蛇毒制剂对体外培养的兔结膜下成纤维细胞的影响

目的　观察蛇毒制剂对体外培养的兔结膜下成纤维细胞与胶原黏附及细胞移行和增殖的影响。方法　将培养的第3～5代兔结膜下成纤维细胞于不同浓度的蛇毒制剂孵育后,接种于涂有鼠尾胶原的24孔板中,去除未黏附的细胞,用目镜网格器计数法和四甲基偶氮唑盐法记录贴壁细胞量。在第3代生长融合细胞的培养板上划线,造成无细胞的裸露区,在不同浓度的蛇毒制剂下孵育,用目镜网格器每6h观察记录移行至裸露区的细胞数。第3代兔结膜下成纤维细胞接种于24孔板与不同浓度的蛇毒制剂共育24、48h后,用四甲基偶氮唑盐法记录各孔细胞数量的吸光度(A)值。结果蛇毒制剂抑制结膜下成纤维细胞黏附呈剂量依赖性。抑制成纤维细胞黏附的半数有效量(ID50)为1.0×10     

几丁聚糖生物膜对结膜下成纤维细胞的作用

目的 评价羧甲基壳聚糖生物膜对体外培养的兔眼结膜下成纤维细胞的抑制作用.方法 成年健康新西兰白兔1只,取结膜下Tenon囊组织进行体外结膜下成纤维细胞培养,传至第3代后进行细胞鉴定,第4代细胞进行生长曲线测定,将培养的第4代兔眼结膜下成纤维细胞接种于合成的羧甲基壳聚糖生物膜上,接种后24 h、48 h、72 h采用MTT比色法评价细胞的增殖情况.结果 体外培养的兔眼结膜下成纤维细胞融合后呈梭形外观,角蛋白染色为阴性,波形蛋白染色为阳性,证明其为成纤维细胞.生长曲线测定表明培养的细胞在接种后第1-5天为指数生长期,第6天后进入细胞生长平台期.接种于羧甲基壳聚糖生物膜后24 h、48 h、72 h的细胞的光密度值分别为0.207 1±0.082 6、0.173 6±0.079 6和0.181 4±0.047 5,而对照组的平均光密度值为0.283 7±0.011 0、0.272 1±0.083 3和0.307 0±0.055 6,同一时间点2组结果比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 羧甲基壳聚糖生物膜具有抑制体外培养的兔眼结膜下成纤维细胞增殖的作用.     

丝裂霉素C抗人翼状胬肉成纤维细胞增殖的实验研究

目的：评价丝裂霉素C（MMC）对人翼状胬肉成纤维细胞（HPF）增殖的影响。方法：体外培养HPF并传5－8代,分别加入10^5,10^4,10^3,10^2,10和1μg/L不同质量浓度的MMC,对照组加入磷酸盐缓冲液（PBS）,48h后用噻唑兰（MTT）比色法在酶标仪上测吸光度A, 计算各质量浓度下HPF的净抑制率。结果：实验组与对照组A值比较有显著性差异（P＜0.05）,质量浓度在10^2μg／L以上尤甚（P＜0.01）。MMC对HPF增殖的抑制率与其药液质量浓度呈正相关。结论：MMC具有明显抗HPF增殖作用,并与用药质量浓度呈良好的量效关系。     

人工合成白细胞介素-1受体阻断剂CK-17对兔结膜下成纤维细胞的影响

目的研究非甾体类抗炎药物——人工合成白细胞介素-1受体阻断剂CK-17对体外培养的兔Tenon囊成纤维细胞(rabbit Tenon’s capsule fibroblast，RTCF)增生及细胞分泌功能的抑制作用。对CK-17在青光眼滤过术后抗瘢痕增生方面应用的可行性进行探讨。设计体外、对照干预实验研究。研究对象体外培养的兔RTCF。方法用细胞计数的方法检测RTCF增生的情况；用胶原检测试剂盒检测RTCF培养基中分泌的总胶原的含量。主要指标成纤维细胞记数，RTCF培养基中总胶原含量。结果(1)CK-17对RTCF的抑制呈浓度和时间依赖性；(2)CK-17对RTCF胶原分泌的抑制呈浓度和时间依赖性；(3)CK-17在实验浓度下对RTCF无细胞毒性。结论CK-17能够抑制体外培养的兔成纤维细胞增生及细胞总胶原的分泌。     

