p53基因与肝癌的研究进展

p53基因在细胞的分化调控中，主要通过细胞分裂制动基因的激活以及程序性细胞死亡系统的启动，控制细胞增殖。而p53基因的突变，会阻碍其正常的生物学功能的发挥，使细胞生长繁殖失控，引起细胞的转化及癌变。原发性肝癌的发生与p53基因的突变密切相关，并以249位密码子的特异性突变和其他位点的散发性突变两种形式存在。249位密码子的特异性突变与黄曲霉素B1的作用以及乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒的诱发等多种因素有关。中国大陆、台湾、香港等地的原发性肝癌，以5～8外显子的166、172、214、247、249、255、273、279和286等位点的突变较为常见。     

胰腺癌患者血浆K-ras和p53基因突变检测的研究

目的　检测胰腺癌患者血浆K ras和p5 3基因突变情况 ,初步分析其诊断价值。方法　本研究包括胰腺癌组 2 4例、其他疾病组 14例和健康对照组 2 1例。提取血浆DNA ,采用突变富集PCR RFLP法检测K ras基因第 12密码子突变 ,PCR SSCP 银染法检测p5 3基因第 5～ 8外显子突变。结果　 2 4例胰腺癌患者中 17例血浆检测到K ras突变 ,3例检测到p5 3突变 ;2 1例健康对照者血浆中均未检测到K ras和p5 3突变 ;在 38例疑为胰腺肿瘤患者中 ,血浆K ras突变诊断胰腺癌的敏感性为 70 % ,特异性为 86 % ,阳性预测值为 90 % ,阴性预测值为 6 3%。结论　本研究提示通过胰腺癌患者血浆标本检测K ras和p5 3基因突变是可行的。血浆K ras突变分析有助于胰腺癌的诊断。     

p53基因突变检测方法的演进和趋势

p53基因是肿瘤蛋白P53 (tumor protein p53)的编码基因,在维持基因组稳定、调控细胞周期和凋亡及抑制肿瘤血管生成中发挥着重要的作用.p53基因突变信息在肿瘤分子筛查诊断、预防、药物疗法选择等方面具有重要的参考价值.本文分析了p53基因与P53蛋白突变检测的重要性、突变检测方法的发展概况,如传统的DNA测序、限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)、单链构像多态性(single-stranded conformation polymorphism,SSCP)等8类实验室常规基因突变检测策略及酵母中分离的等位基因功能分析技术(separation of gene function analysis in yeast,FASAY),近年来新兴的技术包括生物传感器、芯片、高分辨率溶解曲线(high resolution melting,HRM),及下一代测序技术,以期较为全面地展示现今p53及P53突变检测的整体情况,为p53或其他基因突变研究者选择突变检测方法提供参考.     

血浆p53基因突变对非小细胞肺癌发生和发展及预后的意义

目的：研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆p53基因突变对。NSCLC发生、发展和预后估计的意义。方法：应用聚合酶链反应(PCR)扩增p53基因外显子5—8，并用单链构象多态性分析(SSCP)产物突变情况，再与各生物参数进行相关研究。结果：60例NSCLC患者中28例(47％，28／60)p53基因突变。结论：血浆循环核酸p53基因突变在NSCLC中有较高的检出率并与肿瘤的临床分期和远处转移有关，血浆p53基因突变对NSCLC的治疗反应的判断以及远处转移的预测具有重要价值。     

原发性肝癌患者血浆循环游离线粒体DNA定量分析及其诊断意义

目的分析血浆循环游离线粒体DNA(CCF mt DNA)水平与原发性肝癌(HCC)的相关性,探讨其作为HCC标志物的可行性。方法收集HCC患者及体检健康者的血浆标本各60例,提取全基因组DNA;实时荧光定量PCR分析线粒体CoⅡ一段保守且与核基因组无同源的序列;构建含该靶序列的已知浓度的质粒作为标准品,系列稀释后定量检测CCF mt DNA的含量;独立样本t检验分析HCC患者与体检健康者CCF mt DNA水平的差异;ROC曲线分析CCF mt DNA诊断HCC的效能。结果HCC患者CCF mt DNA水平[(0.591±0.014)×106拷贝/m L]显著高于健康对照组[(0.364±0.012)×106拷贝/m L],差异有统计学意义(t=12.27,P0.05);ROC曲线结果显示,以0.470×106拷贝/m L为cut off值,CCF mt DNA诊断HCC的敏感性为83.3%,特异性为88.3%;ROC曲线下面积(AUCROC)=0.916,95%CI:0.864~0.968,P0.05。结论 HCC患者CCF mt DNA水平升高,且诊断HCC的敏感性、特异性较高,可能作为肿瘤标志物用于HCC诊断。     

