产前补充牛磺酸对宫内生长受限胎鼠脑组织PKA-CREB通路及GDNF mRNA表达的影响

目的:探讨牛磺酸对宫内生长受限（IUGR）胎鼠大脑蛋白激酶A-cAMP反应元件结合蛋白（PKA-CREB）通路及胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）mRNA表达的影响。方法:采用妊娠期全程饥饿法制作IUGR模型,将20只孕鼠随机分为4组(n=5):对照组、IUGR组、小剂量(每天100 mg/kg)及大剂量(每天300 mg/kg)牛磺酸用药组。利用逆转录-聚合酶链反应方法检测各组胎鼠大脑PKA、CREB及GDNF mRNA水平变化。结果:与对照组相比,IUGR组胎鼠大脑PKA、CREB及GDNF mRNA表达均明显增多(P<0.05)。与IUGR组相比,小剂量和大剂量牛磺酸组胎鼠脑组织的PKA和CREB mRNA表达水平增高(P<0.05),大剂量牛磺酸组胎鼠脑组织GDNF mRNA水平亦明显增高(P<0.01)。结论:牛磺酸可增加IUGR胎鼠大脑PKA-CREB通路及GDNF mRNA的表达,提示产前补充牛磺酸可能通过增强中枢神经系统神经发生能力、增加神经营养因子的分泌等途径来改善IUGR胎鼠脑损伤,发挥对脑组织的保护作用。［中国当代儿科杂志,2009,11（11）：923-926］     

孕鼠补充牛磺酸对宫内生长受限胎鼠脑组织Ras同源基因-Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶通路关键信号分子表达的影响

目的 观察孕鼠补充牛磺酸对宫内生长受限(IUGR)胎鼠脑组织Ras同源基因-Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(Rho-ROCK)通路中关键信号分子及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,以探讨牛磺酸是否可通过该信号途径促进IUGR胎鼠皮质神经元增殖.方法 采取低蛋白饮食法建立IUGR模型,将30只孕鼠按妊娠顺序分为对照组、IUGR模型组(IUGR组)及IUGR+孕鼠补充牛磺酸组(IUGR+牛磺酸组),牛磺酸组自妊娠第12天开始于饲料中添加牛磺酸300 mg/(kg·d)直至自然分娩.采用实时定量(Real-time)-PCR法检测各组胎鼠脑组织中Ras同源基因(Rho基因)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶基因(ROCK2基因)及PCNA基因mRNA水平,同时采用免疫组织化学法检测各组胎鼠脑组织PCNA蛋白的表达.结果 1.IUGR组、牛磺酸组与对照组胎鼠脑组织RhoA、ROCK2及PCNA mRNA水平:RhoA mRNA分别为1.757±0.041、1.498 ±0.011和1.000 ±0.000(P ＜0.05),ROCK2mRNA分别为1.548±0.231、1.094±0.049和1.000 ±0.000(P ＜0.05),PCNA mRNA分别为2.007±0.800、3.034±0.670和1.000 ±0.000(P ＜0.05).2.IUGR组、牛磺酸组与对照组胎鼠脑组织PCNA免疫组织化学阳性细胞数分别为(22.24 ±6.17)、(77.80±14.60)和(11.30±3.18)个/高倍视野(P＜0.05).结论 孕鼠补充牛磺酸可能通过抑制Rho-ROCK信号途径而发挥对IUGR胎鼠的脑保护作用及促进IUGR胎鼠脑发育,为产前补充牛磺酸促进IUGR脑发育提供了理论依据.     