干扰素α-2b对结膜下成纤维细胞生长形态的影响

目的：探讨干扰素α－２ｂ对体外培养的牛结膜下成纤维细胞是否具有抑制作用及其作用机制。方法：采用光镜、电镜观察该细胞在含不同浓度干扰素α－２ｂ培养液中的生长形态和粘附移动能力。结果：干扰素α－２ｂ能够使该细胞生长密度降低、伪足收缩、细胞变圆、移动能力减弱。结论：干扰素α－２ｂ具有抑制结膜下成纤维细胞粘附和移动生长的能力,提示可用于翼状胬肉、青光眼滤过术后,以减少结膜下瘢痕形成导致的手术失败。     

自体结膜移植联合丝裂霉素C治疗翼状胬肉

翼状胬肉 (以下简称胬肉 )是常见的角结膜病。最常采用手术治疗 ,但术后复发率高。以往曾采取了很多方法预防其术后复发 ,但均不理想。目前已有较多报告采用胬肉切除联合应用抗增殖性药物丝裂霉素 C(m itom ycin C,MMC)来降低其术后复发率且取得一定效果。本文采用显微镜下翼状胬肉切除带蒂结膜瓣转位移植联合术中或术后应用 MMC的方法 ,观察对胬肉切除术后复发的防治效果。1　对象与方法1.1　对象　本院 1995年 9月～ 1997年 12月的门诊及住院胬肉患者共 78例 89眼 ,男 2 8例 ,女 5 0例 ,年龄 2 1～ 6 8a,双眼发病者 11例。患者均为鼻…     

丝裂霉素C对滤过性手术眼的影响

抗代谢药物丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）因其可减少滤过泡纤维化过程,提高青光眼滤过性手术的成功率,近年来越来越广泛应用于滤过性手术中,然而,ＭＭＣ作为一种非细胞周期的细胞毒性药物,直接作用于眼球,对眼部组织有一定影响,有时甚至可导致严重的并发症。本文通过复习文献,就ＭＭＣ对结膜,角膜上皮,角膜内皮,巩膜,睫状体,小梁网细胞等组织作一综述,为临床合理使用ＭＭＣ提供理论依据。     

结膜移植联合丝裂霉素C滴眼治疗翼状胬肉

翼状胬肉是一种以纤维血管组织增生为特征的常见眼病。需手术治疗，但易复发。本文以结膜移植术联合低浓度丝裂霉素C滴眼观察治疗作用。报告如下：对象：进行期翼状骨肉％例，43眼。其中7例为双眼发病，男14例，女R例，年龄对一62岁。采取随机方法分为治疗组与对照组。治疗组：19例22眼，显微镜下行常规翼状银肉切除自体结膜移植术，术后2－4天，角膜利除面上皮覆盖后，给0．腿叽丝裂霉素C滴眼，每日2次，5－7天。术后常规换药，6－7天拆线。给广谱抗生素（诺氟沙星滴眼液）滴眼，每日4次，四环素可的松眼膏涂眼每晚1次，4－6周。术后第4'…     

MMC对兔眼滤过道成纤维细胞活性的抑制作用

目的：应用细胞增殖指标核仁组成区相关嗜银蛋白（AgNORs),研究兔眼滤过道成纤维细胞（Fb)增殖规律及丝裂霉素C（MMC）的抗增殖作用,并对其临床意义进行探讨。方法：邓兔眼滤过道切片作AgNORs及HE染色,比较MMC眼和对照眼Fb AgNORs染色颗粒数量。结果：不同手术区MMC眼Fb AgNORs颗粒数显著低于对照眼,MMC抑制率为50.7%-82.1%。结论：丝裂毒素C可以有效抑制咬切口、巩膜瓣下、结膜瓣下Fb的增殖活性,抑制作用稍强于同类药物5-Fu。     

The effect of viper venom on the attachment, migration and proliferation of Tenon's capsular fibroblasts

