早期脑出血后细胞凋亡与p75NTR、TrkA的相关性研究

目的 探讨p75NTR、TrkA在高血压脑出血(hypertensive intracerebral hemorrhage,HICH)早期的表达情况,初步阐明其与细胞凋亡的关系.方法 收集20例HICH病人脑出血后早期血肿周围不同部位组织标本,分为血肿表面组、半暗带组、脑皮质下区组;并在三组中将标本按出血时间(＞7h、≤7 h)、出血量(＞60 ml、≤60 ml)分组.采用免疫组化检测三组中p75NTR、TrkA的表达,TUNEL方法检测凋亡细胞率,统计分析p75NTR、TrkA及凋亡细胞的相关性.结果 TUNEL法检测结果:脑出血后越靠近血肿凋亡细胞越多(P＜0.01).HICH早期越靠近血肿表面p75NTR表达增加(P＜0.01),并与凋亡细胞率成正比(P＜0.05);TrkA在脑出血后有表达,不同部位TrkA表达无差异(P＞0.05),与细胞凋亡无明显关系(P＞0.05).血肿表面组p75NTR/TrkA比率较其余两组上升(F=4.851,P=0.011).随着出血时间延长、出血量增加,p75NTR表达增加(P＜0.05),而TrkA表达无变化(P＞0.05).结论 HICH早期病人p75NTR在TrkA低表达或者无活性环境中促进细胞凋亡,TrkA与细胞凋亡无相关,p75NTR/TrkA比率变化影响出血后细胞凋亡.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时Bcl-2和P53蛋白的表达

目的研究Bcl-2的P53蛋白在新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的表达及与细胞凋亡的关系。方法将新生7日龄Wistar大鼠制成HlBD模型,应用免疫组织化学-SP法及原位缺口末端标记(TUNEL)研究Bcl-2和P53蛋白在新生大鼠及缺氧缺血(HI)后脑中表达及与凋亡的关系。结果新生大鼠HIBD时凋亡与坏死并存,以凋亡为主。Bcl-2免疫蛋白在正常新生大鼠脑内广泛表达(+～++++);Hl后脑病变处Bcl-2免疫强度明显下降(-～+);P53蛋白在正常新生大鼠脑内基本无表达;HI后病变部位散在分布阳性凋亡细胞。结论Hl后Bcl-2免疫表达减弱,P53的免疫表达增强,提示Bcl-2可抑制凋亡,P53可能促进凋亡。     

大鼠脑出血后血肿周围组织中p75NTR表达及其与凋亡的时相性研究

目的 通过大鼠脑出血模型,探讨脑出血后不同时期p75NTR的变化规律及与细胞凋亡的关系.方法 采用大鼠脑出血模型,检测血肿周围凋亡细胞的比例,p75NTR的蛋白表达水平.结果 血肿周围6h即可见细胞凋亡,72 h达高峰,10d仍可见较高比例的凋亡细胞,与对照组比较有显著统计学差异(P＜0.01).实验组及对照组均可检测出p75 NTR蛋白和RNA表达,但各实验组与对照组比较有显著统计学差异(P＜0.05),尤以72 h为著(P=0.000).发现除6h组外,其余各组的p75NTR的RNA表达水平与凋亡比例呈正相关(P ＜0.001).结论 大鼠脑出血模型中血肿周围组织p75NTR蛋白和RNA表达水平增加,且与凋亡规律一致,24 h后RNA表达与细胞凋亡正相关.     

异丙酚联合亚低温对脑缺血-再灌注损伤后P75基因的影响

目的探讨脑缺血-再灌注(I/R)损伤后P75基因的表达变化及异丙酚联合亚低温对脑损伤的保护作用。方法 96只雌性SD大鼠随机分为对照组(A组)、异丙酚组(B组)、亚低温组(C组)、异丙酚联合亚低温组(D组),各组又分为再灌注后4h、8h、12h亚组,每组8只动物。采用RT-PCR技术检测各组大鼠不同时间点大脑皮质中P75基因表达变化,TUNEL技术观察再灌注12h大鼠脑皮质细胞凋亡情况。结果各组大鼠脑皮质于I/R损伤后各时间均可检测到P75 mRNA表达,且随再灌注时间延长表达水平逐渐升高(P<0.01);B、C、D组P75 mR-NA水平于再灌注4h、8h、12h均显著减低于A组(P<0.01),以D组降低最为明显(P<0.01)。D组大鼠再灌注12h脑皮质凋亡细胞数明显少于其他各组(P<0.05)。结论异丙酚和亚低温处理可通过抑制P75表达减轻缺血-再灌注损伤大脑细胞凋亡的发生,实现对脑组织的保护,异丙酚联合亚低温处理对脑组织的保护效果更佳。     