L-精氨酸对宫内发育迟缓胎鼠胰岛素样生长因子及其结合蛋白表达的影响

目的：宫内发育迟缓(IUGR)儿常有脑发育的异常,L精氨酸具有舒张血管、增加胎盘血流的作用,可用于改善胎盘缺氧状态,促进胎儿生长发育。用被动吸烟法制作孕鼠IUGR模型,孕8～20d给予不同剂量L精氨酸,了解其对宫内发育迟缓胎鼠脑内胰岛素样生长因子及其结合蛋白表达的影响,并探讨L精氨酸的作用机制。方法：孕鼠随机分为4组:对照组、模型组、L精氨酸小剂量和大剂量防治组,每组9只。孕21d剖宫取胎,应用酶联免疫吸附法检测各组胎鼠脑组织胰岛素样生长因子Ⅰ(IGFⅠ)、胰岛素样生长因子Ⅱ(IGFⅡ)、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP3)含量,应用荧光定量RTPCR法检测各组胎鼠脑组织IGFⅠmRNA表达。结果：与对照组相比较,模型组胎鼠脑组织中IGFⅠ(0.789±0.062ng/mgvs0.947±0.042ng/mg)、IGFⅡ(0.270±0.020ng/mgvs0.374±0.015ng/mg)含量均比对照组明显降低,IGFBP3(0.253±0.011ng/mgvs0.089±0.015ng/mg)含量比对照组明显升高,IGFⅠmRNA表达量(13.12±1.39)×104cps/μgRNAvs(21.28±3.54)×104cps/μgRNA比对照组明显降低,差异均有显著性(P<0.01)。与模型组相比较,小剂量和大剂量L精氨酸防治组IGFⅠ含量明显增高,分别为0.937±0.067ng/mg和0.858±0.077ng/mg,IGFⅡ含量明显增高,分别为0.318±0.018ng/mg和0.354±0.021ng/mg,IGFBP3含量明显降低,分别为0.132±0.006ng/mg和0.146±0.009ng/mg差异有显著性(P<0.01或<0.05)。同时小剂量和大剂量L精氨酸防治组IGFⅠmRNA表达量也明显增高,分别为(19.24±2.48)×104cps/μgRNA和(17.35±2.30)×104cps/μgRNAvs(13.12±1.39)×104cps/μgRNA,差异均有显著性(P<0.01)。结论：L精氨酸可增加被动吸烟致宫内发育迟缓胎鼠脑内IGFⅠ、IGFⅡ含量和IGFⅠmRNA的表达,降低IGFBP3含量。L精氨酸防治IUGR的机制与其对胰岛素样生长因子及其结合蛋白表达的影响有关。     

川芎嗪对熏烟致宫内发育迟缓胎鼠脑发育的影响

目的：宫内发育迟缓(IUGR)患儿常有脑发育的异常。川芎嗪能改善脑部微循环,已被应用于新生儿缺氧缺血性脑损伤的治疗。被动吸烟法造大鼠IUGR模型,母鼠在孕8～20d给予川芎嗪,了解其对胎鼠宫内发育迟缓及其脑发育的影响,并探讨其作用机理。方法：孕鼠随机分为4组(均n=9):对照组,模型组,小剂量(40mg/kg)川芎嗪治疗组、大剂量(80mg/kg)川芎嗪治疗组。后3组孕鼠予以被动吸烟导致胎鼠宫内发育迟缓。孕21d剖宫取胎,观测胎鼠体重、脑重、肝重、身长及尾长;检测胎鼠脑组织中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果：对照组、模型组与小剂量、大剂量川芎嗪治疗组胎鼠IUGR发生率分别为3.9%(4/105),55.0%(50/106),11.8%(11/103)和5.4%(5/99)。模型组胎鼠体重(3.1±0.3gvs3.8±0.6g)、脑重(0.144±0.012gvs0.176±0.018g)、肝重(0.29±0.06gvs0.34±0.07g)均较对照组明显降低,差异有显著差异(均P<0.01),小、大剂量川芎嗪治疗组与模型组相比各指标均有所改善。模型组胎鼠脑组织NO(52.4±1.4μmol/gvs43.7±6.7μmol/g)和MDA(273.5±8.5μmol/gvs249.6±6.2μmol/g)水平较对照组明显增高(均P<0.01),而SOD活性比对照组明显降低29.7±2.6U/mgvs36.5±3.9U/mg(P<0.01)。川芎嗪治疗组与模型组相比,MDA水平降低而SOD活性增高(均P<0.01),较模型组进一步增高。结论：川芎嗪可有效防治被动吸烟诱导的胎鼠IUGR及其脑发育障碍,其机制可能与其纠正机体的氧化与抗氧化失衡有关。     

