角质细胞生长因子对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用研究

目的 研究不同浓度角质细胞生长因子（KGF）对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用,为探讨KGF在口腔黏膜病发生发展中的作用提供依据。方法 将不同浓度的KGF（对照组0 ng·mL-1,实验1组5 ng·mL-1,实验2组25 ng·mL-1,实验3组50 ng·mL-1）分别加入体外培养的口腔黏膜上皮细胞,培养12、24、48 h后,倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,荧光实时定量检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达水平。结果 1）实验组较对照组细胞贴壁明显,且48 h时实验3组细胞核仁明显。2）培养48 h时,4组之间的细胞凋亡率、Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达均有统计学差异,随着KGF浓度的增加,细胞凋亡率和Bax mRNA表达逐渐降低,Bcl-2 mRNA表达逐渐升高（P<0.05）。结论 KGF可通过上调Bcl-2 mRNA和下调Bax mRNA的表达抑制上皮细胞的凋亡。     

EGFR参与溶血磷脂酸诱导口腔鳞癌细胞整合素β6的表达

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在溶血磷脂酸(LPA)诱导口腔鳞癌细胞整合素β6(ITGB6)表达中的作用。方法:将口腔鳞癌细胞SAS接种到6孔板中,经LPA诱导后,收集细胞,用定量RT-PCR和Western Blot检测ITGB6的mRNA和蛋白表达量;利用EGFR抑制剂AG1478检测EGFR对LPA诱导ITGB6 mRNA和蛋白表达的影响。结果:1)经10 μmol/L LPA诱导2 h后,SAS细胞ITGB6的mRNA表达水平显著性增加;而ITGB6的蛋白水平则在诱导4h后有显著性升高。2)LPA诱导促进SAS细胞EGFR磷酸化水平增加。3)EGFR抑制剂AG1478抑制LPA诱导SAS细胞ITGB6 mRNA和蛋白表达。结论:LPA能诱导SAS口腔鳞癌细胞ITGB6 mRNA和蛋白表达,EGFR参与LPA诱导的ITGB6表达。     

过表达外源性Notch1对舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体表达的影响

目的研究过表达外源性Notch1对人舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法用脂质体将编码Notch1胞内域的表达质粒体外转染人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞,用甲基噻唑基四唑法（MTT）和流式细胞仪分别检测细胞增殖活性和凋亡情况,用逆转录聚合酶链式反应和Western blot检测Notch1和EGFR的mRNA和蛋白的变化,用免疫细胞化学检测EGFR蛋白的表达。结果转染后Tca8113细胞的增殖活性降低（Р<0.05）,细胞凋亡率增高（Р<0.05）,Notch1表达上调（Р<0.05）,而EGFR表达下调（Р<0.05）。结论体外过表达外源性Notch1抑制人舌鳞癌细胞增殖,诱导其凋亡,并下调其表皮生长因子受体的表达。     

EGCG对舌鳞癌细胞CAL-27的EGFR、67LR及VEGF表达的影响

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对舌鳞癌细胞CAL-27的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、相对分子质量为67 000的层粘连蛋白受体(67 000 dalton lamininreceptor,67LR)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor receptor,VEGF)表达的影响,从而揭示EGCG抑致舌鳞癌细胞增殖的可能机制。方法:不同浓度EGCG处理CAL-27细胞24h后,MTT法检测细胞增殖活性;RealTime PCR法和Western Blot法分别检测CAL-27细胞EGFR、67LR、VEGF的mRNA及蛋白表达情况;Western Blot法检测磷酸化EGFR(p-EGFR)的蛋白表达水平。结果:EGCG浓度依赖性抑制CAL-27细胞的增殖,且抑制其EGFR、67LR、VEGF的mRNA和蛋白、p-EGFR的蛋白表达。结论:EGCG能影响EGFR、67LR及VEGF的转录和翻译水平以及p-EGFR蛋白表达,这可能是EGCG抑制舌鳞癌细胞CAL-27增殖的重要机制。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞表皮生长因子受体基因表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜细胞（PDLC）表达表皮生长因子受体（EGFR）的影响,探讨bFGF在牙周组织分化再生中的意义。方法体外原代培养人PDLC,有限稀释法形成单细胞克隆,用外源性bFGF刺激单细胞克隆,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测克隆细胞内EGFR基因表达的变化。结果bFGF促进人PDLC内EGFR mRNA的合成,并且随着质量浓度的增加促进作用增强。结论bFGF对EGFR的促进作用很可能是牙周炎损伤修复过程中一个重要的调节因素,为牙周组织分化再生提供部分理论基础。     

