全自动蛋白电泳系统在地中海贫血筛查中的应用价值

目的探讨全自动蛋白电泳系统在地中海贫血(简称地贫)筛查中的应用价值,并对5510例测定结果进行分析。方法用法国Sebia公司生产的HydrasysLC电泳仪进行血红蛋白电泳,用其配套的Hyrys扫描系统扫描出各种血红蛋白(Hb)含量,用pH8.6醋酸纤维薄膜定量电泳作HbH、HbBart's、HbA2含量对比,用醋酸纤维薄膜微量电泳作血红蛋白区带对比;用碱变试验作HbF对比。结果测定标本5510例,醋酸纤维薄膜电泳法及全自动蛋白电泳系统电泳法都检出β地中海贫血480例;α地中海贫血:用pH8.6醋酸纤维薄膜电泳法检出α地中海贫血(HbH病)151例、HbBart's区带115例,用全自动蛋白电泳系统电泳法检出HbH病148例、HbBart's区带112例,两种方法检出其它异常Hb都一致:HbCS均为73例、HbE20例、其它异常Hb(HbD、HbG、HbK、HbJ等)区带39例。结论全自动蛋白电泳系统对异常血红蛋白病及β地中海贫血检查有良好的效果;在α地中海贫血的检查中,对HbCS的检出效果非常好,而HbH与HbBart's区带多较淡染(HbH带尤其明显),偶然出现假阴性结果。在联合分析参数平均红细胞容积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、红细胞脆性试验及必要时行醋酸纤维薄膜微量电泳的基础上,全自动蛋白电泳系统在地中海贫血诊断中有很好的应用价值。     

尿液转甲状腺素蛋白评价肾小球损害的指标作用研究

目的 肾小球滤过试验是评价肾小球功能的主要指标.本研究目的 是探索敏感、特异的评价肾小球损害的指标.方法 利用赢东尿液分析仪(韩国),对肾小球肾炎患者尿液进行尿蛋白、尿白细胞、尿红细胞测定;利用SDS～PAGE电泳对尿液转甲状腺素蛋白(TTR)与其他分子蛋白进行比较.结果 ①选择肾小球肾炎患者尿液蛋白定性试验结果,尿蛋白含量在( )～(卅)之间.②尿液中发现转甲状腺素蛋白.③肾小球肾炎尿蛋白定性( )患者,TTR占的比例为21.8%,尿蛋白定性(#),TTR占的比例为18.3%,尿蛋白定性(卅),TTR占的比例为8.5%.结论 尿液转甲状腺素蛋白含量有可能作为评价肾小球损害的敏感指标.     

全自动蛋白电泳系统在筛查β地中海贫血1 913例中的应用

目的 讨论全自动蛋白电泳系统在筛查β地中海贫血的临床应用价值.方法 用法国SEBLA公司生产的HydrsysLC电泳仪进行血红蛋白电泳,用其配套的Hyrys扫描系统对HbA、HbA2、HbF区带进行扫描,得出各区带的含量,用碱变性试验对HbF含量检测,比较两种方法对HbF含量的检测结果.结果 检测临床抗凝血标本1 913例,检出HbA2增高(含量>4.0%)132例,阳性率6.9%.同时伴有HbF增高者36例,对于HbF碱变性试验增高者(>3.1%),全自动蛋白电泳可分辨出HbF区带,且可定量扫描,扫描结果与HbF碱变性试验基本一致.HbF碱变性试验测定的HbF含量在正常范围者(1%～3.1%),电泳分辨不出HbF区带,与HbA区带一起组成Hb(A F)区带.结论 全自动蛋白电泳系统能够清晰分辨出异常增高的HbA2、HbF,且可定量扫描,定量扫描HbF结果与HbF碱变性试验检测结果基本一致,在简便、快捷检查β地中海贫血有良好的效果.     

