一氧化氮对HSV—1在HeLa细胞和Vero—E6细胞中增殖的影响

以硝普钠作一氧化氮供体,观察不同剂量一氧化氮存在条件下ＨＳＶ－１在ＨｅＬａ细胞和Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞中增殖情况。结果表明：一氧化氮对ＨＳＶ－１在Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞中增殖有明显抑制作用,而对ＨＳＶ－１在ＨｅＬａ细胞中增殖无明显影响。提示一氧化氮的抗病毒作用存在着细胞性差异。     

流行性出血热病毒Vero-E6细胞病变株的分离和鉴定

从EHF患者血清中分离到8株EHF病毒,在E 6细胞中传代适应过程中,发现有5株EHF病毒分别在第4～10代出现规律的细胞病变(CPE),对其中两个CPE株(HFN-04和-19)进行了一系列特异性鉴定试验。实验结果表明:(1)病毒的CPE发展与病毒增殖动态完全一致;(2)CPE株的主要生物学和理化性状均符合EHF病毒;(3)用CPE株病毒感染细胞抗原片检测EHF患者双份血清,其恢复期血清抗体均呈4倍以上增高反应;(4)病毒的CPE可被患者血清及EHF、KHF免疫血清所中和,不能被正常兔血清和Reo病毒1—3型多价血清所中和;(5)CPE株病毒感染的E_6细胞几乎能完全吸收EHF患者血清及EHF、KHF抗血清中的特异性抗体;(6)CPE株病毒感染鼠脑悬液与EHF病毒A9株McAb25-1致敏血球呈阳性血凝反应。据此,首次证实了EHF病毒至少有部分毒株能引起E_6细胞规律性CPE。EHF病毒CPE株的发现为EHF的诊断和防治工作提供了有利条件。     

Nucleostemin基因特异性RNA干扰对HeLa细胞体外增殖能力的影响

目的:研究nucleostemin (简称NS)基因特异性RNA干扰对HeLa细胞的增殖和细胞周期的影响.方法:①将NS特异性siRNA真核表达质粒经脂质体转染导入HeLa细胞,筛选NS阳性转染HeLa细胞克隆,作为silencer组用于实验,对照组为HeLa细胞组,②检测silencer组和对照组细胞生长曲线、细胞增殖率和细胞周期.结果:与对照组相比,Silencer组HeLa细胞增殖速率明显降低,细胞处于G0/G1期明显增多,S期则明显减少,DNA异倍体数量明显降低.结论:NS特异性siRNA真核表达质粒转染的HeLa细胞,其细胞增殖速率受到明显抑制.     

银杏叶提取物对HeLa炎症细胞模型应激作用的影响

目的探讨银杏叶提取物(Ginkgo biloba leaf extract,GbE)对细菌脂多糖(LPS)诱导人宫颈癌细胞(HeLa细胞)炎症应激作用的影响。方法将HeLa细胞分成LPS组、GbE+LPS干预组和对照组3组,通过细胞骨架染色了解细胞结构的稳定性;应用OLYMPUS-AU2700自动生化分析仪测定细胞上清液C反应蛋白(CRP)、前白蛋白(PA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量,了解细胞应激反应情况和细胞死亡情况。结果 GbE+LPS组培养48h后细胞骨架较松散,稳定性明显低于LPS组和对照组;GbE+LPS干预组培养8 h后细胞上清液CRP含量显著低于LPS组(tGbE+LPS=-3.649,P<0.05),而LDH含量高于LPS组,但差异无统计学意义(tGbE+LPS=-3.56,P>0.05);各组各时间段细胞上清液PA含量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 GbE具有介导HeLa炎症细胞凋亡及减轻细胞炎症反应的作用。     

芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的探讨芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响。方法通过四甲基偶氮唑蓝法及平板克隆形成实验研究芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响。结果不同浓度的芹菜素(5、10、20 mg/L)对HeLa细胞的生长均有显著的抑制作用,随着芹菜素浓度的增加,抑制作用显著增强;平板克隆实验结果表明,芹菜素能使HeLa细胞的平板克隆形成能力减弱,不论从克隆的大小还是克隆的数目上,实验组均较对照组明显下降,芹菜素浓度越大,平板克隆形成能力越弱。结论芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞的生长有显著的抑制作用。     