PCR扩增肠癌组织p53基因失败的原因分析与解决

目的：分析与解决ＰＣＲ扩增肠癌组织ｐ５３基因时失败的问题,为如何解决ＰＣＲ技术在科研应用中的问题提供一个实例,方法：经初步分析,将失败原因确定为ＤＮＡ模板有问题,采用下列方法处理模板再进行ＰＣＲ反应：用７０％乙醇再清洗模板,用新标本重新提取模板,用ＰＣＲ反应成功与失败的模板配成混合模板。比较ＰＣＲ比较与失败所用模板的差异,寻找与证实失败的原因。结果：最终发现溶解ＤＮＡ模板的ＴＥ缓冲液浓度不高,使Ｐ     

PCR扩增肠癌组织p53基因失败的原因分析与解决

分析与解决PCR扩增肠癌组织p53基因时失败的问题,为如何解决PCR技术在科研应用中的问题提供一个实例.方法 经初步分析,将失败原因确定为DNA模板有问题、采用下列方法处理模板再进行PCR反应：用70%乙醇再清洗模板、用新标本重新提取模板、用PCR反应成功与失败的模板配成混合模板.比较PCR成功与失败所用模板的差异,寻找与证实失败的原因.结果 最终发现溶解DNA模板的TE缓冲液浓度过高,使PCR扩增失败,排除之后获得成功.结论 当PCR扩增失败时,不妨从最简单的反应体系的离子环境先找原因.     

p53基因突变与肺癌放射治疗敏感性的研究进展

p5 3基因突变是肺癌中最常见的遗传改变 ,与肺癌发生、发展关系密切。现就抑癌基因p5 3与肺癌的预后、淋巴结转移、放疗敏感性及肺癌的基因治疗研究进展作一综述     

p53基因第8外显子实时荧光PCR方法的建立

目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测p53基因第8外显子的方法。方法用酚-氯仿抽提法提取云南省中医院的常规体检患者的DNA,应用SYBR GreenⅠ作荧光染料,通过检测PCR产物中荧光讯号的强度来定量p53基因,重复测定该标本18次,以此建立检测p53基因的实时荧光定量PCR方法。结果融解曲线分析表明该方法特异可靠。结论该研究建立了p53基因实时荧光定量PCR检测方法,该方法简便、特异、重复性好、可信度高,为p53基因第8外显子的定量研究提供了理想的检测方法。     

白血病p53基因突变的检测

野生型p53(wt-p53)基因是一种肿瘤抑制基因,定位于人类染色体17p13.1,全长16-20kb,共11个外显子,编码393个氨基酸。wt-p53基因有抑制或阻止细胞转化的功能,并能抑制肿瘤的发生。p53基因的缺失或突变已被证实是许多肿瘤发生的原因之一。国外文献报道也在白血病中发现p53基因的缺失和突变。本研究采用Southern印迹和PCR-     

可疑肺癌患者纤支镜后痰液标本的p53基因突变检测

目的：探讨纤支镜后痰液标本的p53基因突变检测用于肺癌早期诊断的可行性。方法：采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）银染技术,对29例怀疑为肺癌患者的痰液标本行p53基因5－8号外显子突就检测。结果：8例患者有p53突变,突变率为27．6％,其中以6号外显子突变率最高（17．2％）。p53突变率明显高于相应细胞学阳性率（P＜0．05）。结论：纤支镜后痰标本p53突变检测对肺癌的早期诊断具有一定价值,可作为肺癌早期诊断的辅助方法之一。     

