乌鲁木齐市腹泻病患者和家畜家禽中携带小肠结肠炎耶尔森菌毒力岛大肠埃希菌的调查

为了解乌鲁木齐市 (乌市 )腹泻患者及家畜家禽中小肠结肠炎耶尔森菌毒力岛 (HPI)的携带情况和腹泻病患者的临床特征 ,我们于 1997年 6～ 10月对乌市 5 10名腹泻病患者进行了相关的流行病学调查和主要腹泻病原分析。1.材料与方法 :收集乌市有代表性的四家医院就诊的腹泻患者的粪便标本并采集我市各类家畜家禽新鲜粪便标本。EHECO15 7∶H7PCR诊断试剂盒 ,ESIEC诊断血清购自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所。细菌的分离鉴定按常规方法进行。对初步鉴定为EHECO15 7∶H7的菌株采用聚合酶链反应 (PCR)方法检测其溶血素和志贺样毒…     

小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛：结构与功能

小肠结肠炎耶尔林菌强毒力岛（Ｙｅｎ ＨＰＩ）是最近发现的又一细菌毒力岛共结构和功能的研究将进一步加深入人们对小肠结肠炎耶尔森菌毒力或致病力的认识。本文综述了该毒力岛结构和功能的研究进展。     

尿道致病性大肠埃希菌毒力的研究进展

在感染性疾病中，尿路感染（Urinary tract infections，UTIs）的发病率仅次于呼吸道感染，居第二位，尤以妇女和儿童多见。30岁的妇女中有1／3～1／4都有过急性尿路感染的病史，且27％的病人会在6个月再发。泌尿路感染按解剖部位不同分为尿道下部和上行性感染，前者包括尿道炎和膀胱炎，后者指肾盂肾炎。肾盂肾炎是尿路感染最严重的形式，当病史超过半年或一年就有转成慢性肾盂肾炎的可能性，而慢性肾盂肾炎久治不愈是肾功能衰竭最常见的原因之一。     

致病性大肠埃希菌高致病性毒力岛irp2基因序列的扩增与分析

目的探讨致病性大肠埃希菌（EPEC）中高致病性毒力岛（HPI）irp2基因与致病性的关系。方法根据Genebank中irp2基因设计特异性引物，应用聚合酶链反应（PCR）技术扩增基因全长，克隆入pUCm-T载体，并通过酶切和测序鉴定。结果160株EPEC中有16株（10．00％）扩增出278bp基因片段，该基因片段与GeneBank中公布的耶尔森菌HPI irp2基因的同源性高达97％以上。结论部分EPEC具有耶尔森菌毒力岛HPI基因序列，该毒力岛可能与EPEC的致病性有一定相关性。     

小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛:结构与功能

小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛(Yen HPI)是最近发现的又一细菌毒力岛,其结构和功能的研究将进一步加深人们对小肠结肠炎耶尔森菌毒力或致病力的认识。本文综述了该毒力岛结构和功能的研究进展。     

94株肠产毒性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛的检测

目的：检测94株肠产毒性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛。方法：对分离自中国腹泻病人的肠产毒性大肠杆菌，采用PCR和DNA打点杂交的方法，检测耶尔森菌强毒力岛核心区的irp8、irp2、irp3、irp4、irp5及fyuA基因。结论：分离的肠产毒性大肠杆菌，14％（13／94）的菌株irp8、irp2、irp3、irp4、irp5及fyuA基因扩增阳性，以irp2及fyuA为探针进行DNA打点杂交，上述菌菌株均为阳性。结论：14％的肠产毒性大肠杆菌中国分离株携带耶尔森菌强毒力岛。     

O:3和O:9小肠结肠炎耶尔森菌主要毒力基因分布调查

目的了解我国常见致病性血清型毒力基因的分布情况。方法参照国外发展成熟的聚合酶链反应(PCR)技术进行毒力基因检测。结果实验证实在我国分离到的主要流行血清型O：3和O：9小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因分布特征为：ail^ 、ystA^ 、ystB^-、yadA^ 、virF^ 占562％；ail^ 、ystA^ 、ystB^-、yadA^-、virF^-占25．6％；其他型占18.2％。结论通过实验证实在我国引起感染暴发和流行的血清型O：3和O：9小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因的分布主要为：ail^ 、ystA^ 、yadA^ 、ystB^-、virF^ 型，很少部分的ail^ 、ystA^ 、ystB^-、yadA^-、virF^-根据以前的资料被认为是毒力质粒丢失的结果，其他型很有可能是非致病的菌株。     

