实验性急性肝衰竭时门脉高压发生机制的研究

目的：阐明急性肝衰竭时门脉高压的发生与肠源性内毒素血症和肝内微循环障碍的关系。方法：动态观察皮下注射硫代乙酰胺大鼠门脉血流动力学、血浆内毒素、内皮素－１、肿瘤坏死因子－α及台盼蓝肝脏原位灌流等。结果：随着给注射时间的延长,血浆内毒素水平、ＡＬＴ和ＬＤＨ明显升高,血浆及肝组织ＴＮＦ－α和ＥＴ－１显著增多,台盼蓝灌流时间明显延长。肝组织可见肝窦直径显著变窄,肝细胞肿胀变性坏死使肝窦被挤压。结论：肠源性内毒素血症及其引发的肝微循环障碍在急性门脉高压形成中具有重要作用。     

NO在肝纤维化形成中对肝脏微循环的影响

目的探讨外源性一氧化氮(nitric oxide,NO)对肝脏微循环障碍的影响和在肝纤维化发生发展中的作用.方法将大鼠分为3组:正常对照组(normal control,NC):以正常饮食喂养;采用复合因素致肝纤维化组(hepaticfibrosis,HF):同时用生理盐水1.5ml·只-1·d-1灌胃;HF Arg组:以肝纤维化对照组为基础,同时予L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)100mg·Kg-1·d-1灌胃.于实验4周末,观察血浆内毒素(lipopolysaccaride,LPS)、NO、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,观察各组肝组织纤维增生程度,用台盼蓝原位灌流肝脏来观察肝脏微循环的改变.结果血浆内毒素水平在HF组均明显高于NC组,HF Arg组内毒素水平虽比NC组高,但差异无显著性;NO水平HF Arg组明显高于HF组;血浆MDA水平各实验组均明显高于NC组;血浆SOD活性HF组明显低于NC组和HF Arg组;肝脏纤维组织目标面积HF组明显大于HF Arg组;用台盼蓝原位灌流肝脏发现HF组灌流时间最长,HF Arg组与NC组比较差异无显著性.结论外源性NO可能通过改善肝脏微循环,防止肝脏缺血和炎性细胞介质诱导的氧化损伤,延缓肝纤维化的发展.     

普鲁卡因在肝缺血再灌注损伤中的作用

目的肝缺血/再灌流损伤的程度直接影响到肝脏手术的预后,因而寻找一种能减轻肝缺血/再灌流损伤的方法。方法肝门阻断45min,通过对大鼠在活体显微镜下不同时间点肝血窦血流速度及血管管径变化的观察及肝组织的病理切片检查,观察普鲁卡因对大鼠肝脏血管支配神经的控制。结果肝门结扎前用2％普鲁卡因封闭,白细胞的浸润程度明显减轻,血流速度得到改善。结论普鲁卡因对控制改善肝缺血/再灌流损伤起积极作用。     

