IGF-I对ISP损伤大鼠心肌MDA、GSH-Px变化影响的实验研究

目的 研究胰岛素样生长因子－Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）对异丙肾上腺素（ＩＳＰ）致大鼠心肌损伤丙二醛（ＭＤＡ）,谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）的变化影响。方法 采用大鼠ＩＳＰ心肌损伤动物模型,以ＩＧＦ－Ｉ作保护因素,分别检测ＭＤＡ的含量及全血ＧＳＨ－Ｐｘ的活力。结果 ＩＳＰ组大鼠全血ＧＳＨ－Ｐｘ活力明显低于ＩＧＦ－Ｉ＋ＩＳＰ组。结论 ＩＧＦ－Ｉ能减少ＩＳＰ所致心肌损伤时氧自由基的产生,减轻氧自由基对细胞膜     

IGF-1、IGFBP-3在儿童生长激素缺乏症诊断和疗效判断中的应用

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)及其结合蛋白3(IGFBP-3)在儿童生长激素缺乏症(GHD)诊断及疗效判断中的价值。方法68例GHD患儿予以国产0.1 IU/(kg.d)r-hGH治疗12个月,于治疗前及治疗后3、6、12个月分别测定身高、体重、骨龄及血清IGF-1、IGFBP-3,并与60例正常儿童进行对照。结果GHD患儿血清IGF-1和IGFBP-3水平明显低于正常对照组(P均<0.01);r-hGH治疗后身高增长速度明显加快,血清IGF-1、IGFBP-3水平显著升高;治疗前血清IGF-1与治疗6、12个月时的生长速度(GV6,GV12)呈负相关(r=-0.72-、0.78,P均<0.01);治疗3个月时IGFBP-3水平变化与GV6、GV12呈正相关(r=0.82、0.80,P均<0.01)。结论IGF-1、IGFBP-3可用于儿童GHD的诊断及疗效预测。     

IGF-I对ISP损伤大鼠心肌ATP、ADP、AMP变化影响的实验研究

目的 研究胰岛素样生长因子Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）对异丙基肾上腺素（ＩＳＰ）损伤大鼠心肌ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ的影响。方法 采用大鼠ＩＳＰ心肌损伤动物模型,以ＩＧＦ－１作保护因素,用高效液相色谱法测定大鼠心肌组织中高能磷酸化合物含量。结果 与正常组相比,ＩＳＰ损伤组ＡＴＰ水平明显下降,而ＩＧＦ－Ｉ保护组与ＩＳＰ损伤组相比ＡＴＰ水平明显升高。结论 ＩＧＦ－Ｉ可抑制ＩＳＰ所致心肌能量低谢障碍,具有一定的心肌保     

糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1基因表达的影响

为探讨糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞表达单核细胞趋化蛋白 1基因的影响 ,体外分离培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,然后用不同浓度葡萄糖 (0、5、2 0、5 0和 80mmol L)制备的糖基化终产物 BSA(2 0 0mg L)干预 2 4h和用葡萄糖浓度为 5 0mmol L孵育的糖基化终产物 BSA干预 0、12、2 4和 36h ,逆转录聚合酶链反应检测细胞中单核细胞趋化蛋白 1mRNA表达水平。结果发现 ,葡萄糖浓度 2 0mmol L、5 0mmol L和 80mmol L孵育的糖基化终产物都增加单核细胞趋化蛋白 1mRNA的表达 ,其中 5 0mmol L组作用最明显 (P <0 .0 0 5 ) ,干预 12h、2 4h、36h后单核细胞趋化蛋白 1mRNA表达均较未干预组明显增加 (P <0 .0 0 1)。结果提示 ,糖基化终产物促进大鼠主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白 1基因的表达     

