实时荧光聚合酶链反应定量检测LASIK术后兔角膜纤维连接蛋白1的表达

目的　定量检测纤维连接蛋白 1(fibronectin 1,FN1)在LASIK术后不同时段角膜中的表达水平 ,探讨FN1与LASIK术后早期伤口愈合的关系。方法　 2 0只新西兰白兔 ,左眼按近视 4D行LASIK术 ,右眼作对照组。分别于术后 4、4 8h ,1、2周取角膜 ,荧光半定量PCR方法检测中央手术区及周边非手术区角膜FN1mRNA的表达。结果　LASIK术后 4h左眼手术区FN1的mRNA表达水平比右眼相应对照区明显升高 ,4 8h降低至对照组水平 ,其后随时间的延长无明显改变。结论　实时荧光定量PCR定量检测FN1在角膜中的表达结果提示 ,FN1参与LASIK术后角膜瓣与基质床的粘附过程     

α-SMA在PRK和LASIK术后角膜成纤维细胞中的表达

目的通过检测角膜肌成纤维细胞(MFB)特征性标志α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,探讨PRK和LASIK后早期角膜细胞的增生情况以及对角膜透明度的影响。方法新西兰白兔24只,随机分为两组,每组12只:A组,右眼行PRK手术,左眼为正常对照;B组,右眼行LASIK手术,左眼为正常对照。分别于术后3、10、20、35d取兔眼角膜,部分行光镜和电镜观察;另一部分用于免疫组织化学研究,检测成纤维细胞骨架的特征性标志α-SMA的表达,并计数成纤维细胞活化数量。结果PRK组术眼上皮细胞增生明显,成纤维细胞数量增多,基质浅层胶原纤维排列紊乱,上皮下α-SMA表达明显,表达量与上皮增生数量有关。LASIK组术眼仅角膜瓣周边区域上皮增生,基质层胶原纤维排列无明显紊乱,少量活化的成纤维细胞,角膜瓣边缘可见α-SMA表达。两组中的非手术眼均未见α-SMA表达。结论PRK去除了角膜上皮及前弹力层,术后上皮及浅基质层细胞增生明显,成纤维细胞活化增殖,新生胶原排列不规则,是导致角膜透明度下降的原因。LASIK术后角膜结构的完整性保持较好,除角膜瓣边缘外,其余部位无明显上皮增生,成纤维细胞活化数量少,手术区界面组织增生轻微,术后角膜保持透明。     

准分子激光原位角膜磨镶术后角膜神经损伤和再生的实验研究

目的 观察准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）术后角膜神经的损伤及术后不同时期的再生情况。方法 取4只大耳白兔，右眼接受近视性LASIK术，左眼为正常对照，另取14只兔双眼接受LASIK术，术后1、3、7d，1、2、3、6个月行氯化金染色，光镜下观察LASIK术后神经的损伤及再生情况。结果 术后深基质层、角膜瓣连接处的上皮下和浅基质层神经未受损，瓣切削处上皮下和浅基质层神经消失。术后不同部位的角膜神经再生程度不同，术后6个月周边部角膜神经形态已接近正常，角膜中央仍无神经分布。结论 近视性LASIK术对不同部位角膜神经的损伤程度不同，术后6个月周边部神经恢复接近正常，中央部神经修复较慢。     

角膜瓣蒂的位置对LASIK术后早期角膜知觉的影响

目的　探讨角膜瓣蒂的不同位置对LASIK手术后角膜知觉的影响。方法　对 3 1名双眼屈光参差 <1 0D ,术前双眼角膜中央知觉相同的近视眼患者行LASIK手术 ,其中左眼角膜瓣蒂的位置在上方 ,右眼角膜瓣蒂的位置在鼻侧。应用CohetBonnet角膜知觉计分别测定术前、术后一周、二周和四周各眼的角膜中央的角膜知觉。结果　将术后一周、二周时左右眼的角膜知觉阈值进行配对t检验 ,其差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。将术后四周左右眼的角膜知觉阈值进行配对t检验 ,其差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论　角膜瓣蒂的位置不同对LASIK术后早期角膜知觉的影响也不同 ,在术后一周和二周时角膜瓣蒂的位置在上方的角膜知觉低于角膜瓣蒂的位置在鼻侧的角膜知觉 ,在术后四周时 ,随着角膜知觉的恢复双眼的角膜知觉已无显著性差异。     

