大肠埃希菌O157:H7志贺毒素Ⅱ变种的分布

目的 了解徐州地区E.coli O157：H7分离菌析Stx2毒素变种Stx2vha在人及畜禽中的携带分布情况。方法 用特异性探针Southern杂交检测菌株中是否携带Stx2vha毒素变种。结果 66株分离株中35株为Stx2vha毒素变种阳性，占53%，13株为Stx2原互不素阳性，占19.7%，17株为Stx2毒素阴性，占25.8%，另有1株不同于其它菌株是否可为新的毒素变种需进一步确证。35株Stx2vha毒力基因菌株是徐州地区O157：H7菌株的优势菌型，主要宿生动物为羊。     

2株不同产志贺毒素大肠埃希菌O157感染症一例

患儿 ,男 ,2 0 0 1年 2月 2 0日出生 ,发育正常 ,于 12月 6日开始出现灰白色水样腹泻 (6～ 8次 2 4h ,未见血性腹泻 )、肠鸣、呕吐、厌食等症状 ,无溶血性尿毒综合征 ,体温正常 ,病前有食用牛奶和水果史。采用血清学和生物化学方法 ,12月8日采集患儿粪便标本 (1ml)增菌培养。增菌培养物经大肠埃希菌 (E .coli)O15 7免疫色层技术 (E .coliO15 7快检金卡 ,郑州博赛生物技术研究所和美国BINAX公司产品 )检测 ,中国和美国的两种检测卡均显强阳性 ,增菌培养液浸至检测线区域即呈现出比照线粗且颜色更深的阳性线 ,随后取增菌培养物和免疫磁珠…     

浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7的分子生物学特性研究

目的:了解自浙江省杭州市腹泻婴儿中分离的1株大肠埃希菌O157:H7(HZ1-11株)的分子生物学特性.方法:应用ATB1525细菌半动化生化鉴定系统鉴定菌种.应用O157特异性抗血清玻片凝集试验、H7特异性抗血清试管凝集试验、以及PCR检测O抗原特异性rfbE基因和H7特异性fliC基因,进行菌株血清型的鉴定.应用多重Real-timePCR和常规PCR检测stx1、stx2、hly和eae毒力基因.对菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,并与国内代表菌株进行比较.ATB1525药敏检测仪和纸片法检测菌株的抗药性.结果:细菌生化鉴定为大肠埃希菌,山梨醇阴性.血清型为O157:H7.毒力基因stx2、hly和eae均阳性,stx1阴性.PFGE谱带同江苏分离O157:H7菌株几乎完全相同,带型的相似度为97%.结论:该菌株为浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)O157:H7,与国内近年在江苏等地流行的STECO157:H7菌株密切相关.STEC O157:H7已开始对浙江地区的人民健康构成了威胁.     

PCR-RFLP方法对江苏省110株产志贺毒素大肠埃希菌O157分型研究

摘要:目的 优化PCR-RFLP方法,对不同年份不同来源的志贺毒素大肠埃希菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli, STEC）O157进行分子流行病学探索。方法 应用多聚酶链反应(PCR)一限制性片段长度多态性(restriction fragment length Polymorphism,RFLP) 分析技术比较病人来源菌株的EcoRV 和BglI 2种酶酶切图谱,对江苏省110株STEC O157菌株进行分型分析和聚类分析。结果:BglI酶切图谱条带少,图谱清晰明确。110株STEC O157菌株呈现遗传多态性,可分为15个RFLP型别,其中优势型别在不同年份、不同来源标本中都能检出。结论 STEC O157的PCR-RFLP分型推荐用限制性内切酶BglI,江苏省分离的STEC O157菌株具有遗传多样性。     

应用高分辨率熔解曲线技术检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c

目的:探索高分辨率熔解曲线(High Resolution Melting,HRM)分析技术在检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c中的应用。方法:用HRM技术对20株O157:H7代表性菌株志贺毒素2基因进行分型,并与测序结果进行比较。结果:20份O157:H7样品中有3种类型熔解曲线。测序结果显示,12例A型熔解曲线中除1例为stx2a+stx2c杂合型外,其它均为原毒素基因型stx2a;1例B型熔解曲线测序结果为stx2a+stx2c杂合型,7例C型熔解曲线菌株测序结果均为stx2c纯合子。结论:HRM技术简便、快速,可作为志贺毒素2基因变种stx2c的检测方法。     

