比在不饮酒组中的高;c1和c2两个等位基因分布差异也具有显著性(χ2=9.223,P<0.05),c2等位基因频率在饮酒组也比在不饮酒组中的高,与安全饮酒相比,危险饮酒组中c2等位基因频率更高。c2等位基因与是否饮酒以及饮酒量的关联程度分别为0.17和0.20。多因素分析显示:影响饮酒行为的因素依次为CYP450 2E1基因、吸烟和经济收入。结论CYP450 2E1基因是影响藏族男性饮酒行为的主要因素。     

ALDH2和CYP2E1基因多态性及饮酒习惯与肝细胞癌易感性的关系

目的研究乙醛脱氢酶2(ALDH2)和细胞色素P4502E1(CYP2E1)基因多态性与饮酒因素交互作用在广西原发性肝细胞癌发生中的作用。方法对广西壮族自治区300例肝细胞癌和292例正常对照进行流行病学调查研究,并用PCR-RFLP方法检测ALDH2和CYP2E1基因型。结果病例和对照组中ALDH2和CYP2E1变异基因型携带者分别占50.3%、48.0%和32.3%、32.9%(P0.05)。饮酒频度每周≥3次(高频饮酒)且携带变异基因ALDH2和CYP2E1者发生肝癌的危险度分别是饮酒频度每周3次(低频饮酒)且携带野生基因型者的3.334倍(95%CI=1.746～6.406)和1.803倍(95%CI=0.974～3.336),同时携带两变异基因型者患肝癌风险为1.200倍(95%CI=0.730～1.972),且饮酒增加两变异基因型携带者的肝癌发病风险(OR=1.816,95%CI=0.985～3.348)。结论单一ALDH2或CYP2E1基因型与肝细胞癌易感性无关;但高频饮酒且携带变异基因ALDH2或CYP2E1者患肝癌风险增加,且两变异基因型单倍体增加肝癌发病风险。提示乙醇在增加肝癌发病风险的过程中存在基因-环境和基因-基因相互作用。