大肠埃希菌LEE毒力岛的临床流行病学调查

目的：了解携LEE毒力岛大肠埃希菌在杭州不同人群中的流行状况。方法：应用PCR技术检测不同临床来源的大肠埃希菌菌株的LEE毒力岛,并对检出的intinmin基因3’端部分以PCR法和限制性酶切分析法进一步分型,结果：在杭州市区2周岁以下的腹泻婴幼儿中,携LEE毒力岛的大肠埃希菌的检出率高达20．0％,而在2岁以上的腹泻人群中检出率仅为3．0％,检获的大肠埃希菌LEE毒力岛的intimin基因以β型为主（占45．0％）,并有20．0％不能按本PCR方法分型,限制酶切分析表明,β型可进一步分为2个亚型,本文分离菌株的γ型intimin基因与EHEC O157：H7 933株的γ型intimin基因酶切图谱差异较大,检获的携LEE毒力岛的大肠运往希菌菌株中,仅有1／5能用国内目前的致泻性大肠埃希菌诊断血清确定O抗原。结论：携LEE毒力岛大肠埃希菌为杭州市致婴幼儿腹泻的主要细菌性病原。LEE毒力岛的检测应成为EPEC的诊断和流行病学调查主要手段。     

产毒性大肠埃希氏菌质粒特征初步分析

本文对来自全军五个军区和第一军医大学附属珠江医院及广州远郊九佛农村检测的２０６株埃希氏菌阳性株进行了质粒特征的初步分析。发现质粒携带率为９０．８％，携带质粒数量１￣７个不等。最大质粒分子量为８２．９Ｍｄ，最小１．１Ｍｄ，以大分子量质粒居多且稳定。５３Ｍｄ和４５Ｍｄ质粒为优势质粒。不同地区和时期有相同质粒的流行株存在，环境流行株和人群流行株质粒特征不同。     

婴幼儿致病性大肠埃希菌的毒力基因检测研究

目的通过对婴幼儿腹泻病例粪便标本进行致病性大肠埃希菌的分离鉴定及毒力基因检测,从分子生物学方面研究致病性大肠埃希菌引起婴幼儿腹泻的分布,以降低婴幼儿致病性大肠埃希菌的感染率。方法收集江西省儿童医院2011-2012年婴幼儿腹泻病例357份粪便标本,按照致病性大肠埃希菌分离鉴定程序用EC肉汤增菌过夜,增菌后用麦康凯琼脂培养基分离培养,可疑菌用API 20E生化鉴定出大肠埃希菌,然后用聚合酶链反应(PCR)检测致病性大肠埃希菌相应的毒力基因。结果 357份腹泻患者粪便标本中,检出37份携带毒力基因的致病性大肠埃希菌,检出率为10.36%,携带毒力基因的肠聚集性大肠埃希菌(EAggEC)、肠道致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠道侵入性大肠埃希菌(EIEC)、肠道出血性大肠埃希菌(EHEC)检出率分别为8.4%、0.56%、1.12%、0.28%,产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)未检出。结论婴幼儿腹泻病例中致病性大肠埃希菌主要由EaggEC引起,其次为EIEC,进一步证实对致泻大肠埃希菌进行PCR毒力基因检测具有重要临床意义。     

