CAIX/MN/G250 mRNA在肾癌根治术前后表达的检测

目的探讨肾癌相关蛋白CAIX／MN／G250mRNA在肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）手术前后的表达水平及临床意义。方法应用RT—PCR技术检测57例RCC患者癌组织及术前外周血中CAIX／MN／G250mRNA的表达情况,并选择15例癌旁肾组织、15例正常肾组织及40例健康人外周血作对照,对术前外周血CAIX／MN／G250mRNA阳性RCC患者术后随访4周,并对其外周血CAIX／MN／G250mRNA水平进行半定量检测。结果57例RCC患者,其CAIX／MN／G250mRNA阳性率在外周血中为59．6％（34／57）,癌组织中为78．9％（45／57）,显著高于对照组（P〈0．01）。在肾透明细胞癌患者的外周血及癌组织中,CAIX／MN／G250mRNA的阳性率分别为76．2％（32／42）和95．2％（40／42）,均显著高于相应对照组（P〈0．01）。RCC患者外周血及癌组织中CAIX／MN／G250mRNA阳性率均随临床分期的增加而增加（P〈0．01）。34例外周血阳性患者CAIX／MN／G250mRNA水平术前2h、术后7、14、21和28d分别为0．54±0．13、0．56±0．15、0．34±0．13、0．29±0．18和0．22±0．11。RCC患者外周血CAIX／MN／G250mRNA水平在肾癌根治术后随时间的推移呈下降趋势（P均〈0．05）。结论使用RT—PCR技术检测CAIX／MN／G250mRNA对肾癌尤其是透明细胞癌有较好的特异性和敏感性。外周血CAIX／MN／G250mRNA检测可作为肾癌微转移的检测指标用于RCC的诊断、疗效评价及预后判断。     

肾癌患者外周血中survivin mRNA的表达

目的探讨肾透明细胞癌患者外周血中survivin mRNA的表达及其临床意义。方法用RT-PCR方法检测30例肾透明细胞癌患者、10例正常健康人外周血中survivin mRNA的表达。结果30例肾透明细胞癌患者中有23例外周血中survivin mRNA表达阳性，阳性率为76．7％，与正常健康人（0％）相比差异有统计学意义（P〈0．001）；survivin mRNA的表达与临床分期密切相关（P〈0．01）；随肿瘤组织分化程度的降低，survivin阳性率有增加的趋势，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肾透明细胞癌患者外周血中survivin mRNA可作为肾透明细胞癌微转移的一个监测指标。     

EGFL7和VEGF在肾透明细胞癌血管生成及转移中的相关性研究及临床意义

目的：探讨表皮生长因子样结构域7（EGF_1ikedomain7,EGFL7）、血管表皮生长因子（vascularen—dothelialgrowthfactor,VEGF）在肾透明细胞癌中的表达及其与肾癌血管生成和转移的关系。方法：选取87例行根治性肾切除的肾透明细胞癌患者癌及癌旁组织标本,采用免疫化学SP法检测EGFL7、VEGF的表达,并计数血管内皮细胞表面抗原（CD34）标记的血管密度（MVD）;同时选取46例癌及癌旁组织标本,采用RT—PCR检测EGFL7mRNA的表达。结果：EGFL7和VEGF阳性表达率及MVD值在癌组明显高于癌旁组（P〈O．05）,且EGFL7、VEGF与MVD在肾透明细胞癌组织中的表达呈正相关,并与肿瘤分级、分期显著相关（P〈0．05）;EG—FL7mRNA阳性表达率明显高于癌旁组织（P〈O．05）,并与肿瘤分级、分期相关（P〈O．05）。结论：肾透明细胞癌组织中EGFL7、VEGF的表达与肾癌血管生成有关,两者可能协同肿瘤新生血管的生成。     