表皮生长因子受体在人牙周膜成纤维细胞体外矿化中的作用

目的 探讨表皮生长因子受体（EGFR）在人牙周膜成纤维细胞（hPDLC）体外矿化中的作用。方法 体外培养hPDLC,运用免疫细胞化学技术,对hPDLC体外矿化前后EGFR的表达进行比较研究;应用原位杂交及RT-PCR技术,对矿化前后的hPDLC mRNA进行检测。结果 诱导前EGFR呈高表达,随着地塞米松诱导时间的延长,其表达逐渐下降,在矿化结节形成后的第4周,几乎呈阴性表达,与成骨细胞中EGFR的表达一致。原位杂交中杂交信号与免疫细胞化学的检测结果基本一致,RT-PCR的mRNA半定量检测发现,随着hPDLC的体外矿化,碱性磷酸酶升高,EGFR表达降低。结论 EGFR在hPDLC的矿化过程中起着负调控作用,与牙周膜自身结构的稳定性有关。     

涎腺肿瘤组织TN－CmRNA和CDgmRNA的表达及其意义

目的：探讨Tenascin-C（TN－C）mRNA和CD9mRNA在涎腺肿瘤的表达及其对涎腺肿瘤鉴别诊断的价值。方法：采用原位杂交技术检测10例正常涎腺组织、25例多形性腺瘤（PA）、25例腺样囊性癌（ACC）、20例黏液表皮样癌（MEC）、10例腺泡细胞癌（ACCa）中TN-CmRNA和CD9mRNA的表达。结果：TN-CmRNA在正常涎腺组织中呈阴性表达;CD9mRNA在正常涎腺组织中的阳性率为100％;TN-CmRNA、CD9mRNA在4种涎腺肿瘤中均有表达,TN-CmRNA在多形性腺瘤中的阳性表达率显著高于腺样囊性癌和黏液表皮样癌,差异具有统计学意义,而在多形性腺瘤与腺泡细胞癌中的表达差异无统计学意义。CD9mRNA在多形性腺瘤中的阳性表达率高于腺样囊性癌,差异有统计学意义,而在多形性腺瘤和黏液表皮样癌、腺泡细胞癌中的表达差异无统计学意义;在多形性腺瘤中TN-CmRNA和CD9mRNA的表达呈正相关,在腺样囊性癌、黏液表皮样癌和腺泡细胞癌中TN—CmRNA和CD9mRNA的表达无相关性。结论：TN-CmRNA和CD9mRNA与涎腺肿瘤的发生有一定相关性,对涎腺肿瘤之间的鉴别诊断有一定意义。     

MUC1通过调控EGFR/ERK信号通路促进唾液腺腺样囊性癌细胞增殖和侵袭的研究

目的:研究黏蛋白1(MUC1)对唾液腺腺样囊性癌(ACC)细胞生物学功能的影响及其分子机制。方法:首先通过慢病毒(shMUC1)转染对ACC细胞系中MUC1基因进行敲减,通过Real-time PCR和Western blot检测敲减效果;CCK-8实验检测细胞的增殖能力;平板克隆形成实验评价细胞的克隆形成能力;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;采用转录组测序筛选MUC1调控的相关信号通路,并通过Wesern blot验证分析。结果:转染MUC1慢病毒后,ACC细胞中MUC1 mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05);MUC1敲减后ACC细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05);转录组测序分析和Western blot结果表明MUC1主要通过调控EGFR/ERK磷酸化水平影响ACC细胞的生物学功能。结论:MUC1可通过调控EGFR/ERK磷酸化水平促进ACC细胞的增殖、平板克隆、迁移和侵袭,提示MUC1在ACC进展中可能发挥重要作用。     

