诱导HO-1改善氧化应激状态减轻老年供肝缺血-再灌注损伤

目的观察诱导血红素氧合酶-1(HO-1) 生成能否减轻老年供肝移植后缺血-再灌注损伤.方法取老年(16个月龄)SD大鼠5只和成年(3个月龄)大鼠5只,分别测定其肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性及维生素E(Vit E)、维生素C(Vit C)和丙二醛(MDA)含量; 另取老年SD大鼠60只作为供体,随机均分为血晶素(Hemin)组和对照组,分别于取肝前24 h腹腔注射Hemin或生理盐水,然后将其肝脏移植给同种大鼠,同时观察再灌注后肝脏组织学变化和细胞凋亡.结果老年大鼠肝脏组织中SOD活性明显低于成年大鼠,Vit C含量亦少(P＜0.05),而MDA明显增高(P＜0.05).用Hemin预处理的老年SD大鼠供肝在切取前,SOD活性增加,Vit E、Vit C含量增加,MDA含量降低(P＜0.05); 肝移植后血清ALT明显降低,肝组织HO-1活性明显增高,肝脏组织学检查示再灌注后凋亡细胞明显减少(P＜0.05).结论老年SD大鼠肝脏存在氧化应激和脂质过氧化状态,HO-1可通过改善这种状态而减轻其缺血-再灌注损伤.     

大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 评价重组腺相关病毒(rAAV)介导大鼠血红素加氧酶-1(rHO-1)基因转染在大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制.方法 健康雄性SD大鼠81只,体重220～280 g,随机分为4组:假手术组(SH组,n=9)、生理盐水组(NS组,n=24)、重组腺相关病毒-荧光蛋白组(rAAV-EGFP组,n=24)和重组腺相关病毒-HO-1组(rAAV-HO)-1组,n=24).NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-HO-1组分别心肌注射600 μl生理盐水、rAAV-EGFP(1.5×1011 v.g.)或rAAV-HO-1(1.5×1011 v.g.).在基因转染后3个月,NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-HO-1组各处死3只大鼠,取注射部位心肌,通过测定心肌细胞荧光蛋白的表达,计算转染率,并通过免疫组化染色和RT-PCR法检测HO-1蛋白和HO-1 mRNA的表达.采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注模型;再灌注120 min后,处死大鼠,测定心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,电镜下观察心肌细胞的超微结构.结果 心肌细胞转染率为(53.5±2.0)%.与NS组比较,rAAV-HO-1组HO-1蛋白及HO-1 mRNA表达增加(P＜0.01);与rAAV-EGFP组比较,rAAV-HO-1组HO-1蛋白及HO-1 mRNA表达增加(P＜0.01);与SH组比较,NS组和rAAV-EGFP组SOD活性下降,MDA含量升高(P＜0.01);与NS组和rAAV-EGFP组比较,rAAV-HO-1组SOD活性升高,MDA含量降低(P＜0.01).NS组及rAAV-EGFP组心肌细胞超微结构损伤较SH组和rAAV-HO-1组重.结论 腺相关病毒介导的血红素加氧酶-1基因转染大鼠心肌细胞后,可减轻心肌缺血再灌注损伤,其机制与抗氧化有关.     

细胞穿透肽PEP-1介导的血红素加氧酶-1对大鼠肠缺血再灌注诱发肝损伤的影响

目的 评价细胞穿透肽PEP-1介导的血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠肠缺血再灌注诱发肝损伤的影响.方法 雄性SD大鼠24只,7～9周龄,体重210～260 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=8):假手术组(S组)、肠缺血再灌注组(I/R组)和融合蛋白PEP-1/HO-1组(HO组).采用夹闭肠系膜上动脉45 min,恢复灌注120 min的方法制备大鼠肠缺血再灌注模型.HO组于缺血前30 min经左侧髂静脉注射融合蛋白PEP-1/HO-1 0.5 mg,S组仅分离闭肠系膜上动脉,但不夹闭.于再灌注120 min时,右侧颈总动脉取血样,测定血清AST和ALT的活性;然后处死大鼠,取肝组织,光镜下观察病理学结果,测定MDA含量和SOD活性.结果 与S组比较,I/R组和HO组血清AST和ALT的活性升高,肝组织MDA含量升高,SOD活性降低(P＜0.05);与I/R组比较,HO组血清AST和ALT的活性降低,肝组织MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05),肝损伤减轻.结论 细胞穿透肽PEP-1介导的HO-1可减轻大鼠肠缺血再灌注诱发的肝损伤.     