甲状腺组织和细胞中一氧化氮及一氧化氮合酶的研究进展

自从80年代内源性一氧化氮(NO)被发现以来其广泛而重要的生理及病理作用已越来越引起人们的重视。目前的研究已证明：NO这一人们熟悉的无机小分子物质，在心血管、内分泌等系统及免疫和炎症反应中发挥重要作用，其功能具有两面性：一方面NO可由哺乳类动物以适当的量和速度产生，在宿主免疫防御、神经传递和血管调节等正常生理过程中充当信使分子。     

γδT细胞对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨γδT细胞对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法从宫颈癌患者手术切除的肿瘤组织分离肿瘤浸润淋巴细胞,固相抗体包被法体外扩增得到γδT细胞(效应细胞),与人宫颈癌HeLa细胞(靶细胞)按照不同的比例共培养24h或48h后,MTT法检测HeLa细胞增殖情况,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡。结果γδT细胞与HeLa细胞按不同效靶比共培养24h和48h后,MTT法检测结果显示,增殖率均较对照组显著降低(P<0.05)并显示了剂量依赖性,效靶比为32∶1时,50%以上的细胞停止增殖;γδT细胞与HeLa细胞(效靶比为4∶1)共培养24h后FCM分析结果显示,HeLa细胞凋亡率较对照组显著增强(P<0.01)。结论γδT细胞对人宫颈癌HeLa细胞增殖有抑制作用并呈现剂量依赖性,对细胞凋亡有促进作用。     

Plk1磷酸化修饰Tara蛋白对HeLa细胞胞质分裂及增殖的影响

目的:探讨有丝分裂相关激酶Plk1磷酸化修饰Tara蛋白在调控HeLa细胞胞质分裂及增殖中的作用。方法:运用酵母双杂交、免疫共沉淀、体外沉降实验确定Plk1与Tara两种蛋白是否能够相互结合;采用体内外磷酸化实验明确Plk1对Tara蛋白的磷酸化修饰;采用免疫荧光实验及流式细胞术检测Tara蛋白的磷酸化对HeLa细胞胞质分裂及细胞增殖的影响。结果:Plk1与Tara在体内外均能结合;Tara蛋白在体内外均能够被Plk1磷酸化修饰;过量表达Tara蛋白的磷酸化突变体对HeLa细胞的胞质分裂有明显的抑制作用,细胞增殖明显受阻。结论:Plk1能够与Tara结合,并通过磷酸化修饰Tara蛋白阻碍细胞胞质分裂进程及抑制细胞增殖。     

薤白总皂苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的观察薤白总皂苷对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的薤白总皂苷(25、50、100、250、500、1000μg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的薤白总皂苷在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用100和200μg/ml的薤白总皂苷处理宫颈癌HeLa细胞48 h后,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果薤白总皂苷对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间一剂量依赖性;薤白总皂苷(100和200μ/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,抑制HeILa细胞增殖,促进其凋亡(P<0.05,P<0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05,P<0.01)。结论薤白总皂苷有显著的抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与其降低HeLa细胞线粒体膜电位,上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性有关。     

中药双黄连对单纯疱疹病毒的抑毒作用

目的探讨中药双黄连注射液对人胚脑单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎模型的抑毒作用。方法采用人胚脑神经细胞制备HSV—Ⅰ型脑炎模型，用双黄连进行抑毒实验。检测培养液中的HSV－1的DAN拷贝数和肌酸激酶定量，作为抑毒指标。结果双黄连组对单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎模型的病变有明显抑制作用，HSV-1 DNA拷贝数反肌酸激酶定量明显降低。结论双黄连可通过减少病毒DNA的复制，对单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎模型的病变起到抑制病毒的作用。     

