人参皂甙抑制肿瘤坏死因子α介导的内皮细胞炎症反应

目的 探讨人参皂甙Rb1能否抑制人脐静脉内皮细胞中肿瘤坏死因子α引起的细胞炎症反应的发生.方法 将细胞分成四组:对照组(不经任何药物处理)、肿瘤坏死因子α组、人参皂甙Rb1组和肿瘤坏死因子α加人参皂甙Rb1组,分别培养16 h.提取各组细胞mRNA,用实时荧光定量PCR和流式细胞仪测定血管细胞黏附分子1的表达水平;用标记上Calcein-AM的人单核细胞检测人脐静脉内皮细胞单分子层的黏附性;用超氧化物阴离子荧光探针DHE在流式细胞仪上测定超氧阴离子产物,并用荧光探针JC-1检测线粒体膜电位变化.结果 人参皂甙Rb1预处理能有效阻止肿瘤坏死因子α诱导的血管细胞黏附分子1 mRNA增高,并减弱由其导致的单核细胞对人脐静脉内皮细胞的黏附性增加.人参皂甙Rb1还能减少肿瘤坏死因子α诱导的超氧阴离子产物增加,并抑制由其引起的线粒体膜电位衰减.结论 人参皂甙Rb1对炎症及心血管疾病有潜在的治疗作用.     

肿瘤坏死因子α通过RhoA-ERK信号通路调控人脐静脉内皮细胞单层通透性的实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)单层通透性改变的效应分子,以寻找内皮细胞损伤修复的有效治疗靶点.方法 应用TNF-α刺激体外培养的HUVEC,观察HUVEC骨架蛋白F-actin和细胞单层通透性的改变.应用荧光免疫组织化学和Western blot方法检测TNF-α刺激前后细胞中RhoA和MAPK信号通路的改变.并通过添加特异性分子抑制剂Y27632和PD98059阻断RhoA和ERK表达,观察细胞F-actin及细胞单层通透性的改变.进一步应用持续活化型RhoA和主导抑制型RhoA逆转录病毒分别感染改变人HUVEC,改变细胞中RhoA的活化状态,观察TNF-α刺激前后细胞骨架蛋白及单层细胞通透性的变化.并确定RhoA与ERK的相互作用.结果 TNF-α刺激引起HUVEC中F-actin快速重构并形成大量应力纤维,细胞单层通透性明显增强,呈现时间和剂量依赖性趋势.其中TNF-α(100 ng/ml)刺激2 h后细胞单层通透性最强,HRP-BSA渗漏最大浓度为40 ng/ml.同时,细胞中活化RhoA的表达明显增加.TNF-α刺激前后细胞中MAPK信号转导蛋白JNK、P38和ERK1/2总蛋白均无明显改变,但p-JNK、p-p38和p-ERK表达均显著增加.其中,应用Y27632抑制RhoA的活化或PD98059阻断p-ERK表达后,TNF-α刺激的HUVEC中F-actin重构现象消失,同时细胞单层通透性增加也受到明显抑制,HRP-BSA渗漏浓度从40 ng/ml下降至12.5 ng/ml(P<0.05).进一步应用持续活化型RhoA感染人HUVEC细胞,发现RhoA活化的HUVEC单层通透性明显高于GFP感染组,HRP-BSA在TNF-α(100 ng/ml)刺激2 h后渗漏浓度从达到50 ng/ml(P<0.05),同时p-ERK表达也明显增加.而应用TNF-α刺激后,抑制型RhoA感染的HUVEC的骨架蛋白与单层细胞通透性均无明显变化.同时,p-ERK活化也受到明显抑制.结论 RhoA-pERK通路的活化介导了TNF-α诱导的HUVEC通透性增加,特异性抑制RhoA-ERK通路可以阻断TNF-α引起的内皮细胞通透性增加.