Dicer表达与肾透明细胞癌发生及转移的关系

目的：探讨Dicer在肾透明细胞癌发生及转移中的作用。方法：选取正常肾小管上皮细胞株HKC、非转移性肾透明细胞癌细胞株769P、转移性肾透明细胞癌细胞株Caki-1以及36例肾透明细胞癌手术标本（其中11例已发生远处转移）和相应癌旁正常肾组织,应用实时定量PCR和Western blot方法检测Dicer在肾透明细胞癌细胞株和组织中mRNA和蛋白的表达情况,并分析Dicer的mRNA水平与临床病理资料的关系。结果：和正常肾小管上皮细胞株HKC相比;Dicer的mRNA水平在肾透明细胞癌细胞株769-P和Caki-1中均降低（P〈0．001）,而转移性肾透明细胞癌细胞株Caki-1比非转移性肾透明细胞癌细胞株769-P表达水平更低（P〈0．001）;和癌旁正常肾组织相比,Dicer的mRNA水平在‘肾透明细胞癌手术标本中明显降低（P〈0．001）,且已发生远处转移的。肾癌标本比未发生远处转移的肾癌标本表达水平更低（P=0．04）;Dicer在细胞株和组织中的蛋白水平的变化与mRNA水平的变化一致（P〈0．001）;Dicer的mRNA水平在不同年龄、性别、组织学分级、肿瘤大小及T分期组间无统计学差异（P〉0．05）。结论：Dicer表达降低可能在。肾透明细胞癌的肿瘤发生中发挥作用,且其表达的进一步下降可能与肾透明细胞癌的远处转移有关。     

透明质酸合成酶2在肾癌中的表达及临床意义

目的：研究透明质酸合成酶2在肾癌中的表达,并探讨其潜在的临床意义。方法：运用实时定量聚合酶链反应（qPCR）方法检测五种肾癌细胞（ACHN、Caki-1、OS-RC-2、786-O、SN12PM6）透明质酸合成酶三种亚型（HAs1、HAS2、HAs3）mRNA的表达,运用Westernblot方法进一步检测mRNA表达含量高的HAS亚型在五种肾癌细胞系及肾透明细胞癌（ccRCC）组织中的蛋白表达。结果：在五种肾癌细胞系中HAS2mRNA表达水平均明显高于正常肾小管上皮细胞（HK-2）,其中在。肾癌SN12PM6细胞系中表达水平最高（均P〈0．05）,HAS1mRNA的表达水平均明显低于正常肾小管上皮细胞（均P〉0．05）,而HAS3mRNA表达水平除肾癌Caki-1细胞系外均低于正常肾小管上皮细胞（P〉0．05）。在五种肾癌细胞系中HAS2蛋白均明显表达,而正常‘肾小管上皮细胞无明显表达。在肾透明细胞癌组织中HAs2蛋白表达也明显高于相应癌旁组织。结论：透明质酸合成酶2在多种肾癌细胞系和肾透明细胞癌组织中均明显表达,提示透明质酸合成酶2可能在肾癌尤其在肾透明细胞癌发生发展过程中起着至关重要的某种作用,并可能成为新的肾透明细胞癌分子标志物。     

膀胱移行细胞癌临床病理指标与外周血CK-20基因表达的相关研究

目的 探讨外周血角蛋白20（CK－20）基因表达在膀胱移行细胞癌微转移情况及其临床意义。方法 以逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）检测91例膀胱癌不同临床分期及病理分级CK－20mRNA外周血表达情况。结果 91例膀胱癌外周血CK－20基因表达阳性47例(51.6%），外周血肿瘤细胞微转移与膀胱癌患者的临床分期密切相关（P＜0.05），而与病理分级无明显相关（P＞0.05），随访中未发现淋巴结转移的T1－2期患者，术后8个月2例复发且均为CK－20RNA表达阳性。结论 RT－PCR方法检测CK－20mRNA在外周血表达是判断膀胱癌微转移的重要标志，对准确分期及治疗有重要意义。     

肾母细胞瘤过表达基因和WT1基因在肾癌组织中转录水平的定量研究

目的 研究肾癌组织中肾母细胞瘤过表达基因（NOV）及WT1基因mRNA定量表达水平及意义。方法 肾癌组织标本57例。男40例，女17例，平均年龄65岁。T139例、T213例、T3a5例；G114例、G223例、G320例。应用实时RT—PCR方法定量检测癌组织及36例癌旁正常肾组织中NOV和WT1的mRNA表达，并对2种基因表达水平进行相关性分析。结果 肾癌组织NOVmRNA表达水平中位值（1．17）显著低于癌旁正常组织（4．32，P〈0．05），乳头状肾癌组织表达量（2．67）显著高于透明细胞癌（1．06，P〈0．05），G．肿瘤表达量（4．61）显著高于G2～G3肿瘤（1．11，P〈0．05）。NOV表达与肿瘤分期、大小等无显著相关。WT1mRNA在肾癌组织中的表达水平中位值（0．13）显著低于癌旁正常组织（1．93，P〈0．05），WT1表达与肿瘤分期、分级、组织类型等均无关。NOVmRNA与WT1mRNA表达水平无明显相关。结论 NOV基因与肾癌的发生和分化相关。WT1在肾癌组织中表现为低表达。NOV表达是否受WT1的调节尚需进一步研究。     