七氟醚后处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤海马血红素氧合酶-1蛋白表达的影响

目的 探讨七氟醚后处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及血红素氧合酶-1(HO-1)在其中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠40只,体重230～270 g,随机均分为五组:假手术组(C组),缺血-再灌注组(IR组),七氟醚组(S组),七氟醚+锌原卟啉Ⅸ(Znpp)组(SZ组)和溶剂对照组(SD组).采用双侧颈总动脉夹闭合并取血降压再回输的方法制备脑缺血-再灌注损伤模型,S组再灌注前5 min气管插管,吸入1MAC七氟醚15 min; SZ组模型制备前腹腔注射Znpp45μmol/kg,溶于二甲基亚砜(DMSO)0.5 ml; SD组模型制备前腹腔注射DMSO 0.5 ml.所有大鼠再灌注24 h后处死,取海马.光镜下观察各组海马病理学变化,检测海马超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和HO-1蛋白表达.结果 与C组比较,其余四组SOD活性明显降低(P＜0.05),MDA含量明显升高(P＜0.05),SZ组HO-1蛋白表达差异无统计学意义,IR、S和SD组HO-1蛋白表达明显升高(P＜0.05).与IR组比较,S组和SD组SOD活性和HO-1蛋白表达明显升高(P＜0.05),MDA含量明显降低(P＜0.05),SZ组HO-1蛋白表达明显降低(P＜0.05).光镜下S组和SD组海马病理学损伤较IR组和SZ组减轻.结论 七氟醚后处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与七氟醚上调脑组织中HO-1蛋白表达有关.     

大鼠脂肪干细胞对自体肝移植缺血再灌注损伤的保护机制研究

目的探讨大鼠脂肪干细胞在大鼠自体肝移植缺血再灌注(ischemia-reperfusion,IR)损伤模型中的保护作用机制。方法分离并培养大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),构建稳定细胞株。SD大鼠随机分为假手术组、自体肝移植缺血再灌注组(IR组)、自体肝移植缺血再灌注+脂肪干细胞回填组(ADSCs组),每组10只。假手术组上腹正中切口,暴露并离断肝脏韧带,不做其他处理。IR组用动脉夹夹闭肝门阻断血流,肝素注射液灌注15 min,不给药。ADSCs组在肝素注射液灌注后30 min尾静脉注射1×106 ADSCs。手术后24 h后处死大鼠,检测各组大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,以及线粒体活性;苏木素-伊红染色(HE)观察肝脏病理学改变;免疫印迹法(Western blotting)检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、Bax基因表达情况。结果与假手术组相比,IR组AST和ALT水平、MDA含量较高,SOD含量较低(P0.05),线粒体活性较弱。病理切片结果显示,IR组肝细胞出现坏死,炎性细胞浸润严重。Western blotting结果显示IR组较假手术组ICAM-1、Bax表达增多。与IR组相比,ADSCs组AST和ALT水平、MDA含量较低,SOD含量较高(P0.05),线粒体活性较强,炎性细胞浸润较少,ICAM-1、Bax表达减少。结论大鼠脂肪干细胞对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤模型有保护作用,其作用机制可能是通过减少炎症反应和氧化应激程度进而减轻肝脏缺血再灌注损伤。     

