白细胞介素-17与Th17细胞在小鼠肾移植急性排斥反应中的表达及意义

目的研究Thl7细胞及相关因子白细胞介素17(IL-17)在小鼠肾移植排斥反应中的表达及意义。方法建立小鼠肾移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组,在移植术后3 d和7 d,分别应用酶联免疫吸附实验检测两组小鼠血清中IL-17含量,应用流式细胞术检测移植肾中浸润淋巴细胞中Th17细胞数量,取移植肾经10%福尔马林固定后行常规病理检查。结果与同系移植组相比,急性排斥反应组术后第3天及第7天血清中IL-17含量均升高(P<0.05),且术后第7天时IL-17含量明显高于第3天(P<0.05);急性排斥反应组移植肾中浸润淋巴细胞中Th17细胞比例在术后第3天及第7天较同系移植组均明显增多(P<0.05),且术后第7天时Th17细胞比例明显高于第3天(P<0.05);病理组织学检查急性排斥反应组随着移植时间的延长,排斥反应逐渐增强。结论 Thl7细胞在肾移植排斥反应发生发展中可能起着非常重要的作用,对移植脏器中IL-17的检测可作为急性排斥反应早期诊断的预见性和特异性指标。     

IL-17在小鼠肾移植急性排斥反应早期诊断中的作用

目的:研究Th17细胞及相关因子白细胞介素17 (IL-17)在小鼠肾移植排斥反应中的表达及意义.方法:建立小鼠肾移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组;在移植术后3,7d分别应用ELISA检测2组小鼠血清中IFN-γ和IL-17的含量,应用流式细胞技术检测移植肾中浸润淋巴细胞中Th1和Th17细胞数量,取移植肾经10％甲醛固定后行常规病理检查.结果:与同系移植组相比,急性排斥反应组术后第3天血清IFN-γ含量无明显差异而II-17含量显著增高(P＜0.05),术后第7天血清IFN-γ和IL-17含量均显著增高(P＜0.05);急性排斥反应组中血清IFN-γ和IL-17含量术后第7天较第3天均显著增高(P＜0.05);急性排斥反应组移植肾中浸润淋巴细胞中Th1与Th17细胞比例在术后第3天及第7天较同系移植组均明显增多(P＜0.05);急性排斥反应组中移植肾中浸润淋巴细胞中Th1与Th17细胞比例术后第7天明显高于第3天(P＜0.05);病理组织学检查急性排斥反应组随着移植时间的延长,排斥反应逐渐增强.结论:Th17细胞在肾移植排斥反应的发生发展中可能起着非常重要的作用,对受体血清中细胞因子IL-17的检测可作为急性排斥反应早期诊断的预见性和特异性指标.     

IL-17参与小鼠心脏移植排斥反应的实验研究

目的 研究Th17细胞相关因子白细胞介素17(IL-17)在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义.方法 建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组.观察2组供心存活时间,应用RT-PCR检测移植心脏IL-17、核孤独受体γt(RORγt)、干扰素-γ(IFN-γ)mRNA在移植术后1、2、3、4、5、6、7、8 d的动态表达水平.免疫荧光法观察移植术后第4天移植心脏内CD4+、CD8+T细胞中IL-17的表达情况.结果 RT-PCR检测显示,在急性排斥反应组中,IL-17和RORγt mRNA的表达都早于IFN-γ,在移植术后第2天即可于移植心脏中检测到,其表达量在术后第4天均达到高峰,随后逐渐下降,并分别在术后第6天和第7天无表达.免疫荧光结果显示,急性排斥组移植心脏内有大量CD4+、CD8+T细胞浸润,细胞因子IL-17主要由CD4+T细胞分泌.结论 Th17细胞在移植排斥反应的发生发展中可能起着非常重要的作用,对移植脏器中细胞因子IL-17的检测可作为急性排斥反应早期诊断的预见性和特异性指标.     

IL-17在小鼠肾移植急性排斥反应早期诊断中的作用

目的:研究Th17细胞及相关因子白细胞介素17 (IL-17)在小鼠肾移植排斥反应中的表达及意义.方法:建立小鼠肾移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组;在移植术后3,7d分别应用ELISA检测2组小鼠血清中IFN-γ和IL-17的含量,应用流式细胞技术检测移植肾中浸润淋巴细胞中Th1和Th17细胞数量,...     