OBJECTIVES: To observe the effect of viper (Ahylysantipfarciasi) venom on attachment to collagen, migration and proliferation of rabbit Tenon's capsular fibroblast (TFs) in tissue culture. METHODS: Anti-adhesion experiment: The 3 -- 5 passage TFs suspended in DMEM medium were pre-incubated for 30 minutes in the presence of various concentrations of viper venom (0, 2.5 x 10(-4), 5.0 x 10(-4), 1.0 x 10(-3) and 5.0 x 10(-3) U/ml) at 37C, 5% CO(2), then inoculated in 24-well plate coated with rat-tail collagen. After incubation for 90 minutes, the floating cells were removed. The attached cells in each well were enumerated microscopically and determined by the value of absorption (A) of 3-(4, 5-dimethylthiazolzyl)-2, 5-diphenyl tetrazodium bromide (MTT). Anti-migration experiment: A denuded area was made when the 3rd passage of TFs was confluent into a monolayer. Cells were then exposed to viper venom (0 -- 5.0 x 10(-3) U/ml) at 37C, 5% CO(2), and the cells having migrated into the denuded area were enumerated every 6 hours. Anti-proliferative experiment: Two hours after the 3rd passage of TFs was incubated in the 24-well plate at 37C, 5% CO(2), they were exposed to different concentrations of viper venom drug (0 -- 5.0 x 10(-3) U/ml). Twenty-four and 48 hours later, the number of cells was determined by MTT method. RESULTS: Viper venom inhibited TFs from attaching to collagen in a dose-dependent manner and the ID(50) was 1.0 x 10(-3) U/ml. Only did 5.0 x 10(-3) U/ml of viper venom show significant difference from the control during 6 -- 48 hours. The difference of A value was not significant among all groups at 24 and 48 hr. CONCLUSIONS: In vitro, viper venom (> 1.0 x 10(-3) U/ml) can significantly inhibit the attachment of TFs to collagen, and 5.0 x 10(-3) U/ml can inhibit the migration, but can not affect their proliferation.     

HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞的旁观者效应及其机制研究

目的观察HSV—tk／GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转HSV—tk基因HTFs（HTFs—tk）与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合，加入5μg／ml更昔洛韦作用5d，MTT法检测对HTFs的杀伤作用；染料传输法观察HTFs细胞间隙连接细胞间通讯（GJIC）的能力；免疫细胞化学检测Cx43分布；RT—PCR及Westernblot检测Cx43表达。结果旁观者效应随HTFs—tk／HTFs比例增加而增强，高细胞接种密度组明显强于低密度组；染料通过GJIC传输6级以上；Cx43主要分布于HTFs细胞膜并检测到其mRNA与蛋白表达。结论旁观者效应需要细胞间密切接触，Cx43介导GJIC可能是HSV—TK／GCV系统对HTFs产生旁观者效应的主要机制，HTFs表达Cx43可能在结膜伤口愈合反应中发挥重要作用。     

Bevacizumab对人Tenon囊成纤维细胞迁移抑制作用的研究

目的：观察bevacizumab对人Tenon囊成纤维细胞迁移能力的影响,探讨青光眼术后滤过泡瘢痕化的对策。方法：采用从陕西省人民医院中心实验室细胞库中取出冻存的人Tenon囊成纤维细胞,采用细胞复苏法,遵循无菌原则,进行常规培养。创伤划痕试验：待细胞融合度达到80%时在单层细胞表面划出一条无细胞的刮除带,空白对照组加入不含血清的DMEM培养液,bevacizumab处理组加入 bevacizumab 浓度为1 mg/mL 不含血清的DMEM培养液,分时段(0,24,48,72h)观察并测量划痕宽度。结果：人Tenon囊成纤维传代细胞显微镜下观察呈长梭形,细胞核位于细胞的中部,核较大,胞浆丰富,生长时呈漩涡状排列走形,增殖能力强,符合成纤维细胞的一般形态。冻存和复苏后细胞的形态结构和生物学特点维持不变。细胞划痕试验显示：0h时,两组细胞划痕初始宽度相等;24 h 时两组细胞迁移距离基本一致;48 h 时bevacizumab处理组细胞迁移距离明显小于空白对照组;72 h时空白对照组划痕基本愈合, bevacizumab处理组细胞迁移距离较48 h无明显变化,且细胞死亡数目较多。结论：利用细胞复苏法可成功培养形态结构和生物学特性稳定的传代人Tenon囊成纤维细胞,为实验研究奠定细胞学基础。成纤维细胞本身具有较强的迁移能力,外源性bevacizumab作用可以明显抑制细胞的迁移,作用时间过长时,会造成细胞的过多死亡。抗新生血管药物对成纤维细胞的迁徙具有一定的抑制作用,未来很有可能成为眼科临床抗击青光眼术后滤过泡瘢痕化的重要手段。     

