免疫球蛋白kappa轻链基因在鼻咽癌中表达的初步研究

目的：为了探讨Ｉｇｋ是否参与了鼻咽癌的癌变过程及可能机制，对Ｉｇｋ在鼻咽癌中的表达进行了研究，并初步探讨Ｉｇｋ与ＥＢ病毒潜伏膜蛋白基因ＬＭＰ－１在鼻咽癌中的相关性。方法：分别运用原位杂交技术和免疫组化技术检测鼻咽癌活检组织中Ｉｇｋ的ＲＮＡ和蛋白质水平的表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析两株鼻咽癌细胞系（ＣＮＥ１和ＣＮＥ＿ＣＭＰ）ｋａｐｐａ蛋白的表达及强度差异。结果：原位杂交技术显示１００％（４２例／４２     

新疆汉族和维吾尔族鼻咽癌组织的PCR和免疫组化检测比较

目的：了解新疆汉族维吾尔族（维）族鼻咽癌（ＮＰＣ）发病因素的差别。方法：用ＰＣＲ与免疫组化技术对７３例ＮＰＣ组织（汉族４１例,维族３２例）分别进行ＥＢ病毒脱氧核糖核酸（ＥＢＶ－ＤＮＡ）、ＥＢ病毒核抗原（ＥＢＮＡ２）、潜伏膜蛋白（ＬＭＰ－１）检测。     

γ—干扰素对喉癌细胞株HEP—2增殖活性的影响

用单克隆抗体Ｋｉ－６７（抗ＰＣＮＡ），以链霉菌素－生物素技术（ＬＳＡＢ）检测喉癌细胞株ＨＥＰ－２增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达。人重组γ－干扰素（ｒｈｕ－ＩＦＮ－γ）抑制ＰＣＮＡ表达（即抗增殖活性）强弱与其剂量有关；雌激素对ｒｈｕ－ＩＦＮ－γ抗增殖作用无影响。提示：ｒｈｕ－ＩＦＮ－γ对喉癌细胞株ＨＥＰ－２有抗增殖作用，因而在喉癌的治疗中具有应用价值的。     

MDM 2基因在鼻咽癌中的表达及其与p53蛋白表达、EB病毒潜伏感染的关系

目的：探讨ＭＤＭ２基因在鼻咽癌（ＮＰＣ）中的表达情况及其与ｐ５３蛋白表达、ＥＢ病毒（ＥＢＶ）潜伏感染的关系。方法：运用非同位素原位杂交、免疫组化和多聚酶链反应技术对４６例ＮＰＣ、１２例慢性鼻咽炎症粘膜（ＣＩＮＥ）分别进行ＭＤＭ２ｍＲＮＡ、ＭＤＭ２蛋白、ｐ５３蛋白及ＥＢＶ－ＤＮＡ的检测。结果：４６例ＮＰＣ中,１４例ｍＲＮＡ及ＭＤＭ２蛋白高表达,３８例为ｐ５３蛋白阳性,４３例为ＥＢＶ－ＤＮＡ阳性,１２     

人疱疹病毒6型对EB病毒复制影响的研究

目的 探讨人疱疹病毒６型（ＨＨＶ－６）对ＥＢ病毒（ＥＢＶ）复制的影响。方法 用ＨＨＶ－６感染Ｒａｊｉ细胞和ＥＢＶ转化的淋巴细胞（ＬＣＬ），并用抗ＨＨＶ－６单克隆抗体（ＭＡｂ）作免疫萤光分析（ＩＦＡ）确定ＨＨＶ－６已感染这二种细胞。用抗ＥＢＶ人血清作ＩＦＡ观察ＥＢＶ抗原表达。结果 ＨＨＶ－６感染Ｒａｊｉ细胞后可见细胞病变效应（ＣＰＥ）；而ＬＣＬ未见ＣＰＥ。这二种细胞株用抗ＨＨＶ－６的ＭＡｂ作ＩＦＡ均     

一氧化氮在豚鼠耳蜗作用的实验研究

为探讨ＮＯ在内耳的作用，采用外淋巴给药途径，观察一氧化氮气体（ＮＯ）、Ｌ－精氨酸、硝普钠及一氧化氮合酶（ＮＯＳ）拮抗剂Ｎ－甲基－Ｌ－精氨酸对耳蜗蜗内电位（ＥＰ）、复合动作电位（ＣＡＰ）及耳蜗微音器电位（ＣＭ）的影响。结果表明，Ｎ－甲基－Ｌ－精氨酸可以使ＥＰ减小５０％，ＣＡＰ振幅降低３３％及ＣＭ振幅略有降低，在此基础上，用Ｌ－精氨酸外淋巴灌流可以逆转Ｎ－甲基－Ｌ－精氨酸所致的改变。ＮＯ持续外淋巴缓释能使Ｎ－甲基－Ｌ－精氨酸导致的ＥＰ、ＣＡＰ及ＣＭ的改变恢复，并超过正常，随之出现快速下降。外淋巴灌流硝普钠后，ＥＰ、ＣＡＰ及ＣＭ短暂升高后逐渐下降，并维持在较低水平。ＣＡＰＮ１波及ＣＭ潜伏期的变化规律与其振幅的变化规律基本一致。结果提示，ＮＯ在生理条件下维持内耳功能，可能参与耳蜗毛细胞微机械特性及敏感性的调节，过量表达可以产生耳蜗毒性     