尾加压素Ⅱ及其受体在人肾透明细胞癌组织中的表达及意义

目的：测定肾透明细胞癌中尾加压素Ⅱ（UⅡ）与其受体（UT-R）的表达量,以期探讨UⅡ与UT—R的表达在肾透明细胞癌发生中的临床意义。方法：对12例。肾透明细胞癌肿瘤组织通过免疫组化检测肾透明细胞癌组织和正常肾组织UⅡ蛋白的表达,并采用逆转录一多聚酶链式反应（RT—PCR）的方法测定肾透明细胞癌组织和正常肾组织UⅡ mRNA和UT-RmRNA的表达量。结果：肾透明细胞癌组织和正常肾组织中有uⅡ蛋白表达。RT-PCR结果显示肾透明细胞癌中UⅡmRNA的表达明显高于正常肾组织0．92±0．09和0．62±0．06（P〈0．01）。UT-R mRNA的表达明显高于正常肾组织0．28±0．01和0．16±0．03（P〈0．01）。结论：肾透明细胞癌中UⅡ和UT—RmRNA高表达提示UⅡ／UT系统可能与肾透明细胞癌的发生、发展有关,UⅡ可能通过自分泌或軎分泌的方式发挥作用。     

长链非编码 RNA MIAT 在肾透明细胞癌中的表达情况和预后意义

目的 探讨长链非编码RNAMIAT在肾透明细胞癌中的表达情况及与患者临床指标的相关性,分析其作为肾透明细胞癌分子标记物的可能性。方法 通过荧光定量PCR方法 检测MIAT在40例肾透明细胞癌组织和40例癌旁正常组织中的表达情况,同时结合TCGA数据库分析MIAT表达水平与肾透明细胞癌患者临床指标和预后的关系。结果 MIAT在肾透明细胞癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,在肾癌细胞系中的表达明显高于正常肾小管上皮细胞,差异均具有统计学意义（P<0.05）。TCGA数据库资料分析表明,MIAT表达水平与肾癌患者T分期（P<0.001）、M分期呈正相关（P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析表明,高表达MIAT的肾癌患者总体生存时间明显低于低表达MIAT的肾癌患者（Log-rankP<0.05）。结论 MIAT在肾透明细胞癌组织和肾癌细胞系中高表达,有可能成为肾透明细胞癌的分子标记物。     

荧光定量聚合酶链反应检测乳腺癌外周血微小转移

目的：探讨应用荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）扩增乳腺组织特异性基因hMAM mRNA作为检测乳腺癌血行微小转移方法的可能性。方法：利用逆转录RT－PCR检测hMAM mRNA在乳腺癌细胞系SKBR3的表达，将FQ－PCR与普通PCR的敏感性进行比较，并利用FQ－PCR对乳腺癌等不同病种患者101例及健康志愿者31例的外周血进行检测，分析hMAM mRNA表达与乳腺癌临床特点之间的关系。结果：普通巢式PCR扩增hMAM mRNA在10^6个白细胞中可检测出1个SKBR3细胞，而巢式FQ－PCR可在10^7个白细胞中可检测出1个SKBR3细胞，63例乳腺癌患者外周血中19例hMAM mRNA阳性（阳性率30％），随肿瘤分期进展阳性率增高，其他病种患者外周血中均阴性，而31例健康献血员中有1例阳性，结论：巢式FQ－PCR是检测乳腺癌微小转移的敏感方法。     

MN/CA9基因检测与肾细胞癌的意义

目的:探讨MN/CA9基因的检测在诊断肾细胞癌(RCC)中的价值.方法:对无临床转移的RCC患者42例,有转移的RCC患者3例,其他肾脏疾病患者25例,采用RT-PCR方法检测癌组织,正常肾组织及血液和尿液中MN/CA9基因的表达.结果:42例无临床转移的RCC患者的癌组织中38例检测到MN/CA9基因的表达,其中16例外周血中有MN/CA9基因表达,6例尿液中检测到该基因;3例已有肺转移患者中2例血液有该基因表达,1例尿液中有表达.而其他肾脏疾病的25例肾组织中仅1例有MN/CA9的表达,外周血及尿液中未检测到该基因.结论:MN/CA9基因是RCC患者的一个有诊断意义的生物指标,可了解微转移及评价预后.     

