泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响

目的 观察泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响并初步探讨相关机制.方法 实验采用完全随机设计.将26只SD大鼠分为4组:高氧组(n=8)、高氧+MG-132组(n=8)、空气对照组(n=5)、MG-132对照组(n=5).成功制备高氧肺损伤大鼠模型后,观察肺组织病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达并计算Bcl.2/Bax值.结果 高氧组SD大鼠肺组织可见明显急性炎症反应.高氧组、高氧+MG-132组的凋亡指数分别为66.76±7.64、34.78±4.40,明显高于空气组与MG-132对照组(14.48±1.75、12.88±1.95),但高氧+MG-132组的凋亡指数要低于高氧组,差异有显著性(P<0.05).高氧+MG-132组Bcl-2/Bax值(1.22±0.15)高于高氧组(0.87±0.11),差异有显著性(P<0.05).结论 高氧诱发肺组织细胞发生凋亡,蛋白酶体抑制剂MG-132可以通过调节Bcl-2与Bax的表达减轻高氧引起的细胞凋亡.     

mitoKATP通道开放剂对高氧诱导人A549细胞凋亡的保护作用

目的：探讨mitoKATP通道开放剂二氮嗪对高氧诱导人A549细胞凋亡的保护作用和机制。方法：体外培养人肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549）,随机分为对照组、高氧组（换液后通入900 mL/L氧气和50 mL/L 二氧化碳高纯混合气,10 min后密闭培养）和二氮嗪组（用终浓度为100 μmol/L的二氮嗪培养液预处理24 h再进行高氧诱导）。3组分别于处理后12、24、48 h收集细胞进行检测。倒置相差显微镜下观察A549细胞形态,流式细胞仪检测48 h的细胞凋亡,免疫组化法检测细胞内Omi/HtrA2的表达。结果：与对照组相比,高氧组细胞受损明显,形态改变,细胞凋亡率增加（P<0.05）,胞浆Omi/HtrA2表达增多（P<0.05）。与高氧组相比,二氮嗪组细胞损伤状况明显得到改善,细胞生长状况明显好转,形态明显变好;胞浆Omi/HtrA2表达减少（P<0.05）,细胞凋亡率减少（P<0.05）。结论：mitoKATP通道开放剂二氮嗪具有降低Omi/HtrA2表达和A549细胞凋亡,从而减轻高氧诱导的肺损伤的作用。     

硫氧还蛋白-2和细胞色素C在高氧暴露下A549细胞中的表达和意义

目的观察高体积分数氧（高氧）暴露后人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2（Trx-2）和细胞色素C（Cytc）的动态表达，探讨Trx-2和Cytc表达变化在高氧肺损伤中的作用。方法复苏液氮罐中冻存的人肺腺癌A549细胞系后，加入100g／L胎牛血清的MEM培养基，置于37℃50mL／L二氧化碳（CO2）饱和湿度培养箱中培养。然后体外传代培养A549细胞，待其生长至接近融合状态时，随机分为高氧组和空气组，每组18瓶A549细胞（50mL培养瓶）。高氧组持续暴露于常压高氧中，氧体积分数为900mL／L，CO2体积分数为50mL／L；空气组仍置于50mL／L CO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露12、24、48h后提取A549细胞总RNA，半定量反转录聚合酶链反应检测Trx-2和Cytc mRNA水平；蛋白印迹法检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果1.与空气组比较，高氧组24h Trx-2 mRNA的表达显著增强（P〈0．05）；48h Trx-2 mRNA的表达减弱，二组比较无显著性差异（P〉0．05）。2．与空气组比较，高氧组12h Cytc mRNA的表达显著增强（P〈0．05）；24h Cytc mRNA的表达减弱，二组比较无显著性差异（P〉0．05）；48h显著减弱（P〈0．05）。3．与空气组比较，高氧组12h Trx-2蛋白的表达显著增强（P〈0．05）；24h仍增强，二组比较无显著差异（P〉0．05）；48h显著减弱（P〈0．05）。结论高氧暴露可诱导A549细胞中Trx-2和Cytc异常表达，提示Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用，Cytc在高氧肺损伤细胞凋亡发生发展中起重要作用。     