牛磺酸对宫内生长受限新生大鼠大脑Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨牛磺酸对宫内生长受限(IUGR)新生大鼠大脑皮质Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响.方法 将15只孕鼠随机分为3组:正常对照组(正常组)、IUGR模型组(IUGR组)、牛磺酸治疗组(牛磺酸组)(n=5).IUGR模型组孕鼠自受孕第1天始饲以正常组40%的进食量(10 g/d)制备IUGR模型,牛磺酸组在开始建立IUGR模型第12天喂服牛磺酸300 mg/(kg·d),直至自然分娩.每窝新生大鼠随机抽取2只,采用免疫组织化学方法检测各组仔鼠大脑Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达.应用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 与正常组相比,IUGR组新生大鼠大脑皮质Bcl-2阳性细胞数减少,Bax和Caspase-3阳性细胞数增多,Bcl-2/Bax显著降低,差异均具有统计学意义(Pa<0.05).与IUGR组比较,牛磺酸组Bcl-2阳性细胞数增加,Bax和Caspase-3阳性细胞数下降,Bcl-2/Bax增高,差异均具有统计学意义(Pa<0.05).牛磺酸组与正常组新生大鼠大脑皮质,Bcl-2、Bax和Caspase-3阳性细胞数比较差异均具有统计学意义(Pa<0.05).结论 牛磺酸可通过上调Bcl-2的表达,下渊Bax和Caspase-3的表达,抑制神经细胞的凋亡,对IUGR幼鼠脑组织起到保护作用.     

Effect of inhibiting miR-204 expression on the learning and memory abilities of neonatal rats with intrauterine growth restriction and related mechanism北大核心CSCD

目的探讨抑制miR-204表达对宫内发育迟缓(intrauterine growth restriction,IUGR)新生大鼠学习记忆能力的影响及机制。方法采用低蛋白饮食法建立IUGR大鼠模型,将3日龄IUGR幼鼠设为模型组、miRNA拮抗剂对照组(antagomir-NC组)和miR-204拮抗剂组(antagomir组),另取正常幼鼠设为对照组,每组10只。Morris水迷宫实验测定大鼠学习与记忆能力;qRT-PCR检测各组大鼠海马组织中miR-204和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA表达水平;尼氏染色、Tunel法观察海马组织尼氏小体数量和细胞凋亡水平;Western blot检测海马组织中BDNF/TrkB信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠逃避潜伏期增加,跨台次数减少;海马组织中细胞凋亡率和miR-204表达水平升高,而尼氏小体数量、BDNF mRNA,以及BDNF、p-TrkB和p-CREB蛋白表达水平降低(P<0.001)。抑制miR-204表达后,IUGR大鼠海马组织中尼氏小体数量、BDNF mRNA,以及BDNF、p-TrkB和p-CREB蛋白表达水平升高,细胞凋亡率和miR-204表达水平降低,逃避潜伏期减少,跨台次数增加(P<0.001)。结论抑制miR-204可改善IUGR新生大鼠学习及记忆功能,其作用机制可能与靶向激活BDNF/TrkB信号通路有关。     

宫内生长受限大鼠肝脏糖异生酶的表达增加与胰岛素抵抗

目的：宫内生长受限（IUGR)和成年胰岛素抵抗密切相关,但其发生机制不清楚,该研究通过检测IUGR子鼠肝脏中糖异生关键酶及可促进糖异生的转录因子的表达,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的分子机制。方法：通过孕期全程蛋白质营养不良方法建立大鼠IUGR模型,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测IUGR子鼠幼年和成年肝脏中PGC-1α mRNA和蛋白表达变化,同时检测磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（PEPCK）和葡萄糖6-磷酸酶（G6-P酶）的mRNA表达变化。结果：①IUGR组子鼠平均出生体重4.97±0.83 g明显低于正常对照组6.54±0.52 g （P<0.01）,4周时IUGR组平均体重达到对照组平均水平,8周时IUGR组体重为152.03±13.57 g超过正常对照组的136.05±12.24 g （P<0.05）;②IUGR子鼠幼年（3周）空腹血糖和胰岛素水平与对照组没有差异,成年（8周）后IUGR子鼠出现高胰岛素血症(P<0.01),胰岛素抵抗指数（IRI）增高（P<0.05）;③与对照组相比,IUGR组3周和8周龄子鼠肝脏PGC-1α mRNA和蛋白表达明显增高（P<0.05）;同时肝脏PEPCK和G6 P酶的mRNA水平也明显高于对照组(P<0.01)。结论：IUGR鼠自幼年至成年肝脏中糖异生的关键调控因子PGC-1α的mRNA和蛋白表达增加,诱导糖异生关键酶的表达,可能增加肝脏糖异生,促进胰岛素抵抗发生。     

