应用蛋白指纹图谱技术筛选原发性胆汁性肝硬化患者血清特异性标志物

目的: 探讨蛋白指纹图谱技术筛选原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血清中可用于诊断的特异性标志物.方法: 采用弱阳离子纳米磁性微球捕获血清中的蛋白,ProteinChip PBSII-C型蛋白质芯片阅读仪检测绘制成蛋白指纹图谱.所有蛋白指纹图谱采用Biomarker Wizard 3.1分析之后用Biomarker Pattems Sofiware 5.0识别最终可能用于PBC诊断的蛋白标志物并优化组合建立诊断模型.结果: 在PBC患者和对照组之间找到69个差异蛋白峰(P<0.05).其中质荷比(m/z)为3445,4260,8133和16 290的蛋白峰建立PBC诊断模型.该诊断模型能很好地把PBC患者从其他肝脏疾病患者和正常人群中区分出来,其敏感性为93.3%,特异性为95.1%.经双盲实验验证,该模型对PBC诊断的敏感性为92.9%,特异性为82.4%. 结论: 采用纳米磁性微球与蛋白质芯片阅读仪联用的蛋白指纹图谱技术可以检测PBC患者血清中的特异性蛋白标志物,并建立敏感性和特异性均较高的PBC诊断模型.     

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法研究原发性胆汁性肝硬化的血清多肽谱

目的应用弱阳离子交换磁珠提取多肽结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF-MS)分析原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的血清多肽谱,寻找具有潜在意义的血清标志物。方法收集105例血清样本,包括55例PBC患者、25例其他肝病患者和25例正常对照者血清样本,经弱阳离子交换磁珠纯化,MALDI-TOF-MS分析及ClinProTools生物信息学方法研究其血清多肽表达谱。结果在质荷比(m/z)1000～10 000 Da的范围内3组间共检测到158个血清多肽峰,其中83个有统计学意义(P<0.001),在PBC中表达上调的多肽有31个,表达下调的多肽有52个。组合m/z 1062.47、5356.13、4268.63、846.18、1945.31和6649.53Da 6个峰建立多肽诊断指纹图谱模型,该模型盲样验证的准确率在PBC组、正常对照组和其他肝病组分别为100%、81.8%和72.7%。结论可以利用MALDI-TOF-MS技术和ClinProTools软件来筛选PBC血清标志物,其在PBC诊断方面具有一定的价值。     

类风湿关节炎患者血清蛋白质指纹图谱检测及其临床意义

目的初步探讨基于判别分析建立的血清蛋白质指纹图谱模型在类风湿关节炎(RA)诊断中的临床意义.方法用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术及配套蛋白质芯片检测60例RA患者和31例健康人的血清蛋白质指纹图谱,并采用SPSS12.0软件判别分析处理数据和筛选标志物,以建立诊断模型.结果质荷比(m/z)为3 975 Da,6 433 Da和15 129 Da的3个蛋白质峰组合构建的诊断模型鉴别RA患者和健康人的敏感性为80.0%(48/60),特异性为80.6%(25/31).结论血清蛋白质指纹图谱在筛选RA患者血清中特异性蛋白标志物及其诊断方面具有一定价值.     

应用MALDI-TOF-MS技术分析HIV感染者血清多肽变化

目的用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 （matrix-assisted laser desorption/ionization ti me offlight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）技术,分析艾滋病病毒（HIV）感染者和健康人血清多肽图谱的变化。方法选取20例HIV感染者、24例健康对照者的血清,经Zipplate C18层析预分离后,运用MALDI-TOF-MS分析检测,获得HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱,并用SPSS 13.0软件对数据进行分析。随后,用质谱串联技术（MS/MS）对两个差异表达显著的多肽峰测定肽序列,在SWISS-PROT数据库进行多肽鉴定。结果在分子量为800~4 000D范围内,共发现500个多肽峰,其中11个多肽峰在HIV感染者组、正常对照组中表达均有显著差异（P〈0.05）,5个差异多肽在HIV感染者组中表达上调（m/z 1 418.67、1 465.67、1 777.82、1 864.82和2 080.23）,6个差异多肽在HIV感染者组中表达下调（m/z 904.71、920.73、1 076.73、1 521.79、1 552.75和2 080.78）;经质谱串联技术对两个表达显著差异的多肽峰测定肽序列,鉴定结果分别是纤维蛋白多肽（Fibrino-peptide）、激肽原（Kininogen processor）。结论HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱有显著差异,通过多肽指纹图谱找到的HIV相关多肽,为今后开发HIV诊断试剂和治疗药物,提供科学依据。     