慢性粒细胞白血病p53基因的点突变

应用双脱氧指纹图(dideoxy fingerprinting,DDF)技术对不同临床分期的慢性粒细胞白血病(CML)24例骨髓细胞的p53基因的5,6,7,8外显子进行了点突变筛查分析,并用DNA测序技术对筛查到的突变进行确证。结果发现:慢性期20例中未检测到p53基因点突变;加速期3例中有1例在p53基因的第5外显子发生了错义突变,而该病例在慢性期并未发现相同位点的突变;急变期1例p53基因的第6外显子发生了错义突变。结论提示,p53基因的突变可能与慢性粒细胞白血病从慢性期发展到加速期和急变期的临床进程有关。     

p53基因突变在肺癌早期诊断中的应用

目的 探讨p53基因突变在肺癌早期诊断中的应用价值。方法 应用聚合酶链式反应——单链构象多肽性分析(PCR—SSCP)方法，对107例疑诊肺癌患者的纤支镜标本进行p53基因分析，分析结果与病理对照或随访以证实阳性的可信度。结果 43例病理诊断肺癌的患者中，25例p53基因发生突变，占58．2％。在64例疑诊肺癌但病理学阴性的患者中发生p53基因突变18例，无p53基因突变的46例，经过28个月的随访，p53基因突变组有8例诊断为肺癌，占44．4％，而无p53基因突变组仅有2例诊断为肺癌，占4．7％，两组之间差异显著。结论 通过对患者纤支镜标本p53基因分析，能对高危人群及个体危险度进行较准确的估计，有助于肺癌的早期诊断。     

结直肠腺癌BRAF基因突变的检测及其临床意义

目的:探讨结直肠腺癌BRAF基因突变的检测及临床意义。方法:采用PCR直接测序法检测结直肠腺癌患者石蜡包埋肿瘤组织中BRAF基因突变情况,分析BRAF基因突变与患者性别、年龄、组织学分级及临床分期的相关性。结果:17例BRAF基因突变结直肠腺癌病例中,16例为15外显子突变,1例为11外显子突变。16例中,突变位于15外显子第600位密码子14例,包括第1 799位碱基T突变为A(Val600Glu,V600E)13例(92.9%),第1 799、1 800位碱基T、G突变为A、A(Val600Glu,V600E)1例;突变位于15外显子第594位密码子2例,均为第1 780位碱基G突变为A(Asp594Asn,D594N)。1例11外显子突变位于第468位密码子,第1 403位碱基G突变为C(Gly468Va,G468V)。BRAF基因突变与患者性别、年龄无相关性;组织学分级为Ⅲ级的BRAF基因突变患者数多于Ⅱ级(P=0.029);临床分期为Ⅳ期的BRAF基因突变患者数多于Ⅱ期、Ⅲ期(P=0.011)。结论:BRAF基因突变与结直肠腺癌组织学分级和临床分期相关,随着组织学分级和临床分期的增加,BRAF基因突变率升高。     

肝癌患者血清锌指蛋白和p53高表达的临床意义

目的:检测肝癌患者血清中锌指蛋白含量及血浆中p53基因突变性,研究与疾病发生、发展的相关性并探讨其意义。方法:采用PCR扩增p53基因外显子5-8,并对其突变和缺失进行分析;采用SEREX技术获取人类锌指蛋白,经间接ELISA方法,分析肝癌患者血清中表达水平。结合患者有无肝组织以外转移对比分析。结果:肝癌组血清中产生的抗锌指蛋白抗体水平高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。41例肝癌患者17例显示血浆p53基因突变;有转移病灶患者22例的突变率高于无转移病灶者19例。结论:锌指蛋白的高表达提示其参与了肝癌的发生过程,而血浆p53基因突变与肝癌的发生、疾病的轻重及病灶转移有相关性,突变概率在临床鉴别诊断和治疗预后中有参考价值。     

Advances in adenovirus-mediated p53 cancer gene therapy

Introduction: The tumor suppressor p53 gene regulates diverse cellular processes, such as cell-cycle arrest, senescence, apoptosis and autophagy, and it is frequently inactivated by genetic alterations in ～ 50% of all types of human cancers. To restore wild-type p53 function in p53-inactivated tumors, adenovirus-mediated p53 gene therapy has been developed as a promising antitumor strategy in preclinical experiments and clinical studies.