湖北道地药材荆半夏的高效毛细管电泳指纹图谱分析

目的 测定荆半夏药材中苯甲酸的含量.方法 采用高效毛细管电泳法.电泳条件为:石英毛细管柱(75μm×60cm);运行缓冲液为20mmol/L的硼砂溶液(25℃时pH=9.18);分离电压20kV;进样时间为5s;温度为25℃,检测波长为220nm.结果 半夏苯甲酸在10～100μg/ml范围内呈良好的线性关系.平均回收率分别为94.6%、97.9%、96.9%;RSD分别为2.2%、1.8%、1.7%(n=3).结论 毛细管电泳法用于测定荆半夏中苯甲酸的含量是可行的.     

尿中多胺的毛细管电泳激光诱导荧光测定法

目的 :建立高效毛细管区带电泳 (CZE)激光诱导荧光 (LIF)测定人尿中多胺 (POL)的新方法。方法 :样品用 5mmol/L的HClO4分离蛋白 ,样品中多胺与异硫氰酸荧光素 (FITC)完成衍生反应后 ,用四甲基乙二胺(TEMED)作内标 ,在 15mmol/L的硼酸盐缓冲液 (pH 8.5 )中 ,运用毛细管区带电泳进行色谱分离 ,以激光诱导荧光测定法测定多胺。结果 :多胺测定在 10～ 2 0 0 μg/L范围内具有良好的线性关系 (r =0 .996 ) ,最低检测限为 16μg/L ,日内变异系数 (CV) 3.5 1%～ 4 .6 1% ,日间变异系数 (CV) 3.74 %～ 4 .83% ,方法平均回收率为 96 .0 0 %～ 99.33%。结论 :本方法简便、快速、定量可靠 ,可用于临床实验室测定人尿中多胺水平     

MCV、MCH联合Hb电泳在地中海贫血干预中的意义探讨

目的:探讨常用的地中海贫血筛查方法红细胞平均体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、血红蛋白(Hb)电泳检测在地中海贫血诊断中的应用。方法:对5 000例儿童进行血细胞分析,红细胞平均体积(MCV)下降(MCV<80 fl)且平均红细胞血红蛋白含量(MCH)<27 pg实施血红蛋白电泳检测,Hb电泳异常者再进行基因诊断。结果:5 000例受检者中,MCV、MCH下降609例(占12.18%),血红蛋白电泳检测异常者460例(占9.2%),基因确诊285例,其中α-地贫168例,β-地贫114例,α-地贫复合β-地贫3例。结论:MCV、MCH、Hb电泳检测地中海贫血操作简便,灵敏度和特异度高,且价格低廉,易被大众接受,适合在基层医院推广。     

18例骨髓瘤肾病患者血清免疫固定电泳的检测及临床分析

目的 为探讨免疫固定电泳(IFE)对骨髓瘤性肾脏疾病诊断的价值.方法 采用免疫球蛋白(G、A、M)定量测定、血清蛋白电泳、免疫固定电泳,对161例肾内科肾衰和肾病综合症患者进行检测.免疫球蛋白采用免疫散射比浊法测定,血清蛋白电泳采用琼脂糖电泳,免疫固定电泳采用琼脂糖电泳+免疫固定技术.结果 161例患者血清经蛋白电泳筛选出11例M蛋白,检出率为6.8%.有18例患者血清经免疫固定均出现M蛋白,检出率为11.1%.18例患者血清经免疫固定电泳均出现致密深染单克隆M蛋白,结合Ig定量检测并依据判断标准确认为MM.结论 血清免疫固定电泳(IFE)能明确提示骨髓瘤肾病,适于作为肾脏疾病的常规检查项目,在诊断和鉴别诊断骨髓瘤肾损害中有重要意义.     