Abstract：

Objective Tumor necrosis factor-α (TNF-α) is known to induce changes in endothelial cell morphology and permeability. The aim of this study is to determine the underlying signaling mechanisms involved in these responses. Methods Cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were exposed to TNF-α, and HUVEC cytoskeletal changes were evaluated by observing fluorescence of F-actin following ligation with labeled antibodies. Endothelial permeability was detected by measuring the flux of horseradish peroxidase (HRP)-albumin across the EC monolayers. To explore the signaling pathways behind TNF-α-induced changes in HUVEC morphology and permeability, HUVECs were treated with either the Rho GTPase inhibitor Y27632 or the mitogen-activated protein kinases (MAPK) inhibitors PD98059 and SB203580 before TNF-α administration. To further elucidate possible involvement of the RhoA and ERK pathways in TNF-α-induced HUVEC changes, retrovirus-carried recombinant dominant-negative forms and constitutive-activative forms of RhoA, namely T19NRhoA and Q63LRhoA, were pre-infected into HUVECs prior to TNF-α exposure.Results TNF-α induced F-actin cytoskeleton rearrangement and increased HUVEC permeability in a dose and time-dependent manner. The maximal increase in the HRP-BSA flux (40 ng/ml) was seen in cells exposed to TNF-α at 100 ng/ml after 2 h. Preconditioning of HUVEC monolayer with Y27632 or PD98059 significantly reduced TNF-α induced permeability increase (HRP concentration from 40 ng/ml decreased to 12.5 ng/ml, P<0.05) and F-actin cytoskeleton rearrangement, HUVEC pre-infection with activated forms of Q63LRhoA increased HUVEC permeability and upregulated pERK compared to GFP infection, while HUVEC pre-infection with inhibited forms of T19NRhoA attenuated the effects of TNF-α on HUVEC permeability.Conclusion These results indicate that TNF-α-induced EC barrier dysfunction and morphological changes of the F-actin via activating RhoA-ERK/MAPK signal pathway.     

JNK通路介导Ghrelin对肿瘤坏死因子-α诱导的HepG_2细胞间黏附分子-1 mRNA表达的抑制

目的 研究Ghrelin对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HepG2细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达水平的影响及c-Jun氨基末端激酶(JNK)在其中的作用.方法 HepG2细胞培养,加入不同浓度TNF-α,采用RT-PCR检测ICAM-1 mRNA的水平.给予Ghrelin预处理1 h后,再加入TNF-α检测ICAM-1变化.免疫印迹法检测胞浆p-JNK的表达.结果 TNF-α浓度依赖地增高HepG2细胞ICAM-1 mRNA的表达;Ghrelin 组的ICAM-1 mRNA的表达减低; TNF-α组p-JNK增加,Ghrelin组较TNF-α组减少.结论 TNF-α可能通过p-JNK通路介导HepG2细胞 ICAM-1 mRNA的表达;Ghrelin可能通过抑制p-JNK通路抑制 ICAM-1的表达.     

脑梗死患者血清肿瘤坏死因子和细胞黏附分子的含量变化

脑缺血早期细胞浸润引起的炎症反应及其损伤作用日益受到关注 ,其中肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ α)和细胞黏附分子与炎症反应密切相关。我们对急性脑梗死患者外周血ＴＮＦ α和细胞黏附分子水平进行了动态观察。1　资料与方法34例均系住我院的脑梗死患者 ,其中男性 16例、女性18例 ,年龄 6 0～ 76岁。按Ｐｕｌｌｉｃｉｎｏ公式计算梗死灶体积 ,将其分为小梗死灶 14例 ,大梗死灶 2 0例。同时按爱丁堡与斯堪的那维亚研究组标准 ,对患者进行神经功能缺损积分统计 ,轻型 16例 ,中、重型 18例。对照组为相匹配的健康体检者 30例 ,其中男 14例 ,女 16例…     

