维医异常黏液质证候与阳痿病证大鼠性行为学改变的研究

目的 研究维医异常黏液质证候与阳痿病证大鼠模型性行为学改变,探讨异常黏液质型阳痿病证发病特点.方法 选用100只性功能正常的雄性SD大鼠,从中随机取10只为正常对照组(N),余90只采用湿寒性饲料+湿寒性环境的干预条件建立异常黏液质证候模型,判定证候模型建立后,以APO勃起实验筛选阳剩女病证模型,并随机分为病证模型组(A1)、病证自然反证组(A 2)和病证药物反证组(A3);证候模型组(B1)、证候自然反证组(B 2)和证候药物反证组(B3),予以反证,时间2周,并分别在造模前、造模第20周与反证后行大鼠性行为学检测.结果 造模前造模组与正常组间各项观测指标均无统计学差异(P＞0.05);造模因素干预第20周,造模组在插入潜伏期与射精潜伏期较正常组显著延长(P＜0.05),骑跨次数、插入次数与射精次数较正常组显著减少(P＜0.05);反证2周后,A1、A2、B1组骑跨潜伏期、插入潜伏期和射精潜伏期均显著长于正常组(P＜0.05),骑跨、插入、射精次数显著少于正常组(P＜0.05).A3组较A1、A2组插入潜伏期、射精潜伏期显著缩短(P＜0.05),插入次数、射精次数显著增多(P＜0.05);B3组较B1组插入潜伏期与射精潜伏期显著缩短,骑跨次数、插入次数、射精次数显著增多(P＜0.05).A1与A2组在各项指标上的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 (1)维医异常黏液质型阳痿病证模型大鼠主要从勃起潜伏期、勃起次数、交配能力、射精功能方面发生显著改变,致性功能减退,并最终引发勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED).(2)异常黏液质阳痿病证大鼠模型具有良好的科学性、可靠性和稳定性.     

RhoA/Rho激酶在异常黏液质证候及阳痿病证大鼠阴茎中的表达及伊木萨克片干预的研究

目的研究RhoA、Rho激酶(ROCK1)在异常黏液质证候及阳痿病证大鼠模型阴茎组织中的表达,并探讨维药伊木萨克片干预后对其表达的影响。方法选用50只性功能正常的雄性SD大鼠,其中10只为正常对照组(N组),余40只为造模组,采用湿寒饲料+湿寒环境的干预条件建立异常黏液质证候模型大鼠,20周筛选出阳痿病证模型大鼠,并将其分为病证模型组(A1)和病证药物反证组(A3);未成阳痿的大鼠分为证候模型组(B1),证候药物反证组(B3)。伊木萨克片反证2周后,免疫组化和Western-blot方法检测各组大鼠阴茎组织中RhoA、ROCK1的表达。结果 A1、A3、B1组大鼠阴茎组织中RhoA、ROCK1表达均高于N组(P0.05)。A3组大鼠阴茎组织中RhoA、ROCK1表达均低于A1组(P0.05)。B3组大鼠阴茎组织中RhoA、ROCK1表达明显低于B1组(P0.05)。结论 RhoA/ROCK1信号系统可以促进大鼠异常黏液质证候及阳痿病证的发生,伊木萨克片可能通过抑制RhoA/ROCK1信号通路对异常黏液质证候及阳痿病证大鼠模型发挥治疗作用。     

伊木萨克片对异常黏液质型阳痿病证模型大鼠阴茎组织形态学的影响

目的研究伊木萨克片对异常黏型阳痿病证大鼠阴茎组织形态学的影响,探寻其对阴茎勃起功能障碍治疗作用的形态学基础。方法取70只性功能正常雄性SD大鼠,其中10只为正常对照组,余60只为造模组,采用芫荽实+菠菜实+湿寒性环境的干预条件建立异常黏液质证候模型,22周后通过APO勃起实验,从证候模型中筛出阳痿病证模型,并将其分为病证模型组、药物干预组,未成阳痿的大鼠则分为证候模型对照组(简称证候模型组)。药物干预3周后,对阴茎组织进行形态学观察。结果(1)HE染色显示,正常对照组结构清楚完好。证候模型组大鼠阴茎组织有一定水肿的表现,同时伴有间质纤维化样的改变。病证模型组阴茎组织中、重度水肿,间质纤维化明显。病证药物干预组阴茎组织有一定程度的恢复。(2)VG染色结果显示,证候模型组大鼠阴茎组织平滑肌/胶原纤维低于正常对照组(P0.05)。病证模型组大鼠阴茎组织平滑肌/胶原纤维低于证候模型组(P0.05)。病证药物干预组大鼠阴茎组织平滑肌/胶原纤维高于病证模型组(P0.05)。(3)Masson染色结果与VG染色结果相一致。结论异常黏液质型阳痿病证大鼠阴茎组织形态学可发生明显改变,维药伊木萨克片有促进其修复的作用。     

