中性粒细胞杀灭阴道毛滴虫作用的研究

目的 研究中性粒细胞对阴道毛滴虫的杀灭作用。 方法 将滴虫性阴道炎患者的阴道分泌物接种于肝浸汤培养基，获阴道毛滴虫。取患者静脉血分离血清，取其1 ml 于56 ℃ 30 min获补体失活血清。另取1 ml患者血清于0 ℃以阴道毛滴虫吸附3次，获去除抗体血清。用密度梯度离心法及聚合物加速沉降法分离、纯化患者静脉血中性粒细胞。用氮蓝四唑（NBT）和沙黄O（safranin O）染色，显微镜观察中性粒细胞与阴道毛滴虫相互作用及甲臢（NBT还原产物)颗粒（formazan）沉积。取300个阴道毛滴虫和3×104个中性粒细胞，分别在有氧或厌氧、有或无超氧化物岐化酶（SOD）及过氧化氢酶（CAT）、有或无补体等不同条件下，培养10、20、30、40、50及60 min，再接种于固态琼脂培养基，在37 ℃厌氧条件下继续培养5 d。观察计数阴道毛滴虫存活率。 结果 显微镜下可见几个中性粒细胞同时围攻杀灭1个阴道毛滴虫。含有中性粒细胞时培养的虫体存活率，厌氧条件下为85%，有氧条件为3%（P﹤0.01）。SOD及CAT可明显降低其杀虫作用，培养60 min虫体存活率分别为98%及94%，而无SOD及CAT时虫体存活率为2%（P值均<0.05）。加入去除抗体血清，可将虫体全部杀灭。加入补体失活血清则无杀虫作用。 结论 中性粒细胞杀灭阴道毛滴虫作用依赖于氧及患者血清中补体的存在。     

一种价廉方便的培养利什曼原虫的胎牛血清代替品

许多培养利什曼原虫的培养基都以胎牛血清(FCS)为主要成份。但胎牛血清价昂且难以得到。作者试用了一种易得的代替品,并进行了培养试验。所用的培养基有二种:一种是Schneider培养基;另一种是改良的MEM-FCS-EBLB培养基,这种培养基的成份是Earele盐配制的MEM培养基100ml,7.5%重碳酸钠3ml,拟EBLB 5ml,经121℃     

应用单克隆抗体作酶联免疫吸附试验测定粪便中溶组织内阿米巴

采用培养的溶组织内阿米巴HK-9株制备高度免疫的兔血清,从加尼福利亚获取针对HK-9株分泌的单克隆抗体,贮于-70℃。将6株溶组织内阿米巴滋养体置入含维生素和牛血清的Diamond's TYI-S-33培养基生长48小时,粪内寄生物以pH7.4 PBS洗涤2次,450g离心5分钟2次,沉淀微粒悬浮于2ml PBS中,实验前置于-70℃ 5分钟。分别收集粪检溶组织内阿米巴阳性和阴性的大便标本,测定前先置于冰上或4℃,渐至-20～-70℃,最长达7个月,用于ELISA试验。结果:6株溶组织内,阿米巴滋养体以PBS连续10倍稀释,每种稀释度取25μl作     

在体外培养系统中中性粒细胞对日本血吸虫童虫的作用

3小时童虫在含病兔血清、补体和中性粒细胞的培养系统(ISCN)中培养48小时后,约60％的童虫体表有中性粒细胞附着,其中50.8％的童虫已死亡,含病兔血清不含补体(ISCN)、含正常小鼠血清及补体(NSCN)或含正常血清不含补体(NSN)的培养系统中,中性粒细胞粘附童虫体表较少,童虫的死亡率亦低。24小时童虫在ISCN中培养48小时后,中性粒细胞对童虫的附着及童虫死亡率均逊于3小时童虫。在ISCN中,中性粒细胞对72小时童虫几不附着。以中性粒细胞介导的杀死3小时童虫的作用依赖于抗体的存在,但不完全依赖于补体。     