Hippo通路相关分子在先天性膈疝肺发育不良大鼠模型中的表达及意义

目的了解Hippo信号通路主要组成分子在先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)模型大鼠胎肺组织中的表达情况,初步探讨该通路与CDH肺发育不良的关系。方法应用除草醚建立CDH大鼠模型,选取模型组中单纯左侧膈疝的胎鼠左肺作为研究对象,通过免疫印迹法和RT-PCR分别检测肺组织中Lats1、Taz和Yap(pYap)表达情况并与对照组胎鼠的左肺组织进行比较。结果 Lats1、Taz和Yap在模型胎鼠和正常胎鼠的支气管、肺上皮细胞及肺动脉壁中都有表达。模型组的Yap蛋白及其mRNA的表达量分别为2.333 3±0.367 5和1.243 3±0.103 3明显高于对照组的1.250 9±0.388 6和0.983 3±0.065 0,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);而Lats1蛋白及其mRNA和Yap蛋白磷酸化水平(pYap)的表达量在两组间的差异均无统计学意义(P>0.05)。Taz的mRNA表达量在模型组和对照组分别为1.216 7±0.033 9和1.013 3±0.183 4,组间比较,差异有统计学意义(P<0...     

产前补充牛磺酸调节Rho家族因子活性促进生长受限新生大鼠神经干细胞增殖的研究

目的 探讨产前补充牛磺酸通过调节Rho家族因子活性促进生长受限 （FGR）新生大鼠神经干细胞增殖的可能性,为产前补充牛磺酸促进生长受限患儿脑发育提供实验依据。方法 将24只Sprague-Dawley孕鼠随机分为对照组、FGR组、牛磺酸组 （n=8）,通过全程饥饿法建立FGR模型。采用逆转录-聚合酶链反应法、免疫组化及免疫印迹法检测各组新生鼠脑组织神经干细胞特异性胞内标记物脂肪酸结合蛋白7 （FABP7）、Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶2 （ROCK2）、ras同源基因家族成员A （RhoA）、Ras相关的C3肉毒素底物 （rac）表达水平。结果 FGR组FABP7阳性细胞OD值、FABP7mRNA及蛋白的表达低于对照组,牛磺酸组FABP7阳性细胞OD值、FABP7mRNA及蛋白的表达高于FGR组 （P < 0.05）。FGR组中RhoA、ROCK2mRNA的表达高于对照组,牛磺酸组中RhoA、ROCK2mRNA表达高于对照组但低于FGR组 （P < 0.05）;FGR组中racmRNA的表达低于对照组,牛磺酸组中racmRNA表达高于FGR组及对照组 （P < 0.05）;FGR组中RhoA、ROCK2蛋白表达水平高于对照组,牛磺酸组中RhoA、ROCK2蛋白表达水平低于FGR组 （P < 0.05）。结论 产前补充牛磺酸可促进FGR新生大鼠神经干细胞增殖,其机制可能与调控Rho家族因子的活性有关。     

