龟鹿二仙胶汤含药血清对兔骨髓基质干细胞增殖的影响

目的：观察龟鹿二仙胶汤对骨髓基质干细胞（BMSCs）增殖的影响,确定影响BMSCs增殖的最佳中药血清浓度。方法：经前期体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,运用不同浓度的龟鹿二仙胶汤中药含药血清对获得的兔BMSCs进行药物干预24、48、72h后,采用MTT、免疫组化、流式细胞仪等方法,研究龟鹿二仙胶汤对BMSCs增殖的影响。结果：MTT比色实验显示,龟鹿二仙胶各浓度组均能不同程度地促进BMSCs的能量代谢,促进BMSCs增殖,与空白对照组相比有显著差异（P〈0．01）,而且以15倍药物浓度组为最佳。免疫组化结果证实,龟鹿二仙胶汤含药血清可通过促进PCNA表达来控制DNA复制,以15倍龟鹿二仙胶汤药物浓度血清培养时BMSCs表达致密的棕褐色颗粒最多,其他浓度组及TGF—β3组较多,空白对照组则最少。FCM结果显示,二仙胶汤药物血清能显著提高BMSCs增殖指数,且以15倍药物浓度龟鹿血清培养时最明显。结论：龟鹿二仙胶汤刺激BMSCs增值与药物浓度有关,低浓度龟鹿二仙胶汤就能显著刺激BMSCs增殖,无论是48h、72h测验均为15倍药物浓度时具有显著的增值作用,而更高浓度龟鹿二仙胶汤则表现为促进BMSCs增殖作用减弱。     

龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤的保护作用

目的 研究龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤的保护作用。方法 体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传至第二代后分5组培养:正常组、地塞米松（10-8mol/L）组、骨化三醇含药血清组、龟鹿二仙胶含药血清低剂量组、龟鹿二仙胶含药血清高剂量组。MTT法检测骨髓间充质干细胞活力,检测细胞上清中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、炎症因子白介素-6（IL-6）、小鼠白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。采用Western blot检测Nrf-2/HO-1/NF-κB信号通路蛋白表达。结果 龟鹿二仙胶能显著提高细胞活力,增加SOD水平、降低MDA水平、降低炎症因子水平,增加蛋白Nrf-2、HO-1蛋白表达水平,降低NF-κB信号蛋白表达。结论 龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤有保护作用,且作用与调控Nrf-2/HO-1/NF-κB信号相关。      

龟鹿二仙胶联合内热针治疗膝关节骨性关节炎疗效观察(附86例报告)

目的观察中药龟鹿二仙胶联合内热针治疗膝关节骨性关节炎的疗效。方法采用中药龟鹿二仙胶联合内热针治疗膝关节骨性关节炎86例,观察2个月。结果显效36例,有效43例,无效7例,总有效率91.9%。结论龟鹿二仙胶联合内热针治疗膝关节骨性关节炎疗效满意。     

化湿补肾法对膝骨关节炎大鼠软骨修复机制的研究

目的 探讨化湿补肾法治疗膝骨关节炎(KOA)的机制.方法 将48只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、化湿定痛汤组、龟鹿二仙胶组、化湿补肾法组,采用木瓜蛋白酶关节腔注射建立膝骨关节炎模型,造模成功后各组大鼠灌胃相应药物,化湿定痛汤组灌胃化湿定痛汤4.68 g/(kg·d),龟鹿二仙胶组灌胃龟鹿二仙胶汤2.7 g/(...     