大鼠脑出血后血肿周围脑组织p75NTR的表达及其与细胞凋亡的关系

目的研究大鼠脑出血后不同时期血肿周围组织中p75NTR的表达规律及与其细胞凋亡的相关性。方法采用自体动脉血注入右侧尾状核制备大鼠脑出血动物模型,分别于脑出血后6h、24h、72h和10d处死大鼠获取血肿周围脑组织标本,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法及实时荧光定量PCR检测p75NTR蛋白及mRNA的表达。结果脑出血后6hpp75NTR蛋白和nRNA表达水平即上升,24h继续升高,72h到达高峰,至10d仍维持在较高水平,与对照组相比均差异显著（P〈0．05）。脑出血后细胞凋亡率的动态变化趋势与p75NTR蛋白及mRNA表达变化一致,两者之间呈显著正相关（P〈0．05）。结论脑出血后p75NTR可能参与介导脑细胞凋亡。     

鞘内注射LXM-10对神经病理性疼痛大鼠Fos蛋白和P2X3受体表达的影响

目的 研究鞘内注射新型镇痛药LXM-10（2,4-dimethyl-9-β-phenylethyl-3-oxo-6,9-diazaspiro[5,5]undecane chloride,2,4-乙烷基-9-β-苯乙酸-3-oxo-6,9-二氮杂螺环-[5,5]十二烷基盐酸盐,LXM-10）对神经病理性疼痛（neuropathic pain,NPP）大鼠脊髓背角和背根神经节Fos蛋白和P2X3受体表达的影响。方法 选取SD大鼠108只,随机分为假手术组（S组）、对照组（C组）和药物组（L组）,对照组和药物组制备坐骨神经慢性压迫模型（chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI-SN）。假手术组、药物组和对照组根据给药时间不同分为3个亚组（n=12只）,药物组和对照组分别在CCI-SN造模成功后1、5、12d开始向蛛网膜下腔注射生理盐水10μl,连续3d,分别设为C3组、C7组、C14组,或向蛛网膜下腔注射LXM-10 6μg/kg,连续3d,分别设为L3组、L7组、L14组;假手术组仅在相应时间点向鞘内注射生理盐水,设为S3组、S7组、S14组。连续注射3d后于末次给药后2h处死动物,取腰膨大脊髓节段和腰4～6背根神经节分别进行免疫组化实验检测Fos蛋白和P2X3受体的表达情况。结果 对照组各时间点Fos蛋白随着时间延长表达增强,Fos蛋白主要表达于脊髓背角。药物组在各时间点脊髓背角Fos蛋白免疫反应阳性（Fos-like immunoreactivity,F-LI）细胞均较相应时间点对照组明显减少（（L3组 vs C3组,P =0.003;L7组 vs C7组,P =0.023;L14组 vs C14组,P =0.005）。背根神经节中Fos蛋白变化趋势同脊髓背角（L3组 vs C3组,P =0.002;L7组 vs C7组,P =0.003;L14组 vsC14组,P =0.002）。P2X3在CCI-SN造模成功后3～14d,表达逐渐升高,主要在背根神经节表达。在脊髓背角药物组各时间点P2X3阳性细胞表达均较对照组对应时间点降低（L3组 vs C3组,P =0.043;L7组 vs C7组,P =0.008;L14组 vs C14组,P=0.005）。在背根神经节鞘内给药后,各时间点P2X3阳性细胞表达明显减少（L3组 vs C3组,P =0.034;L7组 vs C7组,P =0.001;L14组 vs C14组,P =0.003）。结论 对于NPP大鼠,CCI-SN后脊髓背角和背根神经节中Fos蛋白和P2X3受体表达均明显增强。LXM-10鞘内给药可明显降低二者表达。     

脑出血患者血肿周围脑组织中P75NTR、TrkA的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 通过对人脑出血后血肿周围不同区域组织中的P75NTR、TrkA表达的检测,探讨其在脑出血后血肿周围组织细胞凋亡中的作用. 方法采集脑出血血肿清除术患者的脑组织标本,分别运用DNA断裂原位末端标记(TUNEL)法及免疫组化技术检测血肿周围及远隔部位组织中细胞凋亡率与P75NTR、TrkA的表达. 结果相对于远隔部位组织,脑出血后血肿周围组织中的细胞凋亡率与P75NTR的表达水平明显增加(P<0.05),而TrkA的表达水平并没有明显变化(P>0.05).P75NTR的阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率呈正相关(r=0.628,p=0.000). 结论脑出血后血肿周围组织中凋亡细胞明显增多,P75NTR介导的细胞凋亡通路可能发挥了重要的作用;TrkA在脑出血发生后并没有增量表达以增加细胞存活,未起到拮抗P75NTR介导的细胞凋亡作用.     