自食品中检出肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希菌

肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希菌 (Entericshiga -“Like -toxin -producingandinvasiveE .coli,ESIEC)是 1993年中国预防医学科学院流研所徐建国等首次报道的一种新的腹泻病原菌。因其分离的大肠杆菌与侵袭性大肠杆菌特异探针(Inv)和志贺样毒素 (SLT1 、SLT2 )探针同时发生阳性反应 ,国际上未见有此菌株的报道 ,因此认为本菌为第六种致泻性大肠埃希氏菌 ,并将其命名为ESIEC。流研所检测的 172株不能鉴定的大肠杆菌中 ,ESIEC占 3 1.4% [1 ] 。我国已有粪便标本中检出本菌的报道[4 ] ,在食品中的分布情况尚不清楚。毒力岛(P…     

不同来源产志贺毒素大肠埃希菌分布特征

目的探讨不同标本中产志贺样毒素大肠埃希菌（STEC）的分布特征。方法采集动物粪便、肉类食品和排污口污泥样品，常规分离大肠埃希菌，血清学分型，PCR鉴定产志贺样毒素（stx1，stx2）菌株。结果293份标本中鉴定出8株STEC，1株为产志贺毒素O157：H7型，2株为不产志贺毒素O157：H7型，5株为产志贺毒素非O157：H7型。结论STEC存在于不同来源的标本中，菌株表型与毒力因子存在一定差异。     

进口冷冻肉制品O157：H7大肠埃希菌调查分析

目的：对进口冷冻肉制品O157：H7大肠埃杀菌进行检测。方法：用Binax试剂进行筛选。结果：从174份进口冷冻肉制品中检出4株O157：H7大肠埃希菌,分离率为2．3％,结论：该分离株发酵山梨醇,不具溶血素和志贺样毒素基因,但仍具毒力,41℃增菌培养能抑制杂菌,可提高检出率。     

浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌0157：H7的分子生物学特性研究

目的：了解自浙江省杭州市腹泻婴儿中分离的1株大肠埃希菌O157：H7（HZI-11株）的分子生物学特性。方法：应用ATB1525细菌半动化生化鉴定系统鉴定菌种。应用0157特异性抗血清玻片凝集试验、H7特异性抗血清试管凝集试验、以及PCR检测O抗原特异性rfbE基因和H7特异性fliC基因，进行菌株血清型的鉴定。应用多重Real-time PCR和常规PCR检测stx1、stx2、hly和eae毒力基因。对菌株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型，并与国内代表菌株进行比较。ATB1525药敏检测仪和纸片法检测菌株的抗药性。结果：细菌生化鉴定为大肠埃希菌，山梨醇阴性。血清型为O157：H7。毒力基因stx2、hly和eae均阳性，stx1阴性。PFGE谱带同江苏分离O157：H7菌株几乎完全相同，带型的相似度为97％。结论：该菌株为浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）O157：H7。与国内近年在江苏等地流行的STEC O157：H7菌株密切相关。STEC O157：H7已开始对浙江地区的人民健康构成了威胁。     

我国部分产生志贺毒素肠出血性大肠埃希菌O157：H7脉冲电场凝胶电泳分型

目的 探讨我国部分地区产生志贺毒素的肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7菌株的分布，流行以及分型情况。方法 用脉冲电场凝胶电泳（PFGE）方法进行分型，辅以药物敏感性试验对51株产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株进行研究。结果 根据细菌染色体DNA的XbaI酶切图谱，可将从江苏省徐州市等地分离的51株产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株分成8个PFGE型别（PFGE1-PFGE8），宁夏菌株为PFGE1型和2型，徐州菌株有6个PFGE型，1986-1988年的分离菌株属于PFGE7型，1999、2000年病人分离株的优势型别分别是PFGE5型与3型，1999年爆发性流行期间从患者分离的5株菌属于PFGE5型，从家畜家禽的粪便，食品，蔬菜等标本分离的19株菌，可以分为PFGE3-6等4个型别，其中，PFGE5型占优势（10株菌）。结论 爆发性流行的发生与携带病原菌的家畜家禽粪便污染的食品，蔬菜等有关，从我国部分地区分离的EHECO157：H7菌株的PFGE型别有地区性差异。     