龟鹿二仙胶对秀丽隐杆线虫体内抗衰老作用研究

【目的】探讨龟鹿二仙胶对秀丽隐杆线虫体内抗衰老的作用及机制。【方法】以秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）为模型生物,观察不同浓度龟鹿二仙胶（0.5、2.5、5.0 mg/mL）对线虫健康寿命、行动力、生殖能力、吞咽频率、应激能力和体内活性氧自由基（ROS）、脂褐质水平及抗氧化酶活性的影响。【结果】龟鹿二仙胶能显著提高线虫行动能力、吞咽能力,延长其平均寿命,并对氧化损伤有显著改善作用。此外,不同浓度的龟鹿二仙胶均能显著提高线虫体内过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化酶（GSH）活性,降低机体内丙二醛（MDA）含量和脂褐质的堆积水平。【结论】龟鹿二仙胶可能是通过减缓细胞氧化损伤,进而起到延长秀丽隐杆线虫寿命的作用。     

龟鹿二仙胶方义与应用述要

龟鹿二仙胶,又名龟鹿二仙膏,由瘫角胶、龟板、枸杞子、人参组成。其方见于《医方考·虚损劳瘵门》,方后论：“精极,梦泄遗精,瘦削少气,目视不明,此方主之。”然据其方义,既可作为治疗各科虚证的基本方,也可作为保健的常用方。     

龟鹿二仙胶汤治疗膝骨性关节炎的临床研究

观察龟鹿二仙胶汤对膝骨性关节炎的临床疗效.选择符合中西医诊断标准的临床患者120例,按就诊顺序随机分为2组,以龟鹿二仙胶汤和壮骨关节丸对照治疗.结果治疗组总有效率为98.3%,对照组为88.3%,治疗组的疼痛缓解、活动范围、步行能力、日常动作等指标明显优于对照组,2组比较有显著性差异（P＜0.01）.说明龟鹿二仙胶汤能有效的改善膝骨性关节炎的临床症状.     

龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎骨强度的影响及机制

目的观察龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎骨强度的影响及机制。方法 72只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(OVX组)、雷奈酸锶组(SrR组)、龟鹿二仙胶低剂量组(GL组)、中剂量组(GM组)和高剂量组(GH组),除S组外,其余各组切除卵巢,给药6、12周检测大鼠腰椎骨强度、骨密度、骨小梁面积、平均骨小梁宽度、血清骨钙素、尿脱氧吡啶酚的变化。结果①6周时OVX组腰椎承受最大载荷低于其余各组,12周时GM组明显高于其它2个剂量组(P0.01)。②12周时龟鹿二仙胶3个剂量组骨密度高于OVX组(P0.05),低于S组、SrR组(P0.05);GM组骨小梁面积、平均骨小梁宽度高于其余2个剂量组(P0.05)。结论龟鹿二仙胶能显著提高去卵巢大鼠腰椎骨强度,以GM组最明显,其作用机制为早期提高骨小梁宽度和骨小梁面积,后期提高骨密度和改善骨显微结构。     

龟鹿二仙胶对绝经后骨质疏松性骨折愈合的影响

目的：探讨龟鹿二仙胶对大鼠绝经后骨质疏松性骨折(postmenopausal osteoporotic fractures, PMOPF)愈合的影响。方法：从34只SD大鼠中随机选取11只作为对照组,仅切除卵巢旁脂肪组织,其余大鼠行双侧卵巢切除术建立骨质疏松模型。12周后,所有大鼠行右侧股骨骨折合并髓内针固定术。将造模成功的PMOPF大鼠随机分为模型组、龟鹿二仙胶组(3.6 g·kg^-1)和阿仑膦酸钠组(3.6 g·kg^-1),每组6只。龟鹿二仙胶组和阿仑膦酸钠组给予相应药物灌胃,对照组和模型组给予等剂量生理盐水灌胃,持续8周。采用HE染色、番红固绿染色观察骨折处病理形态;三点弯曲法检测骨折处最大载荷;ELISA法检测血清骨钙素(bone gamma carboxy-glutamic acid containing proteins, BGP)、骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase, BALP)、Ⅰ型胶原交联C-末端肽(type I collagen carboxy-terminal peptide, CTX-1)...     