神经营养因子的两类受体:Trks及p75(综述)

此文简要回顾了神经营养因子的两类受体——酪氨酸激酶受体家族 (Trks)及 p75的分子结构、分布、相互作用 ,与神经营养因子的结合及其后的信号传导路径     

大鼠全脑缺血再灌注后额叶神经细胞凋亡与P53蛋白表达的实验研究

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌注后不同时间对额叶神经细胞凋亡及P~(53)蛋白表达的影响。方法采用改良的Pulsineli 4-血管阻断(4-VO)方法建立SD大鼠急性全脑缺血模型,随机分为3组:正常组(n=7);假手术组(n=49);手术组(n=49)。缺血15min,分别于再灌注1、6、12、24、48、72h和7d断头取脑,采用TUNEL方法检测神经细胞凋亡,SP免疫组化方法观察额叶P~(53)蛋白的表达。结果 全脑缺血再灌注24h,可见少量TUNEL阳性细胞,再灌注48h可见较多TUNEL阳性细胞,72h出现大量TUNEL阳性细胞,7d明显减少。免疫组化染色:缺血组于再灌注24h可见少量P~(53)蛋白表达,48h达高峰,72h有所下降,7d明显下降,这种表达主要在细胞核内。结论 急性全脑缺血再灌注后的迟发性神经元坏死是以凋亡的方式发生的,全脑缺血再灌注后,额叶P~(53)蛋白表达增加,神经细胞凋亡和P~(53)蛋白的表达在一定时间内呈正相关。     

大鼠脑缺血预处理对额叶神经细胞凋亡和P53蛋白表达的影响

目的探讨大鼠短暂性全脑缺血预处理对再次脑缺血额叶神经细胞凋亡和P53蛋白表达的影响.方法采用改良的Pulsinelli 4血管阻断(4VO)方法,建立SD大鼠急性全脑缺血及预处理模型.雄性SD大鼠随机分为三组预处理对照组,给予3min全脑缺血;预处理缺血组,先给予3min全脑缺血,48h后在给予全脑缺血15min;缺血组,仅给予全脑缺血15min.采用TUNEL方法观察额叶神经细胞凋亡,SP免疫组化方法检测P53蛋白的表达.结果预处理对照组未见TUNEL阳性细胞,仅见个别P53蛋白阳性细胞.预处理缺血组与缺血组相比,再灌注后48h、72h及7d额叶TUNEL阳性细胞数显著减少(P《0.01).预处理缺血组与缺血组相比,再灌注后48h、72h及7d额叶P53阳性细胞数显著减少(P《0.01).结论全脑缺血15 min后额叶神经细胞凋亡和P53蛋白表达增多.全脑缺血预处理能减少额叶缺血再灌注后神经细胞凋亡和P53蛋白的表达.     

脑出血患者血肿周围脑组织中P75NTR、TrkA的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 通过对人脑出血后血肿周围不同区域组织中的P75NTR、TrkA表达的检测,探讨其在脑出血后血肿周围组织细胞凋亡中的作用. 方法采集脑出血血肿清除术患者的脑组织标本,分别运用DNA断裂原位末端标记(TUNEL)法及免疫组化技术检测血肿周围及远隔部位组织中细胞凋亡率与P75NTR、TrkA的表达. 结果相对于远隔部位组织,脑出血后血肿周围组织中的细胞凋亡率与P75NTR的表达水平明显增加(P<0.05),而TrkA的表达水平并没有明显变化(P>0.05).P75NTR的阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率呈正相关(r=0.628,p=0.000). 结论脑出血后血肿周围组织中凋亡细胞明显增多,P75NTR介导的细胞凋亡通路可能发挥了重要的作用;TrkA在脑出血发生后并没有增量表达以增加细胞存活,未起到拮抗P75NTR介导的细胞凋亡作用.     