山东省腹泻病人携带耶尔森菌HPI毒力岛大肠杆菌的调查

目的 了解携带耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌的易感人群、感染率、临床症状、分离率。方法 对4个医院1997年6～11月就诊泻患者,进行流行病学调查并收集大便标本,进行细菌分离和鉴定。结果 在671例腹泻病人中,共检出20个属种449株致病毒,志贺菌检出率为25.48%,致泻性大肠杆菌为15.05%,对于176株疑似产志贺样毒素且具侵袭大肠杆菌(ESIEC)菌株采用irp-2、irp-B基因探针进行菌落原位杂交,检出42株携带HPI毒力岛的大肠杆菌。与42株携带HPI毒力岛的大肠杆菌相关的腹泻病人所表现的临床症状为食欲不振、腹痛、腹泻、寒战、乏力、体温正常或低热,粪例多为粘液便或水样便,日腹泻次数超过6次以上者为33例,占78.57%。各年龄组均有感染,10岁以下儿童为主,占33.33%.结论 自671例腹泻病人的粪便标本中,分离到的志贺菌占首位,致泻性大肠杆菌次之;在致泻性大肠杆菌以携带耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌为主(6.26%)。     

我国腹泻病患者和家畜家禽粪便标本中携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的调查

目的　了解携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国腹泻病患者粪便标本、动物粪便标本及部分食品标本中的存在情况和所致腹泻病的临床特征。方法　使用菌落原位杂交、DNA打点杂交和PCR扩增等方法。结果　在各地送检的从腹泻病患者粪便标本中分离到的、用常规方法不能鉴定的大肠杆菌中 ,均检出带有小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌菌株 ,检出率为 2 7.0 5 % (436 / 16 12 )。从市售食品标本中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的检出率为 10 .2 3% (9/ 88)。从家畜家禽粪便中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌检出率为 5 .71% (16 / 2 80 )。携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌所致腹泻的典型临床表现为食欲不振、腹痛、寒战乏力、正常体温或低热、每日腹泻多在 6次以上、多为粘液便。结论　携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国分布广泛 ,检出率高于其他几类致泻性大肠杆菌 ,对我国人民的健康是一个潜在的威胁     

阴沟肠杆菌菌株中携带小肠结肠炎耶尔森菌毒力岛irp-2基因的检测

目的:了解从云南战区感染性腹泻患者粪便标本中分离的阴沟肠杆菌是否携带小肠结肠炎耶尔森菌H IP(H ighPathogen ic ity Island)毒力岛irp-2基因,并研究菌株的毒力及耐药情况。方法:用PCR扩增法检测毒力岛irp-2基因,小白鼠腹腔注射检测毒力。结果:从1040例腹泻病人粪便分离的25株阴沟肠杆菌中,检测出18株携带小肠结肠炎耶尔森菌H IP毒力岛irp-2基因,毒力试验证实有较强毒力,药敏试验筛选出了敏感、中度敏感及耐药三类药敏谱。结论:云南战区检出的阴沟肠杆菌含有小肠结肠炎耶尔森菌H IP毒力岛irp-2基因且为毒力较强的菌株,对人类的健康具有潜在性的威胁。建立的药敏谱,为军队和地方今后在治疗由此菌引起的感染提供重要参考。     

三对引物同时PCR分型检测产毒素大肠杆菌的方法及在分子流行病学研究中的应用

在产毒素大肠杆菌（ＥＴＥＣ）肠毒素基因内设计合成三对引物，建立了三对引物同时ＰＣＲ检测ＥＴＥＣ的方法，一次ＰＣＲ即可扩增出６２７ｂｐ（ＬＴｈ）、２４０ｂｐ（ＳＴＩａ）和１６９ｂｐ（ＳＴＩｂ）三种肠毒素基因片段，可同时分型检测出ＬＴｈ、ＳＴＩａ、ＳＴＩｂ、ＬＴｈ－ＳＴＩａ、ＬＴｈ－ＳＴＩｂ五种基因型的ＥＴＥＣ，与非ＥＴＥＣ对照菌无交叉反应，最小检出量为１０ｃｆｕ，显示了很高的特异性和敏感性。将建立的方法用于山东省六县市６２３例大肠杆菌致泻标本的检测，阳性率为４０．３％，并能鉴别ＥＴＥＣ的基因型，为ＥＴＥＣ腹泻的分子流行病学研究提供了有效的检测手段     