基于网络药理学探讨龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的作用机制

目的:通过网络药理学的方法研究龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的相关作用机制。方法:基于TCMSP数据库、ETCM数据库、化学专业数据库、DrugBank数据库获取龟鹿二仙胶的潜在活性成分及相关靶点,从OMIM、Genecards数据库获取骨质疏松症的已知治疗靶点,运用STRING数据库建立活性成分-疾病靶点的蛋白相互作用网络(PPI),利用Cytoscape3.8.0软件对该网络进行拓扑参数分析得到关键活性成分及其靶点。并在R4.0.2中利用Bioconductor数据包对关键靶点进行GO生物学功能分析和KEGG通路分析,得到龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的有效成分和作用靶点。结果:龟鹿二仙胶共有87个活性成分和2 305个靶点,骨质疏松症共有4141个已知治疗靶点,二者共同作用靶点共71个,获得PPI核心基因69个,GO生物学过程分析得出95个条目,KEGG通路分析得出115条通路。结论:龟鹿二仙胶可能通过抑制炎症因子、调节成骨及破骨细胞分化、改善微循环、促进破骨细胞凋亡等途径起到抗骨质疏松的作用,涉及的通路包括TNF信号通路、IL-17信号通路、NF-kB信号通路、HIF-1信号通路、MAPK...     

高效液相色谱法测定龟鹿补肾胶囊中淫羊藿苷的含量

目的建立龟鹿补肾胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法采用HPLC法测定龟鹿补肾胶囊中淫羊藿苷的含量,采用C18柱,以ψ(水：乙腈：四氢呋喃：冰醋酸)=755：230：10：5为流动相,检测波长270nm。结果平均加样回收率为98．19％。RSD为1．2％。结论本法简便、准确。适用于龟鹿补肾胶囊中淫羊藿苷的含量测定。     

龟鹿二仙胶汤含药血清对兔体外BMSCs向软骨细胞分化的干预作用

目的:探讨龟鹿二仙胶汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的干预作用。方法:抽取兔骨髓液,经体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,将第2代兔BMSCs分为龟鹿二仙胶汤中药含药血清组、软骨细胞组、单纯诱导剂组及空白对照组,进行培养1、2、3周后,通过细胞染色、透射电子显微镜、免疫组化等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响。结果:在转化生长因子-β(3TGF-β3)等诱导下龟鹿二仙胶汤中药血清可以明显促进软骨表型化BMSCs的GAG分泌及Ⅱ型胶原mRNA的表达,与软骨细胞组和单纯诱导剂组有显著性差异(P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶汤含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,优化骨组织工程的种子细胞体系,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化过程。     

加味龟鹿二仙胶治疗月经过多

祖国医学对月经过多的治疗方法甚多,我们应用加味龟鹿二仙胶治疗脾肾两亏型月经过多,共10例(功血3例、子宫肌瘤5例、放环后月经过多2例),均取得较满意的效果。一般用药3～5帖后,经水均能自止。其基本方药为:龟板30克(先煎) 鹿角粉(霜)6克(冲) 党参15克杞子9克阿胶9克(烊冲) 坎炁一条百草霜9克(包煎)生地9克黄芪9克加减;出血甚者加炒地榆、大蓟、小蓟、龙骨、牡蛎等;头昏剧者加女贞子、牡蛎;口干、内热者加黄柏、知母;腰酸甚者加寄生、川断;面目浮肿者加茯苓、葎草等。体会:本组治疗的10例月经过多患者病程均较长,有的达6～7年,久治不愈。祖国     

