抗结核杆菌单克隆抗体的研制及初步鉴定

运用单克隆抗体技术,以结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ的培养滤液免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,以Ｈ３７Ｒｖ及ＢＣＧ抗原同时筛选杂交瘤细胞,得到了７析稳定分泌的抗结核杆菌的杂交瘤细胞株,并对它们的特性作了初步鉴定。在７株单克隆抗体杂交瘤中,５株（２Ｃ５、２Ｃ１１、２Ｄ１、２Ｅ１１及３Ｄ３）为ＩｇＧ１亚类,另两株（３Ｃ３及５Ｄ８）为ＩｇＭ。腹水经ＥＬＩＳＡ检测,效价可达１０＾－３～１０＾－４,同时应用ＥＬＩＳＡ及免疫印迹试     

抗人型结核杆菌单克隆抗体的制备和鉴定

为建立特异、敏感、快速而简单的结核病免疫诊断技术，制备了８株抗结核分枝杆菌的ＩｇＧ单克隆抗体，经ＥＬＩＳＡ法与结核分枝杆菌及８株非结核分枝杆菌的ＰＰＤ鉴定，筛选了其特异性及敏感性。与结核分枝杆菌聚合ＯＴ测定了其培养上清抗体滴度在１０＾－２以上。腹水抗体滴度在２×１０＾－４以上，用免疫转印技术确定了与其特异性结合的抗原相对分子质量分别为４２．７，２７．８ＫＵ。８株杂交瘤细胞的染色体计数为９８￣１３０     

特异性单克隆抗体测定脑囊虫病人血清中循环抗原的临床…

对１３０例临床初诊脑囊虫病人血清中循环抗原及抗体进行了测定。结果发现。６７例抗体阳性患者中有３４例抗原阳性，阳性率为５０．７％；３４例抗原阳性患者中有２０例头颅ＣＴ证实活动性病变；３３例抗体阳性而抗原阴性患者中有２６例头颅ＣＴ证实为１－２个或多个钙化灶，这表明脑囊虫患持异性抗原检测可以比较客观地反映脑虫病变的不同程度与ＣＴ检查之间的关系，而且可以作为疗效观察的指标。     

抗结核单克隆抗体治疗对小白鼠脾内结核杆菌增殖的影响

本文就抗结核单克隆抗体治疗对小白鼠脾内结核菌增殖的影响进行了研究。发现：高剂量单抗治疗可强烈抑制小鼠脾内结核菌生长；低剂量单抗治疗对脾内结核菌的生长呈弱抑制作用。在高、低剂量之间的剂量范围内，单抗治疗刺激脾内结核菌的生长。同一单抗对不同菌株感染的小鼠治疗效果不同，病原菌感染量对单抗的治疗效果具有重要影响。     

抗人型结核杆菌单克隆抗体的制备和鉴定

为建立特异、敏感、快速而简单的结核病免疫诊断技术，制备了８株抗结核分枝杆菌的ＩｇＧ单克隆抗体，经ＥＬＩＳＡ法与结核分枝杆菌及８株非结核分枝杆菌的ＰＰＤ鉴定，筛选了其特异性及敏感性。与结核分枝杆菌聚合ＯＴ测定了其培养上清抗体滴度在１０－２以上。腹水抗体滴度在２×１０－４以上，用免疫转印技术确定了与其特异性结合的抗原相对分子质量分别为４２．７，２７．８ＫＵ。８株杂交瘤细胞的染色体计数为９８～１３０条不等。     

人原发性胆囊癌单克隆抗体制备及其特异性研究

目的 制备人原发性胆囊癌单克隆抗体,对其特异性进行研究.方法 以胆囊癌细胞系SGC-996免疫Balb/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,获得稳定分泌抗SGC-996单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞.结果 杂交瘤细胞符合融合细胞核型特点,有较强的成瘤性.抗体亚类为IgG1.相对应的抗原主要表达在胞质和胞核中,分子量约为67kD抗体对胆囊癌有较强的免疫反应,其他癌组织、癌旁组织及间质、正常胆囊上皮和成纤维细胞均呈阴性.结论 建立一株杂交瘤细胞系,能稳定分泌单克隆抗体,该抗体具有较高特异性.     