松果菊苷对衰老大鼠生精细胞胰岛素通路IRS1、IGF-1、IGFBP3基因表达的影响

目的探讨松果菊苷对衰老大鼠生精细胞胰岛素信号通路胰岛素受体底物(IRS)1、胰岛素样生长因子(IGF)-1、IGF结合蛋白(IGFBP)3基因表达的影响。方法选用原代大鼠生精细胞为研究对象,采用自由基损伤的方法建立细胞衰老模型。运用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹、免疫荧光技术,观察松果菊苷对生精细胞胰岛素信号传导通路关键基因IRS1、IGF-1、IGFBP3 mRNA和蛋白表达变化。结果衰老组IRS1、IGF1的荧光免疫染色的平均光密度明显低于正常组(P0.05),IGFBP3平均光密度明显高于正常组(P0.05),Western印迹半定量分析结果与荧光免疫结果一致。衰老组IRS1、IGF1 mRNA表达水平明显低于正常组(P0.05),IGFBP3 mRNA表达水平明显高于正常组(P0.05)。松果菊苷干预后生精细胞中IRS1,IGF1 mRNA和蛋白表达明显高于衰老组(P0.05),IGFBP3表达明显低于衰老组(P0.05)。结论松果菊苷可通过降低IGFBP3表达,提高IRS1,IGF1表达,延缓生精细胞的衰老状态。     

脂多糖对大鼠胰岛素瘤细胞INS-1自噬和凋亡的影响

目的研究脂多糖（LPS）对大鼠胰岛素瘤细胞INS-1自噬和凋亡的影响及其可能机制。方法取处于对数期生长的INS-1细胞用于实验,分别用0．1、1．0、10．0mg／LLPS处理细胞,24h后用磺酰罗丹明B（SRB）染色法检测LPS对INS-1细胞增殖的影响,用二氯荧光素双醋酸盐（DCFH-DA）作为荧光探针检测细胞内活性氧的水平变化,应用Western blotting法检测细胞自噬体膜上自噬标志分子微管相关蛋白1的轻链3-Ⅱ（Map1LC3-Ⅱ）和凋亡标志蛋白聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶（PARP）切割带的变化。将INS-1细胞的自噬必需基因7（A增7）通过siRNA介导的RNA干扰手段进行沉默,然后以1．0mg／LLPS处理细胞,24h后应用Western blotting检测细胞中Atg7、Map1LC3-Ⅱ和PARP切割带的水平。先用400μmoL／L的活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）处理INS-1细胞,1h后加入10．0mg／L的LPS,24h后应用Western blotting法检测细胞Map1LC3-Ⅱ蛋白和PARP切割蛋白的水平。组间数据比较采用方差分析和t检验。结果与对照组（0．755±0．030）比较,0．1、1．0、10．0mg／LLPS组INS-1存活率降低,差异有统计学意义（分别为0．658±0．042、0．658±0．015、0．634±0．029,F=30．98,P〈0．01）;与对照组（0．447±0．012）相比,0．1、1．0、10．0mg／LLPS组Map1LC3-Ⅱ蛋白水平增加,差异有统计学意义（分别为0．992±0．030、0．949±0．020、0．982±0．013,F=525．79,P〈0．01）;与对照组（0．055±0．001）相比,0．1、1．0、10．0mg／LLPS组PARP切割蛋白水平增加,差异有统计学意义（分别为0．313±0．007、0．390±0．011、0．500±0．033,F=327．09,均P〈0．01）;与对照组比较,10mg／LLPS组活性氧产生明显增多。与对照组比较,转染Atg7siRNA组Atg7、Map1LC3-Ⅱ和PARP切割蛋白水平均显著下降,差异均有统计学意义（t=156．069、123．154、103．246,均P〈0．01）。与LPS10．0mg／L组比较,LPS10．0mg／L＋NAC组Map1LC3-Ⅱ和PARP切割蛋白水平均显著下降,差异均有统计学意义（t=66．37、26．84,均P〈0．01）。结论LPS可诱导INS-1细胞的自噬和凋亡,且其所诱导的凋亡依赖于自噬的发生;活性氧参与了LPS诱导的INS-1细胞的自噬和凋亡。     

