高增殖活性集落形成细胞的研究进展

高增殖活性集落形成细胞（ＨＰＰ－ＣＦＣ）是一类较接近原始造血干细胞的造血祖细胞，有ＨＰＰ－ＣＦＣ－１、ＨＰＰ－ＣＦＣ－２和ＨＰＰ－ＣＦＣ－３三种类型。本文就ＨＰＰ－ＣＦＣ培养方法的建立、特性及调控等作一简要综述。     

WT1基因转染抑制白血病细胞生长和集落形成并促进细胞分化

WT1基因的先天性缺失或功能缺陷可以导致Wilms瘤 ,因此普遍被认为是一种抑癌基因 ,但其在白血病发病中的作用尚有争论[1,2 ] 。我们应用逆转录病毒载体将WT1基因cDNA导入两种不同的人白血病细胞系K5 6 2和U937细胞并获得过度表达 ,发现WT1转染白血病细胞的生长和集落形成能力降低 ,对分化诱导剂的敏感性增加 ,支持该基因在白血病发病中的抑癌基因说。现将结果报道如下。材料和方法1　细胞培养　K5 6 2细胞和U937细胞 (购自美国ATCC)用含10 %胎牛血清的RPMI 16 40培养液 (Gibco/BRL)培养 ,双嗜性包装细胞PhoenixAmpho(NolanLab ,…     

人脐血中分离培养扩增内皮集落形成细胞及其生物相容性

背景：内皮集落形成细胞是内皮祖细胞的一种亚型,体外培养扩增及其在组织工程中的应用尚不明确。目的：探索从人脐血中分离培养扩增内皮集落形成细胞并观察其生物相容性。方法：采用密度梯度离心法从人脐血中分离单个核细胞,接种于Ⅰ型鼠尾胶原包被的培养板上,采用内皮祖细胞专用EGM-2培养基诱导培养,早期传代后扩增,免疫荧光鉴定细胞,并检测其体外成血管和增殖能力,与纳米羟基磷灰石/磷酸三钙材料复合培养后的生物相容性。结果与结论：脐血来源内皮集落形成细胞呈铺路石样集落生长,吞噬Dil-Ac-LDL并结合FITC-UEA-1,表达CD31,vWF,KDR和Tie-2,早期传代后拥有较强增殖潜能,可在体外大量扩增,在体外基质胶上可形成闭合管腔样结构,复合纳米羟基磷灰石/磷酸三钙材料后生物学特性不受影响。提示可从脐血中分离并体外大量扩增内皮集落形成细胞。     

人脐血中分离培养扩增内皮集落形成细胞及其生物相容性

背景:内皮集落形成细胞是内皮祖细胞的一种亚型,体外培养扩增及其在组织工程中的应用尚不明确。目的:探索从人脐血中分离培养扩增内皮集落形成细胞并观察其生物相容性。方法:采用密度梯度离心法从人脐血中分离单个核细胞,接种于Ⅰ型鼠尾胶原包被的培养板上,采用内皮祖细胞专用EGM-2培养基诱导培养,早期传代后扩增,免疫荧光鉴定细胞,并检测其体外成血管和增殖能力,与纳米羟基磷灰石/磷酸三钙材料复合培养后的生物相容性。结果与结论:脐血来源内皮集落形成细胞呈铺路石样集落生长,吞噬Dil-Ac-LDL并结合FITC-UEA-1,表达CD31,vWF,KDR和Tie-2,早期传代后拥有较强增殖潜能,可在体外大量扩增,在体外基质胶上可形成闭合管腔样结构,复合纳米羟基磷灰石/磷酸三钙材料后生物学特性不受影响。提示可从脐血中分离并体外大量扩增内皮集落形成细胞。     

重组人粒细胞集落刺激因子对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的影响

为了研究重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对阿糖胞苷（Ara-C）诱导HL-60细胞凋亡的影响,体外培养HL-60细胞,加入rhG-CSF和（或）Ara-C,瑞氏染色观察细胞形态变化,吖啶橙/溴化乙锭双染色观察细胞凋亡情况,MTT实验检测细胞增殖活性.结果表明：加入rhG-CSF后Ara-C诱导的HL-60细胞的凋亡率升高（P＜0.01）,而MTT实验的OD值降低（P＜0.01）.结论：rhG-CSF有诱导HL-60细胞凋亡的作用,rhG-CSF可以促进Ara-c诱导HL-60细胞凋亡的作用.     

