二苯乙烯苷通过核因子κB信号通路抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的 研究二苯乙烯苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用,探讨二苯乙烯苷是否通过核因子κB信号通路调节凋亡相关基因的表达来抑制细胞凋亡.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、过氧化氢组和二苯乙烯苷组,采用显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测核因子κB p65、IκB、bcl-2蛋白的表达.结果 过氧化氢能显著抑制内皮细胞增殖,增加细胞凋亡率;并增加核因子κB p65蛋白的表达,降低bcl-2和IκB蛋白的表达.二苯乙烯苷预处理后显著增加氧化损伤内皮细胞的增殖率,并降低细胞凋亡率;与过氧化氢组相比,二苯乙烯苷组核因子κB p65蛋白的表达显著降低,bcl-2和IκB蛋白的表达显著升高(P<0.01).结论 二苯乙烯苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与其抑制核因子κB/ IκB信号通路并上调bcl-2蛋白的表达有关.     

二苯乙烯苷对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞核因子κB、肿瘤坏死因子α表达的影响

目的 研究二苯乙烯苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 以不同浓度(0.1、1、10 μmol/L)的二苯乙烯苷孵育体外培养人脐静脉内皮细胞 4 h后,用200 μmol/L 的过氧化氢作用内皮细胞24 h,采用电镜观察、MTT等方法测定各组细胞活力;RT-PCR检测核因子κB、IκB、肿瘤坏死因子α mRNA的表达, Western blot检测核因子κB、IκB蛋白的表达,ELISA检测上清中肿瘤坏死因子α蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,过氧化氢能明显造成内皮细胞损伤(P<0.01) ,引起细胞活性降低.与过氧化氢损伤组比较,不同浓度组二苯乙烯苷均可以提高过氧化氢诱导损伤的人脐静脉内皮细胞活性,降低核因子κB、肿瘤坏死因子α mRNA及蛋白水平的表达,其中以1 μmol/L 二苯乙烯苷组的作用最明显,其差异有显著性(P<0.01),但对IκB的mRNA及蛋白水平差异均无显著性.结论 二苯乙烯苷对过氧化氢所致的人脐静脉内皮细胞损伤有保护作用,其机制可能与下调核因子κB、肿瘤坏死因子α的表达有关.     

银杏黄酮苷对人巨细胞病毒感染的人脐静脉内皮细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC304)细胞周期和凋亡的影响和机制及银杏黄酮苷对其感染HUVEC304的作用。方法:实验分为4组,分别为正常对照组、银杏黄酮苷组、HCMV感染组、HCMV感染加银杏黄酮苷组。采用流式细胞技术对HCMV感染的体外培养的HUVEC304及银杏黄酮苷对其作用后进行观察和分析。结果:HCMV感染HUVEC304后24h,正常对照组G0/G1期的细胞为74.4%,加入HCMV后为59.3%,较正常对照组降低20.3%(P<0·05)。正常对照组凋亡细胞为8.3%,当加入HCMV后为5.8%,较正常对照组降低30.1%(P<0·01)。银杏黄酮苷可以降低HCMV增加进入S和G2/M期的细胞,HCMV感染的细胞处在G0/G1期的为59.3%,用10-2mol/L银杏黄酮苷后被感染细胞处在G0/G1期的增加为67.5%,较感染组增加13.8%(P<0·05)。银杏黄酮苷可以增加HCMV感染的HUVEC304凋亡水平。HCMV感染后凋亡细胞为5.8%,加入10-2mol/L银杏黄酮苷后凋亡细胞为6.2%,较HCMV组升高6.9%(P<0·05)。结论:HCMV感染HUVEC304后,可以降低HUVEC304停留在G1期的细胞,使进入S和G2/M期的细胞明显增加,表明HCMV感染早期可通过增加G0/G1期细胞进入S和G2/M期,导致细胞最终表现为增殖。应用银杏黄酮苷可以促进细胞从G1期向S和G2/M期的转化和细胞的凋亡。HCMV感染HU-VEC304引起的炎性反应可能影响内皮细胞的功能,导致血栓形成、脂质代谢紊乱,最终参与动脉粥样硬化的形成。而银杏黄酮苷可促进HCMV感染HUVEC304的凋亡,抑制被感染细胞的过度增生,因而可能对防治动脉粥样硬化有一定的作用。     