COPD与肿瘤坏死因子及细胞间黏附分子的关系

慢性阻塞性肺疾病 (COPD)是以气道、肺实质、肺血管的慢性炎症为主要特征的疾病。近年来国内外研究发现 ,细胞因子作为炎症介质在气道炎症形成中起着重要作用。本研究通过观察 COPD患者急性加重期和稳定期血浆肿瘤坏死因子(TNF)和可溶性细胞间黏附分子 (SICAM- 1)的水平变化 ,探讨其在 COPD的气道炎症反应中的病理学意义 ,以提高对气道炎症特点的认识。对象和方法1.选择对象　 COPD组 :5 0例 COPD患者因急性感染致咳、痰、喘症状加重而住院。根据病史、体检及胸片、心电图、肝功能检查符合中华医学会呼吸病学会 2 0 0 2年颁布的…     

脑梗死患者血清外周血肿瘤坏死因子和细胞黏附分子含量的变化

我们对急性脑梗死患者外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞黏附分子(sICAM-1)水平进行了动态观察,探讨其在急性脑梗死的病理生理过程中可能的作用机制.     

核因子κB通路参与缺氧诱导心肌细胞分泌肿瘤坏死因子α

目的:探讨缺氧刺激能否诱导体外培养心肌细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α),核因子κB(NF-κB)通路是否参与其中,并发挥调节作用。方法:1%O2物理缺氧刺激原代SD大鼠乳鼠心肌细胞,在不同时间点Real-time PCR检测TNF-αmRNA水平;ELISA检测培养上清中TNF-α蛋白水平;Western blot检测胞质NF-κB相关通路蛋白IKKα,IKKβ,IKKBα蛋白及磷酸化蛋白水平以及胞核NF-κB p65蛋白表达;电泳迁移率实验检测NF-κB DNA结合能力。缺氧同时给予NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)刺激心肌细胞,检测细胞核p65蛋白表达,TNF-αmRNA及蛋白水平。结果:缺氧诱导原代心肌细胞表达TNF-α,TNF-αmRNA水平从缺氧1h开始升高,12h及24h达峰值;其蛋白分泌从缺氧6h开始升高,12h和24h达峰值。缺氧激活NF-κB通路:缺氧5min胞质pIKKα/IKKβ表达开始上调,30min达峰值,持续6h;IKKBα表达缺氧5min开始降低,而pIKKBα缺氧30min开始增加;胞核p65蛋白水平缺氧5min上调,1h达峰值,持续6h;NF-κB DNA结合能力缺氧5min后开始增强。PDTC抑制NF-κB活性,有效抑制TNF-αmRNA及其蛋白表达。结论:缺氧通过激活NF-κB通路,诱导心肌细胞自分泌TNF-α,NF-κB在缺氧诱导心肌细胞自分泌TNF-α过程中起正向调节作用。     

肿瘤坏死因子-α、细胞间黏附分子-1与扑热息痛肝损害

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在扑热息痛肝损害中的作用.方法:应用扑热息痛(AAP)建立Sprague Dawley(SD)大鼠肝损害模型;分别于给药后3、6、12、24 h处死大鼠,AAP组和对照组分别测定ALT水平,HE染色光镜下观察肝脏病理的改变,放射免疫分析法测定血清TNF-α水平、RT-PCR方法检测肝组织ICAM-1mRNA的表达.结果:AAP组给药后24 h血清TNF-α(μg/L)水平显著高于对照组(5.69±0.46vs2.64±0.27,P＜0.01),且与血清ALT水平呈显著的正相关(r=0.773,P＜0.01),肝组织ICAM-1 mRNA表达在各时间点均显著高于对照组(3、6、12、24 h的值分别为:1.58±0.21vs0.62±0.05,1.24±0.09 vs0.63±0.04,0.88±0.08vs 0.32±0.06,0.55±0.14 vs 0.28±0.03,P＜0.01),于3 h达高峰,24 h时仍高于正常水平,同时血清ALT(nkat/L)进行性升高(3、6、12、24 h的值分别为:1166.90±151.03vs586.78±89.35.2153.84±254.55vs573.45±75.18,4220.84±928.52vs750.15±81.68,13202.64±1392.78 vs 780.16±161.37,P＜0.01)和肝脏病理损伤进行性加剧,于24h达高峰.结论:TNF-α、ICAM-1在扑热息痛肝损害的发生、发展过程中发挥着关键作用.     