高效毛细管电泳法测定莱菔子中芥子碱含量

目的:测定中药莱菔子中芥子碱的含量。方法:采用高效毛细管电泳法,电泳条件为石英毛细管柱(75μm×90cm,实际长度81cm),运行缓冲液为0.02mol/L Na2HPO4:0.02mol/L NaH2PO4=1:1(25℃时pH=6.89),分离电压为25kV,压力进样30mbar×8s,温度为25℃,检测波长为326nm。结果:芥子碱在0.2～1.0mg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.9995),平均回收率为99.50%,RSD为1.21%。结论:高效毛细管电泳法可用于测定莱菔子中芥子碱的含量。     

高原红细胞增多患者血清睾酮的变化

1临床资料在海拔4300 m地区高原人群89例中检出高原红细胞增多症患者27(男26例,女1)例,年龄16～47岁,Hb血红蛋白平均230.8 g/L,红细胞压积平均70.7%. 测定了血浆中EPO,CGRP,ET含量,同时与高原正常人血浆中含量进行了对比,经过方差分析无统计学意义. 根据高原红细胞增多症患者中男性占96.2%的情况,考虑高原红细胞增多症的发病是否与性激素有关,我们测定了血清睾酮和E2,结果高原红细胞增多症患者睾酮为698～304 ng/L. 移居高原者27(男12,女15)例,年龄52～24岁,Hb 154.6 g/L,血清睾酮为765～178 ng/L. 世居高原者35例,年龄52～15岁,男15例,女20例,Hb 147.7 g/L,血清睾酮为886～424 ng/L. 高原红细胞增多症E2为34.3 ng/L,移居高原者为33.1 ng/L,世居高原者为26.4 ng/L,无统计学意义.     

毛细管电泳法测定银黄胶囊及银黄颗粒中黄芩苷和绿原酸的含量

目的 建立同时测定银黄胶囊及银黄颗粒中黄芩苷和绿原酸含量的方法.方法 采用毛细管电泳法,电泳条件:未涂层弹性融硅石英毛细管柱(55 cm×75 μm ID,有效长度47 cm);以40 mmol/L 硼砂溶液(pH9.30)为运行缓冲液;分离电压15 kV;重力进样5 s(高度15 cm);检测波长310 nm.结果 以对硝基苯甲酸为内标,黄芩苷、绿原酸的线性范围分别为20.2～101.0 μg/mL(r=0.9981),5.15～25.75 μg/mL(r=0.9991).银黄胶囊中黄芩苷、绿原酸的平均回收率分别为105.0%、97.2%,银黄颗粒中黄芩苷、绿原酸的平均回收率分别为101.3%、96.6%.结论 该法简便、快速、准确可靠,可用于银黄胶囊及银黄颗粒的质量控制.     

HPCE法测定生黄芩、酒黄芩中黄芩苷含量

目的 :建立中药饮片生黄芩、酒黄芩中黄芩苷含量测定的毛细管电泳法。方法 :毛细管电泳法紫外检测生黄芩和酒黄芩中黄芩苷的含量 ,以 4 0mmol/L硼砂缓冲液 (pH 8.5 )为电泳介质 ,未涂层融硅毛细管 (5 0 μm× 4 7cm) ,有效分离长度 4 0cm ,压力进样 17kPa·s ,2 5kV恒压电泳 ,检测波长为 2 80nm。结果 :黄芩苷的线性范围在 0 .0 5～ 0 .80mg/ml,回归方程Y =2 .1335X - 0 .0 5 77,r=0 .9991,平均回收率 98.96 % ,n =5 ,RSD =1.0 2 %。结论 :本方法快速、简便、结果准确 ,重现性好 ,可用于生黄芩、酒黄芩中黄芩苷的含量测定。     