乔松素对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨蜂胶乔松素对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法用消化灌注法收集人脐静脉内皮细胞进行体外原代培养,于培养液中给予10 mg/L脂多糖处理以建立细胞凋亡模型,乔松素处理组于模型条件培养液中分别加入不同浓度的乔松素(50、100和200 mg/L)干预,共同孵育24 h。光镜下观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率以观察细胞增殖变化,缺口末端标记技术TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测信号转导系统核因子κB亚基p65核易位变化。结果模型组内皮细胞凋亡率明显高于阴性对照组,不同浓度乔松素组细胞凋亡率均低于模型组,同时细胞存活率增高(P0.01)。加入不同浓度乔松素能显著降低脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞核因子κB p65核易位活性(P0.01)。结论乔松素可通过抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡而保护内皮细胞功能,其机制可能与抑制核因子κB p65活化有关。     

二苯乙烯苷对血管内皮细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察二苯乙烯苷干预过氧化氢致人脐静脉内皮细胞凋亡及对凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、300μmol/L过氧化氢组及二苯乙烯苷预处理组,采用MTT法、形态学观察、流式细胞仪检测内皮细胞凋亡情况,Western blot检测二苯乙烯苷对Bcl-2和Bax表达的影响。结果内皮细胞经过氧化氢处理后,其增殖明显受到抑制,凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达显著增加,Bcl-2/Bax比值降低,差异均有显著性(P<0.01);经二苯乙烯苷预处理后,细胞增殖率显著提高,凋亡率显著降低;Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值明显提高,差异均有显著性(P<0.01)。结论二苯乙烯苷可通过调节Bcl-2/Bax表达而抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,减少内皮细胞损伤。     

抑制p22phox表达对高糖所致的内皮细胞活性氧生成和细胞凋亡的影响

目的 探讨p22phox基因沉默在高浓度葡萄糖诱导的内皮细胞活性氧生成和细胞凋亡中的作用.方法 将原代培养的人脐静脉内皮细胞分为对照组、高糖组、高糖+siRNA转染组和siRNA转染组,采用Western-blot检测p22phox蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞内活性氧水平及细胞凋亡率.结果 siRNA能有效抑制p22phox表达,高糖能诱导内皮细胞p22phox表达增加.高糖+siRNA转染组的细胞内活性氧水平和细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05).结论 抑制p22phox表达能降低高糖所致的内皮细胞活性氧生成和细胞凋亡.     

对乙酰氨基酚对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨对乙酰氨基酚对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤及凋亡的保护作用及机制.方法 用体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,分为正常对照组、过氧化氢损伤组(0.1 mmol/L)、药物处理加对乙酰氨基酚低浓度(25 μmol/L)、中浓度(50 μmol/L)和高浓度(100 μmol/L)预处理1 h组.用噻唑蓝比色法检测内皮细胞活力,用试剂盒检测丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性,用蛋白免疫印迹法检测Caspase-3的表达,用流式细胞仪分析细胞凋亡率.结果 与正常对照组比较,过氧化氢能明显造成内皮细胞损伤(P<0.05),表现为细胞活力降低,丙二醛含量增加,超氧化物歧化酶活性下降,Caspase-3表达增加,细胞凋亡率增加.对乙酰氨基酚可干扰过氧化氢对内皮细胞的损伤作用,使内皮细胞活力增加,丙二醛含量减少,超氧化物歧化酶活性升高,Caspase-3表达降低,细胞凋亡率减少(P<0.05).结论 对乙酰氨基酚可降低过氧化氢对人脐静脉内皮细胞的损伤作用,抑制过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,其保护作用可能与抗氧化及抑制Caspase-3有关.     

眼镜蛇毒细胞毒素13诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对Bcl-2家族基因表达的影响

目的 研究眼镜蛇毒细胞毒素13诱导人脐静脉内皮细胞凋亡作用及其对Bcl-2家族基因表达的影响.方法 CCK-8法测定细胞毒素13对人脐静脉内皮细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析DNA倍体及细胞凋亡率;逆转录聚合酶链反应检测Bcl-2、Bax和Bcl-x_L基因表达的变化,Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果 细胞毒素13对人脐静脉内皮细胞增殖具有显著的抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其抑制作用呈剂量依赖性.细胞毒素13可上调促凋亡蛋白Bax,而对抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-x_L的表达无明显影响.结论 细胞毒素13可能通过上调Bax表达诱导细胞凋亡,抑制人脐静脉内皮细胞增殖.     