肿瘤坏死因子α诱导核转录因子κB信号通路在特发性肺纤维化中的作用机制

特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）是一种由多种原因导致的、以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱、最终导致肺间质纤维化为特征的疾病.肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种细胞毒性因子,在肺纤维化的发病中起着关键作用.核转录因子κB（NF-κB）是一种多功能的核转录因子,近来研究表明,TNF-α可以通过激活NF-κB信号通路,参与肺纤维化的发生、发展.现对TNF-α介导NF-κB信号通路在IPF中的作用作一综述.     

肿瘤坏死因子α诱导脑血管内皮细胞产生病理性一氧化氮的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF—α）作用于脑血管内皮细胞产生病理性一氧化氮（NO）的机制。方法体外培养肿瘤坏死因子受体（TNFR1）基因敲除的小鼠脑血管内皮细胞（BVEC／RI）和野生型小鼠脑血管内皮细胞（BVEC）,分别给予5ng／ml TNF-α刺激24h后,应用PCR技术、Western blot方法、硝酸还原酶法,测定两种细胞的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因mRNA和蛋白表达量以及所分泌的一氧化氮（NO）含量。结果①给予TNF—α刺激后,野生型BVEC的iNOS mRNA表达增加,BVEC／RI的iNOS mRNA表达未出现明显变化。②给予TNF—α刺激后,野生型BVEC的iNOS蛋白表达量（0．91±0．08）高于未给予TNF-α的BVEC（0．15±0．02）,差异有统计学意义,P〈0．05;BVEC／RI的iNOS蛋白表达量（0．21±0．06）与未给予TNF—α的BVEC／RI（0．30±0．05）相比,差异无统计学意义,P〉0．05。③给予TNF-α刺激后,野生型BVEC的NO含量[（58．6±2．6）μxmol／L]高于未给予TNF—α的BVEC[（18．1±4．3）μmol／L],差异有统计学意义,P〈0．05;BVEC／RI的NO含量[（21．2±3．5）μmol／L]与未给予TNF-α的BVEC／RI[（16．9±3．4）μmol／L]相比,差异无统计学意义,P〉0．05。结论TNF—α可能通过作用于脑血管内皮细胞TNFR1增加iNOS表达,从而增加病理性NO产生。     

核因子κB和AP1介导了大鼠血管平滑肌细胞中肿瘤坏死因子α诱导的ADAMTS-7表达升高

背景与目的在动脉粥样硬化和再狭窄等疾病中,基质金属蛋白酶直接参与了血管平滑肌周围基质的降解和重塑,从而影响到平滑肌的迁移和增殖,对于动脉粥样硬化和再狭窄的发生起着关键性的作用。ADAMTS-7是作者新发现的一种金属蛋白酶,属于ADAMTS(含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白     

核因子-κB、肿瘤坏死因子-α与脑梗死

核因子-κ(B(NF-κB)是广泛存在于神经元、神经胶质细胞和血管内皮细胞的一种转录因子,主要参与机体的炎症反应、细胞凋亡、免疫反应与其他应激反应,被认为是血管内皮细胞损害的始动因子.脑梗死时,肿瘤坏死因子-α等细胞因子能促进炎症级联反应,在缺血性脑损伤中同样起重要作用.     