异常黏液质型阳痿病证大鼠阴茎组织中SP、AchE的表达

目的研究异常黏液质型阳痿病证大鼠模型阴茎组织中P物质(SP)、乙酰胆碱酯酶(Ach E)的表达与伊木萨克片的影响,探讨其生物学意义。方法取100只正常雄性SD大鼠,随机取10只作为正常对照组(N),余90只是造模组,采用湿寒环境和饮食方法建立异常黏液质证候大鼠模型,根据勃起和交配实验,筛选出44只阳痿病证大鼠模型,并将其随机分为病证模型组(A1)、病证自然反证组(A2)、病证药物反证组(A3)。反证后,免疫组化方法检测阴茎组织中SP、Ach E的表达。结果 (1)大鼠阴茎组织中SP表达:A1、A2和A3组较N组显著增高(P0.05);A3组较A1、A2组显著降低(P0.05)。(2)大鼠阴茎组织中Ach E表达:A1、A2组较N组显著降低(P0.05);A3组较A1组显著升高(P0.05)。结论异常黏液质型阳痿病证大鼠模型阴茎组织中SP显著增高、Ach E显著降低,对证维药伊木萨克片可能通过下调SP、上调Ach E表达对异常黏液质型阳痿病证大鼠模型发挥作用。     

异常黏液质证候大鼠阴茎组织差异性表达microRNA的筛选及生物信息学分析

目的筛选异常黏液质证候及药物干预大鼠阴茎组织差异表达microRNA(miRNA),并验证miR-140-3p和miR-486两项关键指标,探讨其生物学意义。方法取80只性功能正常SD雄性大鼠,从中随机抽取10只大鼠设为正常对照组,余70只为造模组,用芫荽实+菠菜实+湿寒性环境的干预条件建立异常黏液质证候模型,通过生物学表征确认模型成功后,随机分为证候模型组、证候药物组。伊木萨克片干预3周后,提取阴茎组织总RNA进行miRNA Illumina高通量测序,筛选出异常黏液质证候及药物干预相关的候选差异表达miRNA,实时荧光定量PCR验证测序结果的可靠性,并进行生物信息学分析。结果筛选出证候相关miRNA候选标志物15个(上调13个,下调2个),伊木萨克片干预相关miRNA候选靶点标志物3个(均下调),验证结果显示miR-486在证候模型组较正常对照组表达升高(P0.05),miR-486和miR-140-3p在证候药物干预组较证候模型组表达降低(P0.05)。结论miR-486可作为异常黏液质证标志物,miR-140-3p、miR-486可作为伊木萨克片靶点标志物,但仍需大样本量验证。     

异常黏液质证候及阳痿病证模型大鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白的表达

目的探讨异常黏液质证候及阳痿病证模型大鼠睾丸间质细胞类固醇合成急性调节蛋白(StAR蛋白)的表达。方法建立异常黏液质证候模型,并筛选出阳痿病证模型后,分为证候模型组、病证模型组、证候用药组及病证用药组,两用药组采用伊木萨克片干预2周后,放免法检测各组血清中睾酮(T)含量,比较各组光镜及电镜下睾丸的形态学变化,免疫组织化学SP法及免疫印迹检测各组大鼠睾丸间质细胞StAR蛋白表达水平。结果 T含量检测结果显示,两模型组外周血清睾酮水平较正常组显著降低(P0.05),证候用药组较证候模型组T水平显著上升,差异有统计学意义(P0.05),病证用药组较病证模型组T水平亦有所上升,但差异无统计学意义(P0.05)。睾丸形态学结果显示,光镜下正常组结构完好,两模型组可见生精细胞数量及层数明显减少,并伴生精上皮脱落,间质细胞数量减少;电镜下两模型组支持细胞核形不规则,胞质电子密度高,内质网扩张,部分生精细胞坏死,两用药组上述改变有所恢复。免疫组织化学结果显示,StAR在各组大鼠睾丸间质中均有表达,两模型组StAR表达水平显著低于正常组,差异有统计学意义(P0.05);证候用药组StAR表达水平较证候模型组显著回升,而病证用药组StAR表达水平较病证模型组有所回升,但差异无统计学意义(P0.05)。免疫印迹结果与免疫组织化学结果一致。结论异常黏液质证候及阳痿病证模型大鼠睾丸的形态结构发生病理改变可能与睾酮水平下降、睾丸间质细胞StAR表达下调有关。     