咪唑类药物对人巨噬细胞培养物内的热带利什曼原虫的作用

作者首次应用4种咪唑类药物,观察对杀灭人巨噬细胞物内的热带利什曼原虫的作用,选择从伊朗分离的NIH株173的无鞭毛期热带利什曼原虫,按6:1的比例感染从正常人末梢血中取出的已在试管内培养6天的单核细胞,分成加抗利什曼药物的实验组及不加药物的对照组,两组均加RPMI-1640培养基,青霉素50单位/ml,链霉素50μg/ml,10%灭活的胎牛血清。3天换1次培养基,感染后5～6天,取出各组的培养物固定染色和镜检,分别计数100个巨噬细胞中的利什曼小体的平均数的百分率。结果克霉唑     

有效原代猪肝细胞培养体系的研制

目的建立一种有效的原代猪肝细胞长期培养体系．为人工肝生物材料提供生存环境．方法把经二步胶原酶灌注法分离的猪肝细胞按３×１０５分别接种于无血清培养基、１００ｍＬ／Ｌ胎牛血清培养基、１００ｍＬ／Ｌ的猪门静脉血清培养基中．光镜下观察各体系中肝细胞形态变化过程．采用Ｂｅｃｋｍａｎ全自动生化分析仪检测各培养体系不同时间培养上清中Ａｌｂｕｍｉｎ,Ｕｒｅａ的含量．结果原代猪肝细胞在三种不同培养体系中存活时间分别是：无血清培养基４ｄ～５ｄ,胎牛血清培养基３５ｄ～３７ｄ,猪门静脉血清培养基５７ｄ～５８ｄ．存活的肝细胞功能活性除无血清培养组不明显外,胎牛血清培养组可维持４ｗｋ左右,猪门静脉血清培养组则可维持８ｗｋ左右结论门静脉血清培养体系是原代猪肝细胞较为理想的生存环境．     

番茄红素对人内皮祖细胞增殖、迁移、成管能力的影响观察及其机制探讨

目的 观察番茄红素（Lyc）对人内皮祖细胞（EPCs）增殖、迁移、成管能力的影响,并探讨其作用机制。方法 取EPCs,培养24 h后分为4组;A组加入含10%胎牛血清的培养基和ox-LDL(10 mg/L)的培养基培养24 h后弃去上清,再加入含10%胎牛血清和Lyc(10 mg/L)的培养基培养24 h;B组加入含10%胎牛血清和ox-LDL(100 mg/L)的培养基培养48 h;C组加入含10%胎牛血清和Lyc(10 mg/L)的培养基培养48 h;D组加入含10%胎牛血清的培养基培养48 h;比较各组细胞增殖活力、细胞划痕愈合率、形成小管直径及p62、LC3-Ⅱ、Beclin-1、p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量。另取EPCs,培养24 h后分为4组;E组首先加入含10%胎牛血清和AMPK抑制剂小分子化合物C(CC)的培养基温箱孵育30 min,然后加入含10%胎牛血清和ox-LDL(10 mg/L)的培养基培养24 h后弃去上清,最后再加入含10%胎牛血清和Lyc(10 mg/L)的培养基培养24 h;F组加入含10%胎牛血清的培养基和ox-LDL...     

阿米巴肝脓肿病人抗溶组织内阿米巴溶组织素(主要是半胱氨酸蛋白酶)的循环抗体检测研究

采用固相酶免疫试验(EIA)和间接免疫荧光抗体(IFA)法检测正常人、无症状溶组织内阿米巴包囊携带者和阿米巴肝脓肿病人血清中抗溶组织内阿米巴溶组织素(主要是半胱氨酸蛋白酶)的循环抗体。EIA是在聚氯乙烯微滴定板上进行。先用兔抗人IgG血清包被,清洗,加牛血清白蛋白封闭,温育后     

