过氧化氢对原代心肌细胞及H9c2细胞的损伤作用

目的:考察过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞损伤作用的相似性。方法:选用H9c2心肌细胞与新生大鼠原代心肌细胞,应用MTT法测定不同浓度过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞活性的影响,观察两株细胞对过氧化氢损伤的敏感性。结果:600～1 600μmol/L的过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞所造成的氧化损伤均具有浓度依赖性,1 200μmol/L的过氧化氢使H9c2心肌细胞的存活率降低40%～60%(P<0.01),表现出与原代心肌细胞相似的H2O2损伤敏感性(P>0.05)。结论:H9c2心肌细胞与原代心肌细胞对过氧化氢氧化损伤具有相似的作用和浓度依赖性。     

缬沙坦对乳鼠心肌细胞过氧化损伤的保护作用

目的:探讨缬沙坦对过氧化氢(H2O2)致心肌细胞过氧化损伤的保护作用.方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞过氧化损伤模型.用2～10 μmol/L缬沙坦预处理后,测定各组心肌细胞存活率;用10μmol/L缬沙坦预处理后,检测各组心肌细胞培养介质中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)浓度.结果:在2～10 μmol/L范围内,缬沙坦剂量依赖性地提高心肌细胞过氧化损伤的细胞存活率(P＜0.05);10μmol/L缬沙坦预处理后,培养介质中LDH和MDA的生成减少(P＜0.05),而SOD含量增高(P＜0.05).结论:缬沙坦可能通过稳定细胞膜、抗脂质过氧化反应及提高清除氧自由基,对心肌心肌细胞过氧化损伤起剂量依赖性保护作用.     

HSP70在化学性缺氧诱导毛细胞损伤中的作用

目的：探讨热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）在氯化钴（cobalt chloride,CoCl2）诱导听细胞损伤中的作用。方法：应用CoCl2处理HEI-OC1听细胞,建立化学性缺氧诱导耳蜗外毛细胞损伤的体外模型。细胞计数试剂盒-8（cell count kit 8,CCK-8）比色法检测细胞存活率,免疫印迹法（Western blot）检测HSP70的蛋白表达。结果：在150-750μmol/L浓度范围内,不同浓度的CoCl2处理听细胞24 h可引起明显的细胞毒性,使细胞存活率呈剂量依赖性地降低。300μmol/L CoCl2作用听细胞30-240 min可时间依赖性地上调HSP70的蛋白表达。HSP70抑制剂槲皮素（quercetin,Quer）可在蛋白水平下调CoCl2引起的听细胞内HSP70表达增加。Quer通过抑制HSP70的表达可加重CoCl2诱导的听细胞缺氧性损伤。结论：适应性HSP70表达增加可保护听细胞对抗缺氧诱导的损伤。     

硫化氢对化学性缺氧诱导PC12细胞凋亡的影响

【目的】 探讨硫化氢(H2S)对抗二氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的作用及其初步机制&#65377;【方法】 应用化学性缺氧模拟剂CoCl2在PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型;以硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率; Hoechst33258 染色检测细胞凋亡的形态学变化; 罗丹明123(Rh123) 染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位(MMP); 2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧 (ROS)水平&#65377;【结果】 CoCl2引起PC12细胞的存活率显著降低及凋亡率明显增加, 同时引起PC12细胞的MMP 明显降低及ROS 生成显著增加&#65377;在600 μmol/L CoCl2处理PC12细胞前,应用100 ~ 400 μmol/L NaHS 预处理30 min,呈浓度依赖性地阻断CoCl2引起PC12细胞的存活率降低; 200 μmol/L&#65380;400 μmol/L NaHS 预处理能显著地降低600 μmol/L CoCl2 引起PC12 细胞的凋亡率增加并阻断CoCl2 引起的MMP降低及ROS升高&#65377;【结论】 H2S 具有神经细胞保护作用, 能明显地对抗CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,此作用可能与其减少ROS生成,提高MMP有关&#65377;     

缺氧、缺氧/复氧对心肌细胞内ROS、MAPKs活性表达的影响

目的:研究缺氧、缺氧/复氧条件对大鼠心肌细胞(H9c2)活性氧(ROS)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)活性及对细胞凋亡的影响.方法:使用化学性低氧模型诱导剂氯化钴(CoCl2)处理H9c2心肌细胞建立缺氧、缺氧/复氧模型.在不同浓度CoCl2(150、300、450、600、900、1200、2400μmol/L)...     