IL-17在大鼠心脏移植急性排斥反应中的作用

目的 观察白细胞介素17(IL-17)在大鼠心脏移植急性排斥反应中含量的变化及其在排斥反应早期诊断中的作用.方法 采用改良心脏移植术式建立大鼠移植模型.实验组取15只SD大鼠的心脏移植于Wistar 大鼠,对照组取15 只Wistar大鼠的心脏移植于Wistar大鼠.实验组于术后第1、3天和发生急性排斥反应时处死大鼠取血和供体心脏,对照组于术后第1、3、8天获取标本(每次5只).应用酶联免疫吸附实验方法检测血清中IL-17的含量,心脏经过固定和染色后置显微镜下观察心肌组织.结果 实验组急性排斥反应平均发生时间为(7.8±2.9)d.实验组中术后第3天和排斥反应发生时血清IL-17含量明显高于对照组(t=-3.126、-11.043,P<0.05);排斥反应发生时IL-17的含量较术后第1天和第3天显著增高(F=15.113,q=3.72、5.21,P<0.05). 对照组术后第1、3、8天IL-17差异无统计学意义 (t=-0.307～0.097,P>0.05).实验组排斥反应发生时心脏排斥反应病理分级为 4 级,对照组为 0 级.结论 在大鼠心脏移植急性排斥反应发生前 5 d 血清 IL-17 水平已明显升高,排斥发生时达高峰,监测血清 IL-17 的含量可作为早期诊断急性排斥反应的一种方法.     

Treg／Th17平衡的改变在大鼠原位气管移植急性排斥发生中的作用

目的研究移植排斥急性期Treg与Th17细胞平衡的改变在介导移植排斥中的作用。方法以Lewis大鼠为受体,接受BN大鼠（异系移植纽）、Lewis大鼠（同系移植组）气管进行原位移植,未移植的正常Lewis大鼠作为对照。在移植后第7天处死大鼠,取脾脏和颈部淋巴结制备单个核细胞,进行细胞内Foxp3（Treg）或IL-17（Th17）染色后流式细胞仪检测分析。结果移植后第7天异系移植组大鼠与其余两组比较,症状较重。发生较严重免疫排斥反应。流式细胞仪检测结果显示异系移植组脾脏和淋巴Foxp3’Treg比例与其余两组比较未有明显变化：异系移植组脾脏和淋巴结Th17细胞的比例与其余两组比较有显著升高,而同系移植组与正常对照组脾脏和淋巴结Thl7细胞比例没有差别。结论急性移植排斥时Treg-与Th17细胞比例失衡,Th17细胞分化增强．比例增加．提Treg／Th17失衡可能是急性期移植排斥发生的重要因素。     

常山酮对大鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用

目的:研究常山酮(HF)对大鼠异基因心脏移植急性排斥反应的影响及相关机制。方法:SPF级近交系Wistar雌性大鼠30只,SD雌性大鼠60只,随机分为3组行颈部心脏移植手术:同系对照组15对(供、受体均为SD大鼠,术前第1天及术后均用生理盐水灌胃),排斥组15对(供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠,术前第1天及术后均用生理盐水灌胃)及HF治疗组15对(供、受体同排斥组,术前第1天及术后均用HF溶液灌胃)。移植后第3,5,7天每组各处死5只受体大鼠,留取移植心行组织病理学及分子生物学检测。结果:与排斥组相比,HF治疗组移植心存活时间延长,免疫排斥反应减轻,血清中白细胞介素-17(IL-17)呈低水平,供心心肌组织中相关细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)呈低表达,具有统计学差异。结论:常山酮可以有效抑制大鼠心脏移植模型体内由于急性排斥反应引起的多种促炎性细胞因子的异常升高,具有抗急性移植排斥反应的潜能,其机制可能与抑制了Th17分泌IL-17减少相关。     

