流式细胞技术在移植术后受者巨细胞病毒诊断上的应用

目的　探讨流式细胞技术 (FCM)诊断移植受者术后巨细胞病毒 (cytomegalovirus,CMV)的感染状况。方法　应用酶联免疫吸附方法、免疫组化方法及流式细胞技术测定 79例移植受者术后抗巨细胞病毒抗体 (CMV Ab)及巨细胞病毒抗原 (CMV Ag)。结果　移植受者抗CMVIgG和抗CMVIgM阳性率分别为 10 0 %和 2 5 %免疫组化方法检测CMV抗原阳性细胞数 0～ 2 0个以上 / 5× 10 4WBC ,而随着CMV抗原阳性细胞数的增多 ,FCM测定CMV抗原的阳性率也逐渐升高。结论　移植受者术后存在不同程度的CMV感染 ,临床上开展流式细胞技术检测对早期诊断移植术后受者CMV感染具有重要意义     

预防因输血传递巨细胞病毒感染的血清学筛选性检查

作者对500名健康供血者进行了巨细胞病毒(CMV)速发性早期抗原(IEA)、早期抗原(EA)、晚期抗原(LA)的抗体检测。76%的供血者检出有LA的抗体,9.6%和10.2%的供血者中分别有IEA和EA的抗体。抗体的阳性率随年龄的增加而增加,女性高于男性。由于IEA与EA的抗体与活动的CMV感染显著有关,因此可以提出选择不致传递CMV的供血者标准。由输血获得人巨细胞病毒(HCMV)的感染可引     

检测病毒特异性IgG和IgM抗体的一种新方法

作者以巨细胞病毒(CMV)作模型介绍一种快速而可靠地检测病毒特异性Igs的新方法.将病人血清与病毒抗原一起孵育,然后离心取得病毒-抗体复合物,再加入抗IgG和抗IgM致敏的乳胶颗粒,确定结合抗体的类别和性质.抗原制备将滴度为10~(4.2)TCID_(50)的CMV接种单层人胚成纤维细胞(F2H或F19H),37℃持续振摇孵育1小时后,加入F-11(MEM:GIBCO)维持液.感染后2～3天换液一次,到第4～6天弃去维持液,用胰酶消化单层细胞,500×g离心10分钟,弃     

巨细胞病毒感染的细胞微丝骨架重组异常

本研究探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人胚成纤维细胞(HF)微丝骨架影响及与病毒复制状态的可能关系。用显微镜观察细胞形态,采用RT-PCR检测β-actin表达,Western-blot检测胞内肌动蛋白质含量,间接免疫荧光标记病毒即刻早期抗原(IE)与微丝骨架探针观察HF细胞内感染状况及微丝骨架变化。结果表明CMV感染率大于95%,IE抗原主要位于胞核。受染细胞变粗、变圆,甚至脱壁,呈时间依赖性。感染后72、96小时,受染细胞内β-actin表达呈渐进性下调,差异显著(P<0.05);96小时后胞内β-actin含量则为未感染组的(74.2±13.4)%,差异显著(P<0.05)。受染细胞内微丝排列紊乱,极性消失;细胞融合,荧光强度明显减弱。结论CMV引起细胞内肌动蛋白质、微丝骨架形态及重组异常可能有助于其侵袭宿主细胞并进一步活化及复制。     

急性乙型肝炎前S1抗原及抗体测定及临床意义

目的 探讨急性乙型肝炎前S1抗原及抗体测定的临床意义.方法 收集该院2004年5月至2010年9月的58例急性乙型肝炎患者、48例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者和30例健康者进行研究.结果 急性乙型肝炎病毒(HBV)感染的早期由于前S1抗原的刺激,机体产生了S1抗体,前S1抗原的存在表明病毒处于活动期并进行复制,以及肝细胞开始损害,前S1抗体的存在说明病毒正在被消除.结论 前S1抗体可能做为急性乙型肝炎(AHB)的早期诊断的指标,前S1抗原可做为乙型肝炎病毒复制和抗乙型肝炎病毒疗效评定实验室敏感指标.     