粒细胞集落刺激因子联合化疗对儿童急性淋巴细胞白血病临床探讨

目的探讨基因重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）联合化疗治疗小儿急性淋巴细胞白血病（ALL）临床疗效。方法选择我院2006年4月至2008年4月初治ALL诱导化疗后中性粒细胞减少患儿50例,分为治疗组和对照组。对照组给予VDP（长春新碱、柔红霉素、泼尼松）或CODP＋I（环磷酰胺、长春新碱、柔红霉素、泼尼松、天门冬酰胺酶）方案;治疗组在对照组基础上,治疗组加用rhG—CSF。观察两组诱导完全缓解率、外周血中性粒细胞绝对值（ANC）恢复至1．0×10’／L的时间、发热持续时间和抗生素应用时间。结果两组完全缓解率没有显著差异（P〉0．05）,但两组外周血ANC恢复至1．0×10^9／L的时间、发热持续时间、抗生素应用时间有显著差异（P〈0．05）。结论rhG—CSF可治疗化疗所致的骨髓抑制,降低感染发生率及严重程度,是安全、有效的。     

恶性细胞中巨噬细胞集落刺激因子及其受体的异源表达

业已证明血清M-CSF(可溶性M-CSF)水平在白血病前期、白血病、淋巴瘤、乳腺癌和肝癌患者明显升高,但机制不明。为探讨细胞内M-CSF及其受体表达在病态造血,肿瘤和白血病中的作用,采用RT-PCR和ABC免疫酶标技术,对12名正常人静脉血,21例初诊血液病患者骨髓和6株血源细胞系的M-CSF/M-CSF-R mRNA及抗原表达进行了分析。结果表明M-CSF及其受体的表达呈多态性分布,无论是因子还是受体在白血病患者的粒、单、红、巨核系的细胞膜、质、核呈不同程度的反应,提示其在不同状态和病种作用中的复杂性,值得深入研究。     

内源性粒细胞集落刺激因子对非小细胞肺癌化疗后白细胞的影响

目的探讨非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)患者化疗前后白细胞的变化与患者内源性粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)的关系。方法共入选NSCLC患者94例,其中71例接受化疗(试验组),23例因为经济原因拒绝化疗或者行手术治疗者(对照组),试验组分别在化疗前第一天与化疗后第六天采血,对照组采血的时间与试验组同步,检测化疗后白细胞计数及G-CSF水平。结果①71例接受化疗的患者化疗后白细胞计数低于化疗前,G-CSF值较化疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05)。②进一步分析显示,化疗后白细胞下降组患者G-CSF基础水平明显低于白细胞正常组、白细胞升高组和对照组的G-CSF水平,差异有统计学意义(P<0.05)。③接受化疗的71例患者中,白细胞下降者30例,该组化疗后的血清G-CSF水平[(0.034±0.0279)ng/ml]明显低于化疗前[(0.889±0.049)ng/ml],差异有统计学意义(P<0.05)。④相关分析研究结果显示,化疗后白细胞计数与内源性G-CSF表达水平的相关系数r为0.265,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NSCLC患者化疗所致的外周血白细胞下降与患者内源性G-CSF的基础水平有关,而且呈正相关。     