非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株脉冲场凝胶电泳分析

目的 对国内不同宿主来源的非0157产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析，以初步建立中国非0157 STEC菌株的基础数据库，了解其分子流行病学特征。方法 参照PulseNet非0157 STEC的PFGE实验方法对76株非0157 STEC分离株进行分析，并使用BioNumerics软件进行聚类。结果 在PulseNet推荐的电泳参数和内切酶XbaI情况下，菌株酶切片段分布均匀，条带易于识别。76株非0157 STEC分离株产生62种PFGE带型，初步聚类为A～M 13个群，不同来源菌株的PFGE带型分布广泛，但均具有某些优势的PFGE聚类群。结论 国内不同来源的非0157 STEC呈高度多态性，PulseNet推荐的PFGE电泳参数和内切酶XbaI适用于中国非0157 STEC菌株的分析。     

2007年浙江省衢州地区动物中产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7感染状况

目的:了解2007年浙江省衢州地区产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7在动物中的分布情况及其耐药性、PFGE分型及毒力基因携带状况。方法:按全国O157:H7监测方案于5~10月份肠道传染病高发季节,在衢州地区采集各种动物粪便/肛拭,用免疫磁珠富集后进行O157:H7分离培养、鉴定,可疑菌株以PCR法检测O、H抗原及志贺样毒素(SLT1和SLT2)、粘附抹平因子(eaeA)及溶血素(hly)4种毒力基因。用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行同源性分析,同时选择14种抗生素进行药敏试验,分析分离所得菌株的耐药状况。结果:共监测动物粪便标本300份,分离得产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7菌株16株,分离率为5.33%。16株O157:H7菌株,毒力基因Hly、eaeA、SLT2均阳性,SLT1均阴性。脉冲场凝胶电泳分型显示,16株O157:H7菌株可分2个PFGE基因型,型间差异较小。耐药性分析显示这些菌株对红霉素、利福平的耐药率最高,达100.0%,对其他受试抗生素均敏感。结论:该地区动物中产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7带菌率较高,所分离菌株主要携带SLT2基因,因此推测该地区存在发生产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7感染暴发或流行的潜在危险,需增加对动物源性O157:H7的监测力度。     

进口冷冻肉制品O157∶H7大肠埃希菌调查分析

目的 :对进口冷冻肉制品O15 7∶H7大肠埃希菌进行检测。方法 :用Binax试剂进行筛选。结果 :从174份进口冷冻肉制品中检出 4株O15 7∶H7大肠埃希菌 ,分离率为 2 .3%。结论 :该分离株发酵山梨醇 ,不具溶血素和志贺样毒素基因 ,但仍具毒力。 41℃增菌培养能抑制杂菌 ,可提高检出率     

从海产品中检出大肠埃希菌O157:H7

目的：调查南京市饮食行业海鲜类食品受大肠埃希菌O157：H7污染的状况。方法：随机采取南京市各大宾馆的海水产品，进行大肠埃希菌O157：H7的检测，进行常规生化和血清学、毒力基因的PCR检测。结果：从一份文蛤样品中成功分离到了1株大肠埃希菌O157：H7。结论：提示我们该菌的宿主范围比较广，须引起高度重视，加强防范，遏止其流行势头。     

与志贺菌和大肠埃希菌O157诊断血清交叉凝集反应细菌的分离和鉴定

目的 了解食品中能与志贺菌、大肠埃希菌O157发生交叉凝集的细菌,为防止误诊提供参考.方法 采用染色形态鉴别、血清学及生化等方法进行检测.结果 对食品风险监测205件样品中检出2种(3株)肠道杆菌能与志贺菌、大肠埃希菌O157诊断血清交叉凝集.结论 肠杆菌科、弧菌科某些种属细菌可携带与志贺菌、大肠埃希菌O157相同或相关抗原,故在鉴定这些杆菌时除依血清学外,还应加用生化试验等检测作出最后判定.     