肺痨康对结核杆菌体内抑菌实验研究

[目的]观察肺痨康对结核杆菌体内抑菌作用。[方法]小鼠随机分为空白组,模型组,阳性组(RFP,灌胃150mg/kg),肺痨康高、中、低剂量组6组,空白组,模型组给予等容积的生理盐水。实验当天,将结核菌配制成1mg/ml生理盐水菌悬液,尾静脉注射0.2ml/只。于第二天灌胃药物。一周后死亡的动物作解剖记录;观察肝,脾,肺的重量指数及每个脏器的结核结节,脏器的病理形态学变化(HE染色)与结核菌数(Z-N染色)。观察并记录各组动物的存活时间。[结果]肺痨康高剂量对感染肺结核小鼠有明显的治疗效果,中剂量组有较明显的疗效。[结论]肺痨康高剂量、中剂量有较好的抗结核杆菌的作用。     

抗炭疽毒素保护性抗原单克隆抗体的制备及功能分析

目的:原核表达炭疽杆菌保护性抗原PA10蛋白,制备单克隆抗体,并进行功能分析?方法:人工合成炭疽杆菌保护性抗原PA10编码基因并克隆入pUC57载体,酶切鉴定后,将PA10编码基因插入原核表达载体pColdⅡ中,测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG和低温条件下诱导蛋白表达,SDS-PAGE验证产物;用HiTrap IMAC HP柱纯化重组蛋白,Western blot进一步验证?以纯化获得PA10重组蛋白为抗原,常规程序免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并检测所制备抗体的中和活性?结果:获得的PA10重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,最终获得了4株特异性的单克隆抗体(分别命名为2G8?5A8?7B3? 9C9)?经体外炭疽毒素保护试验证实,其中1株单抗(7B3)具有较强的中和活性,其保护率可高达96%?结论:本文成功构建并表达炭疽杆菌保护性抗原PA10,制备了具有中和活性的抗PA单克隆抗体,为构建人源化的抗PA中和抗体奠定基础,从而有望用于炭疽病的治疗?     

检测人血型抗A和抗B单克隆抗体的制备

用人Ａ型及Ｂ型红细胞分别免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取免疫脾细胞与同系ＳＰ２／０骨 髓瘤细胞融合，经克隆筛选出８株抗Ａ和５株抗Ｂ杂交瘤细胞株，用小鼠腹水单克隆抗体分 别做凝集试验。亲和力测定、标本检测及ＣＰＶ、ＰＨＡ、ＣｏｎＡ对单克隆抗体效价的影响。结果表 明除Ａ４和Ｂ４株外，其余各株凝集效价均在１：１２８０以上；亲合力与抗Ａ、抗Ｂ血清相似；标本 检测符合率为１００％。结果提示：用含ＰＨＡ、ＣｏｎＡ、ＣＰＶ的杂交瘤细胞注射小鼠，所产生的单 克隆抗体效价比单独用杂交瘤细胞产生的单克隆抗体均高出２倍。     

Characterization and potential diagnostic application of monoclonal antibodies specific to rabies virus

Objective：Rabies is invariably a fatal encephalomyelitis that is considered to be a serious public health problem.It is necessary to develop standard rabies virus diagnostic tools,especially for diagnosing the strains prevalent in China.Methods：Monoclonal antibodies（MAbs）specific to rabies virus were produced and characterized by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）,isotyping,affinity assay,immunofluorescence assay（IFA）,and immunocytochemistry.The MAb,whose affinity was higher for antigen,was used to establish an antigen captureELISA（AC-ELISA）detection system and test the efficiency by using clinical samples.Results：The heavy chain subclasses of two MAbs were all determined to be IgG2a.The 3C7 MAb showed stronger reactivity with rabies virus protein than the 2C5 MAb in an ELISA analysis,whereas the 3C7 MAb showed the highest affinity for antigen.IFA and immunocytochemistry results also indicated that the two MAbs could recognize rabies virus protein in its native form in cell samples.Data obtained using clinical samples showed that rabies virus could be detected by AC-ELISA detection system using the 3C7 MAb.Conclusion：It was potentially useful for the further development of highly sensitive,easily handled,and relatively rapid detection kits/tools for rabies surveillance in those areas where rabies is endemic,especially in China.     

重组人3型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗人3型腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体并对单抗进行鉴定.方法 用纯化的重组六邻体蛋白免疫BALB/c小鼠.取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合.经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得单抗.使用ELISA、Western blot和中和实验等方法鉴定单抗的敏感性、特异性以及中和活性.结果 ELISA和免疫印迹结果表明这4株单抗与腺病毒六邻体蛋白可以特异性结合.而且,4C6株单抗具有中和活性.结论 获得了4个单抗为腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体,可用于3型腺病毒的早期诊断和药物治疗的研究.     