细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,体重220～280g,制备Langendorff离体心脏灌注模型,选取模型制备成功的离体心脏18个,随机分为3组(n=6):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和PEP-1/HO-1处理+缺血再灌注组(HO-1组).IR组K-H液平衡灌注30 min后,采用停灌40 min再灌注50 min的方法制备缺血再灌注模型.HO-1组在停灌前用含50 μmol/L融合蛋白PEP-1/HO-1的K-H液平衡灌注15 min,S组采用K-H液持续灌注120 min.再灌注50 min时,收集冠脉流出液,测定肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;取心肌组织,采用Western blot法测定HO-1蛋白表达水平,采用硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性.结果 HO-1组心肌组织HO-1蛋白表达水平较IR组升高(P＜0.01).与S组比较,IR组和HO-1组冠脉流出液CK和LDH活性及心肌组织MDA含量升高,心肌组织SOD活性降低(P＜0.01);与IR组比较,HO-1组冠脉流出液CK和LDH活性及心肌组织MDA含量降低,心肌组织SOD活性升高(P＜0.01).结论细胞穿透肽PEP-1可将HO-1蛋白成功导入心肌组织,并减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

核因子-κB和诱导性一氧化氮合成酶在大鼠肝脏小移植物缺血预处理中的作用

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)和诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)在大鼠肝脏小移植物缺血预处理中的作用。方法雄性SD大鼠随机分成5组：假手术组(A组)；小移植物组(B组)；应用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的小移植物组(C组)；应用缺血预处理(IPC)的小移植物组(D组)；应用PDTC IPC的小移植物组(E组)。电泳迁移率改变法(EMSA)检测小移植物植入后5个时间点肝脏组织中NF-κB活性，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测iNOS在肝组织中的表达，检测肝脏脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的浓度。结果 A组肝组织中NF-KB的活性很弱。B、C、D、E4组NF-κB变化趋势相仿，一般在恢复灌注后即活化，峰值出现在3h(IPC)；活化峰值强度B组＞C组＞D组＞E组。再灌注2h后B、C、D、E组肝组织中iNOS表达水平开始升高，6h达到峰值，其值B组＞D组＞c组＞E组(P＜0．05)，随后逐渐下降；至12h仍高于对照组的水平。MDA的结果变化和iNOS表达水平变化类似，SOD呈相反变化。结论 NF-κB在大鼠肝脏缺血预处理小移植物中起重要作用。抑制供肝组织中NF-κB的活性可显著降低再灌注早期供肝组织中iNOS表达和氧自由基水平．并有效改善供肝的再灌注损伤。针对NF-κB的靶向治疗可能是供肝保护的一条新途径。     

三七总皂苷对大鼠肝移植物细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3 表达的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)预处理对大鼠供肝缺血一再灌注损伤的保护作用及其对供肝细胞凋亡和Bcl-2及Caspase-3 mRNA表达的影响。方法雄性SD大鼠分别用作供、受体．采用Kamada’s袖套法建立原位肝移植模型，根据供肝切取前1h是否静脉注射PNS(50mg／kg)将大鼠随机分为PNS预处理组(PNS组)和生理盐水对照组(NS组)；另设假手术作对照组(SO组)。分别于供肝再灌注后2h、6h及24h处死各组动物，检测血清ALT及AST，HE切片作病理组织学检查，TUNEL法检测肝细胞凋亡，RT-PCR法检测Bcl-2及Caspas-3m R-NA的表达。结果供肝再灌注后2h、6h及24h各时点，PNS组大鼠血清ALT和AST水平及肝细胞凋亡指数(A1)均明显低于NS组(P＜O．05．P＜O．01)；6h及24h，PNS组大鼠肝组织Bcl-2mRNA的表达水平明显高于NS组(P＜O．05)；2h及6h，PNS组大鼠肝组织Caspase-3mRNA的表达水平明显低于NS组(P＜O．05)。结论PNS预处理大鼠供肝，可以有效地减轻移植肝的缺血／再灌注损伤和细胞凋亡，影响细胞凋亡调控基因Bcl-2和Caspase-3的表达。这可能为PNS抗细胞凋亡的机理之一。     

