许旺细胞源神经营养因子对脊神经根性撕脱所致神经元死亡的干预

背景:许旺细胞源神经营养因子是从许旺细胞胞浆中分离纯化出的一种相对分子质量为58000的神经营养物质,具有明显的神经营养活性,能对抗一氧化氮神经毒性物质。目的:建立根性撕脱伤动物模型,观察许旺细胞源神经营养因子对脊神经根性撕脱所致脊髓前角运动神经元死亡的保护作用。设计:重复观察测量。单位:深圳市第二人民医院骨三科,中山大学附属第一医院显微外科。材料:实验于2003-03/05在中山大学医学院实验动物中心完成。选用清洁级3～4月龄SD大鼠20只,随机分为许旺细胞源神经营养因子组、生理盐水对照组,各10只。两组动物均以左侧为正常侧,右侧为损伤侧。方法:①两组大鼠均建立颈6,7神经根性撕脱伤动物模型。②许旺细胞源神经营养因子组将一小块预浸有质量浓度为1g/L的许旺细胞源神经营养因子40μL的明胶海绵覆盖于损伤侧硬膜囊表面,生理盐水对照组将一小块预浸有等量生理盐水的明胶海绵覆盖于损伤侧硬膜囊表面。③明胶海绵表面置硅胶管,硅胶管一端与明胶海绵缝扎,另一端用凡士林封闭固定于皮下,关闭切口后伤口局部肌肉注射青霉素预防感染。术后两组动物分别通过硅胶管定期注射许旺细胞源神经营养因子或生理盐水20μL,1次/周,3周后取材。④切取颈6,7脊髓节段,观察损伤侧脊髓前角运动神经元的存活率和形态学变化以及一氧化氮合酶的表达。主要观察指标:①脊髓运动神经元存活情况和形态学变化。②脊髓运动神经元一氧化氮合酶表达的变化。结果:实验选用20只大鼠,全部进入结果分析。①脊髓运动神经元存活情况和形态学变化:颈6,7神经根性撕脱术后3周,生理盐水对照组损伤侧68.6%的运动神经元死亡,存活率31.4%,明显低于正常侧(P<0.01),且存活的神经元胞体严重萎缩;许旺细胞源神经营养因子组损伤侧脊髓运动神经元的死亡率较生理盐水对照组减少35%(P<0.01),存活率为66.4%,且存活的神经元胞体代偿性增大,基本与正常侧相似(P>0.05)。②脊髓运动神经元一氧化氮合酶表达的变化:正常情况下,脊髓中的一氧化氮合酶阳性神经元主要见于后角浅层,中央导水管周围、中间外侧柱和脊髓背根神经节中的内脏传入神经元,前角运动神经元不表达一氧化氮合酶。颈6,7神经根性撕脱术后3周,生理盐水对照组损伤侧脊髓运动神经元一氧化氮合酶表达明显增多,而其正常侧和许旺细胞源神经营养因子组损伤侧脊髓运动神经元均未见一氧化氮合酶表达增加。结论:脊神经根性撕脱可引起脊髓前角运动神经元的死亡和一氧化氮合酶表达,许旺细胞源神经营养因子则对受损的神经元有明显的保护作用和抑制一氧化氮合酶表达。提示许旺细胞源神经营养因子的神经元保护作用可能是通过改变神经元的一些细胞分子例如一氧化氮合酶而实现的。     

