MicroRNA在癌症发生中的分子机制

MicroRNA是真核生物中一类长度约为22个核苷酸的参与基因转录后水平调控的非编码小分子RNA.这些小分子RNA通过碱基配对与靶mRNA序列的3'非翻译区或编码区结合,促进目标mRNA降解或抑制蛋白翻译,调控靶基因的表达.它们在细胞增殖、分化、凋亡、基因调控及疾病的发生中扮演重要的角色.已有研究表明,miRNA与肿瘤的发生相关.阐明miRNA在癌症发生中的分子机制,对癌症的靶基因治疗策略具有重要意义.     

MicroRNA在癌症发生中的分子机制

MicroRNA是真核生物中一类长度约为22个核苷酸的参与基因转录后水平调控的非编码小分子RNA。这些小分子RNA通过碱基配对与靶mRNA序列的3’非翻译区或编码区结合，促进目标mRNA降解或抑制蛋白翻译，调控靶基因的表达。它们在细胞增殖、分化、凋亡、基因调控及疾病的发生中扮演重要的角色。已有研究表明，miRNA与肿瘤的发生相关。阐明miRNA在癌症发生中的分子机制，对癌症的靶基因治疗策略具有重要意义。     

MicroRNAs在干细胞的表达及其成骨分化中作用

微小RNA(miRNA)是一类内源性、长约22nt的非编码单链RNA分子,通过与靶mRNA特异性的结合导致靶mRNA降解或抑制其翻译,对基因进行转录后调控。本文就microRNA在干细胞中的表达特点及其作用、microRNA在干细胞向成骨定向分化扮演的角色以及microRNA成骨细胞增殖分化过程中的调控机制等方面的进展予以综述。     

RNA结合基序蛋白3的作用研究进展

RNA结合蛋白(RBPs)参与RNA转录后调控和翻译,它在细胞凋亡、细胞周期等细胞生命活动中发挥着至关重要的作用,并且基于其在肿瘤和神经保护方面的相关研究显示,它是目前研究细胞内RNA调节方式的热点,但对其的机制研究尚不清楚,本文以RNA结合基序蛋白3(RBM3)分子为代表就RNA结合蛋白的基本结构、机制和研究进展进行综述。     

大鼠pEGFP-PLZF真核载体的构建及在精原细胞中的表达

目的:构建真核表达重组质粒pEGFP-N1-PLZF,并了解其在大鼠精原细胞中的融合蛋白表达情况.方法:参考分子克隆技术,采用RT-PCR的方法从大鼠睾丸组织中扩增早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF),将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,并用双酶切、测序进行鉴定;将重组质粒用脂质体转染的方法导入精原细胞中,观察有无荧光的表达及用Western blot检测蛋白表达情况.结果:实验从大鼠睾丸组织中获取了编码plzf基因的全序列cDNA,产生了2 kb的目的插入片段,与pEGFP-N1载体连接后经酶切电泳鉴定及DNA测序证实序列正确;重组质粒转染精原细胞24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,并用Western 1blot:检测到106 kD目的蛋白的表达.结论:新构建的重组质粒pEGFP-N1-PLZF通过鉴定,结构正确.转染到精原细胞后能在其中表达,发挥功能,为后续研究奠定了基础,对研究PLZF调控精原细胞增殖和分化机制具有重要的意义.     

RNA结合蛋白ELAVL1与肿瘤进展的关系研究

胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1/HuR)是一种RNA结合蛋白,通过与特定的mRNA结合参与转录后调控,从而影响细胞增殖、凋亡、分化等生物学行为.近年来研究表明,ELAVL1与肿瘤细胞的增殖、血管生成、侵袭、转移及耐药性明显相关.本文就ELAVL1蛋白与肿瘤进展关系展开综述.     

长链非编码RNA在非肿瘤性肝病中的研究现状与展望

<正>表观遗传学是研究基因表达发生了可遗传的改变,而DNA序列不发生改变的一门生物学分支,对细胞的生长分化及肿瘤的发生发展至关重要。表观遗传学的主要机制包括DNA甲基化、组蛋白修饰及近年来发现的非编码RNA。非编码RNA是指不能翻译为蛋白的功能性RNA分子,其中常见的具调控作用的非编     

RBM家族在肝癌中作用及其机制的研究进展

RNA结合基序蛋白是一类RNA结合蛋白，广泛参与RNA的转录、翻译、代谢等生物学过程，并与RNA可变剪切事件息息相关，在细胞的增殖凋亡等生命过程中起到重要的调控作用。近年来许多研究者发现，RBM蛋白家族的异常表达及功能失调，与肝癌的发生发展密切相关。本文就RBM蛋白家族成员在肝癌中的作用进行综述，了解RBM家族中各成员蛋白在肝癌中发生发展的作用及机制，为肝癌的治疗及预后提供一定的参考。     