单纯疱疹病毒II型感染对生殖道上皮细胞间紧密连接和单核细胞趋化性影响的初步研究

目的探讨人类单纯疱疹病毒II型（HSV-2）感染对生殖道上皮细胞间紧密连接的影响及对单核细胞的趋化作用。方法通过以人子宫内膜腺癌细胞（HEC-1-A）小室培养模型为基础建立生殖道体外单层细胞致密层模型,低剂量HSV-2感染后（MOI=0.1）,检测体外细胞活力;通过检测跨膜电阻判断细胞间紧密连接程度的变化;采用Westernblot、荧光定量PCR法观察细胞紧密连接蛋白ZO-1、E-cadherin和Occuldin的表达情况;通过单核细胞趋化反应实验来检测感染HSV-2的HEC-1-A细胞培养上清液的趋化效应。结果与阴性对照组（Mock组）相比,HSV-2（MOI=0.1）感染使HEC-1-A单层细胞致密层跨膜电阻逐渐降低,且在感染中后期下降明显（P＜0.01）,而细胞活力无显著变化（均＞80%）;随着HSV-2病毒感染,ZO-1蛋白表达水平逐渐降低,在感染60h,该蛋白表达水平最低,而其mRNA表达水平无显著变化（P＞0.05）,E-cadherin和Occuldin均无显著变化（均P＞0.05）;HSV-2感染HEC-1-A后的细胞上清液可诱导单核细胞产生明显的趋化反应（P＜0.01）。结论低剂量HSV-2持续感染可降低HEC-1-A单层细胞致密层跨膜电阻,破坏细胞间紧密连接,很可能与下调ZO-1表达水平相关;感染后的细胞上清液可产生某种特殊的趋化分子介导免疫细胞向感染区域迁移浸润。     

甘草甜素对HSV-1抑制作用的实验研究

目的:观察甘草甜素对单纯疱疹病毒Ⅰ型的抑制作用,为临床更为有效的治疗单纯疱疹病毒性脑炎探索新的药物.方法:体外培养Vero细胞,分成甘草甜素在病毒吸附vero细胞后加入病毒、吸附前甘草甜素预处理细胞以及吸附前甘草甜素预处理病毒,通过观察空斑形成单位来评价甘草甜素对单纯疱疹病毒Ⅰ型的抑制作用,以及作用发生于病毒感染的哪个阶段.结果:病毒吸附vero细胞后加入甘草甜素能明显抑制病毒所致的空斑形成,IC50为0.56mmol/L.吸附前甘草甜素预处理细胞以及吸附前甘草甜素预处理病毒,对病毒所致的空斑形成无明显影响.结论:甘草甜素能明显地抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型的复制,它的作用是发生在病毒穿入细胞后的阶段,不能阻止病毒对细胞的吸附,也不能直接灭活病毒.     

含Ⅰ型单纯疱疹病毒包装信号序列片段的分离及扩增子质粒双表达载体的构建

利用基因工程技术分离出含有Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV－1）包装信号序列和HSV－1基因组复制起点序列的片段，表达外源基因所必需的启动子序列以及其下游作为报告基因的lacZ基因片段，构建成质粒型HSV－1载体pHSVL。用脂质体介导的方法可将该质粒转染入经辅助病毒HSV－1tsK株超感染的Vero细胞，并将其包装成HSV－1假型病毒颗粒，可如天然病毒一样再感染传代细胞和神经细胞并在其中进行基因表达。在pHSVL的基础上，我们还构建了一种可同时表达两种外源基因的质粒型疱疹病毒载体pHLCL，即在pHSVL中插入第二个转录单位：HCMVIE启动子和其下游的荧光素酶基因（lucgene），由此获得的pHLCL病毒接种传代细胞证明它可在其中同时表达两种报告基因．本研究成功地构建了两种质粒型HSV－1载体，其独特的基因转移方式使之在神经生理、病理及神经系统疾病的基因治疗的实验研究中都具有广阔的应用前景。     