中国人先天性溶血性贫血红细胞膜骨架4.1蛋白电泳变异型

目的:鉴定中国人先天性溶血性贫血(溶贫)红细胞膜4.1蛋白(band 4.1)电泳变异类型.方法:以普通显微镜、相差镜和扫描电镜观察25例溶贫患者红细胞形态学变化.以4%～15% 梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳作红细胞膜蛋白定性定量分析.结果:(1)25例红细胞形态学异常溶贫患者中,band 4.1定性定量改变者11例(44%).(2)Band 4.1电泳变异型:①4.1a/b亚基同时缺陷;②4.1a亚基缺陷,a/b亚基相对含量比值倒置(患者0.65～1.20,正常对照1.87±0.22);③4.1a亚基部分缺失伴异常区带(相对分子质量70 000、62 000、48 000);④4.1a亚基完全缺失伴74 000异常区带.(3)除了band 4.1a完全缺失者为筛孔状红细胞形态变化以外,其他电泳变异型与细胞形态学变化无明显对应关系.结论:Band 4.1缺陷不仅可以导致红细胞椭圆形变和球形变,还可导致其他形态改变如筛孔形状.除了spectrin、band 3 以外,band 4.1缺陷是中国人遗传性球形红细胞增多症(HS)另一种常见病因,而欧美国家为ankyrin缺乏,在日本更常见band 4.2缺乏.Band 4.1a完全缺失和部分缺失伴异常区带电泳型未见于国外文献报道.结果提示,HS的主要病因和band 4.1变异型差异可能与种族不同有关.     

血清免疫固定电泳在多发性骨髓瘤诊断中的意义

目的 探讨血清免疫固定电泳在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)诊断中的临床意义.方法 对340例MM患者进行蛋白电泳、免疫固定电泳、尿本周蛋白及免疫球蛋白定量检测.结果 340例MM患者各型免疫固定电泳全部检出,阳性率100%.其中最多为IgG型,212例(62.35%),其次为IgA型,85例(25.0%),而IgM型20例(5.88%),IgD型5例(1.47%),双克隆型8例(2.35%),游离的轻链型10例(2.94%).3种检测方法进行各免疫分型比较:免疫固定电泳与血清蛋白电泳和尿本周蛋白比较(除双克隆型外)差异均有统计学意义(P<0.05).结论 血清蛋白电泳、免疫固定电泳能快速、准确地进行MM分型,对诊断、病情检测、预后判断多发性骨髓瘤有重要价值.     

两种提取青翘挥发油工艺的比较研究

目的: 以青翘收油率和β-蒎烯含量的综合评分为考察指标,比较超临界CO2萃取(SFE-CO2)与水蒸气蒸馏(SD)两种工艺. 方法: SFE-CO2, SD分别以正交设计提取青翘挥发油,采用气相色谱法(GC)测定挥发油中β-蒎烯的含量. 结果: SFE-CO2法正交设计的平均收油率为3.40%(0.94%～7.85%),β-蒎烯平均含量6.72%(1.49%～20.59%);SD法正交设计的平均收油率为2.14%(1.01%～3.58%),β-蒎烯平均含量为47.37%(30.99%～65.75%). 结论: ① SFE-CO2收油率相对较高,且具有绿色环保概念;②青翘SD的挥发油中β-蒎烯含量高,其制备方法投资少且适宜实验研究.     

高效毛细管电泳法测定血清中头孢他啶的含量

采用高效毛细管电泳法测定血清中头孢他啶的含量。毛细管 6 0cm× 75 μm ;运行缓冲液 2 5mmol/L四硼酸钠 (pH8 2 ) ,高压进样 5s,分离电压 2 0kV ,温度为 2 5℃ ,检测波长为 2 5 4nm ,地塞米松磷酸钠为内标。头孢他啶在 0 .6 2 5～ 2 0 μg/mL浓度范围内线性关系良好 (r =0 .9997) ,平均回收率为 98.81 % (n =5 ,RSD =1 .88% )。     

环丙沙星体外诱导铜绿假单胞茵外排泵耐药机制的研究

目的:研究环丙沙星体外诱导铜绿假单胞菌耐药的外排泵机制.方法:多步诱导法对5株铜绿假单胞菌进行体外诱导耐药实验,应用外排泵抑制荆(CCCP)选择出外排泵阳性的铜绿假单胞菌菌株,将上述铜绿假单胞菌诱导前后的菌株分别行增菌培养,提取外膜蛋白,行蛋白电泳,紫外凝胶成像后分析诱导前后外膜蛋白中OprM量的变化来研究环丙沙星体外诱导对铜绿假单胞菌外排泵的影响.结果:诱导后的5株铜绿假单胞菌中外排泵阳性的为3株,蛋白电泳显示诱导后铜绿假单胞菌外膜中外排泵蛋白OprM含量明显增多.结论:环丙沙星体外诱导铜绿假单胞菌耐药的机制之一是增加细菌外膜外排蛋白的含量.     

