3种基因分型方法在鲍曼不动杆菌中的应用评价

目的比较3种基因分型方法在鲍曼不动杆菌中的应用。方法采用琼脂稀释法检测重症监护室(ICU)分离的30株鲍曼不动杆菌的最小抑菌浓度(MIC);分别以肠杆菌科基因间重复一致性序列(ERIC)、基因外回文重复序列(REP)及随机多态性核苷酸序列(RAPD)为引物进行PCR扩增,利用电泳指纹图谱进行基因分型,并进行聚类分析。结果 30株鲍曼不动杆菌仅对头孢哌酮/舒巴坦有较低的耐药率;ERIC-PCR基因分型法的扩增条带最为丰富,能扩增出4~7个条带,RAPD和REP-PCR扩增条带较少,分别扩增出1~5和1~4个条带;3种方法分别将30株鲍曼不动杆菌分为4、4、3个群。结论头孢哌酮/舒巴坦对于多重耐药鲍曼不动杆菌依然有较好的敏感性;本试验初步证实3种方法均可作为鲍曼不动杆菌基因分型的可选方法,ERIC-PCR较另外两种方法扩增条带更丰富,分辨率更好。     

鲍曼不动杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立鲍曼不动杆菌(A.baumannii)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱。方法以优化的随机引物和反应体系对临床分离的176株鲍曼不动杆菌进行RAPD法基因分型,并按DNA条带数及片段大小绘制指纹图谱。结果176株临床分离鲍曼不动杆菌共得122种RAPD指纹图谱,以第68、58和66型为主要型别,分别为18、15和10株。结论RAPD技术可将临床分离鲍曼不动杆菌分型122种,本院的主要流行基因型为第68、58和66型。     

鲍曼不动杆菌的耐药性及β-内酰胺酶耐药基因的研究

目的了解临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶耐药基因的存在类型。方法用美国BD公司Phoenix-100型全自动细菌鉴定药敏系统鉴定细菌及做药敏试验,用聚合酶链反应（PCR）方法检测5种常见β-内酰胺酶耐药基因。采用随机引物PCR扩增对菌株进行分型。结果 50株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B全部敏感,,而对其余18种抗生素耐药率为52%-100%,其中24株为泛耐药菌株,共分为8种基因型,B型菌株为主要的流行株,所有菌株均检出TEM-1基因,46株检出AmpC基因,31株检出0XA-24基因、21株检出0XA-23基因,7株检出IMP基因。结论临床分离的鲍曼不动杆菌主要以引起危重病人的呼吸道感染为主,对18种临床常用抗生素耐药率高,对头孢菌素类高度耐药并且存在克隆传播,同时携带多种耐药基因是本院鲍曼不动杆菌对β-内酰胺酶类抗菌药物耐药的主要原因。     

苏州地区鲍曼不动杆菌中Ⅰ类和Ⅱ类整合子的分布及其基因盒结构分析

摘要：目的: 分析Ⅰ类和Ⅱ类整合子在苏州地区临床分离的鲍曼不动杆菌中分布情况及其基因盒结构。 方法：用PCR法检测69株鲍曼不动杆菌中Ⅰ类和Ⅱ类整合酶基因及整合子携带率,基因测序技术对其可变区进行分析;重复序列引物聚合酶链反应（REP-PCR）对Ⅰ类整合子阳性菌株进行基因分型,分析其同源性。 结果：69株鲍曼不动杆菌中Ⅰ类整合子阳性29株,占42.0%,未检测到Ⅱ类整合子;基因盒结构分析共检出6种基因盒,分别为aacA4,aacC1,catB8,aadA1,orfX和orfX′,以5′CS-aacA4-catB8-aadA1-3′CS基因盒排列为主;REP-PCR法将29株Ⅰ类整合子阳性菌株分成I~V型,其中Ⅲ型为主要流行型别。 结论：苏州地区鲍曼不动杆菌中的整合子携带率较高,主要以Ⅰ类Ⅲ型为主。     

鲍曼不动杆菌随机扩增多态性DNA的分子流行病学研究

目的采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法监测鲍曼不动杆菌医院感染。方法对临床分离的48株医院感染鲍曼不动杆菌进行RAPD基因分型,绘制亲缘关系树状图,分析菌株间的同源性,确证是否存在医院感染的院内流行。结果 48株鲍曼不动杆菌共分到10个型别,鲍曼不动杆菌存在医院感染的院内流行。结论 RAPD可对鲍曼不动杆菌进行分子流行病学调查。     