内毒素血症时内皮素及受体致肝损伤的分子机理研究

目的探讨内毒素血症时大鼠肝组织内皮素-1(endothelin-1,ET-1)和内皮素受体(endothelinreceptor,ETR)活性变化、mRNA表达以及与肝损伤的关系.方法选用Wistar大鼠90只,分为对照组、内毒素组(10mg/kg)和内皮素抗体组(内毒素10mg/kg+1∶2000ET-1抗体2mL/kg).采用内毒素血症动物模型、肝脏原位灌注模型,斑点杂交和原位杂交技术,细胞培养技术.观察了3、6、12和24h四个时相点肝组织ET-1、ETR活性变化、mRNA表达,肝组织中MDA、ATP、GPT的变化.结果(1)ET-1的变化肝组织中内皮素的含量增加6倍;肝组织中内皮素mRNA相对含量增加7.3倍;肝组织中肝小叶中央静脉内皮细胞、肝血窦内皮细胞内反应颗粒密集堆积内毒素能使培养的人脐静脉血管内皮细胞分泌内皮素的量增加12.3倍.(2)ETR的变化肝组织ETR的解离常数(KD)无明显变化,最大结合数(Bmax)伤后3h显著降低,持续24h;肝组织内皮素A型受体(endothelin receptorA)mRNA相对含量均高于对照组;原位杂交结果显示肝血窦周围、肝小叶间动脉壁的平滑肌细胞呈阳性反应,颗粒堆积.(3)内皮素在内毒素致肝损伤中的作用原位灌注肝脏内皮素不仅使门静脉压升高,而且导致肝细胞浊肿在体实验肝组织中内皮素含量与MDA呈正比,与ATP成反比.在体实验和原位灌注肝脏结果表明内皮素抗体可部分拮抗内毒素所致的肝损伤作用.结论内毒素血症时,内毒素能使ET-1含量增加,ETR的最大结合数降低.内毒素可能是在转录和翻译水平调节ET-1和ETAR的合成.内皮素及受体参与内毒素所致的肝损伤.     

内皮素-1在大鼠肝脏冷保存不同时相的含量变化及其与肝损伤的关系

目的：研究内皮素－ １ 在大鼠肝脏冷保存不同时相的含量变化及其与门静脉灌注压及肝损伤的关系。方法：以离体鼠肝灌流为模型,用放免方法检测肝脏保存不同时间灌流液及肝脏中内皮素－ １（ＥＴ－ １） 的变化,同时观察门静脉灌注压及肝脏功能变化,并做相关分析。结果：随保存时间延长,ＥＴ－ １ 水平呈进行性升高。ＥＴ－ １ 与门静脉灌注压变化呈明显正相关（ ｒ ＝ ０－９７０ ,Ｐ＜ ０－０１） ,与胆汁分泌量呈明显负相关（ ｒ ＝ － ０－８６４ ,Ｐ＜ ０－０５） ,与灌注液ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＬＤＨ 也呈明显正相关（ ｒ＝ ０－９１９ ,Ｐ＜ ０－０１） 。结论：ＥＴ－ １ 参与并加重肝脏保存再灌注损伤,尤其对肝脏微循环的直接影响。因此ＥＴ－ １ 很可能是形成该损伤的重要内源性致伤因子之一。     

TNF-α在肠源性内毒素血症中的作用及丹参防治机制研究

目的：研究肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）在肠源性内毒素血症中的作用及丹参防治肝损伤机制。方法：用硫代乙酰胺（ＴＡＡ）诱发大鼠急性肝损伤,检测血浆内毒素、ＴＮＦ－α及丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）水平变化,并与丹参治疗组进行比较。结果：ＴＡＡ诱发急性肝损伤大鼠血浆内毒素及ＴＮＦ－α含量升高,二者呈正相关;血浆ＡＬＴ亦升高,与ＴＮＦ－α亦呈正相关。丹参治疗组大鼠血浆ＴＮＦ－α及ＡＬＴ水平均低于肝损伤对照组     