P19细胞分化过程中激活型bHLH基因的表达

目的检测P19细胞分化过程中激活型碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）转录调控因子mRNA的表达,探讨其神经分化机制。方法用维甲酸（RA）诱导P19细胞分化,通过反转录聚合酶链反应（RT PCR）检测P19分化前以及分化后2、4?d时果蝇As c的哺乳动物类似物（Mash 1)、果蝇atonal的哺乳动物类似物(Math 1)、Neurological stem cell leukemia 2(Nscl 2) mRNA的表达。采用免疫印迹方法(Western blot)检测Mash 1蛋白的表达。结果Mash 1 mRNA和Nscl 2 mRNA 随分化表达升高,在分化后2?d到达顶峰后下降,Math 1 mRNA在分化后期表达明显。Mash 1蛋白的表达与mRNA的表达一致。结论P19细胞分化过程中bHLH转录因子mRNA的表达具有明显的时相性,为解释神经细胞分化调控机制提供实验基础。     

微小RNA在丁酸钠诱导胚胎干细胞分化为肝细胞过程中表达差异谱的变化

目的探讨微小RNA(microRNA)在丁酸钠诱导胚胎干细胞分化为肝细胞过程中表达差异谱的变化,为进一步研究microRNA调控胚胎干细胞向肝细胞分化的分子机制奠定基础。方法分别于丁酸钠诱导小鼠胚胎干细胞向肝细胞分化过程中的第0、6、9天提取细胞总RNA,并分离获得分化细胞microRNA。利用microRNA芯片技术将细胞microRNA与哺乳动物microRNA芯片杂交,采用LuxScan 3.0图像分析软件和SAM(version 2.1)软件对芯片杂交结果进行数据分析,筛选出明显差异表达microRNA并进行靶基因预测。结果胚胎干细胞向肝细胞方向分化6 d时明显差异表达的microRNA共39个,其中17个表达上调、22个表达下调;9 d时明显差异表达的microRNA共44个,其中17个表达上调,27个表达下调。明显时相差异表达的36种microRNA中15种与组蛋白去乙酰化酶相关联。结论在丁酸钠诱导胚胎干细胞向肝细胞分化过程中,组蛋白去乙酰化酶及与其相关的microRNA很可能具有重要的调控胚胎干细胞生长和分化的作用。     

长链非编码RNA在类风湿性关节炎患者和健康人PBMCs中差异表达及其发病机制

目的 探究长链非编码RNA(IncRNA)在类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)和健康人PBMCs中的差异表达,并对其分析以进一步阐明RA的发病机制.方法 选取2016年1-4月在该院风湿免疫科就诊的RA患者22例作为观察组,22例健康人作为对照组.采用Agilent Human IncRNA芯片测定5例RA患者和5例健康人的PBMCs中的In-cRNA和mRNA的差异表达;利用GO以及Pathway分析检测出差异表达的IncRNA的功能分布,构建起IncRNA-mRNA的共表达网络,采用Trans-与Cis-预测其中与RA发病相关的IncRNA.结果 IncRNA在RA患者的PBMCs和健康人的PBMCs中共存在1 623条差异表达,mRNA差异表达则有851条.GO、Pathway分析表明,差异表达的mRNA的主要功能是参与蛋白激酶、核苷酸、金属离子的结合和转录调节,还参与B细胞受体信号通路、TNF信号通路的调节.经过Cis-和Trans-分析预测和Re-al-time PCR验证后找到3个IncRNA可能与RA发病有关,分别为NONHSAT 120696、uc.80+、NONHSAT 031501.结论 IncRNA在RA患者PBMCs和健康人PBMCs中存在差异表达,NONHSAT 120696、uc.80+、NONHSAT 031501 3个IncRNA可能与RA的发病有关.     

Ezh2在全反式维甲酸诱导的P19神经细胞分化过程中的作用

目的 探讨组蛋白甲基转移酶Ezh2在P19神经细胞分化中的作用.方法 通过Western印迹检测全反式维甲酸 (RA)诱导TuJ1蛋白的表达;通过染色质免疫沉淀技术检测Ngn1基因启动子区Ezh2的结合与H3K27三甲基化的变化;通过实时定量RT-PCR检测RA诱导P19细胞分化后 Ezh 2 mRNA表达.结果 在RA诱导P19细胞中,Ezh2与H3K27me3在Ngn1启动子区的结合逐渐升高,并在诱导后第2天达到高峰,然后迅速降低,随后出现神经分化特异标志.结论 Ezh2在RA诱导的P19细胞早期产生一种抑制性的组蛋白修饰标志H3K27me3,通过避免Ngn1的过早表达,确保P19细胞的正常分化.     