SiRNA抑制高氧暴露下A549细胞硫氧还蛋白-2表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系

目的研究小分子干扰RNA(SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(Trx-2)表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系,探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法体外传代培养A549细胞系,待其生长至接近亚汇合状态时,将体外化学合成Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipofectamine2000转染A549细胞。将细胞随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组、干扰后高氧组4组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧(92%O2,5%CO2)中;空气组仍置于5%CO2培养箱中。4组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA。采用半定量RT-PCR测定Trx-2、三磷酸腺苷合成酶6,8(ATPase 6、8)及细胞色素C(CytC)mRNA的表达;Western-blot检测Trx-2蛋白表达;流式细胞术检测高氧和沉默Trx-2对A549细胞凋亡的影响。结果序列特异性SiRNA可抑制Trx-2表达,SiRNA-1、SiRNA-2、SiRNA-3 3组Trx-2蛋白表达均受到抑制,SiRNA-1组抑制效率最高(79.51%)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12 h CytC和24 h Trx-2 mRNA的表达增高,48 h CytC mRNA的表达降低(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,但在12、24 h CytC mRNA表达水平升高(P<0.05)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12、48 hATPase 6 mRNA的表达增高,24、48 h ATPase 8 mRNA的表达增高(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h ATPase 6,8 mRNA的表达减弱(P<0.05)。干扰后高氧组24、48 h A549细胞凋亡百分数明显高于干扰后空气组(P<0.05)。结论高氧暴露和沉默Trx-2导致A549细胞ATPase 6,8表达下调和CytC表达升高,表明能量代谢障碍和细胞凋亡参与高氧肺损伤发病过程,Trx-2对高氧肺损伤线粒体起重要的保护作用。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌细胞凋亡及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的变化

目的 了解缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的变化.方法 通过结扎7 日龄新生大鼠一侧颈总动脉,吸入低浓度氧复制缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的动物模型,并没假手术对照(NC)组,两组分别于HIBD后1 h、4 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d取心脏组织,应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,SP法检测心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 NC组偶见心肌阳性凋亡细胞1～4个/mm~2,各时间点阳性细胞数差异无统计学意义(F=0.5,P>0.05).HIBD组12 h心肌阳性凋亡细胞开始增多,为(14.40±3.21)个/mm~2;72h达高峰,为(26.80 ±2.28)个/mm~2,12～72 h各时间点阳性凋亡细胞明显高于NC组(P<0.05);7 d阳性细胞数减少,但仍高于NC组.NC组大鼠心肌组织Bax呈阳性表达,Bcl-2呈弱阳性表达.HIBD组Bax于24 h开始增高.72 h表达最明显,7 d时表达有所降低,24 h～7 d表达高于NC组(P<0.05);Bel-2于24 h表达开始增高,以后缓慢增高,72 h达高峰,24 h～7 d较NC组表达增高,差异有统计学意义(P<0.05).HIBD组Bcl-2/Bax比值逐渐降低.Bax、Bcl-2的表达与凋亡细胞数之间均星直线正相关(r=0.921、0.980,P均<0.01).Bcl-2/Bax的比值与凋亡细胞数无相关性(r=0.702,P>0.05).结论 HIBD新生大鼠心肌细胞存在凋亡,心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白表达增加,且与心肌细胞凋亡有关.     

胰岛素样生长因子-1在病毒性心肌炎小鼠中的变化及对心肌的保护作用

目的 探讨病毒性心肌炎（VMC）小鼠血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）水平的变化及外源性IGF-1对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 Balb／c雄性小鼠随机分为3组：正常对照组、柯萨奇B3病毒（CVB3）感染组（感染组）和病毒感染加IGF-1治疗组。分别在实验d7、d14处死动物，留取血清、心肌标本。放射免疫法检测血清IGF-1水平，免疫组织化学法检测心肌组织Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 感染组血清IGF-1水平较对照组明显降低，Bcl-2表达减少、Bax表达增加（P〈0．01）；治疗组较感染组Bcl-2表达增加、Bax表达减少（P〈0．01）。结论 IGF-1对VM小鼠的心肌细胞有保护作用。     