肺结核蛋白指纹图谱诊断技术研究

目的探索应用蛋白质组学技术于肺结核诊断。方法从本院临床肺结核病例中,选择痰检测结核分枝杆菌培养阳性、阴性肺结核患者共130名,以健康者65名为对照,进行血清蛋白指纹图谱检测,分析其相关蛋白峰值并进行统计学处理。结果130例活动性肺结核患者,与65名正常人群血清蛋白质质谱数据的比较,5个蛋白峰(5335、8048、11683、11700 、11526m/z)有差异,有统计学意义(P<0.01)。该诊断模型判别的总准确率为92.3%（180/195）,特异度100%(65/65),灵敏度88.5%(115/130)。130例活动性肺结核患者中,菌（+）65例,质谱仪检测结果峰值为：5335 m/z 24例,11683 m/z 16例,8048 m/z 14例,11700m/z5例,占90.8%（59/65）;菌（ ）65例,峰值为：8048 m/z 20例,5335 m/z 14例,11526 m/z 8例,11683 m/z 7例,11700 m/z 6例,占84.6%（55/65）。结论血清蛋白质指纹图谱技术简便、快速,标本用量少,是筛选结核病特异性标志物的有效手段,有望成为活动性肺结核的早期辅助诊断指标。     

胸腔镜与蛋白指纹图谱技术在胸腔积液诊断中的应用

目的 探讨胸腔镜与蛋白指纹图谱检测技术（PFT）,在恶性和结核性胸腔积液早期诊断中的作用。 方法 2009年1月至2010年12月福建省福州肺科医院住院经影像学检查发现有胸腔积液,经内科胸腔镜检查、病理学（或细菌学）、胸腔积液蛋白指纹图谱检测临床确诊的121例住院患者,选择无其他并存病,经胸腔镜检测病理确诊的恶性胸腔积液患者30例（Ⅰ组）和结核性胸腔积液患者50例（Ⅱ组）,同时进行胸腔积液蛋白指纹图谱检测,分析其相关蛋白峰值并进行统计学处理。 结果 Ⅰ组和Ⅱ组行蛋白指纹图谱检测,两组间有7个差异蛋白峰（分别为5335、8048、11 700、11 670、15 982、11 683、7700 m/z）,依据蛋白峰值表达情况,以11 670、11 700 m/z的蛋白峰用于建立恶性胸腔积液诊断模型,诊断Ⅰ组阳性率达83.3%（25/30）,Ⅱ组为24.0%(12/50),两组差异有显著统计学意义（χ²=26.55,P<0.01）,倾向于判定恶性胸腔积液;其敏感度为83.3%（25/30）,特异度为76.0%（38/50）;以5335、8048 m/z用于建立结核性胸腔积液诊断模型,2种蛋白峰建立Ⅰ组与Ⅱ组的鉴别诊断模型结果,诊断Ⅰ组阳性率达16.7%（5/30）,Ⅱ组为52.0%(26/50),两组差异有显著统计学意义（χ²=9.86,P<0.01）,倾向于判定结核性胸深积液;其敏感度为52.0%（26/50）,特异度为83.3%（25/30）。 结论 胸液蛋白指纹图谱检测技术简便、快速,是鉴别结核性与恶性胸腔积液特异性标志物的有效手段,但尚需在判读方法上做进一步深入研究。     

基于Au蛋白芯片技术的狼疮肾炎患者尿蛋白标志物研究

目的 寻找狼疮肾炎(LN)患者尿蛋白标志物,探讨基于Au蛋白芯片技术预测LN的应用价值.方法 采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及Au蛋白芯片检测166例LN患者和对照者尿蛋白指纹图,通过t检验评价蛋白表达差异性,筛选LN患者尿标志蛋白并结合人工神经网络(ANN)技术建立诊断模型,评价其预测LN的价值.对部分筛选的差异蛋白通过比对标准蛋白质谱数据进行初步鉴定.结果 LN患者与对照者尿中差异蛋白质峰有24个(t值为-6.44～10.14,P<0.05),通过BPS软件筛选4863、9744、8762、33 832、67 403和80 806质荷比(m/z)蛋白质建立的ANN模型预测LN的灵敏度为100%(26/26),特异度为95%(38/40).其中5个11 700、22 509、33 832、67 403和80 806 m/z蛋向与标准蛋白质谱比对显示可能为β_2-微球蛋白、视黄醇结合蛋白、α_1-微球蛋白、白蛋白和转铁蛋白.结论 基于Au蛋白芯片技术的尿蛋白指纹图谱检测在LN的早期警示、判断蛋白尿类型及指导免疫抑制剂的使用中具有潜在应用价值.     