Cy7.SE标记ICOS-Ab荧光示踪技术评估小鼠心脏移植术后急性排斥反应

目的 探讨以T细胞活化表达的可诱导共刺激分子(inducible co-stimulatory molecule, ICOS)为基础的荧光示踪技术无创诊断小鼠心脏移植后急性排斥反应的可行性。方法 以小鼠颈部异位心脏移植为模型,分为同系移植、同种移植、同种移植+他克莫司(tacrolimus,FK506)治疗(同种移植治疗组)及同种移植治疗后停药组,分别在移植术后1、3、5、7 d,采用荧光染料Cy7.SE标记抗小鼠ICOS抗体(Cy7.SE-ICOS-Ab)经尾静脉注入移植小鼠,用荧光实时显像仪观察移植物荧光图像变化;同时用流式细胞仪检测各组小鼠脾脏T细胞表面ICOS表达,H-E染色分析心脏移植物病理改变。结果 同系移植及同种移植治疗组小鼠移植术后各时间点基本不显影;同种移植术后1 d,移植物荧光图像无明显变化,但术后3、5、7 d荧光逐渐增强,术后7 d时荧光强度最明显;同种移植治疗后停药组停药3 d移植物荧光强度逐渐增强,停药5、7 d后强度明显增强。H-E染色表明:各时间点同系移植及同种移植治疗组小鼠心脏移植物无明显排斥反应;同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)1 d移植物无明显排斥反应,术后3、5、7 d排斥反应逐渐出现并加重。流式细胞仪检测显示:术后1 d,各组脾脏T细胞表达ICOS水平无明显差异;同系移植及同种移植治疗组在各时间点基本不表达ICOS,但同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)3、5、7 d ICOS表达逐渐增加(P<0.05)。结论 ICOS表达强度与心脏移植后排斥反应强度有关,荧光标记的ICOS抗体可能有助于无创评估移植术后急性排斥反应的发生及程度。     

抗白细胞介素6单克隆抗体治疗延长小鼠同种心脏移植物存活时间的实验研究

目的 观察应用抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6 monoclonal antibody,anti-IL-6 mAb)对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法 建立小鼠颈部异位心脏移植模型.实验动物随机分为同系移植组、移植治疗组(每日注射3 g/L anti-IL-6 mAb 0.1 mL)和移植模型组(注射等量生理盐水).ELISA法检测受鼠移植术后第3、6 天外周血IL-6的表达水平,观察各组移植心脏存活时间,病理分析检测排斥反应程度,流式细胞术(FCM)检测各组受鼠脾脏及移植心脏中CD4+ CD25+调节性T细胞比例变化,RT-PCR检测移植心脏IL-6、IFN-γ、IL-17、RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平.结果 ①治疗组外周血IL-6表达水平较模型组明显降低(P<0.01);②治疗组移植心脏存活时间较模型组明显延长[(22.0±2.3)d vs(7.7±0.8)d,P<0.01],排斥反应病理分级明显下降(Stanford 2级);③治疗组移植心脏中IFN-γ、IL-6、IL-17和RORγt mRNA表达水平较模型组显著下降(均P<0.05),脾脏及移植心脏中浸润的CD4+ CD25+调节性T细胞比例及Foxp3 mRNA表达水平均明显升高,与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05).结论 anti-IL-6 mAb治疗可抑制Th1、Th17型细胞因子的分泌,促进CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞产生,抑制单个核细胞浸润并有效延长小鼠同种移植心脏的存活时间.     

非T细胞来源细胞因子在小鼠心脏移植急性排斥反应模型中的表达

目的研究急性排斥反应性细胞因子在小鼠心脏移植中的表达状况,进一步阐明器官移植急性排斥反应的复杂发生机制。方法采用C57BL/6和Balb/c近交系小鼠,建立小鼠腹腔异位心脏移植模型。随机分为Balb/c-Balb/c同基因对照组(A组)和C57BL/6-Balb/c急性排斥反应组(B组)两组,每组26只。分别于移植术后1、3、5、7 d各处死5只小鼠留取移植心脏标本,采用RT-PCR及W estern印迹方法动态检测组织中IL-15、IL-2、TNF-α及IFN-γ的表达状况,同时行HE染色检测。另外,A、B两组各保留6只小鼠设为亚组,观察移植心脏存活时间。结果A组移植心均获长期存活(>100 d),B组移植心存活时间为8.0 d±0.9 d(t=251.95,P<0.01)。A组各个时间点移植心均未发现排斥现象,B组术后第3天开始出现排斥反应。A组各时间点IL-15 mRNA与TNF-αmRNA呈弱表达,IL-2 mRNA与IFN-γmRNA无表达。B组IL-15 mRNA、TNF-αmRNA、IL-2 mRNA及IFN-γmRNA均明显升高,于第5天达到高峰。A组各时间点可见IL-15、TNF-α、IFN-γ和IL-2蛋白的低水平表达;B组IL-15与IL-2自术后第3天始、TNF-α与IFN-γ自术后第1天始,蛋白表达水平开始升高。结论多种细胞因子,包括非T细胞来源细胞因子,参与了同种异体急性排斥反应的发生。     