抗Plasmodium inui单克隆抗体亲和力的研究

本文对建立的两株抗Plasmodium inui单克隆抗体亲和力进行了研究,结果发现,通过混合及偶联单克隆抗体能显著提高抗体的亲和力,提高抗原检测试验的敏感性,同时减少用不同法方处理的抗原对抗原抗体反应亲和力的影响。     

人垂体提取液免疫建立促甲状腺素单抗杂交瘤细胞株

获取分泌结合力和特异性均好的抗人促甲状腺素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法；用人重体提取液为免疫原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以聚乙二醇为融合剂，亚克隆三次。结果；获得２株分泌与ｈＴＳＨ特异性结合的单克隆抗体杂交瘤细胞株，所分泌的免疫球蛋白为ＩｇＧ１，液相中与ｈＴＳＨ的最大备ｈＴＳＨ单克隆抗体；２．此２株单克隆抗体的获得为建立敏感的ｈＴＳＨ测定方法奠定了基础。     

抗白念珠菌单抗的保护性研究

证实抗白念珠菌保护性抗体存在,为保护机制以及保护性工程抗体的研究打下基础。方法在实验动物模型中观察单抗影响珠菌感染动物存活时间、感染动物重要脏器的组织病理变化,相应组织中白念珠菌ｃｆｕ等。结论１Ｂ５和３Ｅ８皆是具有保护作用的抗念珠胞壁外膜单克隆抗体。     

~(131)Ⅱ标记肝癌单克隆抗体对裸鼠肝癌移植瘤的实验性导向治疗

作者用Ⅰ标记抗人肝细胞癌单克隆抗体HAb8 HAb18 IgG及其(ab)_2片段。从尾静脉注入碘标记物,对16只荷肝癌裸鼠(SMMU-LTNM)分4组治疗,其中D组为无关抗体对照组,A,D组为单次给药,注入剂量为7.4×10′Bq,B,C组为多次给药,每5d注射1次,每次剂量为4.4×10′Bq,肿瘤扩增至0.3cm直径时起始治疗,观察疗效21d。每天用卡尺测量其瘤体大小,取横径和竖径的1/2值。经过治疗,2周内有较明显的抑瘤或杀瘤效应。显效(CR)者瘤块可消失(n=5),而对照组(n=4)的瘤块扩增了3-4倍,治疗组(n=12)的自然生存率延长7d以上。     

人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备抗人心肌肌钙蛋白 I(c Tn I)单克隆抗体 (c Tn I Mc Ab)并进行初步鉴定。 方法 :从健康意外死亡者的心肌中提取、纯化人 c Tn I,以其为抗原 ,免疫 BAL B/ c小鼠后 ,取其脾淋巴细胞与小鼠 Sp2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,反复筛选及克隆 ,得到能稳定分泌 c Tn I Mc Ab的杂交瘤细胞株。初步鉴定 c Tn I Mc Ab。结果 :经间接 EL l SA法筛选 ,3次克隆化后获得 5株能稳定分泌 c Tn I Mc Ab的杂交瘤细胞 (3A7、3A 11、3D2、3F10和 1H9) ,5株单抗免疫球蛋白亚类鉴定均为 Ig G2 a类。染色体数目 92～ 110条。 5株单克隆抗体腹水按 1∶ 10 0稀释 ,与 L DH、CK、CK- MB、AST和人心肌肌钙蛋白 T(c Tn T)行交叉反应为阴性。 5株 c Tn I Mc Ab腹水效价为 3.2× 10 - 6 ～ 1.6× 10 - 7。c Tn I Mc Ab相加试验表明 ,3D2、3F10与 3A7、3A11、1H9能识别不同的抗原表位。 结论 :本实验成功制备了具有较高活性的 c Tn I Mc Ab,具有良好应用开发价值。     

McAb配伍在人胃癌组织反应性的观察

目的 :将胃癌McAb配伍提高McAb与人胃癌组织的反应性 ,为肿瘤定位诊断及导向治疗提供有效的McAb配伍。方法 :采用ABC免疫过氧化物酶染色观察了胃癌McAb及配伍McAb与胃癌组织的反应性。结果 :2 6例胃癌组织经ABC免疫过氧化物酶染色显示 ,3G9、BB4 3经配伍后 ,在相同浓度下 ,与单一McAb相比 ,阳性率由单一McAb的 5 0 0 % ,65 4%提高到配伍后的 96 0 % (P <0 0 1 )。McAb 3G9、BB4 3配伍后作用于正常胃癌组织 ,均呈阴性反应。结论 :合理采用配伍的McAb可提高McAb与人胃癌组织的反应性 ,降低抗原表达的异质性 ,从而提高McAb的载体效应。