丙酮酸乙酯预先给药对原位肝移植术大鼠肝损伤的影响

目的 评价丙酮酸乙酯预先给药对原位肝移植术大鼠肝损伤的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠40只,体重220～ 250 g,作为肝移植术的供体和受体.采用随机数字表法,将受体大鼠随机分为3组(n=8):假手术组(S组)、肝移植组(LT组)和丙酮酸乙酯组(EP组).S组仅行单纯开关腹手术,LT组和EP组分别采用二袖套法建立大鼠原位肝移植模型,EP组于切皮前1h时尾静脉注射丙酮酸乙酯40 mg/kg.于新肝期2h时采集静脉血样,检测血清ALT和AST的活性;取肝中叶组织检测MDA含量和SOD活性.结果 与S组比较,LT组和EP组血清ALT、AST的活性和肝组织MDA含量升高,SOD活性降低(P＜0.05或0.01);与LT组比较,EP组血清ALT、AST的活性和肝组织MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05或0.01).结论 丙酮酸乙酯预先给药可减轻原位肝移植术大鼠肝损伤.     

血红素氧合酶-1/一氧化碳在高动力循环大鼠肝脏缺血/再灌注肺损伤中的保护作用

目的 研究血红素氧合酶-1(HO-1)对高动力循环大鼠肝脏缺血/再灌注引起肺损伤的保护作用,以及其与一氧化碳(CO)的关系.方法 32只雄性SD大鼠,随机分为4组:假手术组(sham operation,S组),高动力循环组(hyperdynamic,HC组)是对门静脉结扎大鼠隔日皮下注射脂多糖(10μg/100 g)三周,每组8只.肝脏缺血/再灌注组(hepatic ischemia-leper-fusion,HIR)是对高动力循环大鼠处死前行全肝缺血20 min后再灌注1 h.血晶素组是对高动力循环大鼠肝脏缺血/再灌注前1 h腹腔注射血晶素50 mg/kg.所有大鼠在处死前静脉注射伊文思蓝30 mg/kg.大鼠处死前取动脉血测碳氧血红蛋白含量,通过测量肺组织含水率(肺叶湿重/干重×100%)和伊文思蓝含量来评估肺微循环通透性,取肺组织测伊文思蓝含量,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量和超氧化物歧化酶(superoxide,SOD)活力变化以及肺组织血红素氧合酶(hemeoxygenase-1,HO-1)活性变化.结果 与S组和HC组相比,HIR组和血晶素组肺叶湿/干重比、伊文思蓝含量、MDA含量、MPO含量均显著增加,而SOD活力则显著下降(P<0.01).与HIR组相比,血晶索组伊文思蓝含量、MDA含量、MPO含量降低(P<0.05).与S组和HC组相比,HIR组和血晶素组碳氧血红蛋白(carboxyhemoglobin,CO-Hb)含量和HO-1活性增加(P<0.01).与HIR组相比,血晶素组碳氧血红蛋白(carboxyhemoglobin,COHb)含量和HO-1活性增加(P<0.05).门静脉压力在各组之间均有统计学意义(P<0.01).结论 CO产生增加参与高动力循环大鼠肝脏缺血/再灌注肺损伤保护,这与HO-1活性增加相关.血晶素可以上调肝脏缺血/再灌注期肺组织HO-1/CO系统,这可能是对损伤的内源性代偿反应.     

Effect of neferine on liver ischemia-reperfusion injury in rats

Introduction

Liver ischemia/reperfusion leads to the formation of reactive oxygen species (ROS) that cause liver injury, a critical clinical problem during liver surgery and transplantation. The aim of the present study was to investigate the hepatoprotective and antioxidant effects of neferine against liver ischemia/reperfusion injury in rats.

Materials and Methods

Wistar rats were randomly divided into 4 groups (n = 8): sham group; model group, and neferine high and low groups (50 and 25 mg/kg, respectively). After either saline or neferine was orally administered for 5 days rat livers were subjected to 30 minutes of ischemia followed by 6 hours of reperfusion. Aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), and hydroxyl radical levels were measured in serum. The liver was removed to assay malondialdehyde (MDA) and carbonyl contents, superoxide dismutase (SOD), and glutathione peroxidase (GPx) activities, as well as to evaluate histopathologic changes.