1株大肠埃希菌O157：H45的鉴定

2000年8月,我们用免疫磁珠法(IMS)对动物粪便分离O157:H45调查中,从鸭粪中分离出1株大肠埃希菌O157:H45菌株.     

从农村耕牛粪便中检出产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7

目的：调查东阳市家畜、家禽中O157：H7的携带状况,并进一步了解分离到的1株STEC O157：H7的分子生物学特性。方法：随机采集全市各乡镇的家畜、家禽粪便及其生鲜肉样品,进行大肠埃希菌O157：H7的检测,应用O157和H7特异性抗血清凝集试验进行菌株血清型的鉴定;选用ATB全自动微生物鉴定仪和VITEK 2-COMPACT进行常规生化及药敏试验;使用PCR检测O、H抗原编码基因和SLTl、SLT2、hly、eaeA 4种毒力基因。结果：在109份样品中,分离出1株经细菌生化鉴定为大肠埃希菌O157,血清型为O157：H7的菌株;使用PCR检测到O157：H7的O、H抗原编码基因和毒力基因SLT2、hly、eaeA,但未检测到毒力基因SLTl。结论：从东阳市的一头农村耕牛粪便中分离到1株STEC O157：H7,提示疾控中心要加强主动监测,及时发现可能发生的疫情,通过有效干预,防范肠出血性大肠杆菌O157：H7所致食源性疾病的发生。     

山东省2000年大肠埃希菌O157动物宿主带菌调查

我们在 2 0 0 0年 5～ 10月选择枣庄市 ,金乡、郯城两个县对部分医院肠道门诊病人及家畜、家禽等动物进行粪便采样监测 ,现将动物带菌情况报道如下。1.材料与方法 :①检测点的选择与标本采集 :在枣庄市台儿庄区、金乡县及郯城县选择 2 0个乡镇、2 6个自然村 ,入户采集牛、羊、猪、鸡等新鲜粪便 2～ 3g直接接种到 18ml的EC肉汤中 ,送实验室 37℃ 6h增菌。②实验材料 :培养基为EC肉汤、山梨醇麦康凯琼脂、麦康凯琼脂 ,由北京陆桥公司生产 ;CHROMagarO15 7显色琼脂由法国CHROMagar公司生产 ,生化反应培养基按常规方法制备并应用。③实验…     

大肠埃希菌O157∶H7携带stx2::IS1203v基因研究

目的了解中国部分地区大肠埃希菌O157：H7菌株携带志贺毒素基因变异状况。方法采用聚合酶链反应扩增志贺毒素基因，使用核苷酸序列测定判断是否存在志贺毒素的新变种，用HeLa细胞毒性实验研究其细胞毒性的变化。结果1992—2002年中国部分地区分离到的289株产志贺毒素的大肠埃希菌O157：H7中有3株菌携带的志贺毒素2（stx2）基因有1．3kb的插入序列（IS）插入，且这段IS和IS1203变种（IS1203 variant，IS1203v）有100％的核苷酸序列同源性。IS1203v插入到3株大肠埃希菌O157：H7 stx2基因的位置及开放性读码框（ORF）方向有所不同。除此之外，3株菌原有的stx2基因序列完全一致且为Stx2原型毒素。和Stx2原型毒素相比，这3株携带stx2：：IS1203v基因的菌株对HeLa细胞的毒性明显降低。结论分离到IS1203v插入stx2基因的大肠埃希菌O157：H7菌株；IS1203v的插入可导致对HeLa细胞的细胞毒性降低。     

方阵式PCR在大肠埃希菌O157检测中的成本效益分析

目的:探讨一种检测O157的经济适用的检测方法。方法:把100个待检样品排成10×10方阵,对方阵中的每排,每列样品混合为一个新的样品,对混合样品进行O157的PCR检测。结果:PCR与方阵相结合,比传统检测方式节省约80%的检测成本,而且能快速准确定位目的菌。结论:PCR与方阵相结合是一种经济有效的检测方法,值得在大样本量的检测工作中推广。