脑缺血大鼠尾壳核神经元型一氧化氮合酶免疫阳性神经元的细胞构筑

目的：观察大鼠尾壳核一氧化氮合酶神经元的分布，以及脑缺血后其免疫阳性神经元细胞构筑学的变化。 方法：实验于2004／2005在南方医科大学和暨南大学进行。取36只SD大鼠随机分为对照组和脑缺血组，每组18只。脑缺血组用双侧颈总动脉阻塞法建立脑缺血模型，对照组行假手术，不结扎颈总动脉。分别于造模后3，7，30d处死动物取材，每个时间点6只。ABC法显示神经元型一氧化氮合酶神经元，图像分析系统测尾壳核阳性神经元数目和大小（神经元以〉25μm为大型，25～15μm为中型，〈15μm为小型）。 结果：经补充后36只大鼠进入结果分析。④神经元型一氧化氮合酶阳性神经元大小和分布不均一，尾壳核背外侧胞体相对较小，数目较多，而腹内侧体积虽大，但较稀疏。②神经元型一氧化氮合酶阳性神经元数目：对照组各时间点无明显变化，脑缺血组缺血后7，30d显著低于对照组（P〈0．01）。③神经元型一氧化氮合酶阳性神经元大小：对照组以中型细胞为主，其次为小型神经元，大型细胞少，三类神经元在不同的时期比例恒定。脑缺血组在缺血后3和7d，中小型神经元变化较明显，其中大型和中型神经元逐渐下降，在缺血30d时中型神经元比例显著低于对照组和缺血后3，7d（P〈0．01），而小型神经元比例显著高于对照组和缺血后3，7d（P〈0．01）。 结论：脑缺血后尾壳核神经元型一氧化氮合酶阳性神经元减少，而且中型细胞减少为主，小型细胞所占比例相对增多。     

许旺细胞源神经营养因子对脊髓背根节感觉神经元的保护作用

背景：许旺细胞源神经营养因子是从许旺细胞胞浆中分离纯化出的一种活性蛋白质，能明显的维持脊髓前角运动神经元的存活和促进周围神经的再生。目的：观察许旺细胞源神经营养因子对周围神经高位损伤所致脊髓背根节感觉神经元死亡的保护作用。 设计：随机对照动物实验。 单位：深圳市第二人民医院。 材料：选用清洁级出生3周SD幼鼠30只，雌雄不拘。随机分为营养因子组和生理盐水对照组，各15只。两组动物均以左侧为正常侧，右侧为损伤侧。方法：实验于2003—05／2003—07在中山大学医学院实验动物中心完成。①两组大鼠均建立L4.5，神经根高位离断动物模型，并将近侧神经残端与硅胶管吻接。根据分组，胶管内分别注入许旺细胞源神经营养因子（60mg／L）或生理盐水各20μL，凡士林封固硅胶管两端。②术后4周处死动物取材，观察损伤神经根背根节感觉神经元的存活率和形态学变化。 主要观察指标：①两组鼠损伤侧坐骨神经再生情况大体观察。②两组鼠背根节神经元存活情况。②背根节神经元形态学变化。 结果：30只鼠全部进入结果分析。①两组鼠坐骨神经再生情况大体观察：营养因子组神经新生轴突沿硅胶管生长，长度达1cm；对照组新生轴突较细少，长度约0．8cm。②两组鼠背根节神经元存活情况：营养因子组背根节内有少量纤维组织增生，神经元丢失不明显，存活率是91．8％，对照组背根节内纤维组织增生明显，神经元大量丢失，存活率是58．6％，营养因子组神经元存活率较对照组高33．2％（P〈0．01）。③背根节神经元形态学变化：对照组背根节神经元的直径和面积显著低于营养因子组和正常侧[（21．8&;#177;1．4）μm，（373．1&;#177;50．9）μm^2（24．8&;#177;1．1）μm，（482．8&;#177;42．2）μm^2（24．5&;#177;1．3）μm，（471．5&;#177;51．4）μm2P〈0．01]，而营养因子组神经元直径和面积与正常侧相比差异无显著性（P〉0．05）。 结论：许旺细胞源神经营养因子对受损的背根节感觉神经元有明显的神经营养活性。     