集成毛细管电泳芯片分离尿蛋白条件的初步优化

目的:探讨集成毛细管电泳芯片快速分离尿蛋白条件的初步优化。方法:考察了分离电压(1200～2000V)、进样时间(10～30s)及乙胺浓度(0.5～2%(v/v))对尿蛋白分离的影响。结果:以75mmol/L pH10.3硼酸盐缓冲液含9.73μmol/L乳酸钙、1%(v/v)乙胺为电泳缓冲液,在以500V的进样电压进样15s、分离电压1500V条件下,电泳分离尿蛋白能分出更多蛋白峰。结论:通过优化可以有效地提高电泳芯片分离尿蛋白的效果。     

桥粒蛋白生化免疫特性研究

桥粒在含高浓度脲(0.5mol/L)的变性剂中(100℃)作用30分钟即能完全溶解.经SDS-PAGE分离获得7条高分子量(>67kd)蛋白带和一些小分子量角蛋白。这7条高分子量蛋白带是桥粒的特异组成蛋白,即桥粒蛋白Ⅰ和Ⅱ(Desmoplakin Ⅰ和Ⅱ),多肽3、4a、4b、5、6,它们的分子量分别为250kd和215kd、165kd、130kd、115kd、83kd及75kd.用制备电泳法1次可提取Desmoplakin Ⅰ 2～2.5mg,纯度达93.1％.等电聚焦电泳测定其等电点为6.8～7.2。氨基酸组成分析甘氨酸含量很高,免疫印迹表明能被Desmoplakin Ⅰ McAb识别.     

血清低密度脂蛋白胆固醇电泳法测定及临床应用

目的:对一种新型的琼脂糖凝胶电泳加胆固醇酶染色法定量分析低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)含量的方法进行评价,并探讨了与临床常用LDLC均相测定法的相关性.方法:采用Helena REP 全自动快速电泳系统分离血清LDLC,然后结合胆固醇酶染色法测定LDLC的含量,分析该法的精密度、准确度和干扰因素及正常参考范围,并将该法与临床常用的LDLC均相测定法进行比较.结果:电泳法测定LDLC的批内CV为3.1 %～4.5 %、批间CV为3.7 %～5.4 %,检测线性范围为0.85 mmol/L～10.10 mmol/L,该法基本不受黄疸、溶血干扰,LDLC的回收率93.7 %～95.5 %.电泳法(X)与LDLC均相测定法(Y)测LDLC的回归方程为Y=0.988X+0.206(Y=0.989),参考范围为1.68 mmol/L～2.97 mmol/L.结论:电泳法测定LDLC的值与临床常用LDLC均相测定法相关,电泳法能完全地分离出LDLC带,克服均相测定时非低密度脂蛋白的胆固醇反应引起的误差,并能同时分离测定VLDL-C、LDL-C、HDL-C和Lp(a)-C,操作简便,给临床提供快速准确的实验数据.     

全自动蛋白电泳系统在妊娠妇女产前Hb病检查中应用

目的探讨全自动蛋白电泳系统用于妊娠妇女产前血红蛋白(Hb)病检查的意义,并对3187例测定结果进行分析。方法使用法国Sebia全自动蛋白电泳系统进行Hb电泳测定。结果检出α地中海贫血(HbH病)5例(0.16%),β地中海贫血120例(3.77%),HbE1例(0.03%),其他异常Hb2例(0.06%)。结论全自动蛋白电泳系统用于产前筛查妊娠妇女的Hb病,尤其是筛查β地中海贫血有良好的效果。