姜黄素对人翼状胬肉成纤维细胞增殖和凋亡及迁移的影响

目的:探讨姜黄素对体外培养的人翼状胬肉成纤维(HPF)细胞增殖和凋亡及迁移的影响。方法:收集我院2021-11-24/12-16手术切除的翼状胬肉组织7例,进行原代成纤维细胞体外培养,并采用免疫荧光染色法进行细胞鉴定。采用含等量二甲基亚砜的0、10、20、40、80、160μmol/L姜黄素处理HPF细胞24h后,用CCK8法检测细胞增殖情况。根据CCK8检测结果将细胞分为对照组(不含姜黄素)、20μmol/L姜黄素组、40μmol/L姜黄素组,每组分别处理HPF细胞24h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell迁移实验检测细胞迁移,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测Bax、Bcl-2、Cyclin D1及MMP2的mRNA与蛋白表达。结果:与对照组相比,20μmol/L姜黄素组和40μmol/L姜黄素组均能抑制HPF细胞的增殖和迁移,并诱导其凋亡(均P<0.05)。与对照组相比,20μmol/L姜黄素组能下调Cyclin D1及MMP2,上调Bax的mRNA表达,下调Bcl-2的蛋白表达(均P<0.05)。与对照组相比,40μmol/L姜黄素组能...     

CCK-8检测法研究槲皮素对人Tenon囊成纤维细胞的抑制作用

目的 观察槲皮素（quercetin,QU）对体外培养的（human Tenon＇s capsule fibroblasts,HTCF）增殖的抑制作用.方法 体外培养HTCF.配制QU溶液,其浓度依次为20 μmol·L^-140 μmol·L^-160 μmol·L^-180 μmol·L^-1100 μmol·L^-1用活细胞计数试剂盒CCK-8检测不同浓度QU作用下HTCF的增殖,并在光学显微镜下观察细胞的形态变化.结果 不同药物浓度HTCF形态学检测显示：50 μmol·L^-1U作用48 h后,细胞收缩,胞核固缩,聚集在核膜边缘;100 μmol·L^-1U作用48 h后,细胞未见增殖,出现凋亡小体,细胞的增殖几乎完全被抑制.细胞生长抑制实验的结果显示：QU在各浓度组对体外培养的HTCF均有抑制作用,抑制效应呈剂量时间依赖关系.结论 QU能抑制体外培养的HTCF的增殖,且该作用呈剂量和时间依赖性.     

The effect of ICG on mitomycin C cytotoxicity in human tenon fibroblasts

PURPOSE: To examine the effects of indocyanine green (ICG) with and without mitomycin C (MMC) on proliferation of cultured human Tenon fibroblasts. METHOD: Fibroblast monolayers were exposed to either MMC [0.4 mg/mL in phosphate buffered saline (PBS)] or PBS containing ICG (0.0625%, 0.125%, 0.25%, and 0.5% in 200 microL PBS) or a combination of MMC (0.4 mg/mL in PBS) and ICG (0.25% and 0.5%) for 5 minutes. Controls were exposed for 5 minutes to MMC, PBS, or culture medium containing no ICG. After treatment, the monolayers were washed and incubated in culture medium for 24, 48, 72 hours, and 1 week periods after which the number of viable cells was quantified. RESULTS: The presence of ICG alone, at concentrations ranging from 0.0625% to 0.5%, had no effect on the rate of fibroblast proliferation measured at any of the incubation periods. As expected, MMC treatment resulted in a significant reduction in viable fibroblast number (8.4+/-0.13x10(3)). ICG in combination with MMC did not significantly alter fibroblast numbers (8.5+/-0.05x10(3)) up to 1 week compared with MMC alone (8.4+/-0.12x10(3)). CONCLUSIONS: ICG at concentrations of 0.5% and below do not reduce proliferation of Tenon capsule fibroblasts. ICG did not potentiate or diminish the effect of MMC on Tenon capsule fibroblast proliferation.     