脑室注射脑源性神经营养因子对脑白质损伤新生大鼠脑组织Lingo-1 mRNA表达的影响

目的 探讨轴突生长抑制因子Lingo-1在大鼠脑白质损伤(WMD)发生中的机制及脑源性神经营养因子(BDNF)对WMD脑组织的可能保护作用.方法 参照Back方法制作2日龄新生大鼠WMD模型,WMD鼠脑室内注射BDNF为干预手段,应用原位杂交和荧光定量RT-PCR检测对照组(假手术组)、WMD组、BDNF处理组缺氧缺血后8、24、48、72 h及7 d脑组织Lingo-1 mR-NA的表达.结果 对照组脑组织Lingo-1 mRNA的表达较少,Lingo-1 mRNA在WMD组大脑各部分广泛分布,尤其皮质和海马分布更为密集.WMD组在缺氧缺血后8、24 h和48 h脑组织Lingo-1mRNA的表达均明显高于对照组(P<0.05),在缺氧缺血后48 h达高峰后开始下降,但72 h及7 d脑组织Lingo-1 mRNA的表达仍高于对照组(P<0.05);BDNF处理组脑组织Lingo-1 mRNA表达在处理后8、24 h较WMD组升高(P<0.05),后逐渐下降,48、72h Lingo-1 mRNA水平均低于同时间点WMD组(P<0.05);7 d时两组Lingo-1 mRNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).BDNF处理组各时间点Lingo-1 mRNA表达均高于对照组(P<0.05).结论 WMD新生大鼠脑组织Lingo-1 mRNA较对照组在大脑各部分分布增多,表达增强,推测Lingo.1可能参与了WMD中的神经损伤和轴突再生抑制的机制.BDNF可在一定程度上降低WMD后Lingo-1 mRNA的表达水平,可能对WMD大鼠脑具有一定的保护作用.     

Amino acid transport systems beta and A in fetal T lymphocytes in intrauterine growth restriction and with tumor necrosis factor-alpha treatment

Intrauterine growth restriction (IUGR) is associated with reduced activity of placental amino acid transport systems beta and A. Whether this phenotype is maintained in fetal cells outside the placenta is unknown. In IUGR, cord blood tumor necrosis factor (TNF)-alpha concentrations are raised, potentially influencing amino acid transport in fetal cells. We used fetal T lymphocytes as a model to study systems beta and A amino acid transporters in IUGR compared with normal pregnancy. We also studied the effect of TNF-alpha on amino acid transporter activity. In fetal lymphocytes from IUGR pregnancies, taurine transporter mRNA expression encoding system beta transporter was reduced, but there was no change in system beta activity. No significant differences were observed in system A mRNA expression (encoding SNAT1 and SNAT2) or system A activity between the two groups. After 24 or 48 h TNF-alpha treatment, fetal T lymphocytes from normal pregnancies showed no significant change in system A or system beta activity, although cell viability was compromised. This study represents the first characterization of amino acid transport in a fetal cell outside the placenta in IUGR. We conclude that the reduced amino acid transporter activity found in placenta in IUGR is not a feature of all fetal cells.     

大鼠骨髓间充质干细胞体外向肠神经细胞分化及胶质细胞源神经营养因子表达的变化

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞向肠神经分化的条件及胶质细胞源神经营养因子(glial cellline-derived neurotrophic factor,GDNF)及其受体RET基因表达的变化.方法 体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),传至第四代,进行诱导分化.以10ng/ml GDNF和10%FBS的稀释胎肠培养基(fetal gut culture medium,FCCM)以及仅含有10 ng/ml GDNF的L-DMEM诱导7 d,对照组为含10%FBS的L-DMEM完全培养液,免疫组化的方法鉴定细胞的神经特异性烯醇化酶(neural specific enolase,NSE)、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)及一氧化氮合酶(nit ric oxide synthase,nNOS)的表达.RT-PCR检测GDNF及RET mRNA的变化,Westem Blot方法检测GDNF蛋白的表达情况.结果 BMSCs能在体外成功培养及纯化,诱导7 d后,实验组均可见NSE、VIP及nNOS的表达,两实验组的阳性率有统计学差异,而对照组为阴性.RT-PCR检测示,BMSCs向肠神经细胞诱导后,GDNF表达显著增强,并促使RET基因表达Western Blot结果提示,诱导后的细胞GDNF在蛋白水平上表达增强.结论 GDNF联合FCCM可诱导BMSCs分化为肠神经细胞,在向神经细胞分化的过程中,能促进GDNF表达的增强,并促使RET基因的表达,GDNF-RET信号通路在肠神经分化过程中可能发挥着重要作用.     

