MiR-26b增强顺铂对宫颈癌细胞株Hela的杀伤活性

目的:研究microRNA-26b(miR-26b)是否能增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤活性及机制。方法:用荧光定量PCR方法检测人正常宫颈上皮细胞系CRL-2614及宫颈癌细胞系Hela、SiHa和C-33a miR-26b的表达水平。MTT法检测顺铂单独治疗及联合miR-26b治疗对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。利用生物信息学及western blot方法验证miR-26b是否调节Hela细胞Mcl-1的表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对miR-26b联合顺铂杀伤Hela细胞疗效的影响。结果:宫颈癌细胞系Hela(0.21±0.04)、SiHa(0.42±0.03)和C-33a(0.33±0.03)的miR-26b的相对表达水平显著低于正常宫颈上皮细胞系CRL-2614 (1.00±0.05)。miR-26b联合1mmol/L顺铂治疗组对Hela细胞的杀伤活性(细胞活力抑制率为52.6±6.9)显著高于1mmol/L顺铂单治疗组(细胞活力抑制率为6.7±3.5)。miR-26b转染后,Hela细胞Mcl-1的蛋白表达水平下降。miR-26b联合1mmol/L顺铂在Mcl-1表达载体转染后对Hela细胞的杀伤活性(细胞活力抑制率为19.6±6.7)显著低于未转染Mcl-1表达载体的miR-26b联合1mmol/L顺铂组(细胞活力抑制率为55.7±7.6)。结论:MiR-26b通过靶向于Mcl-1增强顺铂对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。     

MiR-26b增强顺铂对宫颈癌细胞株Hela的杀伤活性研究

目的观察micro RNA-26b(mi R-26b)联合顺铂对宫颈癌细胞的杀伤效果,并探讨其作用机制。方法荧光定量PCR方法检测人正常宫颈上皮细胞系CRL-2614及宫颈癌细胞系Hela、SiHa和C-33a的mi R-26b表达水平。MTT法检测顺铂单独治疗及联合mi R-26b治疗对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。利用生物信息学及Western blot方法验证mi R-26b是否调节Hela细胞Mcl-1表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对mi R-26b联合顺铂杀伤Hela细胞疗效的影响。结果宫颈癌细胞系mi R-26b表达水平:Hela细胞为(0.21±0.04),Si Ha细胞为(0.42±0.03),C-33a细胞为(0.33±0.03),显著低于正常宫颈上皮细胞系CRL-2614的(1.00±0.05)(P0.05)。mi R-26b联合1μmol/L顺铂治疗组对Hela细胞的杀伤活性[细胞活力抑制率为(52.6±6.9)%]显著高于1μmol/L顺铂单治疗组[细胞活力抑制率为(6.7±3.5)%]。mi R-26b转染后,Hela细胞Mcl-1蛋白表达水平下降。mi R-26b联合1μmol/L顺铂在Mcl-1表达载体转染后对Hela细胞的杀伤活性[细胞活力抑制率为(19.6±6.7)%]显著低于未转染Mcl-1表达载体的mi R-26b联合1μmol/L顺铂组[细胞活力抑制率为(55.7±7.6)%]。结论 Mi R-26b通过靶向于Mcl-1增强顺铂对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。     

苦参碱诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡作用

目的:研究不同浓度的苦参碱(Mat)对宫颈癌Hela细胞株的体外增殖抑制作用。方法:采用体外细胞培养技术,以不同浓度的Mat作用于宫颈癌Hela细胞,相同条件下培养24h、48h、72h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定Mat对Hela细胞的增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:不同浓度Mat在体外均能不同程度抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并且作用呈现时间-剂量依赖性;苦参碱诱导Hela细胞凋亡率增加。结论:Mat有抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡作用。     