Bax/Bcl-2在高体积分数氧致新生大鼠慢性肺疾病肺组织及成纤维细胞中的动态变化

目的 制备高体积分数氧(高氧)诱导新生大鼠慢性肺疾病(CLD)模型,探讨持续吸入高氧对新生大鼠肺组织及成纤维细胞Bax及Bcl-2蛋白表达的影响.方法 足月新生大鼠出生12 h内分别持续吸入氧体积分数为900 mL·L-1的高氧(高氧组)和空气(空气组),于3 d、7 d和14 d随机处死动物后,肺组织取材同时进行肺成纤维细胞的原代培养,应用免疫组织化学半定量法检测其Bax及Bcl-2蛋白水平变化.结果 在肺组织中,高氧组Bcl-2蛋白的表达水平在7 d、14 d有所升高(P<0.001),3 d时表达无变化(P>0.05);而高氧组Bax蛋白的表达水平及Bax/Bcl-2比值在3 d、7 d和14 d均明显高于空气组,且具有时间敏感性(Pa<0.01).在肺成纤维细胞,高氧组3 d、7 d Bcl-2蛋白表达水平无变化(P>0.05),14 d时有所增高(P<0.001),但不如Bax蛋白增加明显;高氧组3 d、7 d和14 d肺成纤维细胞Bax蛋白的表达水平及Bax/Bcl-2比值均明显高于空气组(Pa<0.01).结论 高氧可促进新生大鼠肺组织及成纤维细胞Bax蛋白的表达,从而通过上调Bax/Bcl-2比值促进凋亡发生,参与CLD的发生发展过程.     

宫内炎性预敏和生后高氧暴露对早产大鼠肺Bax和Bcl-2基因表达和肺细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察宫内炎性预敏及生后60%氧暴露对肺增殖性细胞核抗原(PCNA)及肺细胞凋亡影响的动态变化规律及Bcl-2家族中Bax、Bcl-2基因的表达对肺细胞凋亡的调控作用;探讨其与新型支气管肺发育不良(BPD)发病机制之间的关系.方法早产大鼠随机分为生理盐水+高氧组、脂多糖(LPS)+高氧组、LPS组和正常对照组,于生后第1、7和14天利用简单随机抽样方法取8只,采用免疫组织化学染色方法检测各组肺组织PCNA表达水平及脱氧核糖核酸转移酶介导的细胞凋亡标记技术(TUNEL)和逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测各组肺组织凋亡和Bax、Bcl-2基因表达水平.结果 ①PCNA的表达:LPS组和生理盐水+高氧组在生后第1天表达明显低于对照组(LPS组:0.18±0.01;生理盐水+高氧组:0.53±0.11;对照组:1.16±0.31;P=0.005,0.021);LPS+高氧组在生后第14天明显低于其他3组(对照组:0.89±0.22;LPS组:1.03±0.07;生理盐水+高氧组:0.96±0.16;LPS+高氧组:0.47±0.08;P=0.048,0.019,0.030).②凋亡指数(AI):LPS组在生后第1天明显高于对照组(17.73±2.21 vs 7.16±0.31,P=0.021);生理盐水+高氧组在生后第7天最高;LPS+高氧组在生后第14天表达明显高于其他3组(对照组:20.53±4.51;LPS组:13.99±1.69;生理盐水+高氧组:35.08±4.96;LPS+高氧组:49.92±7.93;P=0.005,0.002,0.048).③BaxmRNA的表达:LPS组在生后1 d明显高于其他3组(LPS组:0.73±0.06;对照组:0.16±0.03;生理盐水+高氧组:0.23±0.03;LPS+高氧组:0.24±0.13;P=0.001,0.002,0.002);生理盐水+高氧组在生后第7天表达明显高于对照组(0.58±0.06 vs 0.19±0.05,P=0.002);LPS+高氧组在出生后第14天明显高于对照组(0.58±0.01 vs 0.29±0.09,P=0.009).④Bcl-2 mRNA的表达:LPS组在生后在第1天明显低于其他3组(LPS组:0.18±0.02;对照组:0.41±0.09;生理盐水+高氧组:0.48±0.03;LPS+高氧组:0.59±0.05;P=0.019,0.007,0.012);生理盐水+高氧组及LPS+高氧组在生后第7天明显低于对照组(0.28±0.05/0.21±0.02 vs 0.49±0.09,P=0.02,0.008).结论 宫内炎性预敏及生后高氧暴露可抑制肺细胞增殖,可能通过提高Bax/Bcl-2的表达途径使肺组织细胞过度凋亡,进而导致BPD的发生.     