EB病毒反义LMP1基因对人低分化鼻咽癌CNE－3细胞株生长的抑制作用

为研究鼻咽癌基因治疗的可能性，应用ＥＢ病毒反义ＬＭＰ１基因的重组逆转录病毒载体，用ＰＡ３１７细胞包装成假型逆转录病毒，免疫荧光检查该病毒能明显抑制Ｂ９５－８细胞内ＥＢ病毒的激活，抑制率达７１％。用此病毒成功地感染了人低分化鼻咽癌ＣＮＥ－３细胞株，使ＣＮＥ－３细胞生长速率下降约７０％，软琼脂集落形成和裸鼠致瘤能力均明显下降。用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实转染的肿瘤组织细胞中有较高水平的ｐＺＩＰ载体ｎｅｏ基因存在，证实了ＥＢ病毒反义ＬＭＰ基因能有效地抑制人低分化鼻咽癌ＣＮＥ－３细胞的生长和裸鼠致瘤能力，为鼻咽癌的基因治疗提供了实验依据。     

人疱疹病毒6型对EB病毒复制影响的研究

目的探讨人疱疹病毒６型（ＨＨＶ６）对ＥＢ病毒（ＥＢＶ）复制的影响。方法用ＨＨＶ６感染Ｒａｊｉ细胞和ＥＢＶ转化的淋巴细胞（ＬＣＬ），并用抗ＨＨＶ６单克隆抗体（ＭＡｂ）作免疫萤光分析（ＩＦＡ）确定ＨＨＶ６已感染这二种细胞。用抗ＥＢＶ人血清作ＩＦＡ观察ＥＢＶ抗原表达。结果ＨＨＶ６感染Ｒａｊｉ细胞后可见细胞病变效应（ＣＰＥ）；而ＬＣＬ未见ＣＰＥ。这二种细胞株用抗ＨＨＶ６的ＭＡｂ作ＩＦＡ均检出ＨＨＶ６，而对照组未检出ＨＨＶ６；用抗ＥＢＶ人血清作ＩＦＡ，感染ＨＨＶ６的二种细胞中均检出ＥＢＶ抗原。结论ＨＨＶ６促进了ＥＢＶ抗原表达，并提示在鼻咽癌的发生中ＨＨＶ６和ＥＢＶ可能起协同致病作用。     

NOS抑制剂对面神经损伤后运动神经元胞体凋亡的观察

目的：应用一氧化氮合酶（ＮＯＳ）竞争性抑制剂Ｌ－Ｎ＾ω－硝基精氨酸甲酯（Ｌ－ＮＡＭＥ）减少面神经损伤后一氧化氮（ＮＯ）的产生量,以探讨一氧化氮合酶抑制剂在面神经损伤后对面神经运动神经元的作用。方法：选用豚鼠４０只,手术方法制作面了断的豚鼠模型,随机分为两组,在再生内分别施加Ｌ－ＮＡＭＥ和生理盐水（ＳＡＬ）,运用光镜和透射电镜对面神经运动神经元（ＦＭＮｓ）形态学的变化进行定性,定量观察。结果：抑制剂     

畸变产物耳声发射对侧抑制效应的研究

利用ＩＬＯ９２耳动态分析仪，测试２３例（４６耳）正常青年人的畸变产物耳声发射（ＤＰＯＡＥ）和对侧窄带噪声（ＮＢＮ）的影响。结果：（１）对侧ＮＢＮ对ＤＰＯＡＥ的抑制非常明显，随ＮＢＮ强度增加ＤＰＯＡＥ幅值下降增加，二者呈显著负相关（Ｆ２为１～６ｋＨｚ，γ为－０．４９～－０．２４，均Ｐ〈０．０５，斜率０．２６～０．０８ｄＢ／１０ｄＢ）。（２）在Ｆ２为中频（１．２ｋＨｚ）且为中等强度（４５～６５ｄＢＳＰ     

MiR-155 up-regulation by LMP1 DNA contributes to increased nasopharyngeal carcinoma cell proliferation and migration