多重PCR检测鲍曼不动杆菌6种耐药基因及其临床意义

目的探索多重聚合酶链反应(PCR)检测鲍曼不动杆菌多种耐药基因的方法,并指导临床用药。方法用多重PCR检测鲍曼不动杆菌6种耐药基因,并统计分析82例鲍曼不动杆菌耐药基因与相应抗生素的关联,比对耐药基因检出率及抗生素耐药率对应情况。结果多重PCR检测鲍曼不动杆菌灵敏性高、稳定性强;可尽早、快速、高效地指导临床用药。结论多重PCR可以同时检测鲍曼不动杆菌6种耐药基因,并及时、高效地指导临床用药,有效治疗感染,控制医院内感染。     

应用重复PCR指纹技术调查肺科ICU鲍曼不动杆菌的暴发流行

为调查鲍曼不动杆菌在医院感染中的流行情况 ,分别采用抗生素敏感谱试验及重复PCR指纹技术对从 2 4名病人分离的 2 8株鲍曼不动杆菌作分型研究。结果发现 2 8株共分成 3种抗生素敏感谱模式或 5种基因型 ,以Ⅰ型抗生素敏感谱或基因型A为主 ,从肺科ICU分离的菌株均为基因型A。结果表明基因型A鲍曼不动杆菌是此次暴发流行的菌株。基因分型较抗生素敏感谱分型更为灵敏、特异 ,且具有简便、快速、可靠的特点。在医院感染流行病学调查中颇具应用价值。     

鲍曼不动杆菌整合子与耐药性的相关性研究

目的 调查鲍曼不动杆菌中Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子的存在情况,分析整合子与鲍曼不动杆菌耐药性的关系.方法 测定93株鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性;应用简并引物PCR方法,同时扩增整合子5’保守区的Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合酶基因,对阳性PCR产物用限制性内切酶HinfⅠ作限制片段长度多态性(RFLP)分析进行整合子分类.结果 ...     

鲍曼不动杆菌医院感染流行病学分子研究及基因分型

目的建立随机扩增多态性DNA（RAPD）基因分型方法检测鲍曼不动杆菌,了解鲍曼不动杆菌医院感染流行病学的情况,为控制院内感染提供直接可靠的参考依据。方法对2009-2010年分离的220株鲍曼不动杆菌进行统计分析其临床分布;通过抗生素敏感性试验进行抗菌谱分型;再采用PAPD基因分型方法进行分析。结果标本主要来自ICU,烧伤科,呼吸内科等。从痰液标本中分离的鲍曼不动杆菌占61.0%,其次伤口分泌物标本是占19.0%、中段尿15.6%,其它类型标本占4.4%。抗菌谱分型分为5型。220株鲍曼不动杆菌用RAPD分型共得216株,分型率98.2%（216/220）,分为8种类型：Ⅰ-Ⅷ。结论 RAPD分型技术对鲍曼不动杆菌临床分离株分型率较高;同一抗菌谱型的基因型可能不同,同一基因型的抗菌谱也可能不同。     

耐碳青霉烯类抗生素不动杆菌的β内酰胺酶研究

目的了解不动杆菌属细菌对碳青霉烯类药物的耐药机制,耐药菌株的基因同源性和传播机制。方法采用改良Hodge试验和乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验筛选耐亚胺培南不动杆菌碳青霉烯酶,等电聚焦电泳(IEF)测定产β内酰胺酶等电点,blaTEM,blaSHV,blaCTX-M-Ga-Gc,blaPER-1,blaOXA-23,blaMBL等,引物的PCR进行β内酰胺酶的基因分型,并对PCR产物进行测序;Southern印迹进行苯唑西林酶OXA-23的基因定位脉冲场电泳(PFGE)研究耐亚胺培南不动杆菌同源性。结果6株耐碳青霉烯类不动杆菌均产OXA-23型酶,其中5株同时产PER-1型ESBLs。6株菌blaOXA-23均定位于染色体。3株琼氏不动杆菌属于同一PFGE分型,3株鲍曼不动杆菌分别属于2种PFGE分型。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是导致不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要原因,同时存在blaOXA-23的克隆传播。     