不同胎牛血清、培养瓶体外培养大鼠骨髓间充质干细胞效果比较

目的 比较普通、高纯度胎牛血清培养基及塑料瓶、玻璃瓶体外培养全骨髓贴壁法分离的骨髓间充质干细胞的效果.方法 采用全骨髓贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,常规传代及纯化.分为4组.其中2组分别采用含10％标准胎牛血清的DMEM培养基、含10％高纯度胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,分别为标准胎牛血清组和高纯度胎牛血清组.2组分别用一次性塑料瓶和玻璃瓶培养,分别为塑料瓶组和玻璃瓶组.比较标准胎牛血清组合高纯度胎牛血清组、塑料瓶组和玻璃瓶组骨髓间充质肝细胞细胞的黏附、增殖、分化状况及细胞形态.结果 标准胎牛血清组贴壁细胞少,原代第10天细胞密度低,细胞透亮,出现突起,类似神经样细胞,传代后细胞呈瘢痕样及神经球样细胞形态;高纯度胎牛血清组贴壁细胞较多,密度均匀,呈典型的栅栏样、鱼群及漩涡样集落生长,传代后呈典型长梭形紧密排列.塑料瓶组塑料培养瓶内细胞贴附牢固,呈典型形态生长;玻璃瓶组玻璃培养瓶内细胞换液时部分脱落.结论 体外培养骨髓间充质肝细胞采用高纯度胎牛血清、一次性塑料瓶者培养效果好于普通胎牛血清和玻璃瓶.     

犬恶丝虫微丝蚴的体外培养

本文报告了在体外应用各种合成培养基保存和培养大恶丝虫微丝蚴的结果。所用的不同培养基有:(1)Tobies培养基(双相性的);(2)含胎牛血清的洛克氏液以及(3)含胎牛血清的RPMI1640组织培养基。这些培养基的pH调整到7.2～7.4,每ml培养基加200青霉素和100μg链霉素。     

嗜中性粒细胞通过分泌IL-22促进结肠上皮细胞的修复研究

目的探讨嗜中性粒细胞通过分泌白介素-22(Interleukin-22,IL-22)刺激肠道上皮细胞分泌黏液蛋白的作用。方法分离小鼠骨髓来源的嗜中性粒细胞,不同浓度的IL-23刺激中性粒细胞,检测IL-22 mRNA及蛋白合成;收集经IL-23刺激后中性粒细胞上清,将其作为条件培养基培养小鼠肠道上皮细胞CMT-93,检测CMT-93合成Reg3及MUC2的变化,并用IL-22中和抗体验证IL-22是否在条件培养基中起主要作用。结果 50 ng/ml IL-23即可显著诱导嗜中性粒细胞合成IL-22 mRNA,ELISA检测培养6 h的嗜中性粒细胞上清,IL-22蛋白量为(92±19)pg/ml。条件培养基培养CMT-93细胞24 h,Reg3和MUC2的mRNA合成倍数与对照组相比分别上升(11±3)和(14±5)倍,与单用IL-22诱导无显著差异,但使用IL-22阻断抗体后,条件培养基诱导CMT-93细胞合成抗菌肽的倍数分别降低至(2.4±0.8)和(2.1±0.5)倍。结论嗜中性粒细胞通过分泌细胞因子IL-22在促进肠道上皮细胞分泌抗菌肽中起重要作用。     

胚胎大鼠神经干细胞培养方法的改进

分别以DMEM/F12、2?7、20 ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子、20 ng/ml的表皮生长因子无血清培养液和5%胎牛血清培养液预先培养大鼠神经干细胞(NSCs)2~3 d后,换为无血清培养液;应用倒置显微镜和免疫细胞化学法对其进行观察和比较。结果用含胎牛血清培养液培养的NSCs聚球速度较无血清培养液明显加快,可提前3~4 d观察到NSCs球。细胞染色证实细胞系巢蛋白阳性,经血清培养液诱导分化后部分呈抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性,部分呈抗胶质纤维酸性蛋白阳性,表明可分化为神经元和胶质细胞。认为含血清培养液预先培养可以加快细胞培养速度,是获得NSCs的经济有效方法。     

克隆化的致病性溶组织内阿米巴诱导的抗补体作用

新近从感染者粪便中分离的溶组织内阿米巴,培养在Robinson氏培养基、TYSGM-9或TYI-S-33培养基中,并根据感染者病史、同工酶分析、基因DNA分析鉴定出4株为非致病性虫株,7株为致病性虫株。另取在TYI-S-33培养基长期培养的致病株HM-1:IMSS通过仓鼠肝脏,称为HM-1-H株,或培养在无免疫性的人血清(NHS)替代灭活牛血清的改良TYI-S-33培养基中,称为     