在大鼠脂肪组织及3T3-L1细胞中甘丙肽对抵抗素基因表达的影响

目的　了解甘丙肽对脂肪组织及 3T3 L1细胞抵抗素表达的影响。方法　应用RT PCR、原位杂交的方法验证甘丙肽及其受体在大鼠脂肪组织及脂肪细胞中的表达。应用Northern印迹的方法观察甘丙肽对抵抗素表达的影响。结果　甘丙肽及其受体 1和 2在大鼠脂肪组织中均有表达 ,相对于甘丙肽受体 2 ,受体 1表达的丰度较高。给SD大鼠注入不同剂量甘丙肽 4h后 ,抵抗素基因表达下降。诱导成熟的脂肪细胞加入甘丙肽后 ,在 2h ,4h ,抵抗素的表达无明显的改变 ,但 2 4h可见抵抗素的表达受到抑制。结论　甘丙肽可以在体内及体外抑制抵抗素的表达 ,提示在大鼠脂肪组织中表达的甘丙肽可能在能量代谢及胰岛素抵抗中起到一定的作用     

波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响及其分子机制。方法将INS-1细胞随机分为三组。正常对照组(NG):含5.5 mmol/L葡萄糖;持续高糖组(SHG):含33.3 mmol/L葡萄糖;波动性高糖组(IHG):含5.5 mmol/L或33.3 mmol/L葡萄糖,每24 h交替换液1次,均培养3 d。3 d后检测各组INS-1细胞活性及凋亡百分率,胰岛素分泌量,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(CytC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平以及胰岛素(insulin)和胰岛十二指肠同源盒-1(PDX-1)mRNA表达水平。结果与NG组相比,SHG组与IHG组凋亡率均明显升高,细胞活性明显降低,Bax、CytC及Caspase-3表达明显增强,胰岛素分泌量及insulin、PDX-1 mRNA表达水平均明显降低(P均<0.01);与SHG组相比,IHG组细胞活性及胰岛素分泌量明显降低,凋亡率及Caspase-3明显增加(P均<0.01),Bax、CytC表达水平与insulin及PDX-1 mRNA表达水平均未见统计学差异。结论波动性高糖能导致胰岛细胞凋亡增加和功能障碍,其机制可能与上调Bax、CytC、Caspase-3及降低insulin与PDX-1基因表达等相关。     

胰岛素上调3T3-L1细胞apelin基因表达的初步观察

Northern印迹法证实apelin在分离的小鼠脂肪细胞上有表达，其表达量随3T3-L1细胞分化而渐增。胰岛素上调3T3-L1脂肪细胞apelin的表达，提示脂肪细胞apelin的表达可能与肥胖、胰岛素抵抗、高血压相关。     

肾上腺素和葡萄糖对3T3-L1脂肪细胞水孔蛋白mRNA表达的影响

目的：通过细胞培养研究肾上腺素、葡萄糖对成熟脂肪细胞水孔蛋白（aquaporin adipose,AQPap）基因表达的影响。了解AQPap基因表达的影响因素，探讨其在肥胖及糖尿病发病中所起作用。方法：用不同浓度（10^-6mol/L、10^－7mol/L、10^-8mol/L、10^-9mol/L）的肾上腺素刺激诱导分化第9天的3T3－L1细胞6h，另以不同浓度的葡萄糖（5．6mmol/L、11．2mmol/L、16．8mmol/L、33．6mmol/L）刺激细胞48h。提取细胞RNA。运用半定量RT－PCR技术检测AQPap mRNA表达量的变化。结果：与对照组相比，给予不同浓度的肾上腺素刺激分化成熟的3T3－L1细胞，其AQPap mRNA的表达量变化，差异无显著性意义（P＞0．05）。 葡萄糖浓度的升高使培养细胞AQPap mRNA的表达量显著增强（P＜0．05，16．8mmol/L葡萄糖刺激培养细胞48h,AQPap mRNA表达量约是对照组（葡萄糖浓度为5．6mmol/L）的3倍。结论：肾上腺素是一种脂解激素，它对脂肪细胞AQPap mRNA的表达无影响；高糖状态下AQPap mRNA表达明显增强。     