Fas配体在泌尿生殖肿瘤细胞系及肾癌组织中的表达

目的 明确Ｆａｓ配体在泌尿生殖肿瘤细胞系及肾癌组织中的表达情况。方法 采用免疫细胞化学和反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测膀胱癌（Ｔ２４、ＢＩＵ－８７、ＥＪ）、肾癌（ＧＲＣ－１、ＲＣＣ－９４９）、前列腺癌（ＰＣ－３Ｍ）及１０例肾癌组织上Ｆａｓ配体的表达。结果 免疫细胞化学方法检测细胞系中Ｆａｓ配体表达于ＢＩＵ－８７、ＲＣＣ－９４９和ＧＲＣ－１细胞,而以ＢＩＵ－８７和ＲＣＣ－９４９细胞系表达较强,在     

检测前列腺癌病人外周血中PSA mRNA表达的临床意义

目的 探讨前列腺癌患者外周血中ＰＳＡ ｍＲＮＡ表达的临床意义。方法 运用敏感的巢式ＲＴ－ＰＣＲ方法检测３３例前列腺癌（ＰＣａ）患者和１０例前列腺增生（ＢＰＨ）患者外周血中ＰＳＡ ｍＲＮＡ的表达。结果 ＢＰＨ组外周血中ＰＳＡ ｍＲＮＡ均不表达。ＰＣａ组有１４例（４２％）ＰＳＡ ｍＲＮＡ表达阳性。１２例未行内分泌治疗者中有８例（６７％）阳性,２１例行分泌治疗者中有６例（２９％）阳性,二者差异有显著性（     

细胞粘附分子CD44的变异表达与肾癌的关系

目的探讨变异型细胞粘附分子（ＣＤ４４ｖ）表达与肾细胞癌临床行为的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法分析了ＣＤ４４ｖ在３１例肾癌及１８例正常肾组织标本中的表达情况。结果３１例肾癌中有１８例ＣＤ４４ｖ表达阳性,作为对照的１８例正常肾组织中无一例呈阳性表达（Ｐ＜０００１）。进一步结合病理资料,发现在有转移或病理分期较高的肾癌中ＣＤ４４ｖ的表达率亦较高。结论ＣＤ４４ｖ的表达与肾癌的恶性表型及浸润转移密切相关,可能作为评价肾癌临床行为的一个新的指标     

定量检测大肠癌及大肠良性疾病癌胚抗原信使核糖核酸的研究

目的探讨利用定量巢式逆转录聚合酶链反应(NestedRTPCR)检测大肠良恶性疾病组织及其外周血CEAmRNA(癌胚抗原信使核糖核酸)方法的效果及其临床意义。方法用竞争性NestedRTPCR方法定量检测25例手术切除的大肠肿瘤、肠系膜淋巴结及22例大肠良性病变和6例健康人外周血中CEAmRNA的量。结果25例大肠癌均呈阳性,表达量亦大,拷贝数为105～109。25例淋巴结中病理报告肿瘤转移者11例(44%)中NestedRTPCR方法检测CEAmRNA均呈阳性且量多,拷贝数为106～108,而14例(56%)病理报告肿瘤阴性NestedRTPCR检测有5例(35.7%)CEAmRNA阳性,Copy数为102～103。随访发现CEAmRNA阳性的5例患者均在20个月内复发,而CEAmRNA阴性者均未复发。22例大肠良性病变中2例(均为息肉伴不典型增生改变者)CEAmRNA呈阳性,表达量101,阳性率9%。6例正常健康人外周血CEAmRNA均呈阴性。结论定量NestedRTPCR检测大肠癌CEAmRNA的方法优于常规病理检查并可进行量化。对大肠癌的诊断及判断淋巴结转移有重要意义。     

多药耐药基因在泌尿系统肿瘤细胞系中的表达

目的检测泌尿系统肿瘤多药耐药基因及其产物的表达。方法对肾颗粒细胞癌细胞系ＧＲＣ１，肾透明细胞癌细胞系ＲＣＣ９４９，膀胱移行细胞癌细胞系ＢＩＵ８７、Ｔ２４、ＥＪ，前列腺癌细胞系ＰＣ３ｍ和对照的白血病细胞系ＨＬ６０进行免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测。结果只有ＧＲＣ１同时表达Ｐ糖蛋白（ＰＧＰ）和ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ，其他肿瘤细胞系均无表达。结论泌尿系肿瘤细胞系多数无ＰＧＰ也没有ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ水平的表达，只有ＧＲＣ１例外     