Regulation of oncogenic or tumor-suppressive microRNAs expression by Epstein–Barr virus (EBV) and the correlation of EBV with the nasopharyngeal carcinoma (NPC) have cast new light on the cause of NPC. The present study is to determine the association of miR-155 with EBV-positive NPC, and to evaluate the oncogenic role of miR-155 in cell proliferation, migration and invasion of NPC cells. The miR-155 expression was determined by real-time RT-qPCR; The oncogenic promotion of miR-155 was evaluated by by cell colony formation assay, proliferation assay, scratch assay and transwell migration assay. It showed that miR-155 expression was up-regulated in EBV-positive NPC tissue samples and was correlated with plasma LMP1 DNA copies. Expression of miR-155 was also up-regulated in NPC cell lines post-transfecting with LMP1-expressing plasmid. Up-regulated miR-155 stimulated the capability of NPC cell proliferation, colony formation, cell migration and invasion. Therefore, miR-155 is up-regulated in NPC tissues, with a correlation with plasma LMP1 DNA copies, and is significantly induced in NPC cells by LMP1 in vitro. The oncogenic miR-155 promotes NPC cell proliferation, migration and invasion significantly in vitro.     

鼻咽癌细胞6-10B和HNE2放疗敏感性的分析

 目的通过对比鼻咽癌细胞6 10B和HNE2的放疗敏感性，为临床鼻咽癌不同分期放射治疗提供依据。方法鼻咽癌细胞6-10B和HNE2用于放疗敏感性实验检测，通过集落形成实验检测细胞对放疗的敏感程度、流式细胞术检测细胞周期、流式细胞术与Western blot检测细胞凋亡、免疫荧光结合Westen blot检测DNA损伤标志物γ H2AX表达水平。结果集落形成实验结果初步看出HNE2（IC50约3.5 Gy）对放疗的敏感性强于6-10B（IC50约5 Gy）；细胞周期结果可以发现放疗后，两株细胞均出现G2M期周期阻滞；HNE2细胞放疗引起的DNA损伤和凋亡水平均高于6-10B。结论鼻咽癌细胞HNE2对放疗的敏感性强于6-10B，为鼻咽癌的不同分期治疗提供临床参考。     

Epstein-Barr virus (EBV) latent membrane protein 1 induces interleukin-8 through the nuclear factor-kappa B signaling pathway in EBV-infected nasopharyngeal carcinoma cell line

BACKGROUND/OBJECTIVES: Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is a highly invasive and metastatic malignant tumor and is associated with Epstein-Barr virus (EBV) infection that exhibits type II latency. Angiogenesis is essential for tumor growth, invasion, and metastasis. Our previous studies have indicated that interleukin (IL)-8 was over-expressed in many NPC tissues and was found to be significantly correlated with angiogenesis by immunohistochemistry. STUDY DESIGN: In vitro design. METHODS: The influence of the EBV genome for IL-8 gene expression was studied using the EBV-genome-positive and -negative epithelial/NPC hybrid cell line NPC-KT. The EBV-positive and -negative clones were selected by polymerase chain reaction and in situ hybridization. RESULTS: EBV-positive clones expressed abundant IL-8 mRNA compared with EBV-negative clones. This result indicated that over-expression of IL-8 depended on the presence of EBV genomes in NPC-KT cells. Two encoded genes, latent membrane protein (LMP)1 and EBV-encoded small RNAs (EBERs), expressed in NPC were transfected in EBV-negative NPC-KT cells. LMP1 transactivated the IL-8 promoter, whereas EBERs did not. Moreover, the nuclear factor (NF)-kappa B binding site in the IL-8 promoter was essential for the response to LMP1, and the activator protein (AP)-1 binding site played only a partial role. CONCLUSIONS: LMP1 induces IL-8 mainly through the activation of NF-kappa B and partly through AP-1 in NPC model cell lines, NPC-KT, and this suggests that LMP1 plays an important role in the angiogenesis of NPC.     

鼻咽癌HNE1细胞株端粒酶的表达

目的探讨鼻咽癌HNE1细胞株端粒酶的表达.方法采用TRAPPCRELISA法检测人HNE1、白血病HL60、肺癌TUL1、正常骨髓细胞2例、培养的外周血单个核细胞及人血管平滑肌细胞株中端粒酶的表达.结果人HNE1,HL60及TUL1细胞株中端粒酶均为阳性表达;其余3种正常对照组细胞全部为阴性.HNE1细胞株热灭活后的端粒酶活性均为阴性,而在102个HNE1细胞中亦能检测到端粒酶活性.结论端粒酶在鼻咽癌HNE1细株中具有高表达.端粒酶活性测定具有较高的特异性及灵敏度.     