许旺细胞源神经营养因子对脊髓背根节感觉神经元的保护作用

背景:许旺细胞源神经营养因子是从许旺细胞胞浆中分离纯化出的一种活性蛋白质,能明显的维持脊髓前角运动神经元的存活和促进周围神经的再生。目的:观察许旺细胞源神经营养因子对周围神经高位损伤所致脊髓背根节感觉神经元死亡的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:深圳市第二人民医院。材料:选用清洁级出生3周SD幼鼠30只,雌雄不拘。随机分为营养因子组和生理盐水对照组,各15只。两组动物均以左侧为正常侧,右侧为损伤侧。方法:实验于2003-05/2003-07在中山大学医学院实验动物中心完成。①两组大鼠均建立L4,5神经根高位离断动物模型,并将近侧神经残端与硅胶管吻接。根据分组,胶管内分别注入许旺细胞源神经营养因子(60mg/L)或生理盐水各20μL,凡士林封固硅胶管两端。②术后4周处死动物取材,观察损伤神经根背根节感觉神经元的存活率和形态学变化。主要观察指标:①两组鼠损伤侧坐骨神经再生情况大体观察。②两组鼠背根节神经元存活情况。③背根节神经元形态学变化。结果:30只鼠全部进入结果分析。①两组鼠坐骨神经再生情况大体观察:营养因子组神经新生轴突沿硅胶管生长,长度达1cm;对照组新生轴突较细少,长度约0.8cm。②两组鼠背根节神经元存活情况:营养因子组背根节内有少量纤维组织增生,神经元丢失不明显,存活率是91.8%,对照组背根节内纤维组织增生明显,神经元大量丢失,存活率是58.6%,营养因子组神经元存活率较对照组高33.2%(P<0.01)。③背根节神经元形态学变化:对照组背根节神经元的直径和面积显著低于营养因子组和正常侧犤(21.8±1.4)μm,(373.1±50.9)μm2比(24.8±1.1)μm,(482.8±42.2)μm2和(24.5±1.3)μm,(471.5±51.4)μm2,P<0.01犦,而营养因子组神经元直径和面积与正常侧相比差异无显著性(P>0.05)。结论:许旺细胞源神经营养因子对受损的背根节感觉神经元有明显的神经营养活性。     

缺氧对体外培养动脉内皮细胞中诱生型一氧化氮合酶表达和细胞形态的影响

目的：观察体外培养的动脉内皮细胞在缺氧条件下诱生型一氧化氮合酶的表达和细胞形态的变化情况。方法：实验于2004—09／11在哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室实验室完成。原代培养牛动脉内皮细胞，将培养的内皮细胞随机分为5组，即常氧组、缺氧0．5，1，2，3h组、每组切片选取12个400倍视野进行观察。诱生型一氧化氮合酶的表达采用免疫组织化学法测定。用计算机图文分析系统对各组切片内皮细胞诱生型一氧化氮合酶阳性表达的平均积分吸光度和缺氧后的细胞形态进行分析：结果：①缺氧1h，2h，3h组的平均积分吸光度显著高于常氧组[0．1008&;#177;0．019，0．1179&;#177;0．037，0．1964&;#177;0．023，0．0735&;#177;0．032（t=-10．364～2．133，P〈0．05-0．01）1。②缺氧后细胞的最大直径和最小直径均变小，核浆比例增大，细胞数量减少。结论：缺氧后动脉内皮细胞的生长数量和形态发生明显变化，使其屏障作用降低；同时诱生型一氧化氮合酶表达的增加提示诱生型一氧化氮合酶在缺氧后内皮细胞的损伤中发挥重要作用。     