准分子激光LASIK和PRK治疗兔实验性远视的比较

目的:评价准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)和准分子激光角膜切削术(PRK)治疗高中度远视的预测性、安全性及有效性.方法:选择新西兰大白兔20只,随机分为LASIK和PRK2组,设计每组兔右眼为 5.00D,左眼为 8.00D,应用LASIK和PRK进行预期矫正度的激光切削.分别于术前、术后3,14,30,60,90,180d对术眼进行角膜地形图和裂隙灯检查和记录,同时每组随机处死1只兔子,取角膜标本进行光镜和电镜的病理学检查.结果:所有术眼均无并发症,LASIK组右眼和左眼术后180d的角膜中央曲率变化为( 4.561±0.67)D和( 8.59±0.83)D,PRK组右眼和左眼术后180d的角膜中央曲率变化为( 4.56±0.80)D和( 7.33±0.98)D.术后3～30d均有回退现象(P＜0.05),180d时已基本稳定(P＜0.05).LASIK组和PRK组比较,在 5.00D范围内的差异无显著性(P＜0.05),在 8.00D范围内的差异有显著性(P＜0.05).病理学观察显示病理损伤后LASIK与PRK的愈合过程相同.结论:LASIK与PRK治疗远视均具有安全性.LASIK对高度远视治疗的效果与可预测性优于PRK.     

LASIK术后9年角膜瓣挫裂伤延迟愈合一例

患者男,40岁.右眼LASIK术后9年,被木棒打伤1月于2009年12月21日来院就诊.患者一月前右眼被木棒击伤,因右眼疼痛,流泪不止,视物模糊,在外院诊断"角膜炎,真菌性角膜溃疡",予左氧氟沙星滴眼液,氟康唑,那他霉素滴眼液抗感染治疗一月未见好转来我院.眼部检查:视力右眼:0.2,左眼1.0,右眼混合充血(++),角膜可见错位的LASIK手术角膜瓣,颞下方角膜瓣边缘皱褶隆起,瓣下可见大片上皮植入,延伸至瞳孔区,近中央颞下方角膜瓣可见一竖圆形溃疡,约3 mm×4 mm大小,溃疡呈瓷白色,表面可见坏死组织堆积,内眼无明显异常,左眼未见异常.右眼角膜溃疡刮片未见真菌菌丝,培养阴性,诊断:右眼LASIK术后角膜瓣挫裂伤(延迟愈合).遂予角膜接触镜覆盖,典必殊眼液滴眼4次/d,两周后患者症状明显改善,停用典必殊眼液,继续予角膜接触镜覆盖治疗两周后复诊,患者右眼视力0.6,混合充血减退,角膜溃疡明显消退,可见原溃疡处角膜瓣变薄,上皮完整,瓣下仍可见上皮植入,但较前无进展,取角膜接触镜后视力维持在0.6,无眼部特殊不适.     

LASIK术后角膜瓣并发症2例

0引言准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situkeratomileu-sis,LASIK)因其术后视力恢复快,预测性及安全性较好,已成为目前国内主流的屈光手术;良好的角膜瓣对于LASIK手术的成功而言极其重要,故角膜瓣并发症如瓣裂开、皱褶、移位等问题日益受到关注[1]。现将2例LASIK术后角膜瓣并发症病例报道如下。1病例报告例1:男,19岁。因“右眼被炭化钢击伤4d”入院。既往史:患者1a前因屈光不正行双眼LASIK手术。眼科检查:视力右眼HM/20cm(伤前1.0),左眼1.0。1o经线角膜缘内见长约4mm全层穿通伤口,虹膜裂伤,玻璃体积血。CT示右眼玻璃体腔内见一6mm×6m     