粒—巨噬细胞集落刺激因子对Vp16诱导白血病细胞凋亡的调控作用

目的：探讨粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对Ｖｐ１６诱导白血病细胞凋亡的调控作用，指导白血病临床治疗中正确使用ＧＭ－ＣＳＦ。方法：在构建高效表达ＧＭ－ＣＳＦ的逆转录载体Ｎ２Ａ／ＣＭＶ／ＧＭ－ＣＳＦ表达系统的基础上，对转ＧＭ－ＣＳＦ基因和未转ＧＭ－ＣＳＦ基因的白血病ＨＬ－６０细胞进行研究。结果：未转ＧＭ－ＣＳＦ基因及转空载体Ｎ２Ａ的ＨＬ－６０细胞经Ｖｐ１６处理后均出现凋亡的特征性表现：ＤＮＡ电泳呈梯状；流式细胞仪ＤＮＡ直方图上呈现特征性的亚二倍体（亚Ｇ１）峰；透射电镜观察细胞形态可见凋亡的特征性改变。结论：Ｖｐ１６具有诱导白血病细胞发生凋亡的作用，而ＧＭ－ＣＳＦ能够抑制Ｖｐ１６诱导的细胞凋亡。以上结果表明，白血病临床治疗中为预防和改善化疗所致骨髓抑制而应用ＧＭ－ＣＳＦ时，应谨慎地选择时机，在化疗前和化疗期间不宜使用，以避免白血病细胞对抗癌药物诱导的凋亡产生抵抗而导致耐药。     

晚期非小细胞肺癌患者化疗后粒细胞集落刺激因子临床应用观察

化疗是晚期非小细胞肺癌 (ＮＳＣＬＣ)的主要治疗手段 ,化疗药物所致的粒细胞减少是肺癌患者并发感染 ,甚至导致死亡的重要原因之一[1] 。我科于 1997年 10月至 2 0 0 1年 4月 ,对ＮＳＣＬＣ患者化疗后采用粒细胞集落刺激因子 (Ｇ ＣＳＦ)治疗 ,在促进粒细胞的恢复 ,降低感染的发生率等方面取得了较好的疗效 ,现报告如下。1　资料与方法1.1　病例选择　近 4年来入院后化疗而引起粒细胞减少的ＮＳＣＬＣ患者 5 6例 ,男性 32例 ,女性 2 4例 ,平均年龄 5 7岁 ,随机分为两组 ,即Ｇ ＣＳＦ组 2 7例 ,对照组 2 9例 ,化疗前所有ＮＳＣＬＣ患者生活…     

外源性粒-巨噬细胞集落刺激因子对脓毒症树突状细胞的生物效应

目的 探讨粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)用于重度脓毒症治疗对于脾脏树突状细胞(DCs)的生物学效应及对预后影响.方法 选取160只雄性昆明鼠,随机(随机数字法)分为4组:健康对照组(n=50,不予特殊处理,正常喂养),CLP组(n=42,盲肠结扎穿孔),常规治疗组(n=34,CLP术后12、24、36、48、60、72、84h腹腔注射头孢曲松5 mg/kg),GM-CSF治疗组(n=34,CLP术后除常规治疗外另于12、36、60、84h皮下注射GM-CSF 20 μg/kg).于CLP术后0、12、24、48、72 h分批处死,用流式细胞仪测定各组脾脏DCs数量及凋亡率,用ELISA法检测各组血清IL-12质量浓度.并观察96h生存预后.结果 重度脓毒症时所有时间点脾脏DCs凋亡增加、数量明显减少(P＜0.05),IL-12血清浓度单向曲线型增高(P＜0.05);头孢曲松治疗可以加剧DCs的丢失(P＜0.05),而对IL-12质量浓度无影响(P＞0.05).GM-CSF治疗可增加DCs的数量(P＜0.05),降低IL-12质量浓度(P＜0.05).Logistic回归分析GM-CSF的OR值为0.079.结论 GM-CSF治疗重度脓毒症可以增加脾脏DCs数量,降低血清IL-12质量浓度,改善预后.     