蛋白芯片联合SELDI-TOF-MS在卵巢癌诊断中的应用

目的用蛋白芯片联合表面增强激光解析离子化/飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）分析卵巢癌与对照血清中的差异表达蛋白来筛选与卵巢癌早期诊断和预后相关的肿瘤标志物。方法采用联合SELDI-TOF-MS及WXC2蛋白质芯片,对21例卵巢癌患者（实验组）及24例健康妇女（对照组）血清标本进行检测。结果在相对分子质量0~50 000 Da范围内,检测出69个差异蛋白峰。卵巢癌差异表达明显（P〈0.01）的蛋白峰8个,其中高表达的波峰3个,质荷比分别为5 927.6,8 719.3和11 729.8 Da,低表达的波峰5个,质荷比分别为4 073.8,4 158.4,4 186.7,4 290.2和8 162.5 Da。其中11 729.8 Da蛋白峰已经鉴定为血清淀粉样蛋白A1（SAA1）。结论SELDI-TOF-MS联合蛋白质芯片能够直接检测出卵巢癌患者血清中相对特异的蛋白峰,对于卵巢癌的诊断具有一定的临床意义。     

应用蛋白质组学技术对脂肪肝患者血清标志物的筛选

目的:用纳米磁珠与基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测脂肪肝患者血清蛋白质组,筛选候选标志物并建立诊断模型,初步探讨所建立的诊断模型在脂肪肝早期诊断中的临床意义.方法:95例中度和76例轻度脂肪肝患者均经B超证实,99名健康人血清.用WCX(弱阳离子交换型)纳米磁珠检测各血清标本获得血清蛋白指纹图谱.用Biomarker Wizard软件分析所获得的蛋白图谱找出差异蛋白,再用Biomarker Patterns建立诊断模型.扩大样本量,通过盲法分析进一步验证诊断模型的可靠性.结果:初始建模时,建立了由m/z为7626.2、24147.7、6118.2这3个差异蛋白峰组成的中度脂肪肝诊断模型,其敏感性为90.2%,特异性为93.9%.扩大样本盲法验证的敏感性为90.9%,特异性为92.0%.另选取了m/z为7626.2、3286.0、2760.7、2543.1、2746.1这5个差异蛋白峰组成的模型,能把轻度从中度脂肪肝患者中区分出来:选取m/z为7626.2、11721.0、24141.7、8529.1、9042.7这5个差异蛋白峰组成的模型,能将轻度脂肪肝患者从健康对照中区分出来.结论:蛋白质组学技术可筛选出有意义的血清生物标志差异蛋白.由三个差异表达蛋白及其特定组合构成的诊断模型可以区分中度脂肪肝患者与健康人,由五个特定组合构成的差异表达蛋白的模型能区分轻度、中度脂肪肝患者及区分轻度脂肪肝患者与健康对照.     

SELDI技术应用于肿瘤疗效监测的初步研究

目的应用表面增强的激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术对卵巢癌及喉癌患者治疗前后血清进行疗效相关标志分子的筛选,评价此技术在肿瘤疗效监测方面的可行性。方法应用SELDI-TOF-MS技术分别对20例卵巢癌患者化疗前后及51例喉癌患者手术前后血清蛋白质指纹图谱进行分析,用Biomarker WizaM软件对结果进行统计学分析。结果卵巢癌患者化疗后血清中质荷比（m／z）4475的蛋白峰（14／20）较化疗前表达增高;喉癌患者术前血清高表达m／z13741蛋白峰,术后21例患者该蛋白表达降低,其中11例（11／21）术后m／z13741、m／z5192和m／z15100的蛋白峰表达均较术前显著下降（P〈0．01）。结论SELDI-TOF-MS技术能灵敏的检测肿瘤患者手术及化疗前后血清中的差异蛋白峰。该技术的微创、灵敏、微量等特点将可能在肿瘤疗效监测及肿瘤的个体化治疗研究中具有较好的应用前景。     

弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质质谱分析的初步研究

目的 分析弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质组学变化。方法 16只同窝配对的C57BL/6J小鼠, 随机分成弓形虫急性感染组和对照组, 每组8只。弓形虫急性感染组每鼠腹腔感染经CF?11纤维素纯化的RH株弓形虫速殖子 （1×104 /ml） 0.2 ml, 对照组每鼠腹腔接种0.2 ml 灭菌生理盐水。感染后4 d, 处死全部小鼠, 应用弱阳离子 （WCX） 纳米磁性微球捕获小鼠血清蛋白, 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 （MALDI?TOF?MS） 技术检测两组小鼠血清蛋白质变化, 并采用Au? toflex analysis 与Clin ProTools 软件进行分析与比较。结果 在分子量为1 000~16 000 Da区段, 与对照组小鼠血清蛋白指纹图谱比较, 弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质谱有13种蛋白表达差异有统计学意义, 其中9种蛋白质表达上调, 4种蛋白质表达下调。表达上调的多肽质荷比 （m/z值）分别为1 932.76、 1 976.85、 2 090.53、 5 004.5、 5 776.01、 5 803.05、 5 847.99、 5 877.51和7 501.58, 表达下调的多肽m/z值分别为1 866.40、 4 063.71、 8 120.31和8 203.83。结论 弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质组发生显著改变, 采用WCX纳米磁性微球联用MALDI?TOF?MS技术可检出弓形虫急性感染小鼠血清中的特异性蛋白标志物。     

19例男性原发性胆汁性肝硬化患者临床分析

目的分析男性原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的临床特征及预后。方法回顾性分析19例男性PBC患者的临床资料。结果本组患者平均年龄54±17岁,其中17例(89%)为中老年;确诊时无症状者为7例(36.7%),失代偿期肝硬化9例(47.4%);100%患者血GGT和ALP升高,78.9%ALT和AST轻中度升高;2例(10.5%)合并干燥综合征;13例(68.4%)患者AMA阳性,14例(73.7%)AMA-M2阳性。经熊去氧胆酸治疗,早期患者病情有不同程度的好转。结论男性PBC患者起病隐匿,特异性自身抗体检测阳性率略低,早期诊断困难较大。     

蛋白芯片技术对肝细胞癌组织蛋白谱的建立及标志蛋白的筛选

目的:应用表面增强激光解吸附电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)对肝细胞癌组织的蛋白表达谱进行分析,从中筛选出标记蛋白.方法:采用CM10芯片及SELDI-TOF-MS技术对肝细胞癌组织26例和肝硬化组织18例进行蛋白指纹图谱检测分析;比较高、中、低分化肝细胞癌组织,不同TNM分期肿瘤以及AFP阴、阳性肝细胞癌组织的蛋白表达差异,所得结果均采用Biomarker Wizard软件进行分析;通过查询蛋白库,对特定分子质量所对应的标记蛋白进行初步确定.结果:肝细胞癌和肝硬化组织蛋白表达图谱之间存在16个稳定的标志蛋白,7个蛋白在肝细胞癌组织中表达上调.9个蛋白在肝细胞癌组织中表达下调,其中4.7 kDa,7.2 kDa和9.8 kDa蛋白峰差异性最明显;中分化和高分化肝细胞癌之间存在11个标志蛋白;通过查询蛋白库ExPasy并进行筛选,初步确定特定分子质量所对应的蛋白.结论:采用SELDI-TOF-MS技术,证实在肝细胞癌组织中存在多种高度特异性低分子蛋白.     

Analysis of the urinary peptidome associated with Helicobacter pylori infection

AIM:To investigate the relationship between urinary peptide changes and Helicobacter pylori(H.pylori) infection using urinary peptidome profiling.METHODS:The study was performed in volunteers(n = 137) who gave informed consent.Urinary peptides were enriched by magnetic beads based weak cation exchange chromatography and spectrums acquired by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight(MALDI-TOF) mass spectrometry(MS).ClinProTools bioinformatics software was used for statistical analysis and t...     