皮质酮对体外培养发育中胎鼠脑皮层神经元迁移蛋白LIS1表达的影响

目的研究皮质酮对发育中胎鼠脑皮层神经元迁移蛋白Lissencephaly 1(LIS1)表达的影响。方法体外原代培养Wistar胎鼠脑皮层神经元并分为对照组、低浓度干预组和高浓度干预组,各组给予含有不同浓度皮质酮(对照组:0μmol/L,低浓度干预组:0.1μmol/L,高浓度干预组:1.0μmol/L)的培养基干预,分别于干预后1、4、7 d收集细胞,采用Werstern blot法及免疫细胞化学染色法观察神经元LIS1蛋白表达的变化。结果 Western blot结果显示干预后7 d,低浓度干预组及高浓度干预组胎鼠脑皮层神经元胞浆及胞核内LIS1表达均明显低于对照组(P0.05),且高浓度干预组胞浆内LIS1表达明显低于低浓度干预组(P0.05)。免疫细胞化学染色法结果显示皮质酮干预后1、4、7 d,高浓度干预组LIS1平均光密度值明显低于对照组及低浓度干预组(P0.05),且干预后7 d,低浓度干预组LIS1平均光密度值明显低于对照组(P0.05)。结论皮质酮可下调体外培养发育中胎鼠脑皮层神经元迁移蛋白LIS1的表达水平,且与皮质酮浓度高低、作用时间长短相关。     

宫内发育迟缓儿脐血内脂素及胎盘内脂素mRNA的表达

目的探讨内脂素与胎儿生长发育的关系。方法选择2008年12月—2010年6月足月出生的宫内发育迟缓(IUGR)儿、巨大儿及正常足月儿各35例,采用ELISA法测定脐血内脂素水平,Real-time PCR法检测胎盘内脂素mRNA相对含量,放射免疫法测定脐血胰岛素水平;分析脐血内脂素、胰岛素水平、胎盘内脂素mRNA相对含量与出生体质量的关系及脐血内脂素、胰岛素水平与胎盘内脂素mRNA相对含量间的关系。结果 IUGR儿脐血内脂素水平高于巨大儿及正常足月儿,差异有统计学意义(P<0.05);巨大儿与正常足月儿之间脐血内脂素水平差异无统计学意义(P>0.05)。三组间新生儿脐血胰岛素水平差异有统计学意义(P<0.05)。脐血内脂素水平与出生体质量呈负相关性(r=-0.341,P<0.05),与胰岛素水平无相关性(P>0.05)。三组间胎盘内脂素mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),胎盘内脂素mRNA水平与出生体质量、脐血内脂素、胰岛素水平均无相关性(P>0.05)。结论新生儿期内脂素与IUGR有关,可通过调节代谢而影响胎儿宫内的生长发育。     

Effect of exogenous glial cell-derived neurotrophic factor on development of the enteric nervous system in the rectal end of fetal rats with anorectal malformations

Objective

The objective of this study is to analyze the effect of exogenous glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF) in the development of the enteric nervous system (ENS) in the rectal end of fetal rats.

Materials and methods

Thirty pregnant Sprague-Dawley rats were categorized randomly into three groups: ethylene thiourea (ETU), ETU + GDNF, and control. On day 10 of gestation, ETU was injected via a gastric tube in the ETU group and ETU + GDNF group. On day 11 of gestation, GDNF was administered through the tail vein in the ETU + GDNF group. On day 20 of gestation, fetal rats were harvested by cesarean section. The prevalence of anorectal malformations (ARMs) in the fetal rats was observed. GDNF expression in the rectal end of fetal rats was detected by immunohistochemical and Western blotting analyses.

Results

The prevalence of ARMs in the ETU group and ETU + GDNF group was 51.4 and 52.5 %, respectively, but the difference between the two groups was not significant (P > 0.05). In the rectal end of fetal rats with an anus, GDNF expressions in the three groups were not significantly different (P > 0.05). In the rectal end of fetal rats without an anus: GDNF expression in the ETU + GDNF group was significantly higher than that in the ETU group (P = 0.036); GDNF expression in the rectal end of fetal rats without an anus from the ETU group and ETU + GDNF group was significantly lower than that of fetal rats with an anus (ETU group P = 0.001; ETU + GDNF group P = 0.028). There was a significant difference in the gray level ratio of GDNF and actin between the ETU group and ETU + GDNF group (P < 0.0001), and the expression in the ETU + GDNF group was significantly up-regulated.