建立ERIC-PCR技术快速分析不同耐药性鲍曼不动杆菌的同源性

目的建立肠杆菌科基因间重复序列引物PCR技术(ERIC-PCR技术)用于分析亚胺培南耐药和亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌同源性,为判断医院内感染发生提供一种简便的新方法。方法收集2018年3-6月江苏大学附属医院重症监护室患者痰液中分离的非重复鲍曼不动杆菌80株,其中包含50株亚胺培南耐药菌株,30株亚胺培南敏感菌株。使用细菌基因组DNA提取试剂盒提取细菌基因组DNA,PCR扩增菌株ERIC序列,Quantity One软件分析不同耐药性菌株电泳条带以判断菌株同源性。结果 50株亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌可分为6种基因型,其中最多的一种基因型有24株;30株亚胺培南敏感的鲍曼不动杆菌可分为20种基因型,其中最多的一种基因型仅有3株。结论该院ICU来源的亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌的基因型较少,提示该菌株可能发生了医院内感染。ERIC-PCR技术简单、方便,可以快速分析鲍曼不动杆菌同源性,适合于在各级医院中推广。     

攀枝花地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌OXA基因型及分子流行病学分析

目的通过研究攀枝花地区临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药性及碳青霉烯酶OXA类型,了解该地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药机制及分子流行病学特征。方法收集2014年1月至2015年5月攀枝花地区两所三甲医院临床分离的127株鲍曼不动杆菌;采用KB法检测21种抗菌药物敏感性,比较碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药组和敏感组的耐药率;采用聚合酶链反应(PCR)检测OXA基因;最后采用肠杆菌基因间一致重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行分子分型及同源性分析。结果 66株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对多黏菌素B、米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,分别为15.2%、22.7%、24.2%,对其余18种抗菌药物耐药率均高于80.0%,耐药率明显高于敏感组菌株;OXA-23和OXA-51基因的检出率分别为92.4%、98.5%,OXA-24和OXA-58基因未检出;ERIC-PCR分子分型主要可分为A、B、C、D 4个型,以B型为主。结论攀枝花地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药非常严重,OXA-23、OXA-51基因为该地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌重要基因型,B型为主要流行株。     

鲍曼不动杆菌整合子相关耐药基因研究

目的了解我院鲍曼不动杆菌整合子流行情况，证实整合子与鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系，建立一种快速简便的整合酶聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法收集我院2005年9月至2006年2月临床分离的鲍曼不动杆菌共52株，用纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌耐药性及用整合酶PCR检测其整合子基因。结果在52株鲍曼不动杆菌中，整合酶PCR检测出Ⅰ类整合子33株（63％），未检测出Ⅱ类整合子。统计学分析结果显示，整合子阴性和阳性的鲍曼不动杆菌对各种抗生素的耐药率存在明显差异，前者仅对几种抗生素耐药而后者对多种抗生素耐药。结论我院多重耐药鲍曼不动杆菌中主要为Ⅰ类整合子，整合酶PCR是一种快速、简便、易在临床开展的检测方法，同时也是控制医院感染的有效检测手段。     

临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌同源性分析及常见耐药基因检测

目的了解上海市同仁医院临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌的基因同源性及耐药机制,为广泛耐药鲍曼不动杆菌感染的防治提供依据。方法采用肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)对临床分离的28株广泛耐药鲍曼不动杆菌进行分子生物学分型,采用PCR方法检测9种常见β内酰胺酶基因:blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaNDM-1、blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-51和blaOXA-58;膜孔蛋白基因CarO;插入序列ISAba1;以及ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58的连锁检测。结果 28株临床分离的广泛耐药鲍曼不动杆菌大多来自危重患者呼吸道标本,ERIC-PCR基因分型提示为同一来源克隆株;所有菌株均携带blaOXA-23、blaOXA-51基因,未检测出B类β内酰胺酶基因,以及blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-58等基因;膜孔蛋白基因CarO和插入序列ISAba1检测均为阳性,ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58连锁检测均未扩增到预期条带。结论研究期间临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌为同一克隆株,且携带相同耐药基因,提示存在克隆传播。     

老年人鲍曼不动杆菌的耐药分析

目的分析老年人鲍曼不动杆菌的耐药情况。方法从老年人中分离的鲍曼不动杆菌对10种抗生素的耐药情况,并用PCR方法检测碳青霉烯酶基因。结果64株鲍曼不动杆菌检测出20株携带碳青霉烯酶OXA-23基因。结论鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素耐药主要是产生碳青霉烯酶,也有其它耐药机制起作用。     