内毒素致胎鼠脑白质损伤后Bcl-2和Bax蛋白表达的研究

目的 探讨内毒素致胎鼠脑白质损伤后凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达及其意义.方法 孕鼠随机分为两组:感染组和对照组.感染组:建立宫内感染的动物模型,孕鼠怀孕15 d腹腔注射内毒素;对照组:孕鼠怀孕15 d腹腔注射生理盐水.分别于给药后2、4、12、24、72 h剖腹取胎鼠,取脑组织行组织病理学检查,观察胎盘及胎鼠脑组织病理特点,用免疫组织化学方法检测胎鼠脑组织凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 感染组胎盘组织见中性粒细胞浸润,胎鼠脑组织病理改变包括脑白质染色减淡,结构疏松等.感染组胎鼠脑组织凋亡蛋白Bcl-2的表达自2 h开始逐渐下降,而Bax的表达自2 h逐渐升高,均于12h达到峰值.2h感染组Bcl-2、Bax的阳性细胞百分数与对照组相比,差异无显著性(P>0.05);而4 h、12 h、24 h和72 h感染组与对照组相比,差异有非常显著性(P<0.01).感染组Bax与Bcl-2的比值均明显高于对照组,在各观察时间点两组相比,差异有非常显著性(P<0.01).结论 内毒素诱导是制备胎鼠脑白质损伤的一种有效形式.在胎鼠脑白质损伤中Bcl-2可能抑制细胞凋亡,Bax可能诱发细胞凋亡,两者的比率变化可能对脑白质损伤后细胞凋亡的调节起重要作用.     

利多卡因对高氧暴露早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用

目的：观察利多卡因（Lido）对高氧暴露的早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)增殖和凋亡的影响,为防治早产儿高氧肺损伤提供依据。方法：原代培养的早产大鼠AECⅡ随机分为4组：空气组、高氧组、空气+Lido组、高氧+ Lido组。高氧、高氧+Lido组按5 L/min通入95%O2/5%CO2高纯混合气,10 min后密封。空气+Lido、高氧+Lido组加入20 μg/mL Lido。各组均置于培养箱(37℃,5%CO2)中培养24 h,收集各组细胞,采用流式细胞仪检测AECⅡ凋亡率和细胞周期;运用Western blot 检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达。结果：与空气组比较,高氧组AECⅡ凋亡率增高,G2/M、S期细胞比例明显降低（P<0.01）;PCNA蛋白表达明显下调（P<0.01）。而Lido干预后可使AECⅡ凋亡率降低,G2/M、S期细胞比例增高,PCNA蛋白表达上调。结论：高氧可使早产大鼠AECⅡ凋亡增加,增殖抑制; Lido对高氧所致的AECⅡ损伤有直接的抑制作用。     

卡维地洛对免疫性心肌炎小鼠心肌凋亡调控蛋白影响

目的 观察卡维地洛对免疫性心肌炎小鼠心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Fas的影响,探讨其在免疫性心肌炎中的作用.方法 60只4～5周龄近交系雄性BALB/C小鼠,随机将小鼠分为3组:免疫性心肌炎模型组(模型组),卡维地洛干预组(干预组),空白对照组(对照组),每组20只.眼球取血后处死,留取心脏及血液标本.光镜观察各组小鼠心肌组织病理学改变,电镜观察心肌细胞超微结构,化学发光免疫法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平;免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达的含量;原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况.结果 模型组小鼠心肌细胞光镜下见大量炎症细胞浸润,电镜下可见细胞核固缩、染色质边集,对照组小鼠心肌细胞光镜下未见炎症细胞浸润,电镜下染色质边集不明显.模型组Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达较对照组高(23.48±2.24 vs 6.64±1.60,26.15±2.02 vs 5.09±0.85,21.22±3.62 vs 5.86±1.37,P＜0.01);干预组与模型组比较,小鼠心肌组织炎症积分轻(2.60±0.3l vs 2.02±0.26,P＜0.05),电镜下细胞核固缩轻,心肌细胞Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达低(17.13±1.94 vs 23.48±2.24,17.66±2.62 vs26.15±2.02,16.79±2.83 vs 21.22±3.62,P＜0.05),凋亡指数低[(16.61±4.67)%vs(24.51±4.70)%,P＜0.05],cTn-I水平低[(1.878±0.48)ng/ml vs(1.102±0.23)ng/ml,P＜0.05].结论 卡维地洛可减轻免疫性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡,对免疫性心肌炎起一定的保护作用.