大型利什曼前鞭毛体的毒力和感染性研究

作者从感染的小鼠分离出的大型利什曼,分别以血琼脂培养基和施氏(Schneider's)基添加30%的胎牛血清用以培养前鞭毛体,连续培养至一年以上,以观察其对远交系CDI株和近交系的BALB/c株小鼠的感染性。血琼脂基的制备,是将10%V/V脱纤维兔血加入融化的无菌琼脂内,并分装于平皿制成斜面,另加5ml葡萄糖盐溶液,置于4℃备用。施氏培养基加以30%的胎牛血清,按5‰量分装于25cm~2的玻璃瓶内,备用。刮取大型利什曼阳性鼠的3mm直径的组织,     

斑点酶联免疫吸附试验检测人内脏利什曼病的标准化

斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)是一种经济,简易,可微量目测,适于现场应用的检测抗体的方法。本文对在检测人内脏利什曼病时应用的实验参数进行了观察比较。血清来自查见原虫的内脏利什曼病人,共5份;5份北美正常人血清作对照。杜氏利什曼原虫前鞭毛体培养于含20%灭活胎牛血清等的RPMI1640培养基内,培养至对数生长期时收虫,活原虫约占≥97%;     

田鼠巨噬细胞的体外粘附试验不能区分杜氏利什曼前鞭毛体有无感染性

作者用有感染性和无感染性的杜氏利什曼原虫前鞭毛体与田鼠的脾、淋巴结和腹膜渗出物中的巨噬细胞,在体外进行粘附试验。杜氏利什曼原虫IS株按照Stanber法用田鼠保种。前鞭毛体在肝浸胰胨(LIT)培养基或含20%灭活胎牛血清的Schueider培养基中置于27℃培养,当它们静止6～8天后收集。每ml培养基接种10~6个脾的无鞭     

沥水调脂胶囊对弱氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1及血管内皮细胞P选择素表达的影响

目的　通过探讨健脾祛痰方药沥水调脂胶囊含药血清对弱氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞表达的单核细胞趋化蛋白 1及血管内皮细胞表达P选择素的影响 ,阐明沥水调脂胶囊抗炎防治动脉粥样硬化作用机理。方法　 1.脐静脉内皮细胞的培养 :取新鲜脐带 ,用Ⅱ型胶原酶消化脐静脉内皮细胞后 ,用含有 2 0 %的胎牛血清的M199培养基接种。实验用第 3代。 2 .脐动脉平滑肌细胞的培养 :取新鲜脐带 ,剥离出脐动脉 ,用Ⅳ型胶原酶联合胰酶 ,分二步消化 ,用 2 0 %的胎牛血清的DMEM培养基接种 ,实验用第 3代 ,实验时用无血清培养基。 3.弱氧化低密度脂蛋白的制备 :用铜离子体外氧化法获得 ,用硫代巴比妥法测硫代巴比妥酸反应物值及琼脂糖电泳 ,测定氧化程度。 4 .含药血清的制备 :用沥水调脂胶囊按成人剂量的 8倍 ,灌喂大鼠 ,取大鼠血清 ,用或不用甲醇沉降蛋白后用冻干机冻干 ,临用时用三蒸水将其稀释至用蛋白沉降前的原体积或血清原体积。 5 .用细胞酶联免疫法测定内皮细胞表面P选择素的表达或酶联免疫法测定平滑肌细胞培养上清液中单核细胞趋化蛋白 1的含量。结果　含 2 0 %的除蛋白含药血清对弱氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞表达的单核细胞趋化蛋白 1具有一定的抑制作用。含有 10 %沥水调脂胶囊药血清培养     