Cr~(3+)与EGCG共同作用对牙龈成纤维细胞67LR和EGFR表达的影响

目的:分析表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与Cr3+共同作用,对牙龈成纤维细胞(HGF)的EGCG受体67LR和表皮生长因子受体(EGFR)的影响。方法:EGCG与Cr3+共同作用牙龈成纤维细胞24 h后,用Real-time PCR法检测mRNA表达,运用Western印迹法分析蛋白表达。结果:EGCG能抑制HGF细胞表面受体67LR mRNA以及蛋白水平的表达,加入Cr3+后减弱了EGCG对细胞67LR mRNA和蛋白的影响。EGCG作用24 h能降低EGFR mRNA和蛋白的表达,Cr3+(<200μmol/L)会减弱EGCG抑制EGFR的作用。结论:EGCG能降低HGF细胞67LR和EGFR的表达。加入Cr3+后对细胞67LR无明显影响,但降低细胞EGFR的表达。     

MMP－2 siRNA促进口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡作用的研究

目的：研究基质金属蛋白酶－2（MMP－2）siRNA对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的作用。方法：采用MMP－2 siRNA慢病毒感染Tca8113,qPCR检测MMP－2表达,MTT检测细胞活性,Annexin－V单染检测细胞凋亡。结果：MMP－2 siRNA慢病毒成功抑制Tca8113中MMP－2 mRNA表达。MMP－2干扰组细胞活性显著低于阴性病毒组（P＜0．01）,且细胞凋亡率高于阴性对照组（P＜0．01）。结论：MMP－2干扰能促进Tca8113凋亡,起到抗肿瘤效应。     

牙龈卟啉单胞菌感染对大鼠血管平滑肌细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277感染对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 建立体外牙龈卟啉单胞菌感染大鼠VSMC模型,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测ICAM-1基因的表达。结果 牙龈卟啉单胞菌感染VSMC 8、16、24 h后,ICAM-1表达明显增多,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。感染16 h达高峰,感染8 h与感染16、24 h比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 牙龈卟啉单胞菌感染可引起VSMC ICAM-1高表达,这提示牙周致病菌可能参与血管壁的炎症反应,在动脉粥样硬化的发生、发展中有重要的意义。     

口腔健康教育实验教学改革探索

目的 提高学生口腔健康宣教能力,巩固学生口腔健康教育理论,增加学生学习的兴趣和主动性。方法 选择潍坊医学院2006-2008级口腔医学专业大学四年级学生为研究对象进行口腔健康教育实验教学改革探索,将学生分为试验组和对照组,试验组采用“讲出去”的教学方式,对照组采用传统的教学方法,对试验组的课堂、课后评价以及两组的期终考试和实习考核评价结果进行分析和比较。结果 试验组的课堂、课后评价结果表明,“讲出去”教学方式被学生普遍认可,能提高学生口腔健康宣教的能力;期终考试和实习考核成绩均显示试验组得分高于对照组（P<0.01）。结论 “讲出去”教学方式提高了学生口腔健康宣教的能力,符合教学改革发展趋势。     

乳铁蛋白下调脂多糖激发的人牙周膜细胞Toll样受体4表达的研究

目的 观察乳铁蛋白（LF）对经脂多糖（LPS）刺激的人牙周膜细胞（hPDLCs）表达Toll样受体4（TLR4）的影响。方法 采用组织块酶消化法培养hPDLCs,鉴定后取第4代细胞,分成空白对照组、LPS组、LPS+LF组。空白对照组不加任何刺激,LPS组加入0.1 μg?mL-1 LPS;LPS+LF组在加入0.1 μg?mL-1 LPS 2 h后,加入10 μg?mL-1 LF。以加入LF时开始计算时间,4 h后采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测hPDLCs中TLR4 mRNA的表达,24 h后采用细胞免疫荧光染色法观察TLR4蛋白的表达。结果 RT-PCR检测显示：LPS+LF组TLR4 mRNA表达较LPS组明显降低（P<0.05）,与空白对照组无明显差异（P>0.05）。细胞免疫荧光染色法显示：LPS+LF组TLR4蛋白的表达强度较LPS组减弱（P<0.05）,与空白对照组无明显差别（P>0.05）。结论 LF可以下调LPS激发的hPDLCs中TLR4的表达,在牙周炎症TLR4信号通路的调控过程中有一定的作用。     