游泳对高脂饮食老年大鼠高密度脂蛋白及载脂蛋白A1基因表达的影响

目的探讨运动对高脂饮食老年大鼠血脂代谢的影响. 方法建立饮食性高脂血症大鼠模型,采用不同时间(45 min和90 min)的游泳运动,测定各组大鼠血清胆固醇(TC)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和载脂蛋白A1(apoA1);并用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组大鼠肝脏apoA1 mRNA水平. 结果参加运动的高脂饮食大鼠血清HDL-C分别为(1.48±0.24)mmol/L和(1.49±0.25)mmol/L,apoA1分别为(0.13±0.07)mmol/L和(0.17±0.03)mmol/L,均较对照组和单纯高脂组升高(P＜0.05),高脂饮食的老年大鼠肝脏apoA1mRNA表达明显减少为0.651±0.24(P＜0.01),而游泳运动则使其显著恢复,两运动组apoA1 mRNA表达量分别为1.623±0.61和1.577±0.49,差异无显著性(P＜0.05). 结论游泳运动通过调节大鼠肝脏apoA1 mRNA的表达,影响高脂饮食大鼠血浆高密度脂蛋白(HDL)的变化.     

巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中载脂蛋白E基因表达的变化

研究单核－巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中细胞载脂蛋白E表达的变化,以佛波醇酯（10^-7mol/L)诱导人单核细胞性THP－1细胞分化为巨噬细胞（72h),再以氧化型低密度脂蛋白（50mg/L)刺激巨噬细胞形成泡沫细胞（48h),用逆转录－聚合酶链反应检测这一过程中载脂蛋白E在mRNA水平上的变化。结果显示,单核细胞分化为巨噬细胞的同时伴随着载脂蛋白E表达的增加,巨噬细胞吞噬脂质转化为泡沫细胞后载脂蛋白E的表达进一步增加。     

SNAP对大鼠生长激素腺瘤GH3细胞增殖、生长激素分泌的影响及机制探讨

目的观察一氧化氮(NO)释放剂S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)对大鼠生长激素(GH)腺瘤GH3细胞增殖、GH分泌的影响,并探讨其机制。方法将细胞分为A、B、C、D组,A组常规培养,B、C、D组分别加ghrelin、SNAP、SNAP+ghrelin培养。分别于培养第0、1、2、3、4、5、6天,用MTT法检测细胞吸光度值观察细胞增殖情况;培养2 h后,用ELISA法检测GH3细胞培养液中的GH,Western blot法检测GH3细胞中的磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)。结果 A组培养第2、3、4、5、6天时细胞吸光度值分别为0.381±0.006、1.664±0.005、3.411±0.005、5.221±0.005、10.055±0.005,B组分别为1.062±0.005、3.115±0.005、4.512±0.005、6.656±0.005、11.060±0.005,C组分别为0.161±0.006、0.413±0.005、0.931±0.005、1.861±0.005、5.612±0.005,D组分别为0.219±0.004、0.865±0.005、1.712±0.005、3.059±0.005、6.561±0.005;B组与A组、C组与A组、D组与B组比较,P均<0.01。培养2 h时,A、B、C、D组GH3细胞培养液的吸光度值分别为0.080±0.002、0.165±0.011、0.041±0.003、0.106±0.005,pERK表达量分别为0.301 8±0.004 5、0.682 5±0.003 8、0.192 3±0.008 6、0.298 5±0.006 7,B组与A组、C组与A组、D组与B组比较,P均<0.01。结论 SNAP可抑制ghrelin诱导的GH3细胞增殖及GH分泌,可能与其阻断ghrelin激活的ERK信号通路有关。     

实验性大鼠肝纤维化中Smad3蛋白和细胞外信号调节激酶1的表达

对大鼠纤维化肝组织中Smad3蛋白和细胞外信号调节激酶1(ERK1)的表达进行检测，初步探讨这两种信号分子在肝纤维化发生中的作用。     

胰岛素样生长因子Ⅱ基因在大鼠INS-1细胞中表达的调控

目的 研究不同浓度葡萄糖对INS－1细胞IGF－Ⅱ基因表达的调节及对INS－1细胞增殖的作用，并比较其对IGF－Ⅱ与胰岛素基因表达的关系。方法 采用Northern杂交分析IGF－ⅡmRNA表达，用^3H-胸腺嘧啶掺入法检测细胞增生。结果 IGF－Ⅱ在INS－1细胞中表达。当葡萄糖浓度为10－20mmol/L时，IGF－ⅡmNRA表达量提高3倍以上。佛波醇十四乙酸对INS－1细胞的IGF－ⅡmNRA的表达及增生不起作用，而Forskolin可抑制INS－1细胞的IGF－Ⅱ mRNA表达。结论 高浓度葡萄糖促进INS－1细胞中IGF－Ⅱ mRNA表达，低浓度的葡萄糖环境中胰岛素mRNA的表达量高。     