VEGF-C对宫颈癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨VEGF-C对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT比色法,检测不同浓度的VEGF-C对宫颈癌Hela细胞增殖的结果:及采用流式细胞仪检测VEGF-C联合顺铂(DDP)对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。结果:随着VEGF-C的浓度的逐渐升高,由50ng/ml、100ng/ml、150ng/ml、升至200ng/ml,Hela细胞的增殖率逐渐增加;不同浓度的VEGF-C预处理Hela细胞48h后,细胞的凋亡率依次下降。结论:VEGF-C能促进宫颈癌Hela细胞的增殖,抑制DDP诱导宫颈癌细胞Hela的凋亡。     

PTEN影响宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性

目的:通过转染PTEN基因表达载体,提高宫颈癌Hela细胞中PTEN的表达水平,观察能否影响Hela细胞对顺铂的敏感性,并探讨其分子学机制.方法:将培养的宫颈癌Hela细胞分为空白对照(未转染质粒的Hela细胞)、质粒对照(转染空质粒的Hela细胞)和PTEN转染(转染PTEN表达载体的Hela细胞)3组.分别用RT-PCR和Western检测各组Hela细胞中PTEN的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测各组Hela细胞对顺铂的化学敏感性;RT-PCR检测各组Hela细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的表达水平.结果:PTEN转染组Hela细胞中PTEN的表达水平比另2组细胞显著增高(P＜0.01);经顺铂处理后,PTEN转染组Hela细胞生长抑制率比其它2组显著增高(P＜0.01),PTEN转染组Hela细胞中PI3K被显著抑制(P＜0.01).结论:PTEN能增强宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,它可能通过下调Hela细胞中PI3K而导致Hela细胞对顺铂耐药性下降.     

二氯乙酸盐通过促进Mcl-1降解诱导宫颈癌细胞凋亡

目的 探讨二氯乙酸盐(dichloroacetate,DCA)对官颈癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制.方法 采用CCK-8法检测DCA对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响;流式细胞仪检测DCA对HeLa细胞凋亡的影响;Westem blot检测DCA对HeLa细胞凋亡相关蛋白PARP(poly ADP-ribose polymerase)和Mcl-1(myeloid cell leukemia-1)水平的影响.结果 与对照组比较,DCA处理可显著抑制HeLa细胞增殖(P＜0.01)、促进细胞凋亡(P＜0.01)、升高剪切型PARP(cleaved PARP)蛋白的水平、下调凋亡抑制蛋白Mcl-1的表达.DCA对HeLa细胞Mcl-1蛋白的下调作用可被蛋白酶体抑制剂MG132所抑制,但不能被蛋白翻译抑制剂放线菌酮(cycloheximide,CHX)所抑制.结论 DCA促进宫颈癌细胞凋亡的作用可能与其促进蛋白酶体降解Mcl-1有关.     

雌、孕激素对宫颈癌细胞株Hela细胞凋亡的影响及其机制探讨

自细胞凋亡理论提出以来,对肿瘤的发生有了新的认识。本研究旨在通过细胞培养方法,观察雌二醇(estradiol,E2 )、孕酮(progesterone ,P)对宫颈癌细胞株Hela细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。1　材料与方法1 .1　细胞培养:常规方法复苏冻存的宫颈癌细胞株Hela细胞接种于1 0 0ml培     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对Hela细胞增殖及CDH1、HPV18E6mRNA表达的影响

目的:探讨DNA去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对宫颈癌Hela细胞株增殖及抑癌基因CDH1和HPV18E6 mRNA的表达水平的影响。方法:不同浓度5-Aza-CdR干预Hela细胞株24h以后,四唑氮蓝法(MTT)检测其对Hela细胞增殖的影响,半定量RT-PCR检测CDH1及HPV18E6 mRNA表达的改变。结果:与对照组(DMSO)相比,5-Aza-CdR能显著抑制Hela细胞增值,且呈量-效性。5-Aza-CdR能显著抑制Hela细胞CDH1 mRNA的表达水平(P<0.05),而对HPV18E6 mRNA表达水平无明显影响(P>0.05)。结论:5-Aza-CdR能抑制Hela细胞增殖,其作用可能是通过上调宫颈癌抑癌基因CDH1的表达实现,有望为宫颈癌的治疗提供新的治疗思路。     