搏动信号对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合成酶表达的影响

目的：观察搏动信号对人脐静脉内皮细胞中反映内皮细胞活性的内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响。 方法：实验于2004-06／2005-03在湘雅二医院心胸外科生物材料研究室和上海生物工程有限公司进行。将取自剖宫产产妇自愿捐献的无菌脐带的人脐静脉内皮细胞培养、传代，传4代后分为两组：①搏动培养组：先静放6-8h待细胞贴壁后，用自行设计的细胞搏动培养装置，进行搏动培养。搏动参数：搏动频率150次／min，搏出量0．3mL／次，搏动产生的压力30／9mmHg（1mmHg=0．133kPa）。②静态培养组：不进行搏动，其余条件同搏动培养组。每组每个时间点5个样本。用反转录-聚合酶链反应方法，分别在第1，2，4，6，9，12，15，18天检测两组的人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达水平（相对吸光度值）。 结果：人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶mRNA表达：①培养第1，4天，静态培养组明显高于搏动培养组（1．0&;#177;0．55比1．10&;#177;0．35；1．17&;#177;0．23比1．42&;#177;0．44，P〈0．05）。②培养第2天两组比较差异不显著（1．16&;#177;0．18比1．25&;#177;0．35，P〉0．05）。③培养第6，9，12，15，18天，搏动培养组明显高于静态培养组（1．52&;#177;0.14比1．27&;#177;0.30；1．60&;#177;0.19比1．16&;#177;0.33；1．68&;#177;0.44比0．99&;#177;0.31；1．7&;#177;0.24比1．1&;#177;0.94；1．7&;#177;0.16比1．0&;#177;0.28，P〈0．05）。 结论：搏动信号能提高人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶的表达。提示搏动信号在维持细胞发挥正常的生理功能方面起到重要的作用，能增强细胞的生物活性。     

羊睾丸提取液对小鼠受损睾丸支持细胞的修复作用

目的：探讨羊睾丸提取液对重金属致损睾丸支持细胞的修复与保护作用，以期为干预男性生育功能障碍提供新思路。方法：选用健康昆明种雄性小白鼠30只，随机将其分为对照组、模型组、给药组。每组小鼠10只。采用醋酸铅制备睾丸受损模型，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-黄递酶(NADPH-d)组织化学方法结合显微图像分析，观察各组小鼠睾丸支持细胞一氧化氮合酶(nitric oxide synthase。NOS)活性。结果：模型组睾丸支持细胞肿胀变性，模型组NOS活性(A值：0．146&;#177;0．023)明显低于对照组(0．298&;#177;0．031)；给药组支持细胞形态接近对照组。给药组NOS活性(0．236&;#177;0．020)明显高于模型组(P&;lt;0．01)。对照组体质量明显高于模型组(P&;lt;0．01)；给药组体质量明显高于模型组(P&;lt;0．05)；对照组与给药组无明显差异(P&;gt;0．05)。对照组睾丸质量明显高于模型组(P&;lt;0．05)；给药组睾丸质量明显高于模型组(P&;lt;0．05)。结论：羊睾丸提取液对铅等重金属所致的睾丸损伤有一定的修复和保护作用。     

外源性胶质细胞源性神经营养因子对周围神经损伤大鼠脊髓运动神经元的保护作用

目的：观察周围神经损伤后外源性胶质细胞源性神经营养因子对脊髓运动神经元的保护作用。 方法：成年SD大鼠随机分为2组，对照组（手术＋等渗盐水组）和实验组（手术＋胶质细胞源性神经营养因子组）。采用切断大鼠坐骨神经近端套接单盲管的实验模型。术后3d，1，2，4，8和12周处死动物并取材，对L4-6节段脊髓前角标本冰冻切片，行苏木精-伊红染色，内氏体染色、胆碱酯酶染色、原位末端标记法染色、电镜观察。 结果：①两组大鼠脊髓前角运动神经元的存活率变化：1，2，4，8，12周实验组较对照组显著提高（对照组86．5％，64．4％，60．9％，58．8％，58．5％，53．5％；实验组88．7％，71．5％，79．9％，79．3％，72．4％。69．9％．P〈0．05）。②神经元酶学功能评价：实验组胆碱酯酶阳性颗粒面积均比对照组有提高约20％（P〈0．05）③原位末端标记法染色凋亡细胞计数（每张切片凋亡细胞个数）：对照组为10．24&;#177;3．82；实验组为4．53&;#177;2．16。④神经元超微结构：实验组电镜观察神经元胞体形态改变，没有发现典型凋亡小体。 结论：外源性胶质细胞源性神经营养因子能防止成年大鼠神经损伤后运动神经元的退行性变死亡，对脊髓运动神经元有保护作用。     