PRK与LASIK术后角膜组织神经肽P物质表达的研究

目的定量检测神经肽P物质(substance P,SP)在准分子激光角膜切削术(photorefractive keratectomy,PRK)及准分子激光原位角膜磨镶术(laser in-situ keratoleusis,LASIK)术后角膜中的表达水平,探讨SP在PRK术后组织愈合中的作用。方法12只新西兰白兔,左眼行PRK,右眼行LASIK,手术均按近视-4.00D施行,切削光学消融直径6mm,切削深度80μm,于术后1个月取角膜组织,提取总RNA,逆转录cDNA,采用荧光定量RT-PCR方法,分别检测角膜组织SP的表达水平。结果PRK与LASIK术后角膜组织SP表达水平不同,PRK术后SP mRNA平均相对含量为0.024120±0.002681(SP/β-actin),LASIK术后平均相对含量为0.002500±0.000353(SP/β-actin),PRK术后明显高于LASIK术后,二者比较差异有显著统计学意义(P=0.000)。结论PRK和LASIK术后角膜组织中SP表达水平不同,SP在PRK术后角膜组织中的表达水平增高,可能参与调控PRK术后组织的愈合过程。     

LASIK术后角膜瓣完全溶解1例

患者女性　 3 0岁　因双眼高度近视于 2 0 0 0年 6月 13日行双眼LASIK术。术前常规检查未见眼部异常。屈光度 :右眼 -10 0 0DS ((-2 5 0DC× 90° =0 5 ;左眼 -8 0 0DS ((-3 0 0DC× 165° =0 6。手术顺利。术后第 1天 ,右眼畏光、流泪 ,中度睫状充血 ,角膜瓣不平。左眼角膜瓣复位良好 ,无不适感觉。给予右眼角膜瓣复位 ,戴眼罩。左眼常规点 0 1%艾氟龙。术后第 2天 ,右眼角膜瓣复位良好 ,瞳孔下缘角膜瓣下可见白色类脂质沉积。给予环丙沙星眼水点眼。术后 1周 ,角膜瓣下类脂质吸收 ,给予艾氟龙眼水点右眼 ,2 /日。 6月 2 7日 ,…     

准分子激光原位角膜磨镶术后2年致外伤性角膜瓣脱落1例

患者,男性,20岁,武警部队战士,因“双眼准分子激光角膜磨镶术(keratomileusis,laser in situ,LASIK)后2年,外伤致左眼红痛2d”入院。患者因双眼低度近视于2年前在外院行双眼LASIK手术,术后双眼裸眼视力保持在0.9～1.0之间,近2年来无明显不适。2d前训练时不慎被他人手肘碰撞致左眼受伤,当即感左眼疼痛不适、伴异物感、视物模糊。在当地医院简单处理后来我院进一步治疗。入院后查体,视力:右眼0.9,左眼0.1。左眼睑轻度红肿,球结膜充血( ),无分泌物,角膜瓣已完全脱落无法寻见,角膜刺激症状明显,角膜中央可见直径约5.0mm圆盘状全层上皮脱落…     