人涎腺腺样囊性癌中表皮生长因子受体的表达及意义

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)在人涎腺腺样囊性癌组织和细胞系中的表达及其临床病理学意义。方法:采用免疫组化S-P法对86例不同亚型的人涎腺腺样囊性癌组织病理切片、20例正常腮腺组织切片及ACC-2细胞爬片进行EGFR的检测;激光共聚焦显微镜对ACC-2细胞中EGFR的表达情况进行检测。结果:在涎腺腺样囊性癌组织中EGFR呈过度表达,其阳性率要明显高于正常腮腺组织(P<0.05);EGFR的表达在腺样囊性癌的恶性程度相关(P<0.05);ACC-2细胞中也检测到了EGFR的过度表达。结论:EGFR表达与腺样囊性癌恶性度及预后密切相关。     

髁突骨软骨瘤的正颌外科治疗

目的 探讨正颌外科技术在髁突骨软骨瘤治疗中的应用效果。方法 利用正颌外科方法治疗12例髁突骨软骨瘤患者,进行Le Fort Ⅰ型截骨术修正上颌骨,采用口内入路患侧升支垂直截骨术切除病变髁突,健侧行升支矢状切开术及颏成形术矫正咬合及偏斜。结果 12例患者术后面型均得到矫正,随访2年以上无1例复发。结论 利用正颌外科技术治疗髁突骨软骨瘤,可以避免常规口外切口面部留有的瘢痕,并在切除肿瘤的同时矫正了面型。     

不同牙体预备方法对模拟重度楔状缺损牙体桩核冠修复后抗折特性的影响

目的 探讨不同牙体预备方法对重度楔状缺损牙体桩核冠修复后抗折特性的影响,为临床修复治疗提供理论依据。方法 将64颗离体下颌第一前磨牙按不同的牙体预备和修复方法分组,按照颊侧楔状缺损方悬突牙体去除与否（不去为A,去除为B）和颊侧楔状缺损下方是否制备牙本质肩领（未制备为C,制备为D）,以及铸造桩核修复（设为E）或纤维桩核修复（设为F）随机分为A1-1（A+C+E）、A1-2（A+C+F）、A2-1（A+D+E）、A2-2（A+D+F）、B1-1（B+C+E）、B1-2（B+C+F）、B2-1（B+D+E）、B2-2（B+D+F）共8组,每组8颗,建立重度楔状缺损牙模型,各组按分组内容进行桩核冠修复,用电子万能试验机进行加载,测试各组的抗折载荷,观察折裂模式。结果 1）抗折载荷的比较：A1-1组>B1-1组,A1-2组>B1-2组, B2-1组>B1-1组, B2-1组>B2-2组,其差异均有统计学意义（P<0.05）。2）A1-2、B1-2组可修复性折裂比例均为37.5%,其余各组均为0,A1-2组和B1-2组明显高于其他组。结论 重度楔状缺损患牙桩核冠修复时保留颊侧悬突牙体对承受抗折载荷有利,修复时不建议颊侧设计牙本质肩领;纤维桩较铸造桩更有利于牙体折裂后的再修复。     

染料木黄酮抗涎腺腺样囊性癌远处转移的实验研究

目的　研究染料木黄酮抗涎腺腺样囊性癌 (ACC)实验性肺转移的作用。方法　分别用ACC M细胞及经染料木黄酮处理的ACC M细胞对 2 0只裸鼠尾静脉接种形成肺转移模型 ,6周后处死动物 ,比较治疗组与对照组裸鼠ACC肺转移率、瘤结节数目 ;观察肺转移灶血管内皮生长因子 (VEGF)、基质金属蛋白酶 (MMP 9)的表达及凋亡情况。结果　染料木黄酮治疗组瘤结节数目明显少于对照组(分别为 9 2 9± 1 80和 2 7 4 4± 13 5 5 ,P <0 0 5 ) ;治疗组转移灶凋亡指数 (AI)明显高于对照组 ( 15 37±3 96及 6 0 3± 3 36 ,P <0 0 5 ) ;治疗组VEGF及MMP 9表达明显弱于对照组 (P <0 0 5 )。结论　染料木黄酮有一定的抗ACC M远处转移的作用 ,这可能是多种机制作用的结果     