多重耐药鲍曼不动杆菌超广谱β-内酰胺酶基因检测及分布研究

目的:了解本院鲍曼不动杆菌多重耐药现状,指导临床用药;分析多重耐药菌株的超广谱β-内酰胺酶基因存在状况和菌株的亲缘性,揭示鲍曼不动杆菌的耐药机制.方法:自临床分离的鲍曼不动杆菌205株,采用纸片扩散(K-B)法进行药物敏感试验,用PCR方法检测20株多重耐药鲍曼不动杆菌的超广谱β-内酰胺酶基因.用多分子标志分型法,以13种基因为分子标志行检测结果的样本聚类分析,检测菌株的亲源性.结果:205株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦耐药率18%.对其他抗生素耐药率均在80%左右.PCR检测20株多重耐药鲍曼不动杆菌,bla TEM基因阳性率为50%,bla PER基因阳性率70%,bla VEB基因阳性率10%,bla CARB基因阳性率10%,bla GIM基因阳性率5%,bla DHA基因阳性率15%;未检出bla SHV,bla OXA,bla GES,bla SPM,bla VIM,bla IMP,oprD2基因.聚类分析结果提示本院鲍曼不动杆菌存在院内感染传播且存在暴发性流行.结论;分离菌株对多黏菌素全部敏感,对头孢哌酮/舒巴坦敏感性相对较高,对碳青酶烯类抗生素敏感性较低.多重耐药鲍曼不动杆菌携带bla TEM,bla PER,bla VEB,bla CARB,bla GIM,bla DHA等多种超广谱β-内酰胺酶基因.临床应根据药物敏感试验结果合理应用抗生素.     

建立鲍曼不动杆菌生物膜合成相关基因信息分析及PCR检测方法

目的建立鲍曼不动杆菌生物膜合成相关基因物信息分析及PCR检测方法。方法用DNASTAR软件进行核苷酸多重序列比对和基因扩增技术,对某株(ATCC 19606)鲍曼不动杆菌全长生物膜合成基因片段进行扩增和测序,并通过其他菌株检测进行验证。结果鲍曼不动杆菌不同株中均存在与某株的生物膜合成基因高度同源的序列,相似度均达到97%以上。该生物膜合成基因蛋白中存在两个跨膜区,含有与生物膜形成相关的超家族保守功能结构域。所克隆的生物膜合成基因核苷酸和氨基酸序列相似性都为100%。所建立的基于生物膜合成相关基因PCR仅对鲍曼不动杆菌DNA模板呈阳性扩增结果,其检测灵敏度可达10 cfu/m l。对临床分离菌株的检测与临床生化鉴定结果一致。结论鲍曼不动杆菌生物膜合成相关基因存在于各株鲍曼不动杆菌中,其编码蛋白为膜蛋白与生物膜形成有密切关系。所建立的基于鲍曼不动杆菌生物膜合成基因PCR具有特异、敏感、稳定等优点,可用于临床实验室鲍曼不动杆菌感染的快速诊断以及各种医疗器械带菌状况的检测。     

老年人鲍曼不动杆菌的耐药分析

目的 分析老年人鲍曼不动杆菌的耐药情况.方法 从老年人中分离的鲍曼不动杆菌对10种抗生素的耐药情况,并用PCR方法检测碳青霉烯酶基因.结果 64株鲍曼不动杆菌检测出20株携带碳青霉烯酶OXA-23基因.结论 鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素耐药主要是产生碳青霉烯酶,也有其它耐药机制起作用.     

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物的耐药机制研究

目的探讨鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药机制。方法K-B法检测19株鲍曼不动杆菌对4种氨基糖苷类药物的敏感性,聚合酶链反应(PCR)检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果14株鲍曼不动杆菌携带aacA4基因,检出率为74%。结论aacA4型氨基糖苷类修饰酶是鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药的重要机制。     

鲍曼不动杆菌整合子与耐药性的相关性研究

目的调查鲍曼不动杆菌中Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子的存在情况,分析整合子与鲍曼不动杆菌耐药性的关系。方法测定93株鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性;应用简并引物PCR方法,同时扩增整合子5’保守区的I类、Ⅱ类和Ⅲ类整合酶基因,对阳性PCR产物用限制性内切酶Hinf I作限制片段长度多态性（RFLP）分析进行整合子分类。结果 22株鲍曼不动杆菌检测出Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性的菌株对抗菌药物的耐药率普遍比整合子阴性的菌株高。结论鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药性强,细菌的多重耐药性与Ⅰ类整合子的存在相关。