复发性口疮患者HSV—1的检测及其抗病毒治疗观察

目的：为了研究单纯疱疹病毒Ⅰ型与复发性口疮的关系：方法：采用ＰＣＲ技术检测复发性口疮患者（ＲＯＵ）损害区和健康对照者口腔粘膜脱落细胞的ＨＳＶ－１ＤＮＡ，然后对ＨＳＶ－１ＤＮＡ阳性和阴性患者用无环鸟苷作抗病毒治疗，并观察半年。结果：ＲＯＵ患者ＨＳＶ－１ＤＮＡ的检出率为２６．７％，对照组为６．７％，两者之间有高度显著性差异。ＨＳＶ－１ＤＮＡ阳性者与阴性者抗病毒治疗有效率分别是９３．７５％和１３．６３％     

应激对小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型潜伏感染再激活的影响

目的 探讨不同应激对小鼠三叉神经节潜伏感染的单纯疱疹病毒再激活的影响,以期对疱疹病毒复发性感染的发病机制有更深的了解。方法 给潜伏感染单纯疱疹病毒I型的小鼠施加高热、过度疲劳、寒冷等不同刺激,然后检测小鼠应激反应后三叉神经节单纯疱疹病毒I型抗原的表达。结果 高热、过度疲劳和寒冷应激在小鼠三叉神经节均不同程度地检测到活化的病毒,以高热应激组病毒再激活的数目最多。结论 应激可以诱发小鼠三叉神经节内潜伏感染的单纯疱疹病毒I型再激活,是单纯疱疹病毒复发性感染的重要诱因。     

无环鸟苷对HSV-1角膜炎的治疗和预防复发作用分析

目的：研究分析无环鸟苷治疗HSV-1角膜炎的临床效果以及预防复发的作用。方法：选择2013年1月至2013年7月我院治疗的172例180眼HSV-1角膜炎患者，随机分为两组，对照组84例90眼采用El服法莫替丁治疗，20mg／次，2次，d，治疗6周为1个疗程。观察组88例90眼联用法莫替丁和无环鸟苷治疗，口服法莫替丁，20mg次，2次／d，并用0．1％无环鸟苷眼药水滴眼，5次／d，治疗6周为1个疗程，对比两组疗效并进行2个月的随访。结果：观察组总有效率为96．67％，对照组总有效率为91．11％，两组差异具有统计学意义（P〈0．05），随访2个月显示，观察组仅有2例2眼（2．22％）复发，对照组有4例5眼（5．56％）复发，两组差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：无环鸟苷能够直接作用于患处，具有疗效显著、预防复发、使用安全、副作用少等优点。     

HSV-1载体对体外培养神经元感染作用的研究

目的利用重组有lacZ基因的HSV-1假型病毒载体感染体外培养的人胚神经元,(以β-gal组织化学染色来检测报告基因lacZ在神经元中的表达),并观察该载体的细胞毒性及病毒的水平传播情况。方法用重组有lacZ基因的HSV-1扩增子质粒pHSVlac包装成复制缺陷的假型病毒载体,并在Vero细胞中传代增殖,产生高滴度的病毒载体,用其感染体外原代培养的神经元,以β-gal染色观察报告基因lacZ在神经元中的表达及该载体的细胞毒性。结果pHSVlac质粒与HSV-1 17 ts K可在Vero细胞中包装成复制缺陷的HSV-1假型病毒载体,经传代其滴度可达1×108PFU/mL。该载体在37℃时能感染体外原代培养的人胚神经元,并在其中表达LacZ基因,未发现细胞毒性改变。结论HSV-1载体能够高效靶向地将外源基因导入非分裂的神经元,HSV-1载体介导的基因转移系统的建立为进一步开展神经机能及神经系统疾病的基因治疗的研究奠定了基础。     

施普善对HSV-1感染乳鼠脑神经细胞保护作用研究

目的 探讨施普善对HSV-1感染小鼠神经细胞保护作用.方法 建立HSV-1感染神经系统的小鼠模型,将模型分为未治疗和施普善治疗组,同时设正常对照组,比较各组小鼠病死率、血清NO、IL-lβ水平变化和电镜下小鼠神经细胞形态结构变化.结果 施普善治疗组小鼠病死率、血清NO及IL-1β水平均比未治疗组明显降低,差异有统计学意...