基于iTRAQ标记结合IPA生物分析平台筛选异常黏液质型阳痿病证大鼠血清蛋白质组学研究

目的应用iTRAQ标记技术结合IPA生物分析平台,筛选异常黏液质型阳痿病证特异性差异表达蛋白候选标志物,并探讨其分子机制。方法建立异常黏液质证候模型,并筛选阳痿病证模型后,分为正常组(N)、证候组(B1)和病证组(A1)共3组(n=10),分离血清,进行iTRAQ标记结合LC-MS-MS蛋白质组学分析,应用IPA在线生物平台对异常黏液质型阳痿病证组大鼠血清差异表达蛋白进行蛋白质调控网络分析、生物功能分析、典型通路分析和生物标志物筛查分析。结果通过蛋白质组学技术获得61种异常黏液质型阳痿病证血清差异蛋白,IPA分析结果为,候选差异表达蛋白质中6种与血管内皮功能相关;3种与平滑肌活动相关;10种与炎症相关。参与的主要生物学过程为损伤反应、炎症反应和防御反应等,涉及的主要通路为LXR/RXR通路和FXR/RXR通路等,并获得与勃起功能障碍疾病相关的标志物4个,分别是C反应蛋白、血管紧张素原、T-激肽原1以及β-2-糖蛋白1。结论炎症和血管内皮功能改变可能在该病证发生发展中发挥着关键性作用,上述4种蛋白可能可以作为异常黏液质型阳痿病证大鼠与勃起功能障碍疾病相关的血清候选差异蛋白。     

雄激素对阿朴吗啡和电刺激诱导的去势大鼠勃起功能的影响

目的 :探讨应用安雄进行雄激素替代对去势大鼠勃起功能的影响。方法 :取40只成年雄性 SD大鼠 ,分为去势、高、低剂量安雄及假手术 4组。治疗 4周后采用阿朴吗啡 ( APO)皮下注射与电刺激海绵体神经诱导大鼠勃起 ,对其勃起功能进行评价。结果 :高、低剂量安雄组与假手术组大鼠 APO诱导的勃起成功率、勃起次数与电刺激诱导的海绵体内压 ( ICP)均较去势组大鼠为高或多 ,统计学处理差异有显著性 ( P<0 .0 1 )。结论 :通过 APO皮下注射和电刺激海绵体神经证实 ,去势导致大鼠勃起功能明显下降 ;采用安雄进行雄激素替代可恢复其勃起功能 ;去势既影响了药物诱发的勃起反应 ,也损伤了外周电刺激诱导的勃起反应     

降钙素基因相关肽、血管活性肠肽在勃起功能障碍大鼠模型阴茎组织中表达及作用机制的研究

目的:检测ED大鼠模型阴茎组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、血管活性肠肽(VIP)的表达,并探讨两者在ED中的作用机制。方法:100只正常雄性SD大鼠,随机抽取10只为正常对照组,余90只为造模组,采用湿寒饮食和环境的干预条件建立ED大鼠模型,20周后通过阿朴吗啡(APO)勃起实验,筛选出44只ED大鼠模型,并随机将其分为ED模型组、自然恢复组、给药组,伊木萨克片250 mg/kg干预2～3周后,免疫组化及Western印迹方法检测阴茎组织中CGRP、VIP的表达。结果:免疫组化检测大鼠阴茎组织中CGRP表达:ED模型组(150. 0±43. 3)、自然恢复组(165. 9±40. 7)较正常对照组(227. 3±42. 5)组明显减少(P 0. 05);给药组(255. 0±38. 7)组较ED模型组(150. 0±43. 3)、自然恢复组(165. 9±40. 7)显著升高(P 0. 05)。免疫组化检测大鼠阴茎组织中VIP表达:ED模型组(36. 4±13. 1)、自然恢复组(67. 5±29. 0)较正常对照组(175. 0±45. 6)显著降低(P 0. 05);给药组(167. 5±42. 6)较ED模型组(36. 4±13. 1)、自然恢复组(67. 5±29. 0)显著升高(P 0. 05)。结论:ED大鼠模型阴茎组织中CGRP、VIP明显减少,伊木萨克片可能通过上调CGRP、VIP表达对ED大鼠发挥作用。     

龙鹿胶囊通过SIRT1/eNOS信号通路对糖尿病大鼠勃起功能障碍的影响

目的 探讨龙鹿胶囊对糖尿病勃起功能障碍(DMED)大鼠勃起功能的影响及作用机制.方法 腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型,建模10周后用APO筛选DMED大鼠,将实验动物分为:A、正常组;B、DMED组;C、龙鹿胶囊组;D、西地那非组,其中C组每日予以360mg/kg的龙鹿胶囊原药进行灌胃,D组予以5mg/kg西地拉非灌...