人脑胶质瘤P53、Bax蛋白表达变化及其与病人预后的关系

目的 探讨人脑胶质瘤组织P53、Bax蛋白变化及其与病人预后的关系。方法 选取2016年4月~2018年4月术后病理确诊的脑胶质瘤组织94例,选取同期颅脑损伤内减压术切除正常脑组织90例为对照组。采用免疫组化染色检测P53、Bax蛋白表达水平。随访2年记录总生存率。结果 脑胶质瘤组织P53蛋白表达阳性率（62.77%,59/94）明显高于对照组（15.56%,14/90;P<0.05）,而Bax蛋白表达阳性率（28.72%,27/94）明显低于对照组（68.89%,62/90;P<0.05）。低级别胶质瘤P53蛋白表达阳性率（40.0%,18/45）明显低于高级别胶质瘤（83.67%,41/49;P<0.05）,而Bax蛋白表达阳性率（55.56%,25/45）明显高于高级别胶质瘤（16.33%,8/49;P<0.05）。P53蛋白与胶质瘤病理级别呈正相关（r=0.745,P<0.05）,而Bax蛋白与胶质瘤病理级别呈负相关（r=-0.787,P<0.05）。多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示P53表达阳性、Bax表达阴性是胶质瘤病人生存期较短的独立危险因素（P<0.05）。P53阳性表达胶质瘤病人2年累积生存率（69.49%,41/59）明显低于阴性表达组（88.57%,31/35;P<0.05）,Bax阳性表达胶质瘤病人2年累积生存率（92.59%,25/27）明显高于阴性表达组（70.15%,47/67;P<0.05）。结论 脑胶质瘤P53呈高表达,Bax呈低表达,二者与脑胶质瘤恶性程度有关,对脑胶质瘤预后评估有重要意义。     

高压氧对递增负荷训练大鼠腓肠肌P53、Bcl-2蛋白表达的影响

背景：研究显示高压氧疗法在运动损伤与疲劳恢复方面具有较好的应用效果,但其机制尚不清楚。 目的：观察高压氧对递增负荷跑台运动后大鼠腓肠肌P53、Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-03/05在苏州大学运动人体科学实验室完成。 材料：2个月龄雄性SD大鼠24只,随机分为3组,安静对照组、递增负荷训练组、高压氧恢复组,每组8只。 方法：递增负荷训练组：坡度10%,递增负荷训练,第1~4周,每天20 m/min运动10 min,25 m/min运动10 min,30 m/min运动10 min,35 m/min运动10 min。第5~8周,每天20 m/min运动10 min,25 m/min运动10 min,30 m/min运动20 min,35 m/min运动20 min。高压氧恢复组：运动方案相同,运动后即刻用0.2 MPa压力的高压氧恢复60 min。安静对照组自由喂养,不进行训练。递增负荷训练组末次运动后1 h、高压氧舱恢复组恢复1 h及相应安静对照组分批麻醉处死,快速取腓肠肌立即用体积分数为0.1甲醛固定,制作切片。 主要观察指标：①苏木精-伊红染色观察各组大鼠骨骼肌细胞凋亡情况。②免疫组织化学检测各组大鼠骨骼肌细胞P53与Bcl-2蛋白表达情况。 结果：24只大鼠进入结果分析。①递增负荷训练组大鼠骨骼肌细胞凋亡数量增多,经高压氧恢复后细胞凋亡数量减少。②递增负荷训练组大鼠骨骼肌细胞P53蛋白表达增多,经高压氧恢复后表达显著减少。③递增负荷训练组大鼠骨骼肌细胞Bcl-2蛋白表达增多,高压氧恢复后未见减少。 结论：高压氧能够抑制递增负荷训练大鼠骨骼肌P53蛋白的表达,减少运动导致的大鼠骨骼肌细胞凋亡的发生。     

腺病毒介导嗜铬瘤细胞中p75神经营养因子的RNA干扰

课题前期研究发现,在急性马尾神经受压模型大鼠中,马尾神经元华勒氏变性和腰骶脊髓前角运动神经元的凋亡及马尾相应阶段脊髓中有p75NTR的高表达存在正向变化关系。本文设想用腺病毒携带shRNA的方式,进行针对p75NTR基因沉默病毒的包装及体外验证重组腺病毒的基因沉默效果。实验按照Reynolds siRNA模板寡核苷酸的设计原则,设计合成3条p75 siRNA模板寡核苷酸片段（shRNA）,随后分别克隆进Shuttle vector 1.0 CMV,与表达加强绿色荧光蛋白的腺病毒载体骨架共转染HEK293细胞成功包装出具有p75shRNA的腺病毒,所得病毒分别命名为Ad.shRNA1、Ad.shRNA2、Ad.shRNA3,重组腺病毒分别感染体外培养的PC12细胞。48h后收集PC12细胞中p75NTRmRNA及总蛋白,发现相对于阴性对照,在mRNA水平,Ad.shRNA1,Ad.shRNA2,Ad.shRNA3组RNA干扰率为分别为（98.49±0.68）％,（95.08±1.79）％,（96.60±1.14）％;在蛋白水平,其RNA干扰率分别为（72.89±2.17）％,（58.83±1.15）％,（59.88±0.44）％。由此得出重组腺病毒成功的抑制了p75NTR的表达,其中以Ad.shRNA1基因沉默效果最为显著。     