羊睾丸提取液对小鼠受损睾丸支持细胞一氧化氮合酶活性的影响

背景：大量研究证明，一氧化氮合酶／一氧化氮不仅对维持睾丸支持细胞正常功能起重要作用，而且影响精子的发生、活动及受精能力。目的：观察羊睾丸提取液对重金属铅致损小鼠睾丸支持细胞一氧化氮合酶活性的影响。设计：随机对照动物实验。单位：吉林医药学院组织胚胎学教研室。材料：实验于2004—03／2005—08在吉林医药学院组织胚胎学实验室（解放军总后勤部重点实验室）完成。选用健康昆明种雄性小鼠30只，按随机数字表法分为3组，即对照组、睾丸损伤模型组和羊睾丸提取液组，每组10只。方法：睾丸损伤模型组和羊睾丸提取液组小鼠给予100g／L醋酸铅0．2mL／（只&;#183;d），5次／周，连续2周，停药1周。羊睾丸提取液组同时腹部皮下注射羊睾丸提取液0．5mL／（只&;#183;d）。对照组给予与实验组溶剂等量的重蒸馏水。染毒期满禁食12h后，称体质量后断头处死，解剖取出双侧睾丸，立即称质量，甲醛固定后切片，应用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸一黄递酶组织化学方法结合显微图像分析，观察各组小鼠睾丸支持细胞的一氧化氮合酶活性变化。主要观察指标：染毒期满后各组小鼠的体质量、双侧睾丸质量及睾丸支持细胞一氧化氮合酶吸光度值。结果：30只小鼠全部进入结果分析，无脱失。（D染毒期满后羊睾丸提取液组小鼠的体质量、双侧睾丸质量及一氧化氮合酶A值均显著高于睾丸损伤模型组[（22.47&;#177;3．49）g，（0．113&;#177;0．021）g，0.236&;#177;0．020；（19．13&;#177;3.46）g，（0．089&;#177;0．017）g，0．146&;#177;0．023（t=2．151～3．314，P〈0．05～0．01）]。②睾丸损伤模型组睾丸一氧化氮合酶阳性支持细胞肿胀变性；羊睾丸提取液组的一氧化氮合酶阳性支持细胞形态接近对照组。结论：羊睾丸提取液可以提高重金属铅致损小鼠睾丸支持细胞的一氧化氮合酶活性，对睾丸损伤有一定的修复和保护作用，可为临床治疗男性不育提供新思路。     

脊髓内移植神经干细胞对臂丛神经根性撕脱伤后前角运动神经元生存和修复的影响

目的：观察臂丛根性撕脱伤后脊髓内移植神经干细胞的存活、分化、迁移情况以及对原有前角运动神经元的影响。方法：实验于2004-01／12在福建医科大学分子生物学中心以及福建省骨科研究所完成。将雄性SD大鼠60只随机分为3组，每组20只。①单纯组：将C5-7神经根经后路撕脱制作大鼠臂丛根性撕脱伤模型，不进行细胞移植。②对照组：模型制作后即刻移植灭活神经干细胞（5&;#215;10^8L^-1）4μL于C6脊髓前角。③实验组：模型制作后即刻把体外培养的5-溴尿嘧啶标记的神经干细胞（5&;#215;10^8L^-1）4μL移植于C6脊髓前角。各组于术后1，2，4．8，12周5个时间点取脊髓标本制备切片，每个时间点4只，分别计算损伤侧脊髓前角运动神经元的存活率。观察移植神经干细胞存活、迁移、分化情况采用免疫组织化学染色方法。结果：60只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠臂丛根性撕脱伤后不同时间前角运动神经元存活率：实验组2，4，8，12周时间点均高于对照组和单纯组[实验组：（79.3&;#177;2．9）％，（66.2&;#177;3.8）％，（57.0&;#177;5.4）％，（47．6&;#177;4.8）％；对照组：（69．4&;#177;3．1）％，（45．4&;#177;3．7）％，（33.4&;#177;6．5）％，（29．2&;#177;2.3）％；单纯组：（71.0&;#177;3．0）％，（45．9&;#177;29）％，（355&;#177;5.4）％，（27.9&;#177;1．9）％，t=3．8730-85009，P〈0.01]。（2）神经干细胞移植入脊髓后不仅能存活，迁移达一个脊髓节段，并可以进一步分化为神经元以及星型胶质细胞。结论：①臂丛神经根性撕脱伤后脊髓前角内可以提供神经干细胞分化成星型胶质细胞和神经元的适宜微环境，而随时间不同表现出不同的分化趋向。②移植神经干细胞大鼠前角运动神经元存活率增高，说明神经干细胞移植除能分化为神经元而发挥神经元替代作用外，对神经根撕脱引起脊髓运动神经元死亡也具有保护作用，能明显减少神经根撕脱后运动神经元的继发性变性死亡。     