人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响

目的 :观察人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响。方法 :流式细胞术和免疫荧光检测宫颈癌Hela细胞表面Trop-2蛋白的表达;划痕实验和Transwell检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞凋亡的诱导作用;CCK-8(cell counting kit-8)检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞增殖的影响。结果:Hela细胞表面有Trop-2蛋白表达,人源抗Trop-2 Fab能够抑制Hela细胞的增殖,有效降低Hela细胞的迁移和侵袭能力,同时能够诱导Hela细胞凋亡。结论:人源抗Trop-2 Fab能明显降低宫颈癌细胞的恶性生物学行为,Trop-2可作为宫颈癌治疗的潜在靶点。     

虫草素通过调控miR-135b-5p表达抑制宫颈癌Hela细胞侵袭、转移的实验研究

目的 研究虫草素通过调控miR-135b-5p表达对宫颈癌Hela细胞侵袭、转移的影响及其调控机制。方法 用浓度为50μmol/L(虫草素Ⅰ组)和100μmol/L(虫草素Ⅱ组)的虫草素处理宫颈癌Hela细胞,另设空白对照组,用MTT法测定Hela细胞的生长情况。采用Transwell法测定Hela细胞侵袭情况,采用划痕实验检测宫颈癌Hela细胞的转移能力,采用Real-time PCR法测定人永生化表皮细胞Hacat和宫颈癌Hela细胞中miR-135-5p的表达水平及不同浓度虫草素处理后对miR-135-5p的表达水平的影响。转染miR-135b-5p mimic至宫颈癌Hela细胞,并采用Transwell技术和划痕实验检测宫颈癌Hela细胞的侵袭能力和转移能力。结果 加入虫草素后宫颈癌Hela细胞生长受到显著的抑制,且高浓度的虫草素抑制作用更明显(P<0.05)。宫颈癌Hela细胞中miR-135b-5p的表达水平为(1.97±0.07),显著高于人永生化表皮细胞Hacat细胞中miR-135b-5p的表达水平(1.01±0.03),组间比较差异具有统计学意义(t=28....     

小檗碱对宫颈癌Hela细胞Caspase-3基因表达的影响

目的:研究小檗碱(berberine)对人宫颈癌Hela细胞体外增殖、凋亡及凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。方法:MTT法测定不同浓度(0～40μmol/L)berberine干预Hela细胞后的凋亡率;RT-PCR检测Caspase-3mR-NA表达水平。结果:berberine呈剂量-时间依赖方式抑制Hela细胞的生长(P<0.01);且随着berberine浓度增高,细胞凋亡增加,Caspase-3mRNA表达上调(P<0.001)。结论:berberine抑制人宫颈癌Hela细胞生长、诱导凋亡的机制可能与上调Caspase-3mRNA表达有关。     

米托蒽醌对人卵巢癌COC1细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

目的：研究米托蒽醌（Mitoxantrone,MXT）对人卵巢癌COC1细胞体外增殖与凋亡活性,及凋亡相关基因Mcl-1表达的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度的MXT对COC1细胞体外增殖活性的影响;流式细胞分析方法（FCM）定量检测不同浓度的MXT作用后COC1细胞的凋亡率;Western-blot检测active caspase-3蛋白和Mcl-1蛋白定量;RT-PCR检测Mcl-1 mRNA的表达变化。结果COC1细胞生长抑制率和凋亡率均随MXT浓度的增加递增（P〈0.05）;COC1细胞生长抑制率随MXT作用时间的延长而增高（P〈0.05）;active caspase-3蛋白水平随着MXT作用浓度增高递增（P〈0.05）;Mcl-1 mRNA和蛋白表达水平随着MXT作用浓度增高递减（P〈0.05）。结论米托蒽醌能抑制卵巢癌COC1细胞的增殖,诱导其凋亡,此作用可能与MXT抑制COC1细胞中的Mcl-1表达有关。     