类风湿关节炎滑膜巨噬细胞基因芯片分析

目的: 寻找并分析类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）的关键基因,从而更好地理解RA的潜在发病机制。方法: 采用表达谱的综合分析方法鉴定RA滑膜液巨噬细胞中差异表达基因（differential expression genes,DEGs）。利用功能注释、蛋白蛋白相互作用(protein protein interaction,PPI)网络构建以及寻找核心基因,探讨DEGs在RA中的潜在生物学作用。在GSE17755数据集中对鉴定的DEGs在RA外周血中的mRNA表达水平进行验证。结果： 与对照组相比,RA患者滑膜液巨噬细胞中共找出489个DEGs,其中上调基因359个,下调基因130个。DEGs在炎症反应调节、趋化因子受体结合、肿瘤坏死因子信号通路等方面均有较显著的富集。STAT1、CXCL10、FPR2、ITGAM、PPBP、IRF7、CCL5、OASL、OAS3、IRF1是DEGs的PPI网络中的核心基因。在GSE17755数据集中检测除FPR2之外的9个核心基因的mRNA表达情况,结果表明,与正常人相比,RA患者外周血细胞中STAT1、PPBP、OASL的表达水平明显上调,ITGAM、IRF7、CCL5、IRF1有下调的趋势。结论： STAT1与OASL等基因在RA疾病中可能发挥重要作用。     

活化的Mir-30a-wnt/β-catenin信号轴通过上调组织蛋白酶K的表达促进牙周膜干细胞向成牙骨质细胞分化

目的 探讨牙周膜干细胞（PDLSC）成牙骨质向分化过程中mir-30a-wnt/β-catenin信号轴调控组织蛋白酶K（CTSK）表达的功能作用。方法 极限稀释法分离培养PDLSC,釉基质蛋白衍生物（EMD）诱导细胞成牙骨质向分化。在细胞分化过程中,通过microRNA芯片筛选差异表达的microRNA。首先,给予不同分组细胞EMD诱导和/或抑制microRNA表达等处理,无干预组细胞作为对照。利用qPCR和Western blot技术首先验证差异表达的microRNA是否能够调控CTSK的表达。之后,将细胞膜片复合陶瓷支架材料植入裸鼠皮下,利用免疫组织化学方法观察成牙骨质细胞标记蛋白CAP和CEMP-1的表达变化,明确受microRNA 调控的 CTSK 表达变化是否参与了 PDLSC 成牙骨质分化。在此基础上,从蛋白学水平观察wnt信号通路在microRNA调节CTSK表达过程中是否发挥了相应功效。结果 EMD诱导PDLSC成牙骨质向分化过程中,多种microRNA表达发生变化,其中miR-30a表达出现特异性上调（P<0.05）。表达上调的miR-30a进一步调节CTSK的表达（P<0.05）,促进PDLSC异位形成类牙骨质样结构,高表达成牙骨质细胞标记蛋白CAP和CEMP-1。抑制wnt/β-catenin信号通路,miR-30a对CTSK的表达调控作用出现相应减弱。结论 EMD可能通过上调miR-30a的表达激活wnt/β-catenin信号通路从而经mir-30a-wnt/β-catenin信号轴调控CTSK诱导PDLSC向成牙骨质细胞方向分化。     

Small interfering RNA-mediated knockdown of Notchl in lung T cells of asthmatic mice affects T cell differentiation

Background The immunologic response to allergens mediated by T lymphocytes is an incipient key element in the pathogenesis of asthma,and Th1/Th2 balance is regarded as the core of asthma pathogenesis.Notch is a single-pass transmembrane receptor protein that regulates differentiation,proliferation and apoptosis in a broad range of cells.It is considered that the Notch signal pathway works in every stage of T cell development and differentiation.Whether the pathway of asthma pathogenesis is related to Notch1 remains unknown.This study is aimed to investigate whether the pathway of asthma pathogenesis is related to Notch1 by examining the effect of knockdown of the Notch1 gene by small interfering RNA on T cell differentiation.Methods An OVA-induced asthma mouse model was established.The expression of Notch1 in the tissue and T cells of the lung from asthmatic mice was detected by RT-PCR and Western blotting.The expression of Notch1 and cytokine interleukin(IL)-4 and interferon(IFN)-γ in activated lung T cells was detected by RT-PCR and enzyme-linked immunosorbent assay after blocking Notch1 by small interfering RNA.Results The mRNA and protein expression of Notch1 increased significantly both in the lung tissue and lung T cells of asthmatic mice(both P＜0.05).IL-4 decreased and IFN-γ increased significantly in active lung T cells after Notch1 was blocked by Notch1-specific small interfering RNA(IL-4:(2.51±0.51)pg/ml vs 0.64±0.27)pg/ml protein;IFN-γ:(21.72±4.24)pg/ml vs(39.79±4.09)pg/ml protein,P＜0.05).Conclusion This study demonstrated that the Notch1 signal might play a role in the pathogenesis of asthma by its involvement in Th1/Th2 differentiation.     