Detection of serum tumor markers in multiple myeloma using the CLINPROT system

The discovery of biomarkers unique to multiple myeloma (MM) is of great importance to clinical practice. This study was designed to identify serum tumor marker candidates of MM in the mass range of 700-10000 Da. Serum samples from 48 MM patients and 74 healthy controls were collected and classified into a training dataset (MM/controls: 26/26) and a testing dataset (MM/controls: 22/48). Weak cation exchange magnetic beads, MALDI-TOF MS and analytic software in the CLINPROT system were used to do serum sample pre-fractionation, data acquisition and data analysis. Peak statistics were performed using Welch's t test. Mass spectra from the two model generation cohorts in the training dataset were analyzed by the Supervised Neural Network Algorithm (SNNA) in ClinProTools((TM)) to identify the mass peaks with the highest separation power. The resulting diagnostic model was subsequently validated in the testing dataset. A total of 89 discriminating mass peaks were detected by ClinProTools((TM)) in the range of 700-10000 Da using a signal to noise threshold of 3.0. Of these, 49 peaks had statistical significance (P < 0.0001) and four peaks with the highest separation power were picked up by SNNA to form a diagnostic model. This model achieved high sensitivity (86.36 %) and specificity (87.5 %) in the validation in the testing dataset. Using CLINPROT system and MB-WCX we found four novel biomarker candidates. The diagnostic model built by the four peaks achieved high sensitivity and specificity in validation. CLINPROT system is a powerful and reliable tool for clinical proteomic research.     

经皮脾门静脉核素显像预测肝硬化食管静脉曲张破裂出血的临床研究

为探讨经皮脾门静脉核素显像预测肝硬化食管静脉曲张破裂出血的价值,对40例肝炎后肝硬化和12例非肝病患者（对照组）进行经皮脾门静脉核素显像和胃镜检查。结果显示,根据心-肝曲线特点将肝硬化分为门静脉高压无分流型（Ⅰ型）、有分流型（Ⅱ型）、有侧支循环型（Ⅲ型）及完全肝外分流型（四型）。肝硬化组门体分流指数（PSSI）为0.541±0.128,显著高于对照组0.192±0.086（P＜0.01）;Ⅲ型和Ⅳ型的PSSI显著高于Ⅰ、Ⅱ型（P＜0.01）;F2、3组与F0、1组、红色征（＋）组与红色征（－）组,以及出血组与非出血组之间PSSI均有显著性差异（P＜0.01）,PSSI＞0.62时,食管静脉曲张破裂出血发生率显著增高。提示经皮脾门静脉核素显像可作为预测肝硬化食管静脉曲张破裂出血的重要手段。     

原发性胆汁性肝硬化患者血清抗线粒体抗体、白介素10的表达

目的检测原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者血清抗线粒体抗体（auti—mitochondriaantibodytypeⅡ，AMA—M2）及IL-10水平的表达，研究其与PBC的相关性。方法收集24例PBC患者及20例原发性肝癌（PLC）患者血清样本，并没24例健康对照组，样本随机编号冷冻-20℃保存待检；应用酶联免疫吸附双抗夹心法（ELISA）对AMA—M2及IL—10指标进行检测，并对其一般资料、生物化学等进行分析。结果PBC组和PLC组AMA-M2阳性率分别为100％（24／24）、5％（1／20）；对照组AMA—M2无阳性，三组间有显著性差异（P〈0．01）。PBC组、PLC组和对照组IL-10水平分别为（56．77±25．0）pg／mL，（80．52±17．30）pg／mL和（41．01±15．32）pg／mL，三组间有显著性差异（P〈0.01）。结论血清AMA—M2阳性可作为PBC实验室诊断的重要特征指标；PBC患者和PLC患者免疫功能异常与IL—10高水平表达密切相关。     

肝癌、肝硬化患者前期处理后腹水中差异蛋白质组学分析及意义

目的 分析肝癌、肝硬化患者腹水前期处理后的蛋白质组学变化,并探讨其意义.方法 采用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术（SELDI-TOF-MS技术）对27例肝癌（肝癌组）、46例肝硬化患者（肝硬化组）腹水前期处理后蛋白质进行检测,对蛋白质波谱进行分析.结果 肝癌组在7 852 Da、11 467 Da蛋白质表达量高于肝硬化组,在4 475 Da蛋白质表达量低于肝硬化组（P均＜0.05）.SELDI-TOF-MS技术检测7 852 Da、11 467 Da、4 475 Da区分肝癌和肝硬化灵敏度为81.48％ （22/27）,特异性为86.96％ （40/46）.结论 腹水经前期处理后,肝癌、肝硬化患者在7 852 Da、11 467 Da、4 475 Da蛋白质峰有显著差异,通过这三个蛋白质峰检测可以区分肝癌与肝硬化.