Areas covered: This review focuses on the clinical relevance of replication-deficient adenovirus vectors that carry the wild-type p53 gene (Ad-p53; Advexin, Gendicine and SCH-58500) in clinical studies of patients with various cancers and the future perspectives regarding conditionally replicating adenovirus vectors expressing the wild-type p53 gene (CRAd-p53; AdDelta24-p53, SG600-p53, OBP-702) in preclinical experiments. Moreover, the recent advances in our understanding of the molecular basis for the p53-mediated tumor suppression network induced by Ad-p53 and CRAd-p53 vectors and the combination therapies for promoting the therapeutic potential of adenovirus-mediated p53 gene therapy are discussed.

Expert opinion: Exploration of the molecular mechanism underlying the p53-mediated tumor suppression network and the effective strategy for enhancing the p53-mediated cell death signaling pathway would provide novel insights into the improvement of clinical outcome in p53-based cancer gene therapy.     

大肠肿瘤p53和ki-ras基因协同突变的研究

目的探讨大肠肿瘤p53和ki-ras基因协同突变的临床意义。方法采用免疫组化和PCR-SSCP方法,检测58例大肠肿瘤患者的良性病变、良性病变转为恶变、原发腺癌组织的p53基因、ki-ras基因的表达和突变情况。结果良性病变组与恶变组间的p53基因和Ki-ras基因的表达有显著差异,良性病变组与原发腺癌组的Ki-ras基因表达差异显著;良性病变组的p53基因与Ki-ras基因的表达呈负相关,而恶变组和原发腺癌组呈正相关。p53基因和ki-ras基因两种基因突变率无显著差异,而协同突变与淋巴结转移密切相关,相关系数r=0.335,P=0.017,P0.05。结论 p53和ki-ras基因协同突变可以促进了大肠癌的发展。监测p53基因和Ki-ras基因的协同表达和突变,有助于大肠肿瘤的早期诊断和预后评价。     

乳腺增生病p53基因第7外显子突变检测

目的：探讨p53基因在乳腺癌发生早期的作用及早期诊断乳腺癌的分子病理指标。方法：用PCR－SSCP法检测36例乳腺单纯性增生、31例不典型增生、14例原位癌和16例浸润癌中p53基因第7外显子突变，并用DNA直接测序技术确定突变的碱基及其所在的密码子。结果：乳腺单纯性增生、不典型增生、原位癌、浸润癌中p53基因第7外显子的突变率分别为0％、6．5％（2／31）、21．4％（3／14）、18．8％（3／16）。8例突变中，3例发生于251密码子，4例发生于248密码子，1例发生于236密码子。表现为碱基替换（5例）、缺失（2例）、插入（1例）共三种突变方式。并在1例原位癌中首次发现了251密码子的同义突变（ATC→ATT,异亮氨酸→异亮氨酸）。结论：乳腺癌不典型增生中存在p53基因第7外显子突变，该突变可能在乳腺不典型增生发展到乳腺癌的过程中起重要作用，可作为早期诊断乳腺癌的辅助指标。     

胸水细胞p53和K-ras基因突变对于肺癌的诊断价值

目的：研究p53和K-ras基因在良恶性胸水细胞中的突变情况。方法 研究组为34例伴有恶性胸水的肺癌患者，对照组为28例出现胸水的结核性胸膜炎和其他炎性胸膜炎患者。常规抽水胸水，提取胸水细胞DNA，采用PCR-SSCP方法，分别对p53基因第7、8外显子和K-raS基因第1、2外显子进行突变分析。结果 研究组p53基因突变率为41．2％，而对照组只有7．1％，明显低于肺癌患者（P〈0．05）；研究组K-ras基因突变率（32．4％）也明显高于对照组（3．6％）（P〈0．05）。联合应用p53和K-ras基因突变检测可将胸水细胞中肺癌阳性检出率提高至61．8％。结论 p53和K-ras基因突变是良恶性胸水鉴别诊断的潜在生物学指标。