不同利什曼原虫分离株在培养基中生长繁殖观察

目的　比较我国不同类型内脏利什曼病流行区利什曼原虫前鞭毛体在不同培养基中的生长繁殖情况,为选择合适培养基用于利什曼原虫培养提供实验依据。方法　将3 ×105个KS?2、Cy、JIASHI?5株利什曼原虫前鞭毛体分别接种至1 mL NNN培养基、1 mL M199 + 20%胎牛血清培养基、1 mL M199 + 20%马血清培养基及1 mL 脑心浸液培养基（含血红素）中,22 ℃温箱中无菌静置培养,显微镜下连续观察计数8 d,绘制3株利什曼原虫前鞭毛体的生长曲线。 结果 KS?2、Cy、JIASHI?5株利什曼原虫前鞭毛体均能在NNN培养基、M199 + 20%胎牛血清培养基和M199 + 20%马血清培养基中生长繁殖,在NNN培养基中培养不同时间后的3株利什曼原虫前鞭毛体计数均显著高于M199 + 20%胎牛血清培养基和M199 + 20%马血清培养基（P均 < 0.05）,在这3种培养基中培养不同时间后的KS?2株利什曼原虫前鞭毛体计数均显著高于Cy和JIASHI?5株（P均 < 0.05）。KS?2、Cy、JIASHI?5株利什曼原虫前鞭毛体均不能在脑心浸液培养基中生长繁殖。结论　分离自我国不同类型内脏利什曼病流行区的利什曼原虫在同一培养基中生长增殖速度有差异,同一利什曼原虫分离株在不同培养基中的生长繁殖速度亦有差异。NNN培养基是最适合我国内脏利什曼病流行区利什曼原虫分离株的培养基。     

不同利什曼原虫分离株在培养基中生长繁殖观察

目的　比较我国不同类型内脏利什曼病流行区利什曼原虫前鞭毛体在不同培养基中的生长繁殖情况，为选择合适培养基用于利什曼原虫培养提供实验依据。方法　将3 ×105个KS?2、Cy、JIASHI?5株利什曼原虫前鞭毛体分别接种至1 mL NNN培养基、1 mL M199 + 20%胎牛血清培养基、1 mL M199 + 20%马血清培养基及1 mL 脑心浸液培养基（含血红素）中，22 ℃温箱中无菌静置培养，显微镜下连续观察计数8 d，绘制3株利什曼原虫前鞭毛体的生长曲线。 结果 KS?2、Cy、JIASHI?5株利什曼原虫前鞭毛体均能在NNN培养基、M199 + 20%胎牛血清培养基和M199 + 20%马血清培养基中生长繁殖，在NNN培养基中培养不同时间后的3株利什曼原虫前鞭毛体计数均显著高于M199 + 20%胎牛血清培养基和M199 + 20%马血清培养基（P均 < 0.05），在这3种培养基中培养不同时间后的KS?2株利什曼原虫前鞭毛体计数均显著高于Cy和JIASHI?5株（P均 < 0.05）。KS?2、Cy、JIASHI?5株利什曼原虫前鞭毛体均不能在脑心浸液培养基中生长繁殖。结论　分离自我国不同类型内脏利什曼病流行区的利什曼原虫在同一培养基中生长增殖速度有差异，同一利什曼原虫分离株在不同培养基中的生长繁殖速度亦有差异。NNN培养基是最适合我国内脏利什曼病流行区利什曼原虫分离株的培养基。     

低密度脂蛋白诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化的作用

目的 探讨低密度脂蛋白诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化及myocardin在其分化过程中的作用.方法 不同浓度血清培养骨髓间充质干细胞条件下加以低密度脂蛋白刺激.细胞分为常规培养组,常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L), 20%胎牛血清培养组, 20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组.免疫细胞化学检测myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链的表达、RT-PCR法检测myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌钙结合相关蛋白mRNA的表达.结果 免疫细胞化学结果显示常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L),20%胎牛血清培养组, 20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组分别与常规培养组比较myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链的表达增强(P<0.05);20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组与20%胎牛血清组比较上述三种蛋白表达增强(P<0.05);平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链蛋白的表达与myocardin表达呈正相关(r=0.9018,P<0.05;r=0.7969,P<0.05).RT-PCR结果显示常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L), 20%胎牛血清培养组, 20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组分别与常规培养组比较myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌钙结合相关蛋白mRNA表达明显增强(P<0.05);20%胎牛血清培养组, 20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组比较上述三个指标的表达也增强(P<0.05).平滑肌肌动蛋白、平滑肌钙结合相关蛋白mRNA表达与myocardin正相关(r=0.9295,P<0.05;r=0.8940,P<0.05).结论 高浓度血清,低密度脂蛋白均可诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化,低密度脂蛋白联合20%胎牛血清诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化的作用最强.myocardin可能在此过程中起重要作用.