Results

Neferine significantly prevented AST and ALT elevations, reduced hydroxyl radical release, inhibited SOD and GPx activities, and decreased MDA and carbonyl contents. At the same time, neferine attenuated the histopathologic changes.

Conclusion

Neferine protected against liver ischemia/reperfusion in rats through antioxidant mechanisms. However, further studies are needed to verify whether the hepatoprotection of neferine is correlated with anti-inflammatory and anti-apoptotic effects.     

氧自由基在肝脏保存再灌注损伤中的作用及丹参的保护作用

目的 探讨氧自由基在肝脏保存再灌注损伤（ｈｅｐａｔｉｃ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ,ＨＰＲＩ）中的作用及丹参的保护作用。方法 建立大鼠肝脏保存再灌注模型,分别检测肝脏保存０、８、１６、２４、３２小时组在不同灌注时间点组织超氧化物酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）和灌注液俗 草转氨酸（ＡＳＴ）的变化,并观察肝细胞形态学的改变。结果 与正常组（保存０小时组）比较,保存１     

血红素氧合酶-1减轻老龄大鼠供肝缺血再灌注损伤

目的诱导血红素氧合酶-1,提高老龄大鼠供肝的抗氧化能力,观察其能否减轻老龄大鼠供肝缺血再灌注损伤。方法　老龄SD大鼠为供者,成年SD大鼠为受者,随机分为实验组和对照组。实验组:供者供肝切取前24 h腹腔注射血晶素;对照组:供者供肝切取前24 h腹腔注射生理盐水。受者肝移植后3、6、12、24、48 h分别取移植肝组织,检测抗氧化酶、抗氧化剂、凋亡细胞和凋亡因子的表达情况。结果　实验组移植肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和维生素E、维生素C含量较对照组明显增加,丙氨酸转氨酶(ALT)则较对照组明显降低;另外,实验组较对照组凋亡细胞数量减少,BCL-2表达增加,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)表达降低。结论诱导血红素氧合酶-1可以减轻老龄大鼠供肝缺血再灌注损伤,其机制与抑制细胞凋亡有关。     

肝缺血再灌注致大鼠脑损伤时诱导型一氧化氮合酶表达的变化

目的 评价肝缺血再灌注致大鼠脑损伤时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化.方法 健康雄性Wistar大鼠32只,体重240～280 g,随机分为假手术组(S组,n=8)和肝缺血再灌注组(IR组,n=24).S组仅开腹分离肝动脉、门静脉和胆管,游离脾静脉,40 min后切脾,关腹;IR组通过夹闭肝动脉、门静脉和胆管建立大鼠脾静脉-股静脉转流下全肝缺血再灌注模型,全肝缺血40 min后再灌注,同时切脾.S组断头处死大鼠,IR组分别于再灌注3、6、24 h时断头处死8只大鼠,取脑组织,采用硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测硝化酪氨酸(NT)表达,RT-PCR法检测iNOS mRNA表达.结果 与S组比较,IR组再灌注6、24 h时脑组织NO及MDA的含量升高,NT及iNOS mRNA的表达上调,再灌注6 h时SOD活性降低(P<0.05或0.01);与再灌注3 h时比较,再灌注6、24 h时IR组脑组织NO及MDA的含量升高,SOD活性降低(P<0.05).结论 肝缺血再灌注时大鼠脑组织iNOS表达上调,产生大量NO,生成OONO-,导致脑损伤.     