Abstract：

Objective To observe the effects of carvedilol on the expression of Bcl-2, Bax and Fas in autoimmune myocarditis (AM).Methods A total of 60 inbred male BALB/C mice 4-5 weeks of age were divided at random into 3 groups as follows: AM group ( n = 20), carvedilol group ( n = 20 ) and control group (n = 20).The mice were sacrificed after gathering blood specimens by taking out the eyeballs and hearts tissue.The histological and ultrastructural changes were observed under light microscope and electron microscope.The concentrations of cardiac troponin Ⅰ (cTn Ⅰ ) were detected by chemiluminescence immunoassay (CLIA).Immunohistochemistry (IHC) was performed to analyze the contents of Bcl-2, Bax and Fas, TUNEL to detect the apoptotic index in myocardial cells.Results There were large number of lymphocyte and monocyte infiltrates under light microscope and karyopyknosis and chromatin gathered along the nuclear membrane under electron microscope in AM group.There were no inflammations and chromatin gathering in group C.Compared with control group, the Bcl-2, Bax and Fas protein expression significantly elevated in AM group ( 23.48 ± 2.24 vs.6.64 ± 1.60,26.15 ± 2.02 vs.5.09 ± 0.85,21.22 ± 3.62 vs.5.86 ± 1.37, P ＜ 0.0l ) . The histopathologic scores ( 2.60 ± 0.31 vs.2.02 ± 0.26, P ＜ 0.05 ) and karyopyknosis of carvedilol group decreased as compared with AM group.The Bcl-2, Bax and Fas protein expression (17.13 ±1.94 vs.23.48 ±2.24,17.66 ±2.62 vs.26.15 ±2.02,16.79 ±2.83 vs.21.22 ±3.62, P ＜ 0.05 ), AI [( 16.61 ± 4.67 ) % vs.( 24.51 ± 4.70) %, P ＜ 0.05]and contents of cTnI [( 1.878± 0.48 ) ng/ml vs. ( 1.102 ± 0.23 ) ng/ml, P ＜ 0.05]also decreased in carvedilol group compared with AM group.Conclusion Carvedilol could protect against AM by alleviating cardiomyocyte apoptosis.     

重组人类促红细胞生成素对早产大鼠高氧肺损伤的影响

目的:探讨重组人类促红细胞生成素(rhEpo)对早产大鼠高氧肺损伤的影响。方法:生后 3 d的早产鼠随机分为Ⅰ.空气对照组,Ⅱ.高氧对照组,Ⅲ.高氧+rhEpo组,Ⅳ.空气+rhEpo组。高氧组持续暴露于 ≥90%氧(O2)中,rhEpo 组自生后 3 d开始皮下注射 rhEpo 800 U/kg,隔日1次。分别于暴露3 d,7 d检测各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中还原型谷光甘肽(GSH)、总蛋白、丙二醛(MDA)、非血红素铁含量,并比较肺湿重/干重(W/D)及肺组织病理改变。结果:①与空气组相比,高氧组高氧3 d时 MDA 含量显著增加［(1.39±0.60) nmol/ml vs (0.35±0.22) nmol/ml］(P<0.01);肺组织呈急性肺损伤病理改变。与空气组比较,高氧组7 d时非血红素铁、MDA、总蛋白含量均显著升高［(109.31±7.86) μg/dl vs (94.95±10.83) μg/dl,(1.53±0.39) nmol/ml vs(0.30±0.13) nmol/ml,(0.47±0.02) g/L vs (0.25±0.04) g/L］(P<0.01);肺W/D值升高(5.54±0.41 vs 5.00±0.15)(P<0.05),肺病理改变加重出现肺纤维化趋势及结构紊乱。②高氧+rhEpo组 3 d时BALF中MDA为(0.69±0.19) nmol/ml;7 d时非血红素铁、MDA、总蛋白含量、肺W/D值分别为(99.60±8.21) μg/dl,(0.80±0.24) nmol/ml,(0.36±0.02) g/L,5.08±0.21,较高氧组显著下降(P<0.05 或 0.01);3 d,7 d时GSH含量分别为(130.85±7.62) mg/L和(136.69±5.90) mg/L,较高氧组显著升高(P<0.01)。肺病理改变减轻。结论:高氧暴露3 d即可造成早产鼠急性肺损伤,7 d时加重。rhEpo 对早产鼠高氧肺损伤有一定的保护作用。     