许旺细胞源神经营养因子在大鼠腰髓中的表达

背景许旺细胞能分泌多种营养因子,有保护和营养神经元的作用,并对神经损伤后的修复起促进作用.目的观察正常成年大鼠和不同胎龄鼠及幼鼠腰髓组织中许旺细胞源神经营养因子的表达,及其对脊髓不同发育时期的作用.设计对照实验,动物实验. 材料实验于2003-09于南华大学动物实验室完成,采用Wister大鼠30只,雌雄不限,体质量为150～300 g,由南华大学动物实验室提供.干预①取材和切片取体质量180～220 g,成熟期为4～6周正常成年大鼠腰髓和背根神经节,继而行后固定.共8只雌鼠受孕,取不同孕龄母鼠中的胎鼠及幼鼠腰髓组织,分别行冰冻切片.②免疫组化染色以抗许旺细胞源神经营养蛋白抗体作为一抗,行卵白素-生物素过氧化物酶复合物免疫组化染色,观察染色部位的灰度,通过电脑上扫描计算染色深度得出半定量值,分析许旺细胞源神经营养因子在腰髓的表达.主要观察指标①正常腰髓免疫组化染色结果.②生长发育的腰髓免疫组化染色结果.结果共8只雌鼠受孕,实验样本均取自8只受孕雌鼠的胎鼠及所产幼鼠.①正常腰髓免疫组化染色结果许旺细胞源神经营养因子在成年大鼠腰髓的整个白质和灰质后角Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层有较低表达.②生长发育的腰髓免疫组化染色结果许旺细胞源神经营养因子在胎龄14d和胎龄15 d开始有表达,胚胎时期表达先增高后下降,其中胎龄21 d最高.出生后许旺细胞源神经营养因子在腰髓中表达明显下降,其中第7和12d最高.结论许旺细胞源神经营养因子在成年大鼠腰髓及背根神经节有较低表达,在生长发育的腰髓中表达基本呈逐渐下降趋势.许旺细胞源神经营养因子对大鼠脊髓的发育可能起促进作用,此结果说明许旺细胞源神经营养因子在脊髓生长发育过程中,主要在胚胎发育时期起作用.     

雪旺细胞源神经营养因子对神经元胆碱乙酰基转移酶活性的影响

目的研究雪旺细胞源神经营养因子(SDNF)是否影响运动神经元胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性,了解其对运动神经元功能的影响。方法SD大鼠制作成一侧面神经损伤模型,实验组局部应用雪旺细胞源神经营养因子,对照组应用磷酸盐缓冲液,连续21 d,采用免疫组化染色法研究损伤侧和实验侧面神经核中运动神经元ChAT活性改变。结果实验组中运动神经元的ChAT阳性细胞数,面积及灰度值均优于对照组(P<0.01)。结论外源性雪旺细胞源神经营养因子可以防止轴突损伤后运动神经元胆碱乙酰基转移酶活性的降低。     