单磷酸类脂A预处理对内毒素血症氧自由基的影响

目的探讨单磷酸类脂A(MPLA)对内毒素血症小鼠的预防性保护作用及其可能的机制.方法实验分为两部分.首先观察MPLA预处理对内毒素血症小鼠存活率的影响.第二,选90只雄性昆明种小鼠随机分成3组,每组30只(1)假手术组;(2)内毒素血症组;(3)MPLA预处理组.每组又分成2h、4h及6h3个时相点.MPLA的预处理剂量为100μg小鼠.分别于生理盐水或LPS注射后相应时相点取血、肝和肺组织测血浆丙二醛(MDA)以及肝、肺组织MDA,并且行肝和肺组织病理学检查.结果MPLA3d前预处理在100μg剂量时能明显提高内毒素血症小鼠24h的存活率(60%25%,P＜0.05).内毒素血症时小鼠血MDA及肝、肺组织中MDA水平早期就显著升高,而MPLA预处理则可显著抑制内毒素血症小鼠MDA水平.MPIA预处理可减轻内毒素所致小鼠肝及肺组织的组织病理改变.讨论氧自由基在组织内的大量积聚并造成组织非特异损伤和脏器功能障碍与内毒素血症的发生发展有密切的关系.氧自由基攻击细胞和细胞器膜磷脂中的不饱和脂肪酸,经链式或支链式反应生成一系列脂质过氧化物,从而导致细胞和细胞器膜结构的损伤和功能紊乱.那么,MPLA是否能通过防止氧自由基损伤途径来对内毒素血症(或休克)起保护作用呢?尚未见任何报道.丙二醛(MDA)为细胞膜脂质过氧化的终产物,它的含量高低可以较好地反应氧自由基对组织细胞膜结构的损害程度.本实验结果显示MPLA预处理可显著抑制内毒素血症小鼠MDA水平,并且能明显减轻内毒素血症小鼠肝和肺组织的病理改变.结果MPLA预处理可以减少甚至完全阻断内毒素血症时氧自由基的生成,从而减轻氧自由基对组织和细胞的损伤作用,对内毒素血症小鼠起到保护作用.结论MPLA预处理可提高内毒素血症小鼠的存活率并且能抑制MDA的水平以及减轻组织病理改变.     

内毒素血症与肝脏疾病相关临床与实验研究进展

内毒素是革兰阴性细菌细胞壁中的脂多糖(LPS)组分.只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来.血中细菌或病灶内细菌释放出大量内毒素至血液,或输入大量内毒素污染的液体而引起的一种病理生理表现称作内毒素血症.内毒素血症可以导致多种肝脏疾病的产生,其发生机制比较复杂,其中Toll样受体-4(TLR4)、CD14受体及Kupffer细胞在内毒素性肝损害的发生发展中起着重要作用.近年来,对于内毒素血症和肝脏疾病的临床和实验研究有了较大进展.     

内皮素-1在大鼠肝脏冷保存不同时相的含量变化及其与肝损伤的关系*

目的研究内皮素-1在大鼠肝脏冷保存不同时相的含量变化及其与门静脉灌注压及肝损伤的关系.方法以离体鼠肝灌流为模型,用放免方法检测肝脏保存不同时间灌流液及肝脏中内皮素-1(ET-1)的变化,同时观察门静脉灌注压及肝脏功能变化,并做相关分析.结果随保存时间延长,ET-1水平呈进行性升高.ET-1与门静脉灌注压变化呈明显正相关(r=0.970,P＜0.01),与胆汁分泌量呈明显负相关(r=-0.864,P＜0.05),与灌注液AST、ALT、LDH也呈明显正相关(r=0.919,P＜0.01).结论ET-1参与并加重肝脏保存再灌注损伤,尤其对肝脏微循环的直接影响.因此ET-1很可能是形成该损伤的重要内源性致伤因子之一.     

肝脏微循环障碍在慢性乙型肝炎中的作用及其发生机制

目的 :探讨肝脏微循环障碍的发生机制及其在慢性乙型肝炎 (慢乙肝 )病情发展中的作用。方法 :40例慢乙肝患者均行肝活检 ,活检组织分别进行HE染色、免疫组化染色及电镜观察。同时常规检查肝脏功能。结果 :40例慢乙肝患者均存在不同程度的肝脏微循环障碍 ,其中 2 3例肝窦内皮细胞胞浆内可见WP小体。 40例中vWF沿肝窦壁呈阳性表达的有 2 5例 ,肝细胞内HBcAg阳性表达 17例。vWF与HBcAg同时表达者肝功能均不正常。 2 8例肝功异常者中有9例肝细胞内无HBcAg表达 ,但vWF为阳性表达。结论 :慢乙肝存在肝脏微循环障碍 ;肝脏微循环障碍可协同乙肝病毒对肝细胞的免疫损伤 ,从而影响肝脏功能 ;肝窦内皮细胞中WP小体的出现可能是导致肝脏微循环障碍的重要环节。     