丝裂霉素C在泪囊鼻腔吻合术中的应用

目的　为明确丝裂霉素C在泪囊鼻腔吻合术后 ,抗吻合口瘢痕形成至吻合口关闭的作用。方法　将 45例 (47眼 )慢性泪囊炎随机分为MMC治疗组 2 5眼和对照组 2 2眼。MMC组在泪囊鼻腔吻合术中一次性使用 0 4mg/ml的MMC ,对照组不使用MMC。术后随访 6～ 1 2月。结果　MMC治疗组成功率为 1 0 0 % ,对照组为 86 36% (P <0 0 1 )。MMC治疗组术后未出现粘膜坏死、溃疡、眼球损伤或持久性疼痛等并发症。结论　MMC的抗瘢痕作用有助于保持泪囊鼻腔吻合术的骨孔面积 ,促进吻合口通畅。     

翼状胬肉切除、大范围Tenon囊切除联合丝裂霉素C治疗翼状胬肉的临床研究

目的:探讨翼状胬肉切除、大范围Tenon囊切除联合丝裂霉素C治疗翼状胬肉的临床效果和安全性。方法:选取30例(36眼)初发翼状胬肉患者,采用翼状胬肉切除、大范围Tenon囊切除联合丝裂霉素C进行治疗,然后进行随访观察。结果:所有患者均接受了12～16(平均13.4)mo以上的随访,有1例患者复发,没有发现任何并发症。结论:翼状胬肉切除、大范围Tenon囊切除联合丝裂霉素C治疗翼状胬肉是一种安全有效的治疗方法。     

丝裂霉素C对兔眼睫状体无色素上皮细胞的毒性作用

目的 观察兔眼巩膜咬切术中应用０．２ｍｇ／ｍｌ丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）后,睫状体无色素上皮细胞的病理形态学的改变,探讨ＭＭＣ对睫状体的毒性作用。方法 在兔眼巩膜咬切术中用含０．２ｍｇ／ｍｌ的ＭＭＣ０．１ｍｌ的海绵块,置于Ｔｅｎｏｎ囊和巩膜之间共５分钟,并用２０ｍｌ生理盐水冲洗,术后第７天及２８天,采用光镜观察睫状体,透射电镜观察其无色素上皮细胞。结果 术后第７天睫状体无色素上皮细胞水肿,线粒体丰富、肿     

丝裂霉素C对翼状胬肉成纤维细胞膜通透性及超微结构的影响

背景 丝裂霉素C(MMC)对人翼状胬肉成纤维细胞的生长和增生有明显的抑制作用,但关于其对细胞膜影响的研究很少. 目的 探讨MMC对翼状胬肉成纤维细胞膜理化特性及超微结构改变的干预.方法 收集翼状胬肉手术切除标本15例,用组织块培养法培养人成纤维细胞,以波形蛋白免疫组织化学染色法对培养细胞进行鉴定.取传3代后对数生长期细胞以5×103个/孔的密度接种于96孔板,将不同质量浓度0、50、100、200、300、400 mg/L MMC加入培养孔中处理翼状胬肉成纤维细胞12h,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测培养细胞的活力,应用Annexin V-FICT/碘化丙啶(PI)法检测细胞凋亡的情况;利用原子力显微镜(AFM)观察不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的改变;检测细胞上清液中丙二醛( MDA)的浓度以评价细胞的脂质过氧化程度;检测细胞外液中漏出的乳酸脱氢酶(LDH)含量以评估细胞膜的通透性变化;用Fluo-3/AM标记和流式细胞术检测培养细胞内游离钙离子的变化. 结果 组织块法原代培养贴壁1～2周可见大量长梭形细胞爬出,波形蛋白检测呈阳性反应.用MMC处理培养细胞12h后,人成纤维细胞的活力减弱,MMC对细胞增生的抑制作用呈剂量依赖性.0、50、100、200、300 mg/L MMC处理组细胞凋亡百分比分别为4.2％、4.2％、5.4％、19.3％和25.8％.AFM下可见不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的异常,不同质量浓度MMC处理组细胞外液中LDH活性及细胞上清液中MDA浓度明显高于对照组,且均随着MMC质量浓度的增加,LDH活性及细胞上清液中MDA浓度逐渐增加,组间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).Fluo-3/AM标记和流式细胞术检测表明,培养细胞内游离钙离子增多.结论 MMC能引起翼状胬肉成纤维细胞膜的理化性质改变,其作用呈剂量依赖性,细胞膜是其药效和毒性的作用靶点之一.