肾移植术后慢性排斥患者外周血Th17细胞的表达

【目的】探讨外周血Th17细胞及相关细胞因子与肾移植术后慢性排斥反应发生的关系。【方法】自2007年1月至2010年8月,在中山大学附属第一医院和第三医院收集尿毒症（尿毒症组）、肾移植术后6个月内未发生慢性排斥反应（非慢排组）及6个月内发生慢性排斥反应（慢排组）患者的外周血共75例,其中每组各25例。采用流式细胞术（FCM）检测外周血中CD4+T细胞中Thl7细胞的频率。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中Th17细胞相关细胞因子白介素-17 (IL-17)、白介素-22 (IL-22)和白介素-23 (IL-23)的水平。分析比较组间差异。【结果】术后慢排组Thl7细胞的频率为（3.82±1.7）%,明显低于非慢排组（22.0±11.0）%和尿毒症组（17.2±8.0）%,差异均有统计学意义（P < 0.01）。肾移植术后慢排组患者产生IL-17的量为（7.8±1.3）pg/mL,明显低于非慢排组（17.0±6.0）pg/mL（P < 0.05）和尿毒症组患者（20.4±9.0）pg/mL（P < 0.01）,差异均有统计学意义。IL-22和IL-23在三组间差异无统计学意义（P > 0.05）。【结论】外周血中Th17细胞可能通过分泌细胞因子IL-17参与了肾移植术后慢性排斥反应的发生。     

Immune responses on allograft heart transplantation in inbred rats infected with Echinococcosis multilocularis

Background  Alveolar echinococcosis (AE) is caused by the metacestode stage of Echinococcus multilocularis (E. multilocularis) and is a rare but life-threatening disease. This disease commonly is characterized by an infiltrative, tumor-like growth of the E. multilocularis metacestode in the liver of human. Liver transplantation is an effective therapy for end-stage of hepatic AE, but the characteristics of host immunity associated with E. multilocularis infection with organ transplantation are poorly defined. We hereby aimed to study the immunological status and allograft heart survival in inbred rats with E. multilocularis infection.

Methods  Rat models of AE were established by injecting the E. multilocularis suspension made from E. multilocularis infected tissues into the abdomen of Lewis (LEW) rats. Three months later, in the experimental group, allograft heart transplantation was performed from Brown-Norway (BN) rats to the E. multilocularis infected LEW rats. In the control group, we transplanted hearts from BN rats to healthy LEW rats. The influence of the disturbed immune system in E. multilocularis infected rats on the heart transplantation was assessed, including observation of allograft heart survival time, histopathological examination of grafts and immunohistochemical examination of infiltrating cells (CD4⁺ T cells, CD8⁺ T cells and eosinophile granulocytes), measurement of interleukin (IL)-4 and interferon (IFN)-γ in the serum by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and analysis of CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells in peripheral blood by fluorescence activated cell sorting (FACS) flow cytometric analysis.

Results  The survival time of recipients in the experimental group was prolonged compared with those in the control group. The numbers of graft infiltrating CD8⁺ T cells were decreased whereas the graft infiltrating eosinophil granulocytes (CD15⁺) were increased in grafts in the experimental group (P <0.05). Furthermore, the proportion of CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells in the peripheral blood was 10.8% on average in the experimental group, which was significantly higher than that in the control group (6.1%). In addition, the level of serum IL-4 in E. multilocularis infected rats was higher than that in the control group rats, whereas the level of serum IFN-γ in experimental group was lower than that in the control group when graft rejection occurred (P <0.05).

Conclusions  This study suggests that E. multilocularis infection could prolong the allograft survival time through the polarization of Th1/Th2-type cells and induction of CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells. This strategy may provide a new idea for establishing transplantation tolerance.

     