肺癌细胞中PIK3AP1基因表达变化及其过表达对细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的观察肺癌细胞中PIK3AP1基因的表达情况,分析其表达与患者预后的关系,以及PIK3AP1基因过表达对肺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法体外培养正常支气管上皮细胞系HBEC,非小细胞肺癌细胞系A549、HCC827、H358,小细胞肺癌细胞系H69、H526、H82。采用RT-PCR法检测上述细胞中PIK3AP1 m RNA的表达。利用Kaplan-Meier plotter在线生存分析数据库,对肺癌组织中PIK3AP1 m RNA表达与患者预后的相关性进行分析。取不表达PIK3AP1的肺癌细胞,将其分为观察组和对照组,以慢病毒转染技术分别转染PIK3AP1过表达载体和空载体,采用Brd U法观察细胞增殖能力,Transwell实验观察细胞侵袭能力,细胞划痕实验观察细胞迁移能力,Western blotting法检测AKT、p-AKT蛋白表达。结果 PIK3AP1基因在小细胞肺癌细胞系H69、H526、H82中高表达,在非小细胞肺癌细胞系A549、HCC827、H358中低表达或不表达,在正常支气管上皮细胞中不表达。PIK3AP1基因高表达和低表达肺癌患者的中位生存期分别为6...     

长春新碱对INS-1细胞hTERT、Sp1、c-myc基因表达影响的研究

目的观察抗肿瘤药物长春新碱（Vincristine,VCR）对大鼠胰岛B细胞瘤株INS-1细胞增殖和侵袭的抑制作用和hTERT、Sp1、c-myc表达的影响及其意义,探讨胰岛B细胞瘤的发病机制。方法 INS-1分为对照组（不加VCR）和实验组（加入浓度分别为0.008 mg/mL、0.04 mg/mL、0.2 mg/mL、1 mg/mL的VCR）。两组培养24 h后,用MTT比色法检测INS-1细胞的增殖抑制率;用Transwell侵袭试验检测INS-1细胞的侵袭力;RT-PCR检测各组细胞中hTERT、Sp1、c-myc基因的表达。结果实验组抑制率明显高于对照组（P〈0.05）;且随着VCR浓度的增加,INS-1细胞生长抑制率逐渐增加（P〈0.05）;Transwell小室培养细胞24 h后,实验组侵袭到下层膜的细胞数为（63.26±5.12）个,对照组为（150.65±4.02）个（P〈0.01）;与对照组比较,随着时间的延长,实验组的hTERT、Sp1、c-myc mRNA基因在INS-1细胞的表达也逐渐减弱（P均〈0.05）。结论 VCR能抑制INS-1细胞增殖和侵袭,可能通过抑制Sp1、c-myc和hTERT表达,从而抑制INS-1的端粒酶活性,进而抑制细胞增殖和降低侵袭能力。     

生长激素和生长抑素对大鼠胰岛β细胞功能和糖代谢的影响

目的探讨生长激素（GH）和生长抑素（SS）对大鼠胰岛β细胞功能和糖代谢的影响。方法分组给大鼠连续15d皮下注射GH、SS,测定体内GH、胰岛素及血糖水平;镜下观察胰腺和胰岛β细胞形态。同时设立安慰剂对照组。结果GH组GH水平及血糖水平较正常对照组升高（P〈0.05）;SS组GH水平及β细胞分泌功能指数较正常对照组降低（P〈0.05）;胰岛素水平及胰岛素敏感性指数各组间差异无显著性（P〉0.05）;光镜下胰岛β细胞染色GH组较正常对照组加深,SS组和正常对照组着色较淡。结论GH可以诱导胰岛素抵抗（IR）,SS可以改善IR。