准分子激光角膜切削术与准分子激光原位角膜磨镶术角膜创口愈合的对比实验研究

比较准分子激光角膜切削术(photorefractive keratectomy,PRK)与准分子激光原位角膜磨镶术(1aser in situ keratomileusis,LASIK)后激光对角膜组织的切削效应及角膜的愈合情况,从组织学角度探讨角膜雾状混浊(Haze)及屈光度数回退的成因。方法24只新西兰白兔按预矫屈光度数随机分为-4.00 D组和-8.00 D组,每只兔右眼行PRK,左眼行LASIK。术后10d,1、3及6个月观察Haze情况并验光,每组随机处死3只兔取角膜行光镜、电镜及免疫组化检查,检测胶原Ⅲ、胶原Ⅳ、纤维连结蛋白(fibronectine,FN)及转化生长因子-β(transforming growth factor-β1,TGF-β2)的含量。结果行PRK术的右眼术后出现不同程度的Haze及屈光度数回退,其程度与预矫正屈光度数成正比。行LASIK术的左眼术后除少数角膜瓣周围半环形混浊外,手术区域角膜透明,屈光度数回退较右眼轻。-4.00 D组右眼与左眼术后屈光度数均稳定,-8.00 D组右眼较左眼屈光度数回退明显。右眼术后角膜愈合反应重,恢复慢。6个月时角膜基质仍处于修复阶段。左眼术后除形成角膜上皮栓及对应处基质轻度增生外,手术区域角膜瓣与基质床间界面清晰,无明显增生,角膜基质愈合反应轻、恢复快。术后所有兔眼角膜均有TGF-β1表达及活化,持续时间与角膜愈合时间一致。Haze及屈光度数回退组织学改变为：角膜上皮细胞增生,基底膜不成熟,前基质角膜细胞活化、增殖,新生胶原Ⅲ合成、排列紊乱,细胞外基质FN在角膜上皮下沉积。结论LASIK矫正近视尤其是高度近视优于PRK;角膜伤口愈合特别是基质愈合的反应程度,是。Haze及屈光度数回退的关键;TGF-β1是角膜愈合过程中重要调节因子,可通过介导角膜上皮一基质相互作用,调节胶原Ⅲ及FN的含量,参与瘢痕形成。     

神经生长因子滴眼液对兔眼准分子激光原位角膜磨镶术后角膜神经修复的影响

目的观察神经生长因子（nerve growth factor，NGF）滴眼液时兔眼准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis，LASIK）后角膜神经修复的影响。方法35只中华大耳白兔双眼接受近视性LASIK术．术后左眼用配置的100μg／ml NGF滴眼液．右眼滴平衡液（balanced salt solution，BSS）作为对照，1滴，次，3次，d。分别于术后第1天、第3天、第1周、第2周、第1个月、第3个月、第6个月各取5只兔，在观察双眼前后节反应后处死兔，摘除双侧角膜．进行角膜神经氯化金染色。光镜下观察LASIK术后角膜神经修复过程，分别比较角膜上皮、浅基质层，深基质层NGF组与BSS组LASIK术后不同时期角膜神经的数量。结果LASIK术后角膜深基质层、角膜瓣连接处的上皮下和浅基质层神经未受损，瓣切削处上皮下和浅基质层神经消失。术后不同部位的角膜神经再生程度不同．术后第6个月周边部角膜神经形态已接近正常，角膜中央仍无神经分布。NGF组与BSS组术后各时间点角膜上皮、浅基质层神经数量比较．NGF组大于BSS组，差异有显著性（P〈0．05）；两组术后深基质层神经数量比较，NGF组大于BSS组，差异也有显著性（P〈0．05）。结论NGF滴眼液对LASIK术后不同部位、不同时期角膜神经的修复有明显促进作用。     

准分子激光原位角膜磨镶术后角膜细胞凋亡的研究

目的 了解准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis,LASIK）后早期角膜基质细胞凋亡的特点并探索LASIK术后角膜愈合反应程度与角膜刀的机械损伤、激光能量的相关性。方法 20只新西兰白兔,其中10只兔左眼为LASIK-4.0D组、右眼为LASIK-8.0D组、另10只兔左眼为单纯角膜瓣组、右眼作为空白对照组,在术后4小时处死兔取角膜制作病理切片,行透射电镜检查,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标法（terminal-deoxynucleotidyl transferase medi-ated dUTP nick end labeling,TUNEL）原位显示凋亡细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察凋亡细胞形态,定量统计比较凋亡水平差别。结果 三个手术组中角膜基质中均出现凋亡细胞,主要分布于角膜瓣和基质床交接面两侧50μm范围内的基质层中;瓣缘的凋亡水平高于中央部。而空白对照组中,凋亡细胞仅出现在表层上皮,角膜基质细胞未见凋亡。三个手术组的TUNEL阳性细胞计数进行方差分析,三组之间差异无显著意义（F=1.008,P〉0.05）;每组不同个体的TUNEL阳性细胞计数存在明显的差异。结论 正常角膜基质细胞不发生凋亡。角膜基质细胞凋亡与角膜损伤有关。LASIK术后早期即可出现角膜基质细胞的凋亡表达,该表达与角膜瓣的制作有关,与激光切削的深度、能量无明显的相关性。     