Damage Effect of Hydrogen Peroxide on Primary Cardiac Myocytes and H9c2 Cells

目的:考察过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞损伤作川的相似性.方法:选用H9c2心肌细胞与新生大鼠原代心肌细胞,应用MTT法测定不同浓度过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞活性的影响,观察两株细胞对过氧化氢损伤的敏感性.结果:600～1 600μ mol/L的过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞所造成的氧化损伤均具有浓度依赖性,1 200 μmol/L的过氧化氢使H9c2心肌细胞的存活率降低40％～60％ (P<0.01),表现出与原代心肌细胞相似的H2O2损伤敏感性(P>0.05).结论:H9c2心肌细胞与原代心肌细胞对过氧化氢氧化损伤具有相似的作用和浓度依赖性.     

硫喷妥钠调控miR 664 1 5p对氯化钴诱导的心肌细胞缺氧损伤的保护作用

【摘要】目的 研究硫喷妥钠对氯化钴（CoCl2）诱导的大鼠心肌细胞H9c2缺氧损伤的保护作用及潜在机制。方法 对H9c2细胞进行CoCl2处理建立缺氧损伤模型（模型组）,分别采用125、250、500 nmol/L的硫喷妥钠处理600 μmol/L CoC2的DMEM培养液培养H9c2细胞,分别记为药物1、2、3组,对照组为不含CoCl2的DMEM培养液培养H9c2细胞。CCK8法和流式细胞术分别检测细胞存活率和凋亡率,Western blot测定P21和Caspase 3蛋白水平,分光光度法测定H9c2细胞中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性,qRT PCR检测CoCl2诱导后H9c2细胞miR 664 1 5p的表达水平。结果 与对照组相比,模型组心肌细胞H9c2中MDA、P21和Caspase 3含量升高,细胞存活率降低,凋亡率升高,miR 664 1 5p含量和SOD活性均降低,差异均具有统计学意义（均P＜005）;与模型组相比,药物2组和药物3组H9c2细胞中MDA、P21和Caspase 3含量降低,细胞存活率升高,凋亡率降低,miR 664 1 5p含量和SOD活性均上升,差异均具有统计学意义（均P＜005）;过表达miR 6641 5p可抑制CoCl2诱导的H9c2细胞凋亡,提高细胞存活率;抑制miR 664 1 5p能减弱硫喷妥钠对CoCl2诱导的心肌细胞缺氧损伤的保护作用。结论硫喷妥钠通过miR 664 1 5p提高CoCl2诱导的大鼠心肌细胞H9c2存活率,抑制细胞凋亡,减轻细胞损伤。     

HSP90抑制剂对人多发性骨髓瘤细胞增殖及HSP90蛋白表达的影响

目的：探讨HSP90抑制剂17-AAG对人多发性骨髓瘤细胞增殖及HSP90蛋白表达的影响。方法采用MTT法检测HSP90抑制剂对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖能力的影响;采用 Western blot检测不同浓度的 HSP90抑制剂17-AAG (0.001,0.01,0.1,1.0,10.0μmol/L)对人多发性骨髓瘤细胞中HSP90蛋白表达水平的影响。结果 HSP90抑制剂17-AAG对人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞有剂量依赖性的增殖抑制作用(P<0.05),无时间依赖性的增殖抑制作用(P>0.05)。随着药物浓度的增加,HSP90蛋白水平的表达也逐渐下降。结论 HSP90抑制剂能剂量依赖性抑制人多发性骨髓瘤细胞增殖能力,同时下调人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞中HSP90蛋白水平的表达。     