EB病毒潜伏膜蛋白2A诱导细胞毒性T细胞抗鼻咽癌的体内外实验

目的观察EB病毒（Epstein—Barr virus，EBV）-潜伏膜蛋白2A（1atent membrane protein2A，LMP2A）转染人树突状细胞（dendritic cell，DC）诱导特异性细胞毒性T细胞（cytotoxicity T lymphocyte，CTL）的体外生物学特性；建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型，探讨LMP2A特异性CTL在荷瘤鼠体内的抗肿瘤效应。方法分离人外周血单核细胞（pripheral blood mononuclear cell，PBMC），以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte—monocyte colony stimulating factor，GM—CSF）、白细胞介素4（interleukin-4，IL4）及肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF—α）诱导培养获得DC，荧光激活细胞分选仪（fluorescence activated cell sorter，FACS）检测成熟DC的表面分子表达。用LMP2A重组腺病毒转染成熟DC，将转染DC与自体PBMC混合培养，在白细胞介素2（interleukin-2，IL-2）作用下诱导针对LMP2A的特异性CTL，FACS检测CTL群体中阳性细胞的组成。将鼻咽癌CNE细胞接种BALB／c裸鼠，建立鼻咽癌动物模型；在裸鼠肿瘤局部注射LMP2A特异性CTL，观察治疗后移植瘤生长情况及病理变化。结果人外周血PBMC体外在GM—CSF、IL4、TNF—α诱导下获得典型形态及表型特征的成熟DC。FACS检测表明，以LMP2A重组腺病毒转染DC诱导的CTL细胞群体以CIM、CD8阳性细胞组成为主。在接种CNE细胞3周后建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型；动物体内实验表明注射CTL的裸鼠肿瘤生长缓慢，体积明显小于对照组（P〈0．01）；病理检查显示肿瘤局部发生液化性坏死并有淋巴细胞浸润。结论人外周血单核细胞体外经细胞因子诱导，可生成具典型特征的成熟DC。利用LMP2A重组腺病毒将LMP2A基因转入DC，可在同一个体体外诱导出针对LMP2A的特异性CTL。CNE细胞接种裸鼠，可成功构建鼻咽癌动物模型；LMP2A特异性CTL在动物体内可明显抑制鼻咽癌肿瘤的生长，发挥有效的抗肿瘤作用。     

LMP1诱导鼻咽癌细胞发生TRAIL抵抗的体外实验

 目的探讨EBV膜潜伏蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)基因过表达后对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)凋亡诱导作用和凋亡信号传导的影响。方法利用脂质体介导的pGL6 LMP1上调LMP1低表达的TRAIL抵抗性鼻咽癌细胞CNE 1中LMP1的表达;通过MTT比色法、流式细胞术观察LMP1过表达后对CNE 1细胞TRAIL敏感性的影响;流式细胞术、Western blot、线粒体膜电位检测观察LMP1过表达后对死亡受体表达、细胞内外凋亡信号通路激活、线粒体膜电位改变的影响。结果死亡受体荧光标记后流式细胞术检测发现CNE 1和CNE 1 LMP1之间细胞膜蛋白死亡受体4（death receptor 4,DR4）,死亡受体5（death receptor,DR5）表达差异无统计学意义（P>0.05）。Western blot结果显示TRAIL(100 ng/ml)分别作用2、4、6、12 h后,CNE 1细胞中caspase 8 p43/p41,p18亚单位蛋白和caspase 3 p17,p10亚单位蛋白表达明显高于CNE 1 LMP1细胞,而Bcl 2相互作用域死亡激动蛋白的截短形式（truncated form of Bid,tBid）和caspase 9 p35亚单位蛋白表达无明显改变,且两个细胞株间也无明显区别。JC 1线粒体膜电位检测法结果显示TRAIL干预后,线粒体膜电位无明显改变,且两个细胞株间也无明显区别。结论LMP1过表达抑制TRAIL对鼻咽癌细胞的凋亡诱导作用和其细胞外凋亡信号的传导,提示LMP1是通过抑制细胞外信号通路激活诱导鼻咽癌细胞发生TRAIL抵抗。     

小发卡状RNA联合脱氧核酶抑制鼻咽癌细胞中EB病毒潜伏膜蛋白基因表达研究

目的:探讨小发卡状RNA单独及联合脱氧核酶对鼻咽癌细胞中EB病毒EBV潜伏膜蛋白1(LMP1)基因表达的抑制作用。方法:带绿色荧光报告基团的LMP1mRNA表达载体,小发卡状RNA及脱氧核酶按照阳性对照组、RNA干扰组、联合组和脱氧核酶组4组分别共转染HNE1细胞,观察分析计数细胞中绿色荧光表达情况,检测LMP1mRNA和蛋白表达水平。结果:联合组细胞绿色荧光OD值均数与RNA干扰组差异有统计学意义(P<0.01);联合组绿色荧光抑制率分别为86.31%和88.88%,比RNA干扰组抑制率75.15%高;EBVLMP1mRNA和蛋白水平检测提示联合组抑制效率较RNA干扰组高。结论:小发卡状RNA联合脱氧核酶能够提高抑制EBV-LMP1基因表达的效率。