卡维地洛与阿替洛尔对肿瘤坏死因子α诱导内皮细胞凋亡的影响

本研究通过体外培养人肺静脉血管内皮细胞,观察卡维地洛与阿替洛尔对肿瘤坏死因子(TNF α)诱导内皮细胞凋亡的影响。一、资料与方法1.传4～6代生长良好的人肺静脉血管内皮细胞,消化,离心,用10 %的16 4 0培养液配成1×10 6/ml浓度的细胞悬液;6孔培养板每孔加入1×10 6/ml的细胞悬液1ml,再分别加入1mmol/L浓度卡维地洛(山东齐鲁制药厂) 0、2 5、5、10、15 μl(此时培养液中的卡维地洛浓度分别为0、2 5、5、10、15 μmol/L) ,然后加入10mg/LTNF α10 μl,每种处理5个复孔,置于37℃含5 %CO2 的饱和水汽培养箱中培养。阿替洛尔(Sigma公司)…     

替米沙坦对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1、核因子κB表达及细胞黏附的影响

目的观察替米沙坦对同型半胱氨酸诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、核因子κB(NF-κB)表达及与单核细胞黏附的影响。方法胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞;RT-PCR检测VCAM-1 mRMA的表达;Western blot检测VCAM-1、NF-κB蛋白的表达;ROSE BENGAL染色法检测单核细胞-血管内皮细胞黏附功能。结果与空白对照组相比,同型半胱氨酸增强了人脐静脉内皮细胞VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白、NF-κB p65蛋白的表达水平及与单核细胞黏附能力。替米沙坦(1000 nmol/L组)明显降低了同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白、NF-κB p65蛋白及与单核细胞的黏附水平(P<0.01)。与同型半胱氨酸组比,PDTC(NF-κB抑制剂)组NF-κB p65蛋白、VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白表达水平均明显降低,内皮细胞与单核细胞的黏附水平也明显降低(P<0.01)。结论替米沙坦抑制了VCAM-1 mRMA和蛋白的表达及内皮与单核细胞的黏附水平,其机制可能是通过抑制NF-κB而抑制炎症反应及内皮损伤。     

蒜氨酸与大蒜素抑制肿瘤坏死因子α诱导的炎症反应对比

目的比较蒜氨酸与大蒜素对肿瘤坏死因子α诱导的炎症反应的抑制作用,并进一步探讨蒜氨酸能否取代大蒜素的抗动脉粥样硬化作用。方法将细胞分成10组:对照组、肿瘤坏死因子α组(1μg/L)、蒜氨酸组、大蒜素组、肿瘤坏死因子α(1μg/L)+蒜氨酸(5 mg/L、10 mg/L、30 mg/L)组、肿瘤坏死因子α(1μg/L)+大蒜素(5mg/L、10 mg/L、30 mg/L)组,分别培养16 h。提取各组细胞mRNA,用实时定量PCR测定细胞间黏附分子1的表达水平;用虎红染色法检测人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附性;用划线法和MTT法分别检测大蒜素和蒜氨酸对平滑肌细胞迁移和增殖作用的影响。结果蒜氨酸和大蒜素预处理都能有效抑制肿瘤坏死因子α诱导的细胞间黏附分子1表达量的增高,并减弱由其导致的单核细胞对人脐静脉内皮细胞的黏附性增加,同时能抑制由肿瘤坏死因子α诱导的平滑肌细胞迁移和增殖作用。结论蒜氨酸与大蒜素对肿瘤坏死因子α介导的炎症反应及动脉粥样硬化均有一定的抑制作用,并且效果相近,因此蒜氨酸一定程度上可以取代大蒜素。     