肝微循环障碍在病毒所致肝损伤中作用的研究

本研究旨在探讨肝微循环障碍在病毒所致肝损伤发生中的作用。实验Ⅰ,麻疹活疫苗同时注入家兔门静脉及耳缘静脉,24小时快速放血处死,立即取肝固定送病理检查。光镜下可见小血管扩张瘀滞,红细胞粘集贴壁、纤维蛋白血小板构成之微血栓形成等严重微循环障碍的改变。同时可见肝细胞变性、小灶状坏死及GPT(血清谷丙转氨酶)等也明显升高。如先给予山莨菪碱,GPT等升高受到明显抑制。实验Ⅱ,麻疹活疫苗仅单独注入门静脉,24小时GPT并不升高,仅门脉血管对静注去甲肾上腺素的收缩反应性上升。实验Ⅲ,麻疹活疫苗仅注入耳缘静脉,24小时GPT也不升高,但血小板粘附功能增强。结果提示:(1)在病毒感染中肝血管收缩反应性上升及血小板粘附功能增强是肝微循环障碍发生的基础。(2)肝微循环障碍是病毒所致肝损伤的机理之一。(3)山茛菪碱是防治病毒性肝损伤的有效药物。     

乙酮可可碱对大鼠肝脏缺血／再灌注损伤影响的实验研究

目的探讨乙酮可可碱保护大鼠肝缺血／再灌注损伤的机制。方法采取大鼠第一肝门阻断的缺血再灌注模型,将健康雄性SD大鼠64只随机分为四组：对照组及乙酮可可碱给药组,观察每组动物的病理切片,分别检测血浆谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）以及肝组织匀浆中内皮素-1（ET-1）的含量,免疫组化测定P-选择素的表达。结果肝脏缺血／再灌注后,病理有明显的损伤改变。PTX保护组再灌注2、4h血清ALT、LDH、TNF-α和肝组织匀浆中ET-1含量与对照组相比显著降低（P〈0．01）,PTX保护组P-选择素蛋白表达显著低于对照组（P〈0．01）。结论肝脏微循环障碍是肝脏缺血／再灌注损伤的病理基础,给予PTX预处理可降低TNF-α、ET-1产生和减少P-选择素表达,从而减轻肝脏损伤。     

羟乙基淀粉130／0．4对脂多糖诱导大鼠肠系膜微循环障碍的改善作用

目的探讨羟乙基淀粉（Hydroxyethyl Starch，HES）130／0．4后投入对脂多糖诱导大鼠肠系膜微循环障碍的改善作用。方法连续输注脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）2mg／kg 60 min建立大鼠微循环障碍模型。在LPS输注30min后，经颈静脉连续输注生理盐水或HES 15 ml／（kg·h），至60min结束。用活体微循环观测技术，观察肠系膜细静脉血管内径和红细胞流速、滚动和黏附白细胞数、细静脉白蛋白漏出的动态变化和血管外周肥大细胞脱颗粒。用流式细胞仪测定大鼠外周血粒细胞黏附分子CD11b和CD18的表达。结果LPS在不影响血压的情况下，显著增加了细静脉内白细胞滚动和黏附数目、血浆白蛋白漏出和肥大细胞脱颗粒率，降低了细静脉红细胞流速。输注HES，可以明显改善LPS诱导的上述变化。结论HES后投入可以明显改善LPS引起的微循环障碍。     