巨细胞病毒对多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞的感染及其对IL-6 mRNA表达的影响

目的　探讨人巨细胞病毒 (CMV)对多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞的感染及其对细胞IL 6mRNA表达的影响。方法　以 10 0 ,10 ,1半数组织培养感染量 (TCID50 )滴度的CMV与KM3细胞共培养 ,RT PCR法检测细胞CMV即刻早期抗原基因 (IE)、甘油醛 3 磷酸脱氢酶基因 (GAPDH)及IL 6mRNA的表达 ,流式细胞术检测细胞CMVpp6 5抗原的表达 ,透射电镜检测细胞内CMV病毒颗粒。结果　CMV感染的KM3细胞可明显地表达IEmRNA ,同时该细胞IL 6mRNA水平明显升高 ;10 0 ,10TCID50滴度的CMV感染的KM3细胞CMVpp6 5抗原表达率分别为 (5 .5 8± 1.5 5 ) %、(3.75± 0 .85 ) % ,与对照组的 (1.5 8± 0 .33) %相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;透射电镜下 ,10 0TCID50 滴度的CMV感染的KM3细胞内及胞膜表面可见到CMV病毒颗粒。结论　CMV可感染多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞 ,并在其中活化复制 ;该病毒可提高KM3细胞IL 6mRNA的表达     

人缺失型Midkine重组蛋白的纯化及多克隆抗体的制备

目的获得兔抗人缺失型Midkine(t MK)的多克隆抗体,并将其初步应用于临床检测。方法将人t MK蛋白经亲和层析法纯化,并将其作为抗原免疫新西兰大白兔,获得兔抗人血清,经饱和硫酸铵纯化,获得初步纯化的兔抗人t MK多克隆抗体,用免疫组织化学和蛋白印迹(Western blot)试验检测抗体的灵敏度和特异性。结果获得初步纯化的兔抗人t MK特异性多克隆抗体,该抗体能识别天然人t MK蛋白。结论制备的t MK多克隆抗体可初步用于临床检测。     

肾移植术后巨细胞病毒感染诊断、预防与治疗

目的:探讨肾移植术后巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染的诊断、治疗与预防方法。方法:回顾性分析28例肾移植患者临床资料,检测手术前、后血中CMV抗原和CMV抗体及肾脏穿刺标本组织中CMV抗原的表达,并采用静脉注射更昔洛韦进行预防与治疗。结果:11例发生CMV感染,均为无临床症状的CMV感染,均治愈。结论:积极预防、早期治疗肾移植术后CMV感染至关重要,CMV抗原检测和免疫组织化学检测共同应用能够对CMV感染作出早期诊断,更昔洛韦能有效治疗CMV感染。     

婴幼儿巨细胞病毒感染19例临床分析

巨细胞病毒(CMV)是宫内和围生期感染的重要病原体之一。报道19例婴幼儿CMV感染如下。 资料和方法 对象 对儿科病室87例有咳嗽气急、黄疽、肝脾肿大、紫癜及神经系统症状的婴幼儿患者进行CMV分离和特异性抗体测定。 病毒学检查 用尿液、唾液、咽拭子标本。抗CMV抗体IgM,及IgG,采用间接免疫荧光法。 诊断标准 凡病毒分离或抗CMV IgM阳性者确诊为CMV感染.     

生物素标记DNA探针原位杂交法快速诊断肝移植的巨细胞病毒感染

巨细胞病毒(CMV)是异体移植的常见感染,可引起严重发病.需快速诊断早期感染以处理因移植后大量改变免疫抑制系统,使用特异性抗病毒药物等引起的肝功能损害,尤其是继CMV感染后的"消失性(Vanishing)胆管综合征".细胞培养法诊断CMV感染要3周时间,虽可检出CMV早期抗原,但从血、尿、胆汁临床标本检出CMV并不足以证明病毒对移植物功能障碍的致病作用.原位杂交法直接检查肝组织炎症区复制病毒的特异性DNA可准确诊断移植物CMV感染,有力证实导致肝炎的病毒,但需要放射性标记探针,且太慢,为此     