肝癌组织中核因子κB的表达与肿瘤坏死因子α的相关性分析

目的 探讨核因子κB(NF-κB)在肝癌组织中的表达特点及其与肿瘤坏死因子α(TNF α)、临床病理学特征的关系. 方法以自身配对法收集手术后肝癌及其癌周组织各30份,以免疫组织化学法和酶联免疫吸附法检测肝癌和癌周组织中NF-κB的定位和表达,并以酶联免疫吸附法定量分析肝癌和癌周组织中TNF α的水平.样本均数间的比较先进行方差齐性检验,方差相等时进行t检验或方差分析;样本率之间的比较采用x~2检验;等级资料的比较采用秩和检验;相关性分析采用Pearson相关分析.用Stata7.0统计软件包处理、分析数据.结果 NF-κB蛋白在肝癌组织的胞核和胞质中均有表达,而对应的癌周组织中仅在胞质中有表达;NF-κB表达的阳性率肝癌组织中为100.0%,癌周组织为63.3%,x~2=13.47,P<0.01,差异有统计学意义.NF一κB表达强度:肝癌组织(+)4例、(++)10例、(+++)16例,癌周组织(-)11例、(+)7例、(++)9例,(+++)3例,肝癌组织中NF-κB的表达强度明显高于其对应的癌周组织,u=4.44,P<0.01,差异有统计学意义.核蛋白NF-κB的表达水平.肝癌组织中大约是癌周组织的1.9倍,t=23.17,P<0.01,差异有统计学意义.TNF α的表达水平在肝癌组织中大约是癌周组织的2.3倍.t＝39.22,P<0.01,差异有统计学意义.核蛋白NF-κB及TNF α的表达呈显著正相关,r=0.964,t=19.31,P<0.01.肝癌组织中核蛋白NF-κB的表达水平与肿瘤的分化程度、肿瘤数目、肿瘤大小和HBsAg是否阳性未见明显的相关性,各组间的差异无统计学意义. 结论TNF α可诱导NF-κB活化,进入细胞核内参与肝癌的发生和发展.     

脑心通胶囊对脑梗死患者血清肿瘤坏死因子-α及细胞间黏附分子-1水平的影响

目的观察脑心通对脑梗死患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平的影响,并探讨其作用机制。方法150例急性脑梗死患者随机分为脑心通治疗组75例和对照组75例,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定发病后第1天、第3天、第7天、第14天血清TNF-α和sICAM-1水平的变化。在治疗前和治疗后第14天进行欧洲卒中评分(ESS)及日常生活能力量表(ADL)评分,治疗第14天的ESS和ADL评分增分率判断疗效。结果治疗后7d和14d,治疗组血清TNF-α和sICAM-1水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗组ADL增分率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组ESS增分率差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前两组患者血清TNF-α水平均与ESS和ADL评分呈负相关(r值分别为-0.436、-0.438,P<0.001);血清sICAM-1水平均与ESS和ADL评分呈负相关(r值分别为-0.453、-0.461,P<0.001)。结论脑心通可降低急性脑梗死患者血清TNF-α和sICAM-1水平,改善患者的生存质量。     

霉酚酸对内皮细胞核因子-κB及其抑制因子IκBα的影响

目的研究霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)对内皮细胞核因子-κB(NF-κB)活力及其抑制因子IκBα的影响.方法利用凝胶迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,     

大剂量氟伐他汀短期治疗对老年不稳定性心绞痛患者血清可溶性细胞黏附分子和肿瘤坏死因子-α水平的影响

目的探讨大剂量氟伐他汀短期治疗对老年不稳定性心绞痛患者血清中可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）、可溶性血管细胞黏附分子-1（sVCAM-1）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的影响。方法将56例老年不稳定性心绞痛患者随机分为常规治疗组和大剂量治疗组,两组患者均给予抗心绞痛常规治疗,常规治疗组给予氟伐他汀40mg／d,大剂量治疗组给予氟伐他汀80mg／d,入院当日和治疗1个月时检测患者血清中sICAM-1、sVCAM-1和TNF-α水平。结果两组患者治疗后血清sICAM-1、sVCAM-1和TNF-α水平均较治疗前明显降低（P〈0．05）,但组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论大剂量氟伐他汀短期治疗不能进一步降低老年不稳定性心绞痛患者血清sICAM-1、sVCAM-1和TNF-α水平。