丙戊酸钠调控组蛋白乙酰化对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡影响

目的探讨组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。方法不同浓度的VPA处理Hela细胞,应用Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平,荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测p21基因mRNA表达,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果经VPA作用后,人宫颈癌Hela细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,p21基因mRNA表达增加;同时细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。结论 VPA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖和诱导细胞凋亡。     

甲氨蝶呤的两种给药方式对宫颈癌Hela细胞生长的不同影响

目的研究甲氨蝶呤(MTX)的两种给药方式对宫颈癌Hela细胞生长的不同影响,以探索更好的给药方法。方法培养Hela细胞,设生理盐水对照组、常规化疗组(MTX 12 mg/mL,72 h)和节律化疗组(MTX2 mg/mL,12 h/次,72 h给药6次),分别用MTT法检测各组的细胞增殖改变,Hoechst 33342/PI双染色检测细胞凋亡和死亡情况,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Caspase-3的表达。结果与生理盐水对照组比较,两个MTX化疗组Hela细胞均有不同程度的增殖抑制和凋亡(P<0.01);与常规化疗组比较,节律化疗组Hela细胞的增殖抑制率和凋亡率更高(P<0.05),Hela细胞的死亡率更低(P<0.01)。RT-PCR结果显示,两个MTX化疗组Hela细胞中Caspase-3的表达高于生理盐水对照组;而节律化疗组Hela细胞Caspase-3的表达显著高于常规化疗组。结论甲氨蝶呤节律化疗比常规化疗对宫颈癌Hela细胞的抑制作用更强、毒性更小。     

天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及APC基因去甲基化

目的:研究天花粉蛋白(TCS)抗宫颈癌作用机制。方法:MTT还原法检测TCS对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用,流式细胞仪检测TCS对HeLa细胞周期及凋亡率的影响,MSP检测TCS作用前后APC基因启动子甲基化状态。结果:TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用,呈剂量依赖性;TCS可以将HeLa细胞阻滞于S期;TCS诱导HeLa细胞发生凋亡,有剂量依赖性;80 mg/LTCS处理HeLa细胞48 h后,APC基因启动子出现去甲基化。结论:TCS对HeLa细胞有明显抑制作用,抑制机理与将HeLa细胞阻滞于S期、诱导细胞凋亡及APC基因启动子出现去甲基化有关,TCS有良好的抗宫颈癌临床应用前景。     

顺铂上调STAT1蛋白抑制宫颈癌细胞增殖

目的研究Stat1蛋白对宫颈癌Hela细胞生长、增殖及顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法采用蛋白印迹法（Western
blot）检测不同浓度DDP处理Hela细胞后Stat1蛋白表达差异;转染Stat1-siRNA后,通过Western blot验证干扰效果;应用四甲
基偶氮唑蓝（MTT）法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）观察转染Stat1-siRNA后Hela细胞对DDP敏感性变化,并检测Stat1相关细
胞因子c-Myc的表达变化。结果随着DDP浓度的增加,Hela细胞中Stat1蛋白的表达量逐渐增加,DDP浓度为5 mg/L时,Stat1
蛋白表达上调1.5倍,DDP浓度为10 mg/L时,Stat1蛋白表达上调近2倍;特异性Stat1-siRNA 使Hela细胞中Stat1的表达下调
70%,促进细胞生长和增殖;Stat1-siRNA可以降低DDP对Hela细胞生长和增殖的抑制效应,削弱DDP对c-Myc的抑制作用。
结论Hela细胞中c-Myc是STAT1发挥抑癌作用的靶点基因之一;STAT1/c-Myc通路介导了DDP抑制Hela细胞生长、增殖的作
用;STAT1可增强Hela细胞对DDP的敏感性。
     