Conclusion

GDNF could not totally prevent the occurrence of ETU-induced ARMs, but it up-regulated expression of the GDNF gene in the wall of the rectal end, thereby promoting the growth of a hypogenetic ENS.     

宫内生长迟缓大鼠脂肪组织肿瘤坏死因子αmRNA表达与胰岛素抵抗关系的研究

目的探讨内脏脂肪组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达与宫内生长迟缓(IUGR)大鼠成年后胰岛素抵抗(IR)发生的关系,以及生后早期不同的营养模式的远期影响.方法用母鼠全程饥饿法建立IUGR动物模型.32只IUGR新生雌鼠随机分为4组IUGR模型组(S/N组)给予常规饮食,IUGR高热能饮食组(A组),IUGR高蛋白高热能饮食组(B组),IUGR高蛋白质等热能饮食组(C组).各组幼鼠在3周哺乳期间母鼠分别摄取上述饲料.第4周起各组幼鼠断乳后全部改为自由进食常规饮食至实验结束.另以正常母鼠所生正常新生雌鼠8只为正常对照组(C/N组)生后给予常规饮食喂养至实验结束.各组大鼠在48周(中老年期)时分别测定体重、肾周脂肪重量、脂肪组织TNF-αmRNA表达,计算ISI(胰岛素敏感指数)并分析其与TNF-αmRNA表达量及肾周脂重、脂重/体重的相关性.结果IUGR模型组及IUGRA、B组胰岛素敏感性下降,并且脂肪组织TNF-αmRNA表达及肾周脂重、脂重/体重显著高于正常对照组(P<0.05或0.01);IUGR的C组胰岛素敏感性及TNF-αmRNA表达量、脂重/体重与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05).脂肪组织TNF-αmRNA水平与肾周脂肪重量、脂重/体重量呈正相关,与ISI呈负相关.脂重/体重与ISI呈负相关.结论IUGR大鼠成年后发生胰岛素抵抗可能经由中心性肥胖的途径,与腹脂增多、脂肪细胞过度表达TNF-α有关,脂源性TNF-α可能是IUGR胰岛素抵抗的重要协病因素.高蛋白的早期营养模式可能通过实现IUGR个体的骨骼肌的生长追赶而非脂肪追赶避免了中心性肥胖和胰岛素抵抗的发生,是较合理的早期营养饮食模式.     

Uteroplacental insufficiency alters cerebral mitochondrial gene expression and DNA in fetal and juvenile rats

Uteroplacental insufficiency increases the risk of perinatal and long-term neurologic morbidity by depriving the fetus of oxidative substrate and causing intrauterine growth retardation. Skeletal muscle and liver from growth retarded fetal and juvenile rats respond to this deprivation by altering mitochondrial gene expression and function. The objective of this study was to determine whether cerebral mitochondrial mRNA is similarly altered in fetal and juvenile growth retarded rats and to correlate these alterations with mitochondrial DNA and marker protein levels. To fulfill this objective, mRNA levels of four important mitochondrial proteins were quantified using RT-PCR in growth retarded and sham-operated control fetal and juvenile rat brains; these proteins were NADH-ubiquinone oxireductase subunit 4, subunit C of the F1F0-ATPase, and the adenine nucleotide transporters 1 and 2. Mitochondrial DNA/nuclear DNA ratios and mitochondrial 60 kD marker protein levels were also quantified in growth retarded and sham-operated control fetal and juvenile rat brains using PCR and Western Blotting, respectively. Cerebral mRNA levels of all four proteins were increased in the IUGR fetuses and decreased in the IUGR juvenile animals. Cerebral mitochondrial/nuclear DNA ratios and mitochondrial marker protein levels were not significantly altered in the IUGR fetuses; however, both were significantly diminished in IUGR juvenile pups. These studies suggest that the metabolic stresses associated with uteroplacental insufficiency in the rat cause altered fetal and postnatal cerebral mitochondrial mRNA and DNA levels.