聚合酶链反应方法检测鼠疫耶尔森菌的内部对照研究

目的 避免聚合酶链反应(PCR)方法检测鼠疫菌发生假阴性。方法 通过克隆，将16srRNA引物的扩增产物与鼠疫菌F1抗原基因克隆子相连，并以其作为内部对照模板进行PCR试验。结果 得到了在包含F1抗原基因中连接有16SrRNA扩增产物的质粒，并初步确立了作为内部对照质粒的参照标准浓度。结论 在采用PCR方法检测鼠疫菌时，加入适宜浓度的内部对照质粒作为模板与待检样品同时扩增，可避免假阴性的发生。     

用4对引物聚合酶链反应检验鼠疫菌的研究

目的 以传统的“四步检验”法为“金标准”，用4对引物聚合酶链反应（PCR）检测鼠疫动物材料，从而探索一种鼠疫快速诊断的方法。方法 毒力测定和4对引物PCR按常规方法进行。结果 在150份动物材料中，传统的“四步检验”作为金标准共检出阳性62份，而PCR法共检出阳性52份，经χ^2检验，差异无统计学意义（χ^2=1．42，P〉0．05）。PCR实验在4h内全部完成。结论 4对引物PCR法具有快速、敏感等优点，可以用于鼠疫的快速诊断和流行病学调查。     

PCR快速检测肠毒素大肠杆菌方法的研究

目的利用PCR技术,尝试建立特异性引物PCR快速检测肠毒素大肠杆菌的方法。方法设计肠毒素大肠杆菌LT基因的特异性引物,优化PCR反应条件,对16种样品进行细菌通用引物和特异性引物的PCR扩增,从而鉴定肠毒素大肠杆菌。结果所有样品都出现细菌通用引物的扩增条带,而只有肠毒素大肠杆菌有特异性引物的PCR扩增产物,结果与实际完全一致。结论该方法具有简单、迅速、准确的特点,可应用于对肠毒素大肠杆菌的鉴定。     

多重实时PCR检测沙门菌、志贺菌和致泻性大肠埃希菌

目的 建立多重实时荧光PCR检测沙门菌侵袭蛋白A基因（invA）、肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）不耐热肠毒素基因（elt）、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌侵袭力基因（ipaH）的方法。方法 优化多重实时荧光PCR的反应条件,检测系列10倍稀释的阳性菌DNA提取物。90份腹泻患者粪便样品经缓冲蛋白胨水（buffered peptone water,BP）增菌6h后进行多重实时荧光PCR检测,并对阳性标本进行菌株分离和鉴定。结果 多重实时PCR方法最低可以检测到10CFU／μl的福氏2aF301株、10。CFU／μl的鼠伤寒沙门菌和ETEC44815株。检测腹泻患者粪便样品,elt基因阳性率为14．4％（13／90）,ipaH基因阳性率为5．6％（5／90）;并从阳性样品中分离到3株elt基因阳性大肠埃希菌和4株ipaH基因阳性大肠埃希菌。整个检测过程可在10h内完成,其中包括BP增菌6h。结论 建立了同时检测invA、elt、ipaH毒力基因的多重实时荧光PCR方法,具有高度的特异性,可用于沙门菌、肠产毒性大肠埃希菌、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌菌株的毒力基因鉴定及临床腹泻粪便标本的快速筛检。     

三对引物同时PCR分型检测产毒素大肠杆菌的方法及在分子流行病学研究中的应用

在产毒素大肠杆菌肠毒素基因内设计合成三对引物，建立了三对引物同时ＰＣＲ检测ＥＴＥＣ的方法，一次ＰＣＲ即可扩增出６２７ｂｐ（ＬＴｈ）、２４０ｂｐ（ＳＴ Ｉａ）和１６９ｂｐ（ＳＴ Ｉｂ）三种肠毒素基因片段，可同时分型检测出ＬＴｈ，ＳＴ Ｉａ、ＳＴ Ｉｂ、ＬＴｈ－ＳＴ Ｉａ、ＬＴｈ－ＳＴ Ｉｂ五种基因型的ＥＴＥＣ，与非ＥＴＥＣ对照菌无交叉反应，最小检出量为１０ｃｆｕ，显示了很高的特异性和敏感性。将建立的