许旺细胞源神经营养因子肌肉注射对端侧吻合后神经再生的影响

目的:观察分析肌肉注射许旺细胞源神经营养因子能否提高端侧吻合后再生神经的质量。方法:①实验选取清洁级雌性SD大鼠24只,随机数字表法分为许旺细胞源神经营养因子组、生理盐水对照组,12只/组。每组大鼠均随机切断一侧腓总神经,与胫神经外膜开窗处行端侧吻合,另一侧作为正常对照。②术后许旺细胞源神经营养因子组于神经端侧吻合的小腿外侧肌肉注射100mg/L许旺细胞源神经营养因子,1次/周,共4周。生理盐水对照组于相同位置注射0.1mL生理盐水,方法和疗程同上。两组作为正常对照的右侧神经不作任何处理。③术后12周,两组大鼠行腓总神经电生理特性检测、组织学检查及胫前肌湿重测定。结果:实验选取清洁级雌性SD大鼠24只,全部进入结果分析。①两组术后12周电生理检测结果:与生理盐水对照组比较,许旺细胞源神经营养因子组端侧吻合侧的神经传导速度加快[(17.33±1.59),(23.14±1.42)m/s,P<0.05],相应的潜伏期则缩短[(8.54±0.63),(5.57±0.78)ms,P<0.05],且复合肌肉动作电位振幅升高[(2.35±0.51),(3.77±0.49)mV,P<0.05]。②两组术后12周胫前肌湿重及腓总神经纤维数量测定结果:许旺细胞源神经营养因子组胫前肌湿重比值及腓总神经纤维数量比值均显著高于生理盐水对照组(0.785±0.152,0.515±0.132;0.747±0.126,0.453±0.151;P<0.05)。③两组术后12周组织学检查结果:与生理盐水对照组比较,许旺细胞源神经营养因子组端侧吻合侧再生的腓总神经横切面神经纤维数目相对较多,神经纤维粗,排列相对较齐,髓鞘厚,束间有少量结缔组织。结论:肌肉注射许旺细胞源神经营养因子可在一定程度上提高端侧吻合后再生神经的质量。     

复发性抑郁症患者血清脑源性神经营养因子和胶质细胞源性神经营养因子水平的研究

目的探讨复发性抑郁症患者血清中脑源性神经营养因子(BDNF)与胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)水平。方法采用酶联免疫吸附法测定49例治疗前的复发性抑郁症患者以及36例正常对照者血清BDNF和GDNF水平,采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评定复发性抑郁症患者的抑郁症状。结果复发性抑郁症患者治疗前血清BDNF和GDNF水平显著低于对照组(P<0.01)。在复发性抑郁症患者组,血清BDNF水平与HAMD总分呈显著负相关(P<0.01)。结论复发性抑郁症患者可能存在神经营养因子水平低下,这种变化是否为抑郁发作的生物学指标尚不清楚。     

神经根撕脱后3种鼠类脊髓运动神经元的再生反应

背景臂丛撕脱损伤脊髓运动神经元的程度存在种属差异,神经元型一氧化氮合酶(Neuronal nitric oxide synthase,nNOS)基因与运动神经元的死亡密切相关.目的研究臂丛撕脱诱导受损运动神经元nNOS基因表达的种属差异.设计完全随机设计,对照实验研究.地点和材料中山大学动物实验中心提供实验所需SD大鼠、Hamster金黄地鼠、BALB/C小鼠各20只.干预3组动物分别行右侧臂丛撕脱术,2周后取C7段脊髓进行nNOS免疫细胞化学、NADPH-d酶组织化学和中性红活细胞染色.主要观察指标三种动物损伤侧脊髓前角nNOS阳性和存活的运动神经元数目.结果臂丛撕脱后2周,SD大鼠和金黄地鼠损伤侧前角都可见大量强阳性的nNOS运动神经元,而BALB/C小鼠却没有此反应.统计分析显示三组动物间nNOS阳性运动神经元数目有显著差异(F=501.502,P＜0.001)SD大鼠多于金黄地鼠(55.59%与42.26%,t=5.940,P＜0.001),多于BALB/C小鼠(55.59%与0%,t=51.651,P＜0.001),金黄地鼠多于BALB/C小鼠(42.26%与0%,t=21.452,P0.001);三组动物间存活的运动神经元数目也有显著差异(F=110.588,P＜0.001)SD大鼠多于金黄地鼠(87.29%与76.01%,t=5.252,P＜0.05),多于BAL/C小鼠(87.29%与57.38%,t=19.561,P<.001),金黄地鼠多于BALB/C小鼠(76.01%与57.38%,t=7.996,P＜0.001).结论臂丛撕脱后大鼠、金黄地鼠和小鼠nNOS表达的差异与损伤运动神经元死亡的种属差异密切相关,提示损伤诱导的nNOS基因表达可能参与受损运动神经元的再生反应.     