干扰Sestrin2表达对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察干扰Sestrin2表达对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响。方法用ox-LDL处理HUVEC复制内皮细胞损伤模型。Western blot检测不同浓度ox-LDL处理HUVEC不同时间Sestrin2的蛋白表达水平及转染Sestrin2 siRNA后Sestrin2的蛋白表达水平;流式细胞术检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC凋亡率的影响;Western blot检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC中Caspase-3表达的影响及ox-LDL对HUVEC中JNK通路的影响。结果不同浓度(20、50和100 mg/L)的ox-LDL处理HUVEC 24 h均能明显上调Sestrin2表达;50 mg/L ox-LDL处理HUVEC不同时间(24 h和48 h)均能明显上调Sestrin2表达,24 h达高峰;转染Sestrin2 siRNA能明显抑制Sestrin2的表达;ox-LDL能明显诱导HUVEC凋亡,转染Sestrin2 siRNA能明显促进由ox-LDL诱导的HUVEC凋亡;ox-LDL能明显诱导p-JNK和p-c-Jun的表达,且SP600125能明显抑制由ox-LDL诱导的Sestrin2表达。结论 ox-LDL通过JNK/c-Jun信号通路诱导Sestrin2表达,干扰Sestrin2表达能明显促进ox-LDL诱导的HUVEC凋亡。     

miR-155通过调节Caspase-3和FADD表达影响TNF-α诱导的HUVEC凋亡

目的观察TNF-α处理的脐静脉内皮细胞(HUVEC)中miR-155的表达情况,探讨miR-155的表达与TNF-α诱导的HUVEC凋亡的关系,并探究两者之间的作用机制。方法不同浓度TNF-α分别处理HUVEC不同时间,MTT法检测细胞活性,Hoechst33342荧光染色法检测HUVEC凋亡,qRT-PCR检测细胞中miR-155的表达;通过转染miR-155 mimic和anti-miR-155使HUVEC中miR-155过表达或抑制其表达,Hoechst33342荧光染色和Annexin V-FITC/PI双染法检测过表达miR-155或抑制miR-155表达对HUVEC凋亡的影响;使用miRanda和Tangetscan等分析软件预测miR-155作用的潜在靶基因,Western blot检测靶基因Caspase-3和FADD的表达变化。结果 TNF-α可诱导HUVEC凋亡,且呈剂量和时间依赖性增加; 10μg/L TNF-α处理HUVEC 24 h后可以诱导其miR-155表达明显增加;抑制miR-155表达可以增加HUVEC凋亡; miR-155过表达则抑制HUVEC凋亡; miR-155通过调节Caspase-3、FADD和active-Caspase-3表达抑制细胞凋亡。结论 miR-155通过下调FADD和Caspase-3表达调节Caspase凋亡信号通路,抑制TNF-α诱导的HUVEC凋亡。     

氯喹对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:探究氯喹(chloroquine, CQ)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤的作用及机制。方法:用对数生长期的HUVEC进行实验,分为5组,对照组细胞不经药物处理,LPS组用10μg/mL LPS刺激细胞,低、中、高浓度CQ组用10μg/mL LPS和低、中、高浓度CQ(0.1、1和10μmol/L)共同作用细胞。培养24 h后用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测BCL-2、BAX、裂解的胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)蛋白的表达。结果:LPS刺激细胞后导致HUVEC活力降低、凋亡增加,同时BCL-2/BAX蛋白比值降低,裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达增高(P0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值无明显变化(P0.05);加入CQ作用后,低、中浓度CQ改善了LPS所致的细胞损伤,表现为细胞活力升高和细胞凋亡减少、BCL-2/BAX蛋白比值升高、裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达降低(均P0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值仍无明显变化(P0.05),而高浓度CQ对LPS所致的细胞活力抑制和细胞凋亡无明显改善作用,BCL-2/BAX蛋白比值无明显变化(P0.05),裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值则有所升高(P0.05)。结论:低、中浓度CQ可通过抑制细胞凋亡途径减轻LPS对HUVEC造成的损伤,低、中浓度CQ对于自噬没有影响;高浓度CQ可通过激活自噬、促进细胞凋亡途径加重LPS对HUVEC的损伤。     

蓝莓花色苷对人脐静脉内皮细胞凋亡调控基因Bax、Caspase-3表达的影响

目的探讨蓝莓花色苷对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法将HUVEC常规复苏传代,建立HUVEC凋亡模型,随机分成空白对照组、AngⅡ组、蓝莓花色苷组、AngⅡ+蓝莓花色苷组。采用MTT法检测细胞活性,通过Annexin V-FITC标记的流式细胞术检测细胞凋亡率,Western印迹蛋白免疫印迹法检测Bax、Caspase-3蛋白表达。结果与空白对照组相比,AngⅡ组Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著增加(P0.01);与AngⅡ组相比,蓝莓花色苷组、AngⅡ+蓝莓花色苷组Bax和Caspase-3的蛋白表达水平明显降低(P0.01)。结论蓝莓花色苷对HUVEC凋亡有一定抑制作用。     