夏至草醇提物对急性微循环障碍大鼠一氧化氮及其合酶的影响

目的:观察夏至草醇提物对高分子右旋糖苷(Dextran 500)致急性微循环障碍大鼠一氧化氮(NO)及其合酶(NOS)的影响。方法:Wistar雄性大鼠20只,随机分为夏至草组(n=8)、模型组(n=6)和对照组(n=6)。静注10%Dextran500(10ml/kg.bw)复制急性微循环障碍模型(对照组以等量生理盐水代替)。6min后,夏至草组自颈静脉缓慢推注夏至草醇提物(5g/ml,6g/kg.bw),其它两组以等量生理盐水代替。40min后,制备肝、肾、心肌、肺组织匀浆,观察组织匀浆NO含量及NOS活性的变化。结果:模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆NO含量及NOS活性均显著高于对照组(P<0.01);夏至草组各器官组织匀浆NO含量及NOS活性显著低于模型组(P<0.01),除肝匀浆NO含量及心肌匀浆NOS活性高于对照组外,其它各指标与对照组均无统计学差异。结论:夏至草醇提物减轻Dextran 500致急性微循环障碍大鼠器官损伤的机制与降低NO的生成与释放有关。     

夏至草醇提物对急性微循环障碍大鼠器官损伤的干预作用

目的:观察夏至草醇提物对高分子右旋糖苷(Dextran500)致急性微循环障碍大鼠器官损伤的影响。方法:Wistar雄性大鼠20只,随机分为夏至草组(n=8)、模型组(n=6)和对照组(n=6)。前二组静注10%Dextran500(10ml/kg体重)复制急性微循环障碍模型(对照组以等量生理盐水代替)。6min后,夏至草组自颈静脉缓慢推注夏至草醇提物(5g/ml,6g/kg体重),其它两组以等量生理盐水代替,监测平均动脉血压(MAP)。40min后,制备血清,进行血液生化指标检测;制备病理切片,观察肺、肝、肾、心肌形态学变化。结果:与对照组相比,模型组血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cre)、乳酸脱氢酶-1(LDH-1)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平显著升高,MAP下降;与模型组相比,夏至草组血清AST、ALT、BUN、Cre、LDH-1、CK-MB水平显著降低,MAP升高。组织形态学显示,对照组肝、肾、肺、心肌结构正常,模型组各器官病变较重,多见红细胞瘀滞、血栓形成及坏死,夏至草组病变较轻,未见坏死。结论:夏至草醇提物能明显减轻Dextran500致急性微循环障碍大鼠各器官功能障碍与组织学损伤。     

夏至草醇提物对急性微循环障碍大鼠自由基损伤的影响

目的观察夏至草醇提物对高分子右旋糖苷(Dextran 500)致急性微循环障碍大鼠器官自由基损伤的影响。方法Wistar雄性大鼠20只,随机分为夏至草组(n=8)、模型组(n=6)和对照组(n=6)。静注10?xtran 500(10 ml/kg.bw)复制急性微循环障碍模型(对照组以等量生理盐水代替)。6 min后,夏至草组自颈静脉缓慢推注夏至草醇提物(5 g/ml,6 g/kg.bw),其它两组以等量生理盐水代替。40 min后,制备肝、肾、心肌、肺组织匀浆,观察组织匀浆自由基指标的变化。结果与对照组相比,模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆MDA含量显著升高,SOD活性降低;夏至草组各器官组织匀浆MDA含量显著低于模型组,SOD活性升高,除心肌组织匀浆SOD活性低于对照组外,其它各指标与对照组均无统计学意义。结论夏至草醇提物能明显减轻Dextran 500致急性微循环障碍大鼠的自由基损伤。     

Intralobular heterogeneity of carbon tetrachloride-induced oxidative stress in perfused rat liver visualized by digital imaging fluorescence microscopy