阿魏酸钠对CCL4致肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的:研究阿魏酸钠(SF)对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用.方法:用50%四氯化碳油溶液皮下注射的方法制作肝硬化大鼠模型,将30只肝硬化大鼠随机均分为3组.A组:假手术组(10只);B组:对照组(10只);C组:SF保护组(10只).B、C组分别从尾静脉缓慢注入生理盐水1.5 mL、SF 1.5 mL(150 mg/kg)后,完全阻断大鼠肝门血流30 min,比较各组肝脏再灌注2 h后的肝功能,肝组织抗氧化能力、一氧化氮(NO)含量及肝脏形态学改变.结果:肝脏再灌注2 h时,与对照组比较,SF保护组大鼠肝组织丙二醛(MDA)含量显著减少(P＜0.01),超氧化物歧化酶(SOD)和NO含量显著增高(P＜0.01),血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性显著降低(P＜0.01),对肝脏显微结构和超微结构损伤较轻.结论:SF对肝硬化大鼠肝I/R损伤有明显的保护作用.     

低温环境复灌对兔肾缺血-再灌注损伤保护作用的实验研究

目的  探讨建立兔肾缺血低温环境、常温环境及高温环境再灌注损伤模型的新方法, 并评价低温环境复灌对兔肾缺血-再灌注损伤(IRI)的影响。方法  将60只健康新西兰兔随机分为5组:对照组(A组)、假手术组(B组)、低温环境复灌组(C组)、常温环境复灌组(D组)、高温环境复灌组(E组), 每组12只。术后7 d内每日检测各组兔的血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平; 术后1 d检测各组兔肾组织内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性; 术后1 d采用苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理学变化; 术后1 d采用dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色评价细胞凋亡。结果  术后1 d, 与A组和B组比较, C、D和E组兔的Scr和BUN水平均升高(均为P < 0.01);与C组比较, D组和E组兔的Scr和BUN水平升高更明显(均为P < 0.05)。术后7 d内, C、D和E组兔的Scr和BUN水平呈下降趋势。与D组和E组比较, C组兔的Scr和BUN水平较低(均为P < 0.05)。与A组和B组比较, C、D和E组的MDA含量均升高, SOD活性均降低(均为P < 0.01);与C组比较, D组和E组的MDA含量升高更明显, SOD活性更低(均为P < 0.01)。术后1 d肾组织病理学检查示A组和B组肾组织形态结构正常, D组和E组损伤表现明显, 与D、E组比较, C组损伤较轻。TUNEL染色结果显示, D组和E组肾小管上皮细胞阳性细胞明显增多, 管腔内也可见到阳性细胞, C组阳性细胞数量较D组和E组明显减少。结论  冰泥覆盖肾脏、37 ℃生理盐水及40 ℃生理盐水连续滴加肾脏可建立不同温度环境复灌模型。低温环境复灌对肾IRI具有保护作用。     

心脏停跳大鼠肝脏过氧化亚硝酸介导的细胞凋亡变化

目的 该实验旨在研究过氧化亚硝酸对心脏停跳大鼠肝细胞凋亡的影响.方法 切取雄性Wistar大鼠肝脏后,通过门静脉插管灌注60 ml 4℃HTK保存液,其中心脏搏动组为立即插管;心脏停跳组为60 min后插管;另外一组为心脏停跳但灌注液中含有7500 IU超氧化物歧化酶(SOD).(n均=6).然后所有的大鼠肝脏均在4℃HTK液中保存24 h后置于循环灌注系统中,用Kreb-Henseleit缓冲液常温再灌注45 min.结果 同心脏停跳组相比,心脏搏动和SOD组大鼠灌注液中转氨酶(GPT和GLDH)的含量明显减少(均P<0.05);门静脉压力明显降低(均P<0.01);胆汁分泌量明显增加(均P<0.01),一氧化氮含量明显降低(均P<0.05);细胞凋亡明显减少(均P<0.05);灌洗液中硝基酪氨酸明显减少(P<0.01和P<0.05)且硝基酪氨酸免疫组化染色明显减弱.结论 氧自由基的代谢产物--过氧化亚硝酸与心脏停跳大鼠肝脏细胞凋亡的发生相关.     