白介素和集落刺激因子对5-Fu处理小鼠脾集落形成的影响

给小鼠静脉注射5-fluorouracil(5-Fu),4日后将鼠脾细胞与各种细胞因子混合培养观察集落形成情况,结果表明IL-3作用于小鼠脾细胞CFU-S阶段,其作用与IL-3的剂量有关,红细胞生成素(EPO)作用于红细胞系CFU-S以下的分化成熟,IL-6,G-CSF,GM-CSF作用于粒细胞系统的分化成熟,IL-3与EP0,IL-6,G-CSF和GM-CSF均有协同作用。     

急性肺损伤早期前B细胞集落刺激因子水平的变化

目的 探讨胸部开放伤合并海水浸泡致急性肺损伤(AlJ)早期前B细胞集落刺激因子(PBEF)水平及意义.方法 16只犬致胸部开放伤后随机(随机数字法)分成对照组(n=8,单纯胸部开放伤)和海水组(n=8,胸部开放伤后5min内经伤口灌人海水35 mL/kg),10min内闭合伤口,制成au模型.伤后0,2,4,6,8 h取动脉和静脉血,8 h取支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本.检测血浆及BALF中总蛋白浓度、血浆渗透压和电解质浓度;ELISA方法测血浆炎症因子IL-1β、IL-8和内皮细胞损伤标志物vWF水平,以及血浆、BALF和肺组织中PBEF水平;PBEF与血浆渗透压、炎症因子行简单相关分析.采用SPSS 10.0统计软件分析数据.结果 海水组动物血浆、BALF和肺组织中PBEF水平较对照组明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.01):伤后8 h海水组PBEF水平较对照组显著升高[血浆内:(3014.16±883.47)vs.(1060.94±251.08);BALF内:(1373.35±102.53)vs.(997.77±70.31);肺组织内:(1455.22±71.74)vs.(921.43±118.13),pg/mL];血浆内PBEF水平峰值海水组出现在伤后4 h(3204.56±604.21),对照组出现在伤后6 h(1220.86±191.30),且二者峰值差异具有统计学意义(P＜0.05).血浆IL-1β,IL-8和vWF水平变化与PBEF一致,海水组较对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).PBEF水平升高与炎症因子和血浆渗透压明显正相关(P＜0.01),其相关系数分别为0.489(PBEF vs.PPI),0.549(PBEF vs.IL-1β),0.496(PBEF vs.IL-8),0.465(PBEF vs.vWf).结论 胸部开放伤合并海水浸泡致au早期PBEF水平进行性升高,与海水高渗有关.PBEF参与au炎症病理过程,可以作为胸部开放伤海水浸泡致au早期较为敏感的监测指标之一.     

粒细胞集落刺激因子治疗急性淋巴细胞白血病疗效和安全性的系统评价

目的系统评价粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对急性淋巴细胞白血病（ALL）患者的疗效和安全性。方法计算机检索Cochrane Library、PubMed、EMbase、中国期刊全文数据库和维普中文科技期刊数据库,检索时间2000年1月～2009年10月。纳入G-CSF治疗急性淋巴细胞白血病的随机对照研究。按Cochrane系统评价方法评价纳入研究的方法学质量和提取有效数据,用RevMan 5.0软件对总体生存率、诱导化疗结束后的完全缓解率、生存质量、感染情况、复发率、不良反应等进行Meta分析。结果共纳入6个随机对照试验,共620例患者,研究质量均为C级。Meta分析结果显示G-CSF组在成人ALL总体生存率[RR=2.24,95%CI（1.28,3.90）,P=0.004]方面优于对照组。结论 G-CSF可提高成人ALL患者的总体生存率,尚不能证明其有提高完全缓解率、改善生存质量、减少感染情况、降低复发率的作用,有待进一步研究证实。     