抑制热休克蛋白70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂化疗的敏感性

目的 探讨抑制宫颈癌Hela229细胞内热休克蛋白(HSP)70表达对顺铂(DDP)化疗敏感性的影响.方法 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)及集落克隆法测定各因素对Hela229细胞的抑制作用;溴化丙啶(PI)单染法及DAPI检测细胞的凋亡率;JC-1染色法测定线粒体膜电位(△Ψm)的变化;Western blotting测定相关蛋白的表达;建立裸鼠动物模型测定各因素体内的抑瘤作用.结果 宫颈癌细胞较正常宫颈细胞高表达HSP70;当HSP70抑制剂与顺铂合用,细胞的存活率较单用顺铂显著下降(P<0.01);PI与DAPI染色实验表明HSP70抑制剂能增加顺铂诱导的细胞凋亡率;JC-1染色结果显示,HSP70抑制剂处理后顺铂组细胞线粒体膜电位发生了明显的降低.Western blotting实验结果显示HSP70蛋白表达抑制剂与顺铂合用较单用顺铂显著增加促凋亡蛋Bax/caspase-3表达及caspase-3活化;明显降低抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达.裸鼠移植肿瘤模型结果表明HSP70抑制剂与顺铂合用能增强顺铂对模型小鼠肿瘤的抑制作用(P<0.01).结论 抑制HSP70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂的敏感性,机制可能是通过抑制HSP70,进而调节凋亡相关蛋白的表达,促进宫颈癌细胞凋亡.HSP70有望成为宫颈癌基因治疗的一个新靶点.     

以Celecoxib为基础的联合方案对宫颈癌细胞抑制作用的研究

目的:探讨环氧化酶-2(cox-2)抑制剂Celecoxib与化疗药顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞的作用及机制。方法:用免疫细胞化学SP法检测Hela细胞cox-2蛋白表达后,将Celecoxib、DDP单独或联合处理Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:Celecoxib可下调Hela细胞cox-2蛋白表达,抑制其增殖作用呈浓度和时间依赖性。在一定浓度范围内DDP也抑制Hela细胞生长,作用呈量效关系。Celecoxib与DDP联合应用后抗增殖作用较单一用药显著增强(P<0.05),DDP浓度≥1 mg/L时两者有协同或相加作用。Celecoxib及DDP均可有效诱导Hela细胞凋亡,联用凋亡率明显增加并出现G0-G1期细胞阻滞。结论:Celecoxib与DDP联用可通过抑制增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞对Hela细胞有协同抗肿瘤效应,提示两者联合可能在宫颈癌临床治疗上具有潜在价值。     

光动力联合塞来昔布对子宫颈癌COX-2表达及影响的研究

目的研究光动力联合塞来昔布对子宫颈癌细胞中环氧合酶-2(cyclooxynase-2,COX-2)蛋白表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法①培养子宫颈癌Hela细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测选择性COX-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)对子宫颈癌Hela细胞增殖抑制作用。②将Hela细胞分为4组:空白对照组(Hela,H组)、塞来昔布组(celecoxib,C组)、光动力组(photodynamics therapy,PDT,P组)、塞来昔布+光动力组(celecoxib+photodynamics therapy,P+C组)、分别应用蛋白印迹法(Westernblot)和免疫组化法检测COX-2蛋白表达情况。结果 MTT比色法检测显示,celecoxib作用Hela细胞24 h后对宫颈癌细胞有相对的抑制作用。Western blot和免疫组化法检测结果均显示:celecoxib联合PDT作用Hela细胞24 h后COX-2蛋白的相对表达水平明显降低,与其它3组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论选择性COX-2抑制剂celecoxib能抑制人子宫颈癌细胞的增殖,且呈浓度依赖性,随着浓度的增大作用逐渐增强。PDT联合选择性COX-2抑制剂celecobix能有效抑制靶基因COX-2的表达,进而可抑制子宫颈癌细胞增殖并诱导细胞调亡增加,为子宫颈癌的基因研究及治疗提供新思路。     

维生素C增加人宫颈癌Hela细胞株对顺铂敏感性的研究

目的研究维生素C与顺铂合用对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用,流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率。结果维生素C和顺铂均可抑制Hela细胞生长,将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡。两药联合作用时表现出协同作用,细胞生长抑制率显著提高,凋亡率明显增加。结论维生素C可与顺铂协同抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。