发育兔眼准分子激光原位角膜磨镶术后的修复机制

目的研究发育兔眼对准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）的反应，探讨术后创面的愈合机制。方法2个月和12个月龄大耳白兔各24只，分为幼年组和成年组。每只兔右眼行LASIK手术。术后10、30、90、180d每组各6只取双眼角膜，行光镜、电镜及免疫组织化学检查，检测Ⅲ型胶原、增生细胞核抗原（PCNA）及转化生长因子-β1（TGF—β1）的含量变化。结果成年组LASIK术后角膜瓣界面清晰，角膜基质反应轻、愈合快。幼年组术后角膜上皮细胞增生较成年组活跃，10、30、90d时Ⅲ型胶原、PCNA和TGF—β的表达量高于成年组。术后180d两组动物的3种因子表达量差异无统计学意义。结论幼兔眼LASIK术后早期角膜基质组织对准分子激光切削的反应大于成年兔，但半年后角膜伤口愈合与成年兔差异无统计学意义。     

准分子激光角膜切削术与磨镶术后兔角膜基质细胞凋亡的研究

目的研究准分子激光角膜切削术(photorefractive keratectomy,PRK)和准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK)后不同时间点角膜基质细胞凋亡的特点并探索不同手术方式、不同的矫正度数对角膜基质细胞凋亡水平的影响。方法50只新西兰纯种白兔随机分为A、B两大组,每组25只;A组兔子为PRK组,B组兔子为LASIK组;每组兔子左眼进行-4.0D激光切削,右眼进行-8.0D激光切削。分别在术后4h、24h、1w、4w和3m五个时间点处死兔子,每个时间点每组随即处死5只兔子,取兔角膜制作病理切片,行透射电镜检查,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)原位显示凋亡细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察凋亡细胞形态,定量统计比较凋亡水平的差别。结果在术后4h、24hPRK组角膜基质中凋亡细胞较多,其中PRK-8.0D组的凋亡细胞数较PRK-4.0D组多,其差异有显著性意义(P<0.05);在术后4h、24h两个时间点,PRK-8.0D组与LASIK-8.0D组的角膜基质中的凋亡细胞数进行比较,两者差异有显著性意义(P<0.05);在不同的时间点,LASIK-4.0D组与LASIK-8.0D组TUNEL阳性细胞计数的比较,两者之间差异无显著性意义(P>0.05)。结论LASIK术后角膜基质细胞的凋亡水平较PRK低,凋亡程度与制瓣中的角膜损伤有关,与切削深度无明显相关;PRK术后角膜基质细胞的凋亡水平随切削深度增加而增高。     

LASIK术后角膜瓣丢失1例

患者男,33岁。因双眼近视14年来我院就诊要求行手术治疗。术前眼部检查:VOD0 .0 3(- 14 .5 0 DS　- 2 .0 0 DC×180°→0 .8) ,VOS0 .0 3(- 14 .0 0 DS　- 2 .0 0 DC×170°→0 .8)。双眼前节及眼底未见特殊异常。行L ASIK手术(Ker-atom- 准分子激光机和SCMD角膜板层刀)。术中右眼正常,左眼角膜瓣游离,角膜瓣厚度为130 μm,激光治疗光斑大小为4 .9/ 4 .1m m。术毕左眼角膜瓣对位良好,并行左眼睑封闭减少眼球活动。术后第一天患者诉左眼疼痛。检查见右眼无异常。VOS0 .0 2 ,角膜中央约4 m m上皮缺损,未做特殊处理,给与艾氟龙、泰…     