阳离子脂质体转染神经营养因子3基因修饰许旺细胞与基质凝胶桥接损伤的坐骨神经

背景：周围神经损伤后给予外源性神经营养因子3对促进神经再生及保护肌萎缩均有作用。目的：观察阳离子脂质体转染神经营养因子3基因修饰的许旺细胞与细胞外基质凝胶桥接修复坐骨神经损伤的效果。方法：取80只成年Wistar大鼠制作左侧坐骨神经缺损模型,随机分组,以不同材料进行修复：细胞外基质凝胶组、许旺细胞-聚乳酸/羟基乙酸共聚物-细胞外基质凝胶组、神经营养因子3基因-聚乳酸/羟基乙酸共聚物-细胞外基质凝胶组、神经营养因子3基因修饰许旺细胞-聚乳酸/羟基乙酸共聚物-细胞外基质凝胶组。结果与结论：①腓肠肌肌肉组织学检查：术后8,12周神经营养因子3基因修饰许旺细胞-聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物-细胞外基质凝胶组腓肠肌横截面积结构清晰、肌纤维粗大,呈基本正常肌肉结构,纤维组织较少,肌横截面积明显大于其他3组（P〈0.05,P〈0.01）。②肌细胞凋亡检测：术后4,8,12周神经营养因子3基因修饰许旺细胞-聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物-细胞外基质凝胶组肌细胞凋亡数低于其他3组（P〈0.05）。表明阳离子脂质体转染神经营养因子3基因修饰的许旺细胞与细胞外基质凝胶可较好修复损伤神经,防止失神经肌萎缩细胞凋亡。     

胶质细胞源性神经营养因子对胰腺癌细胞侵袭的影响

目的：观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）在胰腺癌细胞侵袭中的作用及可能的机制。方法四甲基偶氮唑盐（MTT）法分别检测促分裂原活化蛋白激酶通道（MAPK）阻断剂PD98059和磷脂酰肌醇3激酶通道（PI3K）阻断剂LY294002在不同浓度、不同作用时间条件下对胰腺癌细胞MIA Paca-2存活率的影响,利用Trans-well装置在boyden小室的下室中分别加入不同的细胞因子（GDNF、GDNF抗体、PD98059、LY294002）,通过计数各组跨膜细胞的数量并进行统计学分析,检测GDNF对胰腺癌细胞的趋化作用和PD98059、LY294002的阻断效果。结果 MTT实验中,培养基中分别加入不同浓度的PD98059或LY294002后,在不同作用时间下胰腺癌细胞形态未发生明显改变,各组的细胞存活率总体水平大都维持在90％～100％,且随药物作用时间或药物浓度变化均无明显规律性变化。Trans-well实验中,下室中加入GDNF后增加了Boyden小室跨膜细胞数量,加入阻断剂PD98059后跨膜细胞数量明显减少,差异有统计学意义（P＝0.014）,加入阻断剂LY294002后跨膜细胞数量有减少趋势,差异无统计学意义（P＝0.221）,同时加入两种阻断剂后跨膜细胞数量减少,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 GDNF可增强胰腺癌细胞MIA Paca-2的侵袭转移能力,发挥这一作用的途径可能与MAPK通道和PI3 K通道有关。