基于网络药理学探讨托法替布联合甲氨蝶呤治疗 类风湿关节炎的作用机制

目的:探讨托法替布联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎（RA）的分子靶点和作用机制。方法:通过PharmMapper 平台获取托 法替布和甲氨蝶呤的预测药效团及其主要元素,基于STRING 平台分析靶蛋白之间的相互作用关系（PPI）,采用Cytoscape 3.7.2 软件进行药物的预测靶点可视化分析, 并通过GO 富集分析和KEGG 通路分析探究其治疗RA 的可能分子机制。结果: 通过 PharmMapper 平台共获得137 个托法替布和甲氨蝶呤的预测靶蛋白/基因,PPI 结果证实Janus 激酶（JAK）2、JAK3、信号转导与 转录激活因子（STAT）1、蛋白激酶B（AKT）1、白细胞介素（IL）-2、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）1、MAPK8、表皮生长因子受体 （EGFR）等为主要预测靶蛋白/基因,GO 分析表明上述靶蛋白/基因在受损DNA 结合（P=0.002）、ATP 酶结合（P=0.002）、核受体 活性（P=0.002）、转录因子活性（P=0.002）、直接配体调控序列特异性DNA 结合（P=0.002）、类固醇激素受体活性（P=0.004）、生长 因子受体结合（P=0.022）和内肽酶活性（P=0.029）等功能处显著富集,结合KEGG 通路分析证实托法替布联合甲氨蝶呤与JAKSTAT 、转化生长因子（TGF）-β、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/-AKT、p53、Ras、MAPK、血管内皮生长因子（VEGF）、核因子（NF）-κB、 Notch 等信号通路密切相关。结论:托法替布联合甲氨蝶呤治疗RA 的分子机制具有多基因、多靶点的特点,并通过抑制炎症因 子、血管生成、细胞自噬等方式调节免疫性疾病。     

类风湿性关节炎患者循环microRNAs生物标志物的筛选及鉴定

目的：分析类风湿性关节炎（RA）患者血浆中差异表达的microRNAs（miRNAs）。方法：采用miRNA芯片检测、筛选RA患者与正常人血浆中表达有显著变化的miRNAs,并采用RT-qPCR技术对芯片数据进行验证。数据处理采用GeneSpring GX软件,t检验和方差分析用于统计学分析。结果：RA患者与正常人间存在差异的循环miRNAs共有40个,其中18个上调,22个下调。根据循环miRNAs在芯片中表达差异的倍数和潜在的生物学价值,选取4个miRNAs进行RT-qPCR验证,候选的miRNAs与正常对照间差异有统计学意义（P＜0.05）,证实芯片结果可靠性。结论：RA患者体内具有差异表达的循环miRNAs,这些循环miRNAs可作为一种潜在的RA候选生物标志物。     

Wnt3a在大鼠骨髓源性胆碱能神经元中的表达

目的 通过研究大鼠骨髓基质细胞诱导的胆碱能神经元中Wnt3a的表达变化,了解Wnt3a在胆碱能神经元诱导分化过程中的作用,揭示神经元分化过程中可能的信号通路.方法 取Wistar雄性大鼠的股骨骨髓,培养骨髓基质细胞,经三代纯化CD71免疫细胞化学鉴定后进行分组实验.实验共分四组:骨髓基质细胞组,未加任何诱导因子;胆碱能神经元诱导分化组,加入Shh,RA和bFGF诱导基质细胞向胆碱能神经元分化,并用ChAT鉴定胆碱能神经元;神经干细胞诱导组,加入bFGF、EGF和RA诱导基质细胞为神经干细胞;自然分化组,加入血清诱导分化.提取细胞总RNA,利用RT-PCR进行Wnt3a的半定量分析.结果 与对照的骨髓基质细胞组,神经干细胞诱导组及自然分化组相比,Wnt3a在胆碱能神经元组中表达最高并且有统计学差异.结论 Wnt3a在骨髓基质细胞来源的胆碱能神经元中高表达,提示Wnt3a可能是胆碱能神经元分化的Wnt信号通路中的一个环节.