Spatial and temporal alterations in carbon tetrachloride-induced oxidative stress were studied in perfused hepatic microcirculatory units of the rat by digital imaging microscopic fluorography using dichlorofluorescin diacetate, a hydroperoxide-sensitive fluorogenic probe. The surface of the liver loaded with dichlorofluorescin was microscopically visualized, and the fluorescence of dichlorofluorescin (DCF), a highly fluorescent molecule generated by hydroperoxide-mediated oxidation of dichlorofluorescin, was digitally processed. After completing the experiments, fluorescein-labeled albumin was injected into the perfusate to confirm the state of sinusoidal perfusion and the topography of hepatic microangioarchitecture in the area studied. During transportal infusion of carbon tetrachloride, DCF fluorescence was observed predominantly in the pericentral area and was attenuated by pretreatment with SKF-525A, suggesting the involvement of cytochrome P-450. After peaking at the maximum level, the pericentral DCF fluorescence gradually decreased in parallel to the loss of viability, implicating the causal role of intracellular hydroperoxide formation in hepatocellular injury. In retrogradely perfused liver, in which intralobular O2 gradient was reversed, no significant activation of DCF fluorescence was observed among hepatic lobules. It is therefore conceivable that the zonal heterogeneity of carbon tetrachloride-induced lipid peroxidation may depend on at least two factors, sinusoidal oxygenation and the intralobular distribution of cytochrome P-450. Furthermore, development of the current technique will provide a useful method to investigate the microtopography of oxidative stress in organ microcirculatory units.     

Ischemic preconditioning increases the tolerance of Fatty liver to hepatic ischemia-reperfusion injury in the rat

Hepatic steatosis is a major risk factor in ischemia-reperfusion. The present study evaluates whether preconditioning, demonstrated to be effective in normal livers, could also confer protection in the presence of steatosis and investigates the potential underlying protective mechanisms. Fatty rats had increased hepatic injury and decreased survival after 60 minutes of ischemia compared with lean rats. Fatty livers showed a degree of neutrophil accumulation and microcirculatory alterations similar to that of normal livers. However, in presence of steatosis, an increased lipid peroxidation that could be reduced with glutathione-ester pretreatment was observed after hepatic reperfusion. Ischemic preconditioning reduced hepatic injury and increased animal survival. Both in normal and fatty livers, this endogenous protective mechanism was found to control lipid peroxidation, hepatic microcirculation failure, and neutrophil accumulation, reducing the subsequent hepatic injury. These beneficial effects could be mediated by nitric oxide, because the inhibition of nitric oxide synthesis and nitric oxide donor pretreatment abolished and simulated, respectively, the benefits of preconditioning. Thus, ischemic preconditioning could be an effective surgical strategy to reduce the hepatic ischemia-reperfusion injury in normal and fatty livers under normothermic conditions, including hepatic resections, and liver transplantation.     

肝脏缺血再灌注损伤与肝微循环变化

肝脏缺血再灌注见于许多临床疾病和手术过程中。肝缺血再灌注时,肝脏组织细胞发生一系列代谢、结构和功能的损伤,甚至导致肝功能衰竭,是影响疾病预后、手术成败和病人存活的主要因素之一。因此研究肝缺血再灌注损伤和防治具有重要的临床意义。目前有关常温肝缺血再灌注损伤与肝微循环变化的关系有待研究,本实验对此进行初步观察,为防治肝缺血再灌注损伤提供理论依据。１　材料与方法１．１　动物模型与分组健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠,雌雄兼用,体重２００～２５０ｇ。禁食１２ｈ后,腹腔注射３％戊巴比妥钠３００ｍｇ／ｋｇ（体重）施行麻…     

急性DIC时皮肤及内脏微循环血流量的变化

健康大耳白兔26只。用激光多普勒血流计测定皮肤与肾脏、肝脏、胃、空肠及结肠表面微循环血流量,随机分为三组:急性DIC组(n=10)、山莨菪碱治疗组(n=10)和对照组(n=6)。以凝血酶(60u/kg)加氨基乙酸(0.4克/kg)静脉输注1小时复制急性DIC模型,实验30、60、120分钟测定上述脏器表面微循环血流量变化。结果急性DIC组皮肤与肾、肝、胃、空肠及结肠微循环血流量在120分钟均较对照组明显降低,三组动物皮肤微循环血流量的变化与上述内脏表面微循环血流量的变化呈高度正相关。结果提示急性DIC时及山莨菪碱治疗后皮肤微循环血流量的动态变化可间接反映肾、肝、胃肠道微循环血流量的变化。