谷氨酸转运体-1在H2S保护PC12细胞对抗化学性低氧损伤中的作用

目的探讨谷氨酸转运体-1（GLT-1）在硫化氢（H2S）保护PC12细胞对抗化学性低氧损伤中的作用。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴（CoCl2）处理PC12细胞建立化学性低氧损伤模型作为研究对象。实验分为6组,正常对照组：未经任何药物处理的PC12细胞;CoCl2处理组：PC12细胞用600μmol/L的CoCl2处理24h或48h;H2S单独处理组;H2S预处理组：400μmol/L NaHS（H2S的供体）提前30min作用PC12细胞,然后与CoCl2一起再作用24h或48h;DHK（一种GLT-1抑制剂）单独处理组;DHK阻断组：在NaHS预处理前30min,给以400μmol/L DHK,然后按H2S预处理组继续处理。应用蛋白免疫印迹法（Western bolt）检测GLT-1蛋白表达;CCK-8比色法测定细胞存活率;Hoechst33258核染色法检测细胞凋亡的形态学改变及数量改变;罗丹明123（Rh123）染色及荧光显微镜照相测定线粒体膜电位（MMP）。结果 600μmol/L CoCl2处理PC12细胞24h可使GLT-1表达明显减少;在CoCl2处理PC12细胞前应用400μmol/L NaHS预处理30min能明显地阻断CoCl2对GLT-1表达的抑制作用;400μmol/L的GLT-1抑制剂DHK能阻断H2S保护PC12细胞对抗CoCl2诱导的损伤作用,使细胞存活率降低,凋亡细胞数量及MMP丢失增多。结论上调GLT-1表达可能是H2S保护PC12细胞对抗CoCl2损伤的作用机制之一。     

同型半胱氨酸经PERK磷酸化激活CHOP-ERO1α通路介导心肌细胞凋亡的研究

目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)对心肌的损伤作用及其可能机制.方法 选用H9C2心肌细胞,分别用不同浓度Hcy、4-苯基丁酸(4-PBA)干预细胞.将H9C2细胞分为对照组、H400组、H400P2组,对照组使用普通培养基,H400组加入400μmol/L的Hcy,H400P2组在H400组基础上加入2 mmol/L的4-PBA.CCK-8检测细胞存活率,TUNEL染色评估细胞凋亡,免疫细胞化学检测内质网氧化还原酶1α(ERO1α)表达,Western blot检测蛋白表达差异.结果 Hcy对H9C2心肌细胞损伤呈浓度依赖性(F=2 039.958,P＜0.01).与对照组比较,H400组细胞凋亡分数及胰腺内质网激酶(PERK)、磷酸化PEPK(p-PERK)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、ERO1α表达均增加(P＜0.01);H400P2组细胞凋亡分数及PERK、p-PERK、CHOP、ERO1α表达均有所下降,与H400组比较均差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Hcy通过内质网应激机制介导心肌细胞凋亡.     

HSP70抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体的释放及细胞凋亡

目的：阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：采用基因瞬间转染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达，采用Hoechst 33258染色观察H2O2 (0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率。DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯带。采用caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析caspase-9和caspase-3的活化。利用免疫荧光分析HSP70对H2O2所致Smac从线粒体释放的影响。结果：HSP70对H2O2及Smac所致C2C12肌原细胞凋亡具有明显的抑制作用,凋亡核百分率明显降低, DNA电泳未出现明显“梯状”条带;caspase-9和caspase-3的活化明显受到抑制;并进一步发现HSP70可抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体释放。结论：HSP70可通过抑制Smac从线粒体释放来抑制H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡。     

Molecular cloning of human heat shock protein 27 and study of its protective effects on oxidative damage in rat cardiomyocte H9c2

INTRODUCTIONApgionsgt-imnit omtiuclt icceellllsu slaurch o ragsa nciasrmdiso imsy omcoysttes e vaindde nnte iurons[1].Cardiomyocytes aging is associated with an increasedincidence of cardiac arrhythmias and diastolic ansystolic dysfunction,which may ultimately lead to hearfailure.Because of enormous suffering and health-carburdenthat cardiac dysfunction causes,much effort hagoneinto both understanding the mechanisms leading tage-related myocardial decline and discovering the accesses to re…     

热休克蛋白70对H2O2损伤心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对损伤大鼠心肌细胞凋亡的保护作用.方法体外培养大鼠心肌细胞,免疫组化、DNA Ladder、流式细胞仪、细胞色素C氧化酶比活力的测定、电镜观察等作为检测指标,观察过氧化氢(H2O2)造成心肌细胞损伤,以及HSP70的保护作用.结果温度诱导后HSP70在胞浆中大量表达,损伤组与保护组凋亡率、细胞色素C氧化酶比活力有显著性差异(P<0.01).电镜观察损伤组细胞膜、细胞器损伤明显,并出现凋亡小体.结论 HSP70可延迟细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用.     