白细胞中巨细胞病毒抗原检测及在肾移植的临床应用

目的 建立一种新的快速诊断巨细胞病毒（CMV）感染的方法并初步用于肾移植受者。方法 采用抗CMV抗原的单克隆抗体，运用免疫组化链菌素-生物素标记法对外周血白细胞核中CMV抗原（即刻早期抗原和早期抗原）进行染色，诊断CMV感染。结果 共检测肾移植受术者72例，CMV活动性感染率为47％（34／72），CMV病发病为18％（13／72）。CMV抗原阳性细胞数在CMV活动性感染者中平均为11．5／5万WBC，在CMV病者为20．517．a／5万WBC。同时检测10名健康人，结果 均为阴性。结论 该法具有快速、简便、成本低等优点，且能达到定量检测的目的，可用于临床对CMV感染的早期快速诊断。     

高效价抗巨细胞病毒免疫球蛋白的制备与临床应用

巨细胞病毒(CMV)感染相当广泛。新生儿中,大约有1%先天性(即通过胎盘)感染了 CMV。人群中可查出抗体的比例,随着年龄的增长而增加,在成人中高达50—80%。在正常情况下,尽管 CMV 感染不会引起疾病,但在某些情况下,潜伏性 CMV可被激活,引起一些临床综合征,严重者甚至危及生命,尤其常见于器官移植如肾移植、骨髓移植等。因此,近年来利用蛋白分离技术与免疫学相结合,制备出了高效价抗 CMV免疫球蛋白(CMVIG)并应用于临床。现综述如下。     

从检验指标判断乙型病毒性肝炎患者的传染性

乙型肝炎病毒感染是我国乃至世界范围内的公共问题。乙型肝炎病毒感染的隐匿性,使感染不能及时发现,进而导致疾病的传播。乙型肝炎病毒的检测指标能够间接反映患者体内病毒的感染状态,本文旨在讨论传统检验指标乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、e抗体(抗-HBe)、乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)、乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)以及新的生物学标记物共价闭合环状DNA(cccDNA)、乙型肝炎核心抗原相关抗原(HBcrAg)对乙型肝炎患者体内病毒复制情况的提示意义。     

乙型肝炎病毒前S1前S2蛋白与血清HBV—DNA两对半检测的相关性

目前,乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）血清学常规检测项目主要是乙型肝炎“两对半”[即乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）],但它实际上并不能完全反映HBV在患者体内的复制及传染情况。近年来对HBV前S蛋白的研究日趋深入,多数学者认为前S蛋白可作为HBV感染、复制及乙型肝炎患者诊断、治疗、预后的重要指标。     

检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较

目的　比较血pp6 5抗原和IgM抗体检测对移植患者巨细胞病毒 (CMV)活动性感染的诊断价值。方法　收集 5 8位移植患者的血标本 (共 2 0 8份 ) ,分离血浆和多形核白细胞 ,血浆用于CMVIgM抗体检测 (ELISA) ,白细胞用于pp6 5抗原血症检测(荧光免疫组化 )。同时随机取部分血浆标本进行荧光定量PCR分析 ,检测CMVDNA。结果　pp6 5抗原阳性细胞数与CMVDNA拷贝数呈正相关 (r=0 .87) ,也与病人的临床症状密切相关 ,可用于监测移植患者CMV的活动性感染。IgM抗体与pp6 5抗原阳性的一致率为 2 1.2 % ,对CMV感染的敏感性为 2 2 .3% ,特异性为 95 .6 %。结论　pp6 5抗原阳性细胞数能反映CMV的数量 ,可监测CMV活动性感染 ,检测方法特异、灵敏、操作简单 ,适宜临床实验室应用。血清IgM抗体检测因为敏感性较低 ,不适用于移植患者CMV活动性感染的监测。     

对移植物供者做HCV核心抗原或核酸检测能否提高器官移植的病毒传播的安全?