原花青素对血管内皮细胞过氧化氢损伤的保护作用

目的 观察原花青素对血管内皮细胞过氧化氢损伤的保护作用及可能机制.方法 用体外培养的人脐静脉内皮细胞传代后进行实验,实验分为3组:对照组常规培养;过氧化氢损伤组;药物干预组加入原花青素低、中、高浓度组(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L预处理).用MTT法观察原花青素对过氧化氢损伤的内皮细胞活性的影响,各组均测定细胞中超氧化物歧化酶、丙二醛和乳酸脱氢酶的活性,用Hoechst 33258荧光染色法观察过氧化氢损伤对血管内皮细胞的凋亡情况,蛋白免疫印迹法分析各组凋亡基因bcl-2蛋白的表达.结果 (1)原花青素使过氧化氢损伤的内皮细胞的脂质过氧化物丙二醛生成减少,乳酸脱氢酶漏出液减少,超氧化物歧化酶活力增加;(2)过氧化氢损伤可以诱导内皮细胞凋亡,原花青素可显著减少过氧化氢诱导的内皮细胞的凋亡,且上调抗凋亡基因bcl-2的蛋白表达.结论 原花青素处理对过氧化氢所致的内皮细胞的损伤有保护作用,机制可能通过抗脂质过氧化,对氧自由基的清除,以及抗细胞凋亡有关.     

糖基化终末产物对人脐静脉内皮细胞凋亡及其受体表达的影响

目的 研究糖基化终末产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡及其受体(RAGE)表达的影响。方法 采用流式细胞仪技术，荧光显微镜，电镜观察AGEs对培养的HUVEC凋亡的影响，同时用RT-PCR方法检测RAGE的mRNA的表达。结果 AGEs加入细胞培养中，可明显诱导HUVEC凋亡，并呈剂量依赖效应关系。在发生凋亡的同时有RAGE mRNA表达的增强。结论 AGEs对HUVEC有诱导凋亡的作用，该作用可能通过RAGE介导。     

卡托普利对高压力培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 观察大气压、中压力、高压力培养对离体人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡的影响,及血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利(Captopril,Cap)对HUVECs凋亡的作用。方法 采用改良的Jaffe’s法,取4-6代HUVECs制成单细胞悬液。采用大气压(OmmHg)、中压力(120mmHg)、高压力(180mmHg)三种条件培养,分别用形态学、DNA凝胶电泳、流式细胞仪等观察各组培养16b、24h、48h HUVECs凋亡情况。结果 与大气压培养比较,中压力培养未见HUVECs凋亡,高压力培养凋亡百分率增加,48h达到最高(P<0.001)。两种浓度Cap均能抑制高压力培养对HUVECs的促凋亡作用。结论 高压力培养能诱导HUVECs凋亡,并呈时间依赖性。而Cap能减轻高压力培养对HUVECs的促凋亡作用。     

非诺贝特对溶血卵磷脂诱导的内皮细胞X连锁凋亡抑制蛋白基因表达的影响

目的:观察非诺贝特对溶血卵磷脂(LPC)诱导的内皮细胞X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,分为:①正常对照组、②LPC组、③非诺贝特低浓度(10μmol/L)组、④非诺贝特中浓度(50μmol/L)组及⑤非诺贝特高浓度(100μmol/L)组。采用实时定量PCR及流式细胞仪分别观测LPC对内皮细胞XIAP mRNA及蛋白表达的影响,及非诺贝特干预后的变化。结果:与正常对照组比较,LPC使XIAP mRNA及蛋白表达减弱。非诺贝特干预后内皮细胞XIAP mRNA及蛋白表达增强。结论:非诺贝特可通过促进XIAP基因表达干预LPC对内皮细胞凋亡的影响。     