二氯化钴诱导A549细胞凋亡及机制的研究

目的探讨二氯化钴(CoCl2)诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用机制。方法应用不同浓度CoCl2作用A549细胞不同时间,建立化学性缺氧诱导细胞凋亡的实验模型;应用MTT法检测细胞生长抑制率;应用AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡情况;应用Western blotting法检测总Akt(total-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)和survivin蛋白表达情况。结果 300、400μmol/L CoCl2作用24、36、48h后A549细胞的生长受到不同程度的抑制,并呈现比较明显的剂量和时间依赖关系;通过荧光显微镜下能观察到细胞呈新月形、核质体绿色、染色质浓缩,呈现凋亡显著特征,200、300、400μmol/L CoCl2处理24、48h后的细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01);Western blotting检测结果显示300、400μmol/L CoCl2作用48h后细胞内p-Akt、survivin蛋白表达量较对照组显著减少(P<0.01),300μmol/L CoCl2作用36、48h较对照组能显著下调p-Akt、survivin蛋白表达量(P<0.01),而总Akt蛋白表达量均无显著变化。结论 CoCl2可能是通过抑制p-Akt和survivin的蛋白表达,从而诱导A549细胞凋亡。     

丙泊酚对氯化钴诱导人心肌AC16细胞低氧损伤的保护作用

目的：研究丙泊酚预处理对氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)诱导离体人心肌AC16细胞低氧损伤的影响及其相关的分子机制。方法：以CoCl2处理的人心肌AC16细胞作为心肌细胞低氧的体外模型。将AC16细胞分为对照组、CoCl2诱导低氧组(CoCl2组)和丙泊酚+CoCl2诱导低氧组(Propofol+CoCl2组)。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)评估细胞活力;采用流式细胞术分析AC16细胞凋亡比率(apoptosis ratio,AR)和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,Δψm);采用对线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)敏感的荧光探针测定各组AC16细胞中ROS含量,并检测AC16细胞中的丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平;采用Western印迹评估c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p38信号转导途径的激活。结果：1)与对照组相比,以500 μmol/L CoCl2处理12 h的CoCl2组AC16细胞活力显著降低(P<0.01);2)与对照组相比,CoCl2组和Propofol+ CoCl2组AC16细胞的AR均显著升高,而Δψm均显著降低(均P<0.01);与CoCl2组相比,Propofol+CoCl2组AC16细胞的AR显著降低,而Δψm显著升高(均P<0.05);3)与对照组相比,CoCl2组的ROS和MDA水平显著升高,SOD水平显著降低(均P<0.01);与对照组相比,Propofol+CoCl2组ROS和MDA水平显著升高,SOD水平显著降低(均P<0.05);4)与对照组相比,CoCl2组JNK和p38的磷酸化水平显著升高(均P<0.05);与CoCl2组相比,Propofol+CoCl2组JNK和p38的磷酸化水平显著降低(均P<0.05)。结论：丙泊酚预处理可能通过抑制JNK和p38信号通路的激活,从而保护人心肌AC16细胞免受CoCl2诱导的低氧损伤。     

肺癌中热休克转录因子2促进热休克蛋白的表达

目的 探讨HSF2通过促进热休克蛋白 (heat shock protein, HSP) 的表达对肺癌发生以及肿瘤细胞增殖的影响.方法 选取肺癌旁组织, 构建过表达HSF2真核载体 (p IRES2-EGFP-HSF2) , 分别转染BEAS-2B、A549, 检测其对细胞增殖及HSP表达的影响;转染p IRES2-EGFP-HSF2质粒的同时, 共转染HSP27、HSP90的si RNA, 检测其对细胞增殖的影响.结果 过表达HSF2可增加BEAS-2B和A549细胞增殖速度 (P<0.01) , 促进HSP27和HSP90的表达;转染HSP27、HSP90的si RNA均可减弱HSF2诱导的BEAS-2B和A549细胞增殖 (P<0.01) .结论 HSF2促进肺癌细胞增殖的作用可能主要是通过促进热休克蛋白的表达来实现.     