高氧致早产鼠AECⅡ凋亡及其信号机制

目的：吸入高浓度氧气是导致新生早产儿肺发育障碍,并最终发展为慢性肺疾病(CLD)的主要原因,但其详细机制尚不清楚。本文旨在确定肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)凋亡在高氧诱导的早产鼠CLD形成中的作用及其主要信号机制。方法：93只新生早产大鼠随机分为两组:对照组(n= 45)吸入空气,模型组(n= 48)吸入≥95%氧气。分别采用原位末端标记技术(TUNEL)、电镜及逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术检测特定时间点各组大鼠肺组织细胞凋亡及其相关因子的表达。结果：模型组凋亡指数(AI)自7d起明显高于对照组(P<0. 05),发生凋亡的细胞是AECⅡ;模型组BaxmRNA3d起高于对照组(P<0. 05),Bcl 2自7d起低于对照组(P<0. 05);两组FasmRNA表达无差异(P>0. 05)。结论：早产大鼠CLD过程中存在AECⅡ凋亡,这可能是导致高氧诱导的CLD早产大鼠肺泡发育障碍的主要因素之一;凋亡信号的启动可能有Bax与Bcl 2比值变化的参与,而与Fas的转录表达无关。     

干扰素-λ2对急性病毒性心肌炎小鼠凋亡相关蛋白的研究

目的：干扰素-λ（IFN-λ)广泛存在于人体各组织中,目前研究发现其具有抗病毒、抗肿瘤等作用。但其是否能用于治疗病毒性心肌炎尚缺乏相关报道。探讨IFN-λ2在病毒性心肌炎（VMC）早期的作用,为IFN-λ2 是否能应用于临床治疗或预防VMC提供实验室依据。方法：采用腹腔注射柯萨奇B3（CVB3）病毒的方法制造病毒性心肌炎小鼠模型。实验分3组：空白对照组、病毒组、IFN-λ2 治疗组。空白对照组给予腹腔注射等量的PBS培养液,记为第0天;IFN-λ2治疗组从第1天开始,连续5 d每天经背部皮肤不同点给予小鼠IFN-λ2 400 ng （0.1 mL）,空白对照组和病毒组则每天以同样方法给予等量生理盐水。死亡小鼠从组中剔除。9 d后处死所有存活小鼠。检测各组小鼠心脏的病理改变。采用免疫组织化学技术检测各组小鼠心脏组织中凋亡相关蛋白Bcl-2 及Bax的表达。结果：①病毒组心肌病理评分要高于空白对照组及IFN-λ2治疗组。 ②免疫组化结果显示正常心肌组织有少量Bcl-2及Bax的表达,病毒组较空白对照组Bcl-2表达减少、Bax表达明显增加(P<0.01);IFN-λ2治疗组较病毒组Bcl-2表达增加、Bax表达减少(P<0.01) 。结论：INF-λ2 能减轻柯萨奇病毒所致心肌炎小鼠的心肌病理改变,能抑制小鼠心肌细胞凋亡,对VMC小鼠的心肌细胞具有保护作用。［中国当代儿科杂志,2009,11（4）：296-300］     