大鼠脑出血后不同时期神经营养因子受体p75、神经生长因子前体、酪氨酸激酶A的表达及其与细胞凋亡的相关性

目的研究脑出血后血肿周围组织中神经营养因子受体p75(p75NTR)、神经生长因子前体(pro NGF)、酪氨酸激酶A(TrkA)的表达及细胞凋亡率,进一步探讨其在脑出血后的细胞凋亡中所发挥的作用。方法制作大鼠脑出血模型,于术后6 h、24 h、72 h、10 d处死各组大鼠获取所需脑组织标本,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化SP法检测p75 NTR、TrkA、pro NGF的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测p75 NTR、TrkA的基因表达水平。结果脑出血后p75 NTR、proNGF表达水平及p75 NTR/TrkA值与对照组比较显著升高(P 0. 01),且动态变化规律与脑细胞凋亡率相似;72 h后TrkA的动态变化规律与细胞凋亡率相反。结论脑出血后pro NGF与p75 NTR的结合可能参与介导脑细胞凋亡,p75 NTR/TrkA值增高时,pro NGF及p75 NTR以介导细胞凋亡为主; TrkA在脑出血后72 h内神经营养作用被抑制,72 h后可能发挥神经营养作用。     

年龄与P300的关系：视听两种模式下的对比研究

在46名年龄从21～69岁的健康人中,就年龄对P300的影响,在视听两种模式下进行了对比研究。结果发现:视听两种模式所引出的事件相关电位(ERPs)之N_1、P_2、N_2成分的潜伏期与年龄的变化缺乏一致性,而P300成分的潜伏期则随年龄的增长而延长,延长的速率分别为1.56ms/年(听)和1.41ms/年(视)。两种模式之间的P300的潜伏期相关性分析发现:在健康人中,视听P300潜伏期的变化具有较好的一致性。     

P2Y12受体介导小胶质细胞在肌萎缩侧索硬化疾病中的作用

目的 探索分析P2Y12受体介导小胶质细胞在肌萎缩侧索硬化(ALS)疾病发生发展中的作用。方法 应用SOD1-G93A转基因小鼠,通过转棒实验、Western blot方法及免疫荧光双标染色,观察SOD1-G93A转基因小鼠在症状前期、症状中期、终末期及对照组小鼠运动功能、皮质与腰髓P2Y12受体及小胶质细胞特异性标记物IBA1表达的变化情况。结果 SOD1-G93A转基因小鼠随病程进展运动功能逐渐下降;腰髓P2Y12受体随病程进展有逐渐降低趋势,与对照组比较,终末期P2Y12受体表达明显减低(P<0.05),皮质各期变化不明显;腰髓IBA1受体随病程进展有逐渐升高趋势,与对照组比较,终末期IBA1表达明显升高(P<0.05),皮质各期变化不明显。结论 随SOD1-G93A转基因小鼠病程进展运动功能逐渐降低,腰髓P2Y12受体表达减少,小胶质细胞增生明显,P2Y12受体介导的小胶质细胞活化可能参与了ALS的发生发展。     

P2Y1受体介导星形胶质细胞的激活在急性一氧化碳中毒迟发性脑病中的作用

目的 探讨P2Y1受体和星形胶质细胞在急性一氧化碳(CO)中毒迟发性脑病(DEACMP)中的作用以及DEACMP可能的发病机制。方法 经水迷宫实验筛选认知功能合格的雄性SD大鼠,随机分为两组：对照组、CO中毒组,CO中毒组制作DEACMP模型,分别于造模后第7天、第14天、第21天、第28天对比两组行为学改变,神经元变化以及海马组织中P2Y1受体和星型胶质细胞的表达。结果 通过水迷宫发现与对照组相比,造模后第21天、第28天CO中毒组大鼠逃避潜伏期均明显延长(P<0.05);HE染色发现造模后第14天、第21天、第28天模型组大鼠海马锥体细胞及神经元坏死明显,结合水迷宫可表明大鼠在21 d时出现DEACMP;与对照组相比,Western blot法检测提示各时间点CO中毒组海马区P2Y1及GFAP蛋白表达均增多(P<0.05),呈先升高后降低的趋势;免疫荧光表明海马区P2Y1和GFAP存在共表达,相对于对照组,中毒后各时间点海马CA₁区P2Y1和GFAP都有表达上调(P<0.05)。结论 P2Y1受体对星形胶质细胞的激活可能是DEACMP的发病机...