LASIK术后继发性圆锥角膜1例

患者，男，45岁。因左眼LASIK术后9年、视力下降8年到我院就诊。患者既往双眼高度近视，1996年在外院行左眼LASIK术，右眼因并发性白内障未行LASIK手术，术后左眼视力0．5，1年后左眼视力开始逐渐下降，2004年4月在外院检查左眼视力为0．03，矫正0．2，角膜地形图检查右眼角膜中央厚度为611μm，屈光度43．84D，角膜前表面屈光度42．4D，后表面屈光度50．8D，最大拟似角膜计值（SimK）43．8D，最小SimK值42．9D；左眼角膜中央厚度为339p．m，屈光度52．87D，角膜前表面屈光度43．0D，后表面屈光度58．3D，最大SimK值53．6D，最小SimK值50．2D。诊断为左眼继发性圆锥角膜，予配戴硬性角膜接触镜治疗。2005年8月来我院就诊，查体：VODFC／30cm，不能矫正，VOS0．06，矫正-16．0 DS=0．3，右眼角膜透明，晶状体核性及后囊下混浊。     

超薄角膜瓣准分子激光原位角膜磨镶术和准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术对兔角膜组织愈合影响的对比研究

目的 探讨超薄角膜瓣准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)和准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术(LASEK)对兔角膜组织愈合的影响.方法 实验研究.32只新西兰白兔随机分为两组各16只,一组右眼行超薄角膜瓣LASIK,另一组右眼行LASEK,左眼对照.两组兔眼均行-10.00 D准分子激光切削.术后裂隙灯显微镜观察角膜情况,术后1、3个月取两组兔激光切削区角膜分别进行光镜、透射电镜检查,并采用免疫组化和RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白及转化生长因子β1(TGF-β1)在其中表达水平.RT-PCR结果采用灰度扫描,结果采用t检验进行组间比较.结果 超薄角膜瓣LASIK组术后角膜愈合反应轻、恢复快,角膜保持透明,无角膜上皮下雾状混浊(haze)发生.LASEK组术后角膜愈合反应重,恢复慢,1个月时角膜发生1级haze(62.5%)和2级haze(37.5%),3个月时发生0.5级haze(43.75%)和1级haze(56.25%).术后1、3个月超薄角膜瓣LASIK组和LASEK组角膜前基质内均有Ⅲ型胶原、FN和TGF-β1蛋白及其mRNA的表达,但LASEK组的表达明显增强(t=18.47,11.98;P<0.01);两组间Ⅰ型胶原蛋白及其mRNA的表达无统计学意义(t=0.72,0.36,0.47,2.38;P>0.05).超薄角膜瓣LASIK组术后3个月Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、FN、TGF-β1 mRNA的表达与正常对照组差异无统计学意义(t=2.42,1.54,-0.83;P>0.05).结论 动物实验提示,模拟高度近视治疗的超薄角膜瓣LASIK术后角膜组织愈合反应明显优于LAsEK术后.(中华眼科杂志,2009,45:594-600)     

准分子激光原位角膜磨镶术1眼未制瓣的临床观察

患者,女,26岁,个体。右眼屈光度为:-2.50DS/-0.75DC×180°,左眼为:-3.00DS。于2004年11月在我科进行屈光手术,右眼行准分子激光原位角膜磨镶术(laserin situ keratomileusis,LASIK)后,左眼未制角膜瓣直接进行了激光切削。发现操作失误后,左眼给予配戴角膜接触镜3d。术后右眼视     

准分子激光原位角膜磨镶术后角膜上皮植入一例

患者，男，62岁。长途旅行后左眼视力忽然下降1天，伴畏光、流泪来诊。既往史：1年半以前，因双眼近视曾行准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)矫正。无眼外伤及其他眼科疾病史。近1年感左眼视力轻度下降，未到眼科就诊。眼科检查：视力右眼1．0，左眼0．04。左眼球结膜混合充血，角膜中央直径约4mm区域水肿、浑