龟鹿二仙胶通过调控 PD-1 表达抑制 H22 荷瘤小鼠肿瘤生长的研究

目的初步探讨龟鹿二仙胶通过降低肿瘤周围T淋巴细胞PD-1表达,抑制T细胞凋亡,从而抑制肿瘤生长的分子机制。方法采用皮下接种H22肝癌细胞株方法建立荷瘤小鼠模型,观察药物干预后各组荷瘤小鼠肿瘤的生长速度,Annexin V/PI双染色法测定小鼠脾脏T淋巴细胞凋亡比例,分离肿瘤浸润性T淋巴细胞,流式细胞检测PD-1阳性细胞的比例。结果 (1)龟鹿二仙胶呈剂量依赖抑制皮下瘤的生长,顺铂组及高、中、低剂量组抑瘤率分别为81.36%、79.64%、48.86%、21.96%;(2)顺铂组及高、中、低剂量组小鼠T淋巴细胞凋亡比例分别为早期(24.37±0.32)%、(5.30±0.21)%、(6.90±0.16)%、(11.93±2.01)%;晚期(8.83±1.23)%、(4.73±0.33)%、(6.40±0.34)%、(7.47±0.54)%,说明与顺铂组比较,龟鹿二仙胶能够抑制小鼠T淋巴细胞凋亡;(3)龟鹿二仙胶高剂量组、中剂量组的PD-1表达阳性细胞比分别为(11.73±0.54)%、(20.00±0.66)%,明显低于生理盐水组(32.57±0.65)%和顺铂组(31.83±0.43)%,说明龟鹿二仙胶能够降低肿瘤浸润T淋巴细胞中PD-1阳性的比例。结论龟鹿二仙胶具有抑制肿瘤生长的作用,其机制可能是通过抑制PD-1表达,减少T淋巴细胞凋亡,增强机体免疫力,从而抑制和杀伤肿瘤细胞得以实现的。     

龟鹿二仙膏提高耐力作用研究

目的：研究龟鹿二仙膏的温肾益精、补气养血作用。方法：采用负荷游泳时间及常压密闭环境存活时间试验方法。结果：龟鹿二仙膏可明显延长小鼠贞荷游泳时间及在密闭环境中的存活时间。结论：龟鹿二仙膏有较好提高耐力作用。     

龟鹿二仙胶的现代运用

<正>龟鹿二仙胶为中医传统名方,明代(1569年)王三才所著的《医便》就有详细记载,该方由鹿角胶、龟板、人参、枸杞子组成。方中龟板、鹿角胶"二仙"为主药,均归肾经。《古今名医方论·龟鹿二仙膏》云"龟得天地之阴气最厚,善通任脉",其腹甲为胶,能滋阴潜阳、补血。"鹿得天地之阳气最全,善通督脉",其角为胶,能补肾阳、生精血。人参大补元气而生津。枸杞子益精生血。《医方考·虚损劳瘵门》云人参"善于固气"     

痹痿同治法对脂多糖诱导大鼠退变软骨细胞炎症和凋亡的影响

目的 探讨痹痿同治法方药化湿定痛汤合龟鹿二仙胶对骨关节炎的可能作用机制。方法 制备化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清及空白血清。采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立稳定的软骨细胞体外培养体系,采用免疫组化染色法对F2代软骨细胞进行鉴定。鉴定成功后分别用4个体积分数的含药血清(5%、10%、15%、20%)和空白血清处理软骨细胞(5×10³个/孔),培养24、48、72 h后,CCK-8法检测软骨细胞活性,选择提升软骨细胞活性的最佳含药血清体积分数进行后续实验。用10 mg/L脂多糖诱导F2代软骨细胞,复制退变软骨细胞模型,将细胞分为空白组、模型组、化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清组(简称“含药血清组”)。干预24 h后,采用CCK-8法检测各组软骨细胞活性,ELISA法检测各组细胞培养液上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,qRT-PCR法检测各组软骨细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达,Western blotting检测...     