雌激素对大鼠肝切除肝缺血再灌注损伤中核因子-κB/IκB传导通路的影响及保护作用

目的 观察雌激素对大鼠肝切除肝缺血再灌注损伤中核因子-κB(NF-κB)/抑制蛋白(IκB)传导通路影响.方法 制作肝切除肝缺血再灌注损伤动物模型,雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组);肝切除肝缺血再灌注组(I/R组);肝切除肝缺血再灌注+雌激素组(I/R+ E2 组).分别在缺血再灌注后1、3、6h光镜下观察肝组织病理学改变,检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平和肝组织丙二醛(MDA)的含量及超氧化物岐化酶(SOD)的活性,免疫组织化学法测定肝组织NF-κB的表达,Western blot检测NF-κB抑制蛋白(IκB-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 再灌注后I/R组在各时相血清ALT、AST均显著高于I/R +E2组,并于6h达到峰值(P＜0.05).与I/R+E2组和Sham比较,I/R组肝细胞凋亡率显著升高(P＜0.01);肝组织中IκB-α表达降低,而NF-κB表达增高(P＜0.05);ICAM-1 和MDA的结果变化和NF-κB表达水平变化类似,SOD呈相反变化.在光镜下观察,I/R组肝小叶结构紊乱,肝窦淤血,肝细胞水肿变性,肝细胞片状坏死,在Sham组和I/R +E2组上述病理学变化明显改善.结论 雌激素对肝切除肝脏缺血再灌注损伤有显著保护作用,其作用机制可能与雌激素影响NF-κB/IκB传导通路、减轻脂质过氧化反应、减少炎症介质释放及抑制细胞凋亡有关.     

The Evaluation of Protective Effects of FK-506 on Neural Ischemic-Reperfusion Injury: an Experimental Study

Abstract Objective: In this study, we aimed to delineate the mode of neuroprotective action of FK-506, and demonstrated that FK-506 could decrease oxidative stress and apoptotic cell death in an in vivo rat model of neural ischemia-reperfusion after hemorrhagic shock. Methods: Thirty rats were used as experimental subjects and divided into five equal groups. Group A rats (sham group, n = 6) were anesthetized and craniotomies were performed for collecting brain tissue samples. In group B ischemia-reperfusion (I/R + 1 h, n = 6), group C (I/R + 24 h, n = 6), group D (I/ R + 1 h FK-506, n = 6) and group E (I/R + 24 h FK-506, n = 6), systolic blood pressure of the rats decreased to 40–50% of the normal level via bleeding from the femoral vein. Thus, a hemorrhagic shock and ischemic neural tissue model was formed. The bloodwas retained and given to the remaining animals in groups B, C,Dand E via femoral vein for reperfusion 20 min after the procedure. In group D and E, 1 mg/kg FK-506 in 0.5 ml isotonic solution was administered to the rats 5 min before reperfusion. Group B and D rats were sacrificed after 1 h and group Cand E rats were sacrificed 24 h after reperfusion; the rats were sacrificed via bleeding associated with intracardiac puncture. Craniotomy was also performed in groups B, C, D and E and brain tissue samples were fixed using neutral buffered 10% formaldehyde solution for immunohistopathological examination as in group A. Brain tissue superoxide dismutase (SOD) activities, malondialdehyde (MDA) levels, tissue myeloperoxydase (MPO) activities and apoptotic cell analyses with Apo 2.7 immunohistochemically were also performed in all groups. Results: The result of the study revealed that the SOD activities were lower for groups B (I/R + 1 h) and C (I/ R + 24 h) than for group A (sham group) (p < 0.05). In addition, SOD activities were higher in groups D (I/ R + 1 h FK-506) and E (I/R + 24 h FK-506) than in groups B (I/R + 1 h) and C (I/R + 24 h) (p < 0.05). MDA levels, MPO activities and the number of apoptotic cells were lower in group A (sham group) than in groups B (I/R + 1 h) and C (I/R + 24 h) (p < 0.05). In addition to these MDA levels, MPO activities and the number of apoptotic cells were higher in groups B (I/R + 1 h) and C (I/R + 24 h) as compared to groups D (I/R + 1 h FK-506) and E (I/R + 24 h FK-506) (p < 0.05). Conclusion: The results suggest that the prophylactic use of FK-506 in an in situ ischemic neural tissue may prevent reperfusion injury.