硫化氢通过抑制iNOS-NO通路对抗化学性缺氧引起的PC12细胞损伤

【目的】 探讨硫化氢（H2S）是否通过抑制iNOS-NO通路对抗化学性缺氧诱导的PC12细胞损伤。【方法】应用化学性低氧模拟剂氯化钴（CoCl2）处理PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hoechst33258染色法观察细胞凋亡的形态学改变;PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;Griess试剂盒检测细胞培养液中的亚硝酸盐（NO的代谢物）的浓度;Western blot法检测iNOS蛋白的表达水平。【结果】 应用600µmol/L CoCl2处理PC12细胞24h可使诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达明显增多;在应用600µmol/L CoCl2处理PC12细胞前30min,应用400µmol/LNaHS（H2S的供体）预处理细胞不仅可明显地抑制CoCl2诱导的iNOS表达及NO生成的增多,还能保护PC12细胞对抗600µmol/L CoCl2引起的损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞数目减少;在CoCl2损伤PC12细胞前60min应用iNOS抑制剂L-Canavanine(10µmol/L)预处理也能产生类似NaHS的作用。SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)预处理60min也可以下调CoCl2引起的iNOS高表达。【结论】 iNOS-NO通路介导CoCl2引起PC12细胞的损伤作用; H2S通过抑制iNOS-NO通路对抗化学性缺氧诱导的PC12细胞损伤。     

色素上皮衍生因子对缺氧条件下H9C2心肌细胞保护作用

目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对H9C2心肌细胞在低氧无血清条件下的保护作用及其可能的机制.方法 体外培养H9C2细胞进行低氧无血清处理,将细胞分为对照组(H9C2)、缺氧组(缺氧+H9C2)、PEDF组(缺氧+H9C2+PEDF)、残粒体分裂抑制剂(Medivi-1)组(缺氧+H9C2+Mdivi-1).TUNEL染色检测H9C2心肌细胞凋亡率;Western blot检测动力相关蛋白1(Drp1)、活化半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspase3)的蛋白水平;电镜及MitoTracker Red检测线粒体形态;采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测线粒体膜电位,MitoSOXTM检测线粒体活性氧簇(ROS)水平.结果 缺氧诱导H9C2细胞线粒体分裂,缺氧组(6 h)与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),PEDF减少缺氧条件下线粒体分裂,PEDF组与缺氧组(6 h)比较差异有统计学意义(P＜0.05),PEDF和Mdivi-1可以减少缺氧条件下(24 h)细胞凋亡,与缺氧组(24 h)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PEDF通过抑制缺氧条件下H9C2细胞线粒体分裂减少细胞凋亡.     

热应激预适应对H2O2诱发乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的观察热应激预适应对H2O2诱发乳鼠心肌细胞损伤的保护作用.方法用胰蛋白酶消化法分离Wistar大鼠乳鼠心肌细胞,将其分为正常对照组(37℃无H2O2损伤),H2O2损伤组(37℃ H2O2损伤)和热应激组(42℃ H2O2损伤).测定3组细胞线粒体的琥珀酸脱氢酶(SDH)比活力、细胞色素C氧化酶(CCO)比活力;应用免疫组化技术检测热休克蛋白70(HSP70)的表达.结果与正常对照组比较,H2O2损伤组的SDH、CCO比活力显著下降(P<0.05);而热应激组下降不明显(P＞0.05).并且,HSP70仅在热应激组中大量表达.结论 H2O2能够引起乳鼠心肌细胞损伤;而热应激预适应对其具有保护作用,其保护机制可能与热应激时HSP70的大量表达有关.