接受器官移植的患者面临多种病毒的感染。病毒的安全基于对移植物的仔细选择,临床参数和全面筛选以下标志物:抗人类免疫缺陷病毒抗体、P24抗原、抗人T细胞白血病病毒、抗巨细胞病毒抗体、抗EB病毒抗体、HBs抗原、抗HBs抗体、抗HBc抗体和抗丙肝(HCV)抗体。HCV传染的危险性理论上与出现在急性感染患者血清转换前的“血清学窗口期”有关,它可持续达70天。本次研究的主题是确定HCV核心抗原和核酸检测(NAT)     

移植群体中人巨细胞病毒核酸监测的研究进展

免疫学的深入发展，推动了移植领域的发展并已取得了长足进步。人巨细胞病毒（cytomegalovirus）的感染与再活动的严重威胁给医患双方带来困惑。如能做到早期发现、早期诊断、早期治疗，将会给移植群体送来喜讯。CMV病毒学检测是诊断CMV感染的依据，血清学方法通过检测CMV-IgM、IgG抗体，证明新近或既往感染CMV病毒，临床应用广泛，但敏感性较差，尤其对于免疫功能低下的移植受体，其IgM抗体的产生能力较低而不会出现阳性结果。故血清学方法不适于早期诊断，目前主要用于供受者是否感染CMV的筛选。笔者就移植群体中人巨细胞病毒（HCMV）的监测，尤其是病毒核酸的研究进展作一综述。     

液相悬浮芯片技术用于婴幼儿ToRCH病原体抗体检测的评估

目的评价液相悬浮芯片技术检测婴幼儿To RCH病原体[弓形虫(TOX)、风疹病毒(RUB)、人巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒(HSV)]抗体与传统方法的一致性。方法使用液相悬浮芯片技术对130例患儿的To RCH病原体的IgM和IgG抗体进行测定,并与化学发光法进行比对研究,比对不一致的样本进一步采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行对比。结果除抗CMV IgG抗体外,液相悬浮芯片技术的测定结果与化学发光法的一致率均在80.00%以上,二者具有良好的一致性(K0.4)。而液相悬浮芯片技术检测抗CMV IgG抗体与化学发光法和ELISA的一致率分别仅为45.37%和47.22%,该方法与传统方法(化学发光法和ELISA)缺乏一致性(K值分别为0.10和0.11)。结论液相悬浮芯片技术在测定TOX抗体(IgM和IgG)、RUB抗体(IgM和IgG)、CMV抗体(IgM)和HSV抗体(IgM和IgG)时具有良好的一致性,而在进行抗CMV IgG抗体的测定时与化学发光法和ELISA均有较大差异。     

一种抗丙肝病毒核心多肽酶联免疫吸附法的敏感性

作者采用一种新的抗丙肝病毒(HCV)核心多肽酶联免疫吸附法(ELISA)与最初的抗-C100ELISA 对比测定:A 组225例血友病患者的储存血清;B 组44例慢性非甲非乙(NANB)型肝炎患者的新鲜血清或血浆和 C 组9例输血后 HCV 感染的血清样本,来评价本法的敏感性。抗-HCV ELISA 是测定15种氨基酸合成的、HCV 核心蛋白的多肽抗体。并用4种抗原重组免疫斑点法(4-RIBA)测定1种结构重组抗原(C-22=核心)和3种非结构重组抗原     

肾移植受者巨细胞病毒即刻早期信使核糖核酸检测及其临床意义

目的:探讨肾移植术后巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染的早期、快速、准确的诊断方法.方法:应用核酸基础序列扩增法(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)检测55例肾移植术后受者外周血CMV的即刻早期信使核糖核酸(immediate early messenger ribonucleic acid,IE-mRNA),同时检测CMV的PP65抗原,并比较其结果.结果:55例中29例抗原指数阳性,发生CMV病10例,未发生CMV病19例,发生CMV病组与未发生CMV病组比较,其抗原指数值差异有统计学意义(P＜0.01).IE-mRNA阳性20例,IE-mRNA阳性者的CMV抗原指数值显著高于IE-mRNA阴性者,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).术后首次检测到IE-mRNA的时间显著早于首次检出PP65抗原的时间(P＜0.05),经抗病毒治疗后两者转阴时间无差异.结论:应用NASBA检测IE-mRNA能早期诊断CMV活动性感染,对肾移植术后抗CMV治疗具有指导意义.