三氧化二砷对人神经母细胞瘤细胞凋亡作用的影响

目的：三氧化二砷(As2O3 )通过诱导细胞凋亡和诱导细胞分化效应治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)患者已取得很好疗效。与APL细胞相似,神经母细胞瘤(NB)细胞也是分化成熟受阻,该文对As2O3 在体外对人神经母细胞瘤细胞凋亡作用的影响及可能的机制进行探讨。方法：比色法观察As2O3 对神经母细胞瘤SK N SH细胞增殖的影响;Giemsa染色观察细胞形态学改变;Annexinⅴ/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡;免疫细胞化学染色方法检测bcl 2蛋白表达变化。结果：As2O3 明显抑制SK N SH细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应,并出现细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测4. 0μmol/LAs2O3 作用SK N SH细胞72h后,早期凋亡细胞比例( 9. 9±0. 8 )%,与对照组( 3. 7±0. 2 )%相比明显增多,差异有显著性(P< 0. 05 );分别以1. 0, 2. 0,4. 0μmol/L的As2O3 处理SK N SH细胞72h后,bcl 2表达随As2O3 浓度增加呈降低趋势,bcl 2表达阳性率分别为(26. 3±8. 0)%, (15. 0±4. 5)%和(4. 8±3. 2)%,与对照组(73. 6±6. 1)%相比,差异有显著性(P<0. 01)。结论：As2O3 可在体外抑制神经母细胞瘤细胞增殖,诱导凋亡,bcl 2参与了其调节作用。     

miR-124-3p与miR-506-3p在蛋白C降低中的作用及机制研究

目的:探讨miR-124-3p和miR-506-3p在蛋白C(protein C,PROC)降低中的作用及机制。方法:将PROC 3'-UTR野生型(PROCwt)和PROC 3'-UTR突变型(PROCmut)克隆构建到含萤火虫荧光素酶报告质粒中(Luc-PROCwt和Luc-PROCmut),利用双荧光素酶报告体系...     

2-甲氧基雌二醇诱导K562细胞凋亡的机制研究

目的探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)对K562细胞的凋亡诱导效应及其作用机制。方法使用不同浓度2-ME(0,5,10,20,40μmol/L)作用于K562细胞,48 h后用流式细胞术检测2-ME作用后K562细胞的凋亡率的变化;用western blot方法检测2-ME作用48 h后K562细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。结果 (1)2-ME在5~40μmol/L浓度范围内作用48 h对K562细胞有凋亡诱导作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),这种作用呈剂量依赖关系;(2)2-ME作用48 h后,K562细胞Bcl-2蛋白的表达较对照组减少,差异有显著性(P<0.05),而Bax和Caspase-3表达较对照组增高,差异有显著性(P<0.05)。结论 2-ME可能通过线粒体途径诱导K562白血病细胞凋亡。     

高体积分数氧致慢性肺疾病早产鼠肺上皮细胞凋亡及其调控机制

目的 探讨高体积分数氧致慢性肺疾病(CLD)早产鼠肺泡上皮细胞(AEC)凋亡的动态变化规律及Caspase-3 mRNA、Bax和Bcl-2基因的调控作用.方法 将60只早产SD鼠生后1 d内随机分为高体积分数氧暴露组(高氧组)和空气组(对照组)各30只,制备高体积分数氧致CLD早产鼠模型,应用脱氧核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术及链霉亲和素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组织化学方法,检测生后1、3、7、14及21 d AEC的凋亡指数(AI)和肺组织Caspase-3 mRNA、Bax及Bcl-2基因蛋白的表达.相关分析采用Spearman分析.结果 与对照组比较,高氧组3 d AEC的AI、肺组织Caspase-3 mRNA水平及Bax基因蛋白表达开始升高,7～21 d明显增加,Caspase-3 mRNA水平在此期间持续于高水平;Bcl-2基因表达7 d开始降低,14～21 d明显降低.高氧组AEC的AI与肺组织Caspase-3 mRNA及Bax表达均呈正相关,与Bcl-2表达呈负相关.结论 高体积分数氧可致CLD早产鼠肺组织Caspase-3 mRNA基因表达增强,使Bax和Bcl-2介导Bax/Bcl-2基因表达比例失衡,是CLD早产鼠肺上皮细胞凋亡的重要机制之一.