龟鹿二仙胶逆转化疗诱导的造血干细胞衰老的机制研究

[目的]探讨龟鹿二仙胶对化疗诱导的骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)衰老的影响及其相关机制。[方法]30只雄性昆明小鼠右腋部皮下注射肝癌细胞株H22细胞悬液0.1mL,细胞浓度为1.0×10~7个/mL,建立荷瘤小鼠模型。将荷瘤小鼠随机分为3组(对照组、模型组、龟鹿二仙胶组),对照组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液0.2mL,1次/d,连续3d(d1~3);其余两组小鼠均腹腔注射环磷酰胺100mg/(kg·d),1次/d,连续3d(d1~3)。龟鹿二仙胶组小鼠同时给予龟鹿二仙胶9.5g/(kg·d)灌胃,1次/d,共9d(d1~9);对照组和模型组同时予0.9%氯化钠溶液0.3mL连续灌胃,1次/d,共9d(d1~9)。给药结束后24h分离小鼠骨髓HSC,以衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated beta-galactosidase,SA-β-gal)染色检测HSC衰老情况,流式细胞术检测细胞周期,CCK-8检测细胞活力。Western blot检测p16~(Ink4a)-Rb信号通路p16、CDK4/6、pRb蛋白的表达水平,q PCR检测p16、CDK4/6、pRb的mRNA表达水平。[结果]与对照组比较,模型组HSC的细胞活力明显降低(P0.01),SA-β-gal染色阳性率明显升高(P0.01),S期细胞比例明显升高(P0.01),p16蛋白的表达水平明显升高(P0.01),CDK4/6、pRb蛋白的表达水平明显降低(P0.01);与模型组比较,龟鹿二仙胶组HSC的细胞活力明显升高(P0.05),SA-β-gal染色阳性率明显降低(P0.01),S期细胞比例明显减低(P0.01),p16蛋白的表达水平明显降低(P0.01),CDK4/6、pRb蛋白的表达水平明显升高(P0.01,P0.05)。各组p16~(Ink4a)-Rb信号通路上相关mRNA的表达差异无统计学意义(P0.05)。[结论]龟鹿二仙胶能够改善化疗后HSC衰老,p16~(Ink4a)-Rb信号通路上相关蛋白可能是其作用靶点,但对mRNA表达的影响有待进一步研究。     

加味龟鹿二仙汤对乳腺癌患者化疗骨髓毒性的影响*

目的：观察加味龟鹿二仙汤对乳腺癌化疗骨髓毒性的影响。方法：将96例乳腺癌患者分为两组,治疗组（n=49）化疗同期服用加味龟鹿二仙汤,对照组（n=47）化疗同期服用鲨肝醇。连续6个疗程,比较化疗前后两组患者重组人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）使用率、毒副反应。结果：治疗组较对照组G-CSF使用率低（P<005）;治疗组白细胞、中性粒细胞、血红蛋白、血小板下降程度轻,恢复快,单个核细胞对乳腺癌细胞杀伤活性增强。结论：化疗联合使用加味龟鹿二仙汤不仅可以减少升白药物使用频率,同时有效减轻化疗所致的骨髓毒性,提高患者的免疫力。     

加味龟鹿二仙胶对晚期大肠癌化疗患者临床效果、骨髓功能、免疫功能分析

目的 探讨加味龟鹿二仙胶对晚期大肠癌化疗患者临床效果、骨髓功能和免疫功能的影响。方法 回顾性分析2017 年9 月～2019 年6 月我院收集的晚期大肠癌患者66 例，既往3 个月内化疗曾出现骨髓抑制并使用过集落刺激因子，分为研究组和对照组，各33 例，对照组使用常规化疗，研究组在对照组的基础上加用加味龟鹿二仙胶，比较两组的近期治疗效果、不良反应、中医证候积分、骨髓功能、骨髓抑制和免疫功能以及生活质量。结果 研究组的治疗效果比对照组更优（P＜0.05），不良反应比对照组低（P＜0.05），中医证候积分比对照组优（P＜0.05），生活质量比对照组更好（P＜0.05），骨髓功能和免疫功能均比对照组好（P＜0.05），骨髓抑制的发生率比对照组低（P＜0.05）。结论 对晚期大肠癌化疗患者加用加味龟鹿二仙胶治疗，可以提高治疗效果，降低不良反应，更为安全可靠，且可有效改善患者中医证候积分、骨髓功能和免疫功能，提高患者的生活质量，因此可在临床推广应用。