Tumor-M2-Pyruvatkinase beim Nierenzellkarzinom Untersuchungen im Plasma von Patienten

Tumor cell metabolism is characterized by a high rate of aerobic glycolysis. The metabolic differences require changes in glycolytic enzyme activities and isoenzyme patterns. The inactive form of the M2 pyruvate kinase (Tu M2-PK) is specifically expressed in tumor cells and has been detected immunohistochemically in tumor tissue but also in peripheral blood of patients with different malignant tumors. In this study, Tu M2-PK in the plasma of patients with renal cell carcinoma (RCC) was compared with healthy volunteers. Tu M2-PK was quantified with a commercially available enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kit. Using the ELISA kit, plasma probes of 57 healthy individuals were compared to 63 patients with RCC (51 patients with non-metastatic RCC, 12 patients with metastatic RCC). Statistical analysis was performed with the non-parametric ANOVA test according to Kruskal-Wallis. In patients with renal cell carcinoma, Tu M2-PK was significantly higher than in healthy volunteers. For organ-defined, non-metastatic tumors, sensitivity was only 27.5%, if the 95% reference values of the control group were used for discrimination. The differences were more pronounced in patients with metastatic disease. Tu M2-PK was significantly enhanced compared to healthy controls, but also to the group with non-metastatic disease, the sensitivity was 66.7%. Our data show that Tu M2-PK has no impact as an unspecific marker for the diagnosis of renal cell carcinoma. This is especially relevant to organ-defined, non-metastatic RCC. In advanced metastatic disease, a potential importance as a parameter for treatment control in palliative therapeutic approaches can be assumed, and warrants further investigations.     

MN/CA IX antigen as a potential target for renal cell carcinoma

MN/CA IX is considered as a carbonic anhydrase isoenzyme expressed in the normal alimentary tract in a tissue-specific manner. This antigen is activated in the majority of renal cell carcinomas (RCC) but not in the normal kidney tissues. Our previous study revealed that increase of malignant potential is related to down-regulation of MN/CA9. To investigate the mechanism of MN activation in RCC, we examined the methylation status of this gene (MN/CA9) in RCC cell lines (SKRC-1, 6, 10, 12, 14, 44, 59). Moreover, we analyzed the circulating blood of patients for the presence of RCC cells by RT-PCR, to determine whether detection of circulating RCC cells could be useful as a biomarker. CpG methylation was investigated at 7 CpG sites in the MN/CA9 5' region. Clear mRNA signals were observed in 5 cell lines (SKRC-1, 6, 10, 44, 59), e.g., MN/CA9 positive. These 5 MN-positive cell lines showed hypomethylation in the 5' region. In contrast, all CpG sites were methylated in the remaining 2 lines and 3 normal kidney tissue samples. These results suggest that hypomethylation in the 5' region may play an important role in the expression of MN/CA9 in RCC. RT-PCR analysis of blood samples from RCC patients revealed the presence of circulating MN-positive cancer cells in the blood. Although a significant correlation with tumor stage and grade was not observed, the analysis of blood samples from patients with metastases resulted in a high detection rate of 82%. These findings suggest the usefulness of MN/CA IX as a potential diagnostic marker for detection of RCC.     

Epidemiology,Aetiology, and Pathogenesis of Renal Cell Carcinoma

Significant advances in molecular medicine have made renal cell carcinoma (RCC) the prototype solid organ malignancy for targeted medical cancer treatment. Theseis new options have made it possible to prolong the life of patients with metastatic disease. However, we are far away from thoroughly understanding the molecular processes of RCC development let alone from being able to cure advanced renal cancer. RCC is the most common renal neoplasia and it remains a very aggressive and often fatal disease.There are several known histologic subtypes of this heterogeneous tumor entity with associated distinct molecular alterations and different clinical outcomes [1], [2], [3], [4]. The clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common and apparently most aggressive RCC subtype with the highest rates of local invasion, metastasis and mortality. It constitutes 70–80% of all renal cancers [1], [5]. It is estimated that more than 30% of patients with RCC have metastatic disease at the time of diagnosis and 30% of organ-confined RCCs will develop metastatic disease after local treatment [6]. Thus, RCC remains a very major challenge.