重组人粒细胞集落刺激因子防治急性淋巴细胞白血病患儿口腔溃疡效果观察

目的探讨预防化疗所致口腔溃疡的有效方法,缩短口腔溃疡愈合时间。方法60例在诱导缓解阶段、巩固治疗阶段、大剂量MTX髓外白血病预防阶段、加强化疗阶段的急性淋巴细胞白血病患儿,按入院单日为实验组,双日为对照组分为两组各30例。对照组在化疗期单纯用常规口腔护理:2%碳酸氢钠溶液漱口,制霉菌素溶液搽口腔黏膜,3次/d,清晨、饮食前后、睡觉前后朵贝氏溶液漱口,口腔吹氧2次/d,15 min/次;实验组在常规口腔护理基础上,化疗开始时加用重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)100μg 生理盐水20 ml配制的药液进行口腔护理。观察两组患儿口腔溃疡的发生率、口腔溃疡分度、溃疡愈合时间等。结果实验组患儿口腔溃疡的发生率明显降低,经2χ检验有显著性差异(P<0.005);两组患儿发生口腔溃疡的程度,经秩和检验有显著性差异(P<0.01),实验组以轻度为主,对照组以重度为主;溃疡愈合时间实验组明显缩短(P<0.001)。结论G-CSF配制溶液能预防口腔黏膜溃疡发生,减轻病情,促进口腔黏膜溃疡修复,提高患儿对化疗的耐受能力,其效果优于常规口腔护理。     

人粒-巨噬细胞集落刺激因子受体在NIH3T3细胞中的功能表达

目的　探讨人类粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ） 受体（ＧＭＲ） 在ＮＩＨ３Ｔ３ 细胞中表达的功能特性。方法　将编码人ＧＭＲα和β亚单位的ｃＤＮＡ 转染到无人ＧＭＲ表达的小鼠ＮＩＨ３Ｔ３ 细胞中,并检测其阳性转染子在配体刺激后的增殖信号传导与酪氨酸磷酸化。结果　重建的功能性ＧＭＲα／β可以介导细胞增殖与细胞集落形成,并诱导βｃ、Ｊａｋ２、Ｓｈｃ 及Ｓｈｃ 相关蛋白Ｐ１４５（ＳＨＩＰ） 酪氨酸磷酸化,然而,人ＧＭＣＳＦ并不能激活仅含ＧＭＲα的ＮＩＨ３Ｔ３ 细胞出现有丝分裂信号表达。结论　人ＧＭＲα与β亚单位同时转染入ＮＩＨ３Ｔ３ 细胞后,可通过βｃ 磷酸化,激活Ｊａｋ２ 、Ｓｈｃ 和ＳＨＩＰ信号传导途径,而导致配体依赖性细胞生长与集落形成     

碱性成纤维细胞生长因子对胚胎干细胞来源集落形成细胞的作用

背景:有研究表明,在卵黄囊造血、胎肝造血和在胚胎干细胞向造血干细胞分化过程中,碱性成纤维细胞生长因子可强烈表达.目的:在拟胚体培养阶段施加碱性成纤维细胞生长因子,验证碱性成纤维细胞生长因子对集落形成细胞产生的调控作用.方法:购买小鼠胚胎干细胞D3细胞系,取第3～5代小鼠原代胚胎成纤维细胞,加入新配制含丝裂霉素C的DMEM生长培养基孵育2.5 h,使饲养层细胞失去增殖能力;加入胰酶消化适度,离心后制成单细胞悬液,以10×104/cm2的密度种至用明胶包被的培养瓶中,放入孵箱内培养24 h之后使用.复苏胚胎干细胞D3细胞并将其接种于饲养层细胞之上.在拟胚体培养阶段按培养基成分不同分为2组:对照组(标准培养基+血管内皮生长因子+干细胞因子组)、实验组(标准培养基+血管内皮生长因子+干细胞因子+碱性成纤维细胞生长因子组).各组于培养3,6d时分别计数克隆形成数,通过免疫荧光法检测Flk-1+细胞表达情况,并用IMAGE-PRO PLUS图像分析系统统计阳件细胞数及平均吸光度值.结果与结论:与对照组比较,在拟胚体培养阶段加入碱性成纤维细胞生长因子可显著增加集落形成细胞的数量(P＜0.01),Flk-1阳性细胞数及平均吸光度值也显著增加(P＜0.01).证明碱性成纤维细胞生长因子能够有效地促进胚胎体的扩增以及成血管血液干细胞的产生与增殖.