双生子儿童口腔微生物群组结构分析

目的 通过聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）分析双生子儿童中同卵双生子和异卵双生子口腔微生物群组结构的差异。方法 选取双生子儿童20对,其中同卵双生子10对,异卵双生子10对;乳牙列10对,混合牙列10对;有龋者17人,无龋者23人。采集唾液样本后,提取细菌DNA,经通用引物扩增16s rRNA基因和PCR-DGGE分析后,计算PCR-DGGE条带数及多样性指数。结果 同卵双生子与异卵双生子均表现出明显的聚类分布,但同卵双生子与异卵双生子之间无统计学差异（P>0.05）。乳牙列组中,有龋儿童的PCR-DGGE条带数（11.00±1.56）及多样性指数（1.05±0.36）低于无龋儿童（14.00±2.74,1.44±0.37）,两者间均具有统计学差异（P<0.05）。混合牙列组中,有龋儿童的PCR-DGGE条带数（11.88±4.05）及多样性指数（1.18±0.36）低于无龋儿童（14.31±5.71,1.28± 0.47）,但两者间均无统计学差异（P>0.05）。结论 亲缘之间口腔微生物组群结构更为相似,环境的影响可能大于遗传的影响。有龋儿童的微生物种类较无龋儿童有所减少。     

人颊黏膜微生物群落年龄相关性演替研究

目的 初步探讨健康人群颊黏膜菌群组成在不同年龄及牙列阶段的动态演替过程。方法 25例健康受试者根据年龄及牙列情况分为5组：乳牙列组、混合牙列组、青少年组、青年组及老年组;分别提取各样本的细菌总DNA进行聚合酶链式反应,采用Quantity One软件对扩增产物的变性梯度凝胶电泳（DGGE）指纹图谱进行生物信息学分析。结果 1）颊黏膜菌群的组成具有个体差异性。2）乳牙列组、混合牙列组、青少年组、青年组及老年组DGGE指纹图谱的平均条带数分别为21.2±4.0、17.8±3.9、15.8±4.3、16.8±3.7、22.2±6.5,各组间的差异无统计学意义（P>0.05）,提示颊黏膜优势菌群的数量在各个年龄阶段保持相对稳定。3）5组的Shannon指数分别为1.73±0.2、1.43±0.1、1.05±0.2、1.45±0.2和1.63±0.3,各组间的差异有统计学意义（P=0.003）;提示颊黏膜微生物的多样性在儿童至青少年阶段呈下降趋势,在青年至老年阶段呈上升趋势。4）群落结构相似性聚类分析发现：同组内大部分样本聚类位置相近,群落结构表现出较高的相似性;不同组的大部分样本未聚类在一起,群落结构呈现出一定的差异性。结论 不同年龄组健康人群的颊黏膜微生物群落组成存在差异,青少年期可能是颊黏膜微生物多样性改变的重要转折点。     

正畸正颌联合治疗颜面不对称患者头颅定位后前位片的非对称性分析

目的 分析正畸正颌联合治疗的颜面不对称患者头颅定位后前位片测量指标的非对称性。方法 选取不同程度颜面不对称患者45例,对所有患者治疗前后头颅定位后前位片进行测量,采用单样本t检验将治疗前测量指标的非对称率与个别正常人群的非对称率进行比较,通过相关系数的分析,归纳出颜面不对称患者倾向于采用正畸正颌联合治疗的测量指标,并得出其参考值。同时通过配对t检验比较治疗前后测量指标非对称率的差异。结果 有14项指标治疗前的非对称率与个别正常人群的非对称率相比差异有统计学意义（P<0.05）。45例患者中与Me[X]具有较高直线相关关系的指标为Ag[X]。28例患者以下颌骨体部不对称为主,15例患者以下颌升支不对称为主,2例患者同时存在下颌体部和下颌升支的不对称。Me[X]等15项测量指标治疗前后差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 颜面部的不对称主要集中在面下1/3,以下颌体部不对称为主要表现。当与Me[X]具有高度直线相关关系的指标Ag[X]的非对称率大于参考值下限11.31%,Go[X]的非对称率大于参考值下限9.79%,且Me[X]大于参考值下限5.2 mm时,该患者的治疗方案更倾向于正畸正颌联合治疗。