应用RNA干扰技术研究游离脂肪酸对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术探讨游离脂肪酸(FFA)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响.方法 利用体外同源重组技术构建糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)特异的siRNA腺病毒表达载体,在人胚胎肾293A细胞中包装并扩增病毒,应用空斑实验法测定病毒滴度.选用GsK-3β特异的RNAi腺病毒感染HUVEC,采用Western blot方法检测其对GSK-3β和β-catenin 蛋白水平的影响.FFA贮存液按油酸盐:棕榈酸盐2:1配制,RNAi腺病毒和FFA共同干预HUVEC,采用流式细胞术、Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.实验分为0.75 mmol/L FFA组、GSK-3β特异性RNAi腺病毒(Ad-640)+FFA组、未重组RNAi腺病毒(Ad-DEST)+FFA组、正常细胞组.采用方差分析进行数据比较.结果 构建的RNAi腺病毒感染HUVEC可以显著抑制GSK-3β蛋白的表达,上调细胞内β-catenin蛋白水平.0.75 mmol/L FFA具有促进细胞凋亡率的作用,荧光染色可见细胞出现典型的凋亡形态学改变;Ad-640+0.75 mmol/L FFA组与0.75 mmol/L FFA组(F=26.42,P<0.01)及Ad-DEST+0.75 mmol/L FFA组(F=23.34,P<0.01)相比细胞凋亡率显著减少,凋亡形态学改变亦明显减少,而Ad-DEST+FFA组与FFA组细胞凋亡率无显著差异(F=5.56,P>0.05),凋亡形态学改变相似.结论 构建的CSK-3β特异性RNAi腺病毒对FFA作用下的HUVEC具有部分保护作用.     

人剪切修复基因着色性干皮病基因D对人脐静脉内皮细胞的促凋亡作用

目的探讨人剪切修复基因着色性干皮病基因D(XPD)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的促凋亡作用。方法用脂质体转染法瞬时转染HUVEC,转染重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2,并用未转染的与重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2具有相同遗传背景和代数的HUVEC作为空白对照。实验分为3组:正常对照组、pEGFP-N2组和pEGFP-N2/XPD组。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用RT-PCR和Western Blot检测XPD、Bcl-2、Bax和wt-p53表达量的变化,用MTT法观察细胞增殖活力。结果在荧光显微镜下,可在转染了重组质粒pEGFP-N2/XPD或空载质粒pEGFP-N2的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;流式细胞仪结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染引起细胞凋亡增加(P<0.05或P<0.01);RT-PCR和Western Blot检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高(P<0.05),同时使得Bcl-2表达降低,Bax和wt-p53表达增高(P<0.05或P<0.01);MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制细胞增殖活力(P<0.05)。结论 XPD能促进HUVEC凋亡,下调XPD的表达,有望成为治疗动脉粥样硬化的一个新靶点。     

蓝莓花色苷对人脐静脉内皮细胞分泌活性氧的影响

目的观察蓝莓花色苷对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌活性氧(ROS)的影响及其保护血管内皮细胞的作用机制。方法将HUVEC常规复苏传代,建立HUVEC损伤模型,采用MTT法检测细胞活性,随机分为空白对照组(Control)、AngⅡ诱导组(AngⅡ)、蓝莓花色苷组(BBA)、AngⅡ+蓝莓花色苷干预组(AngⅡ+BBA)。采用ROS测试盒测定胞内ROS水平。结果与空白对照组对比,经AngⅡ刺激后,HUVEC内的ROS水平明显增加(P<0.01)。与AngⅡ诱导组对比,AngⅡ+蓝莓花色苷干预组内ROS水平下降(P<0.05)。结论 AngⅡ可以降低HUVEC的活性,导致ROS分泌增加;蓝莓花色苷改善被AngⅡ损伤的HUVEC的活性与其降低ROS的分泌有关。     

褪黑素对过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤的拮抗作用及其机制

目的:研究不同浓度褪黑素（melatonin,MLT）对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活力的影响,以及对过氧化氢(H2O2)诱导血管内皮细胞损伤的拮抗作用及机制。方法: 分别用不同浓度（125、250、500 μmol/L）的MLT处理体外培养的HUVECs 2 h、4 h和6 h后,用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度的MLT对HUVECs存活率的影响。以300 μmol/L的H2O2建立HUVECs损伤模型,用125、250、500 μmol/L的MLT与H2O2（300 μmol/L）共同处理HUVECs 2 h、4 h和6 h后,分别用噻唑蓝（MTT）比色法测细胞的存活率、细胞黏附实验评价细胞黏附能力、酶活性测定法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量和细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活力。用Griess法测定细胞培养液中NO-2的浓度来反映HUVECs的一氧化氮(NO)释放量。结果: 以不同浓度的MLT处理内皮细胞 2 h、4 h和6 h后,内皮细胞的存活率无统计学差异。MLT能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率、黏附能力及细胞内SOD的活力（P<0.01）,增加培养液中NO含量（P<0.01）,降低内皮细胞LDH的释放（P<0.01）。以500 μmol/L的MLT效果最明显。结论: 不同浓度的MLT对HUVECs的存活率均无影响,提示MLT药物浓度的安全范围较大。MLT对H2O2诱导HUVECs损伤的拮抗作用可能与其抗氧化能力和促进内皮细胞合成NO有关。