Th17细胞相关细胞因子在大鼠小肠移植急性排斥反应中的作用

目的 通过对大鼠小肠移植FK506预处理模型研究,探讨Th17细胞相关细胞因子在大鼠小肠移植急性排斥反应中的表达。根据病理表现及相关细胞因子表达,进一步探究Th17细胞相关因子在大鼠小肠移植急性排斥的作用机理,试图为预防小肠移植急性排斥损伤提出新思路。方法 雄性健康F344大鼠5对及Lewis大鼠10对,6~8周龄,采用数字表法随机分为对照1组(F344 5只、Lewis 5只)、对照2组(Lewis大鼠5对)和实验组(F344 5只、Lewis 5只)。采用供体肠系膜上动脉-受体腹主动脉端侧、供体门静脉-受体下腔静脉端侧吻合法,供体肠管近端旷置远端回肠-回肠端侧吻合的异体全段性小肠移植术式。实验组:FK506按2 mg/Kg的剂量实验前3日每日肌肉注射,手术当日及术后7 d,按0.3 mg·kg^-1·d^-1肌肉注射。术后7 d处死受体大鼠或濒死大鼠,取供体肠管行HE染色及免疫组织化学染色观察病理变化,右心室穿刺取血用ELISA方法检测血清中IL-17、IL-23、IL-6、TGF-β、IFN-γ的含量。结果 在大鼠小肠移植急性排斥反应模型中,移植肠管的黏膜发生明显的病理形态学改变。对照1组小肠黏膜的病理形态学改变最明显,实验组病理学改变相对较轻,对照2组大鼠小肠黏膜改变最轻。免疫组织化学染色提示巨噬细胞浸润以对照1组最明显,其次为实验组,对照2组浸润最轻。实验组和对照组的大鼠静脉血血清中的IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β平均浓度大体趋势相同,各种细胞因子以对照1组最高,实验组次之,对照2组最低。结论 在大鼠小肠移植模型中,FK506预处理能减轻小肠移植急性排斥反应造成的黏膜损伤,有利于移植受体的存活。其机理与减少移植肠管巨噬细胞的浸润有关。对照1组和实验组大鼠血液中IL-17、IL-23等细胞因子水平均值都高于对照2组,提示Th17相关因子参与急性排斥反应过程。阻断Th17相关因子产生可能会减轻小肠移植急性排斥反应损伤。     

小肠移植排斥反应期移植肠基因表达的研究

目的 了解大鼠小肠移植排挤反应期移植肠粘膜白细胞介素２（ＩＬ－２）、γ于扰素（ＩＦＮ－γ）、穿孔素、粒细胞酶Ｂ的ｍＲＮＡ表达的变化。方法 选用近交系大鼠Ｆ３４４／Ｎ和Ｗｉｓｔａｒ／Ａ进行全小肠异移植,实验分４组,第１组：非手术对照组;第２组：同基因移植对照组;第３组：异基因移植组;第４组：环孢菌素Ａ治疗组（６ｍｇ．Ｋｇ＾－１．ｄ＾－１）。术后第３、５、７天取各组动物移植肠标本进行病理学检查,检测移     

先天性心脏病术后肺部感染与Th17/Treg细胞的相关性

目的探讨Th17/Treg细胞及其细胞因子在先天性心脏病术后肺部感染患儿中的变化及意义。方法选取先天性心脏病行手术治疗的患儿69例,其中术后发生肺部感染47例为肺部感染组,根据严重指数（PSI）分为轻度感染组、重度感染组,无感染组22例。采用流式细胞分析法检测外周血中 Th17 细胞、Treg 细胞占 CD4+T 细胞的比例,酶联免疫吸附法（ELISA）检测所有研究对象血清白细胞介素（IL）-6、IL-10、IL-17、IL-21、转化生长因子-β（TGF-β）含量,检测凝血指标,并记录患者入院第1天血清C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、红细胞沉降率（ESR）、白细胞（WBC）计数等实验室指标;应用Pearson法分析分析 Th17 细胞与 Treg 细胞的比例与肺部感染指标的相关性;采用logistic回归分析法评估先天性心脏病患者术后肺部感染影响因素。结果与无感染组相比,轻度感染组CD4+Th17细胞比例、Th17/Treg细胞比显著升高（P<0.05）,重度感染组CD4+Th17、CD4+CD25+Treg细胞比例、Th17/Treg细胞比均显著升高（P<0.05）;与轻度感染组相比,重度感染组CD4+Th17、CD4+CD25+Treg细胞比例、Th17/Treg细胞比均显著升高（P<0.05）;与无感染组相比,轻度感染组与重度感染组IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平升高 （P<0.05）;与轻度感染组相比,重度感染组IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平升高（P<0.05）;Pearson分析显示：CD4+Th17比例与CRP、PCT、BNP呈正相关（r=0.570、0.623、0.515,P＜0.05）;CD4+、CD25+Treg比例与BNP呈正相关（r=0.513,P<0.05）,与CRP、PCT呈一般正相关（r=0.315、0.360,P<0.05）;Th17/Treg比例与CRP、PCT、BNP呈显著正相关（r=0.562、0.613、0.596,P<0.05）。结论Th17/Treg 细胞失衡可能直接参与先天性心脏病术后肺部感染,并与病情发展相关。