P75NGFR在小鼠牙胚发育中的定位分布研究

目的：研究神经生长因子受体P75NGFR在小鼠牙胚发育过程中的定位分布。方法：采用免疫组化方法和图像分析技术观察P75NGFR在小鼠牙胚发育各期的表达与分布。结果：P75NGFR在小鼠牙胚发育各期均有不同程度的表达。胚胎E13d牙胚位于蕾状期：口腔上皮、成釉器上皮细胞阳性表达（＋）；在帽状期及钟状期口腔上皮、成釉器的星网层表达阳性（＋）；在P2～10d牙冠发育成熟期：成釉细胞、成牙本质细胞、前期牙本质、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性（＋）；P10—30d牙根发育期：除上述细胞成分外，上皮根鞘、牙槽骨表达强阳性（＋＋）。结论：P75NGFR参与牙胚及牙体硬组织的发育过程。     

跨膜蛋白Syndecan-1在不同发育时期小鼠磨牙组织中的表达

目的以小鼠磨牙为发育模型,研究其不同发育时期跨膜蛋白Syndecan- 1的表达特点,进而分析Syndecan-1在牙齿发育中的作用。方法取不同胎龄的胎鼠,制作其下颌第一磨牙的切片,进行免疫荧光染色,并在荧光显微镜下观察Syndecan- 1的表达情况。结果Syndecan- 1的表达随牙胚发育的时期不同而变化：蕾状期时在牙源性上皮和间充质中有弱的阳性分布,帽状期时成釉器上皮阳性表达减弱,而牙乳头及周围的间充质的阳性反应明显增强,钟状期时成釉器上皮又呈阳性表达,并以在中间细胞层的反应更为强烈,而牙乳头间充质的染色则很弱,同时前成釉细胞以及下方的成牙本质细胞的顶端也呈Syndecan- 1的阳性表达。结论Syndecan- 1参与了成釉器和牙乳头的发育和分化过程的调节,并与牙胚细胞的增殖以及成釉细胞和成牙本质细胞的分化相关。     

新基因mcpr1在小鼠牙胚发育中的时空表达和意义

目的:探讨mcpr1在牙胚发生过程中的可能作用。方法:采用免疫组化LsAB法观察MCPR1在小鼠牙胚发育各个时期的表达分布及其变化情况。结果:MCPR1在小鼠牙胚各个时期均有表达,但各期分布模式有所不同,帽状期开始在成釉器上皮细胞表达,在釉结节内亦呈现强阳性表达,在分化成熟的成牙本质细胞及成釉细胞内呈现出强阳性表达。结论:mcpr1可能通过上皮-间充质之间的信号传递及相关基因的相互调控,参与成釉器的成熟及牙胚的发育。     

大鼠成釉器细胞的分离纯化

目的：寻找一种大鼠成釉器细胞分离纯化的简捷方法。方法：分离出生后6dSD大鼠上下颌第一和第二磨牙完整牙胚，剥离牙囊和成釉器，酶消化法原代混合培养。采用多次差别消化法去除成纤维样细胞，纯化上皮样细胞，并进行抗角蛋白染色和RT—PCR检测釉原蛋白、成釉蛋白mRNA表达。结果：原代细胞为混杂细胞，经2～3次差别消化可完全去除成纤维样细胞。上皮样细胞呈多角形，铺路石样生长，抗角蛋白染色阳性，表达釉原蛋白、成釉蛋白mRNA。结论：本研究通过多次差别消化获得了纯化的大鼠成釉器细胞。     

BMP2在成釉细胞瘤中的表达及成熟肽片断的基因克隆

成釉细胞瘤是较常见的一种牙源性的肿瘤 ,目前普遍认为其来源于胚胎发育时期的成釉器 ,肿瘤性的成釉上皮过度增生且失去其诱导硬组织形成的活性。骨形成蛋白 (ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ,ＢＭＰ)在牙胚成釉器中有较高表达并诱导间充质细胞向成釉上皮分化 ,是牙釉质和牙本质形成过程中的重要因素之一。我们检测了成釉细胞瘤中的ＢＭＰ的表达及作用 ,研究成釉细胞瘤丧失其成骨性的病理发生机制。一、材料和方法1 标本来源 :16例标本来源于第四军医大学口腔医学院手术切除标本。取有ＢＭＰ表达和ＢＭＰ2ｍＲＮＡ扩增的 …     

组蛋白去甲基化酶JMJD3在小鼠牙发育中的表达

目的 研究组蛋白去甲基化酶JMJD3在牙发育过程中的表达.方法 采用免疫组织化学方法观察小鼠胚胎E14~18天及出生后P1~P3磨牙牙胚中组蛋白去甲基化酶JMJD3的表达.结果 JMJD3表达于细胞核内,包括上皮性细胞和间充质细胞.在小鼠磨牙牙胚发育的蕾状期(E14)和帽状期(E16),JMJD3在牙蕾上皮,成釉器内釉细胞、外釉细胞、星网状细胞中弱表达.在小鼠磨牙牙胚发育的钟状期(E18),JMJD3在成釉器的外釉细胞层,内釉细胞层,中间层、星网状层及邻近间充质细胞内呈强阳性表达.在小鼠磨牙牙胚发育钟状晚期(P3), JMJD3在成釉细胞、成牙本质细胞及邻近间充质细胞呈强阳性表达.结论 JMJD3在小鼠牙发育过程中呈时空特异性表达,提示JMJD3参与小鼠磨牙的发育.     

转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的表达和意义

目的：探讨转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的时空表达和对牙胚发育的影响。方法：建立小鼠牙胚发育模型，用免疫组织化学检测转化生长因子βⅠ型受体（ＴβＲ－Ⅰ）、Ⅱ型受体（ＴβＲ－Ⅱ）、Ⅲ型受体（ＴβＲ－Ⅲ）在牙胚发育中的表达。结果：转化生长因子βⅠ型受体、Ⅱ型受体在牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状期以及硬组织形成期均有表达，且随着成釉细胞和成牙本质细胞的逐渐成熟，表达增加，其中Ⅰ型受体比Ⅱ型受体表达量多，Ⅲ型受体仅在蕾状期的成釉器上皮和钟状期的内外釉上皮、牙囊有弱表达。结论：转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的时空表达与成釉细胞、成牙本质细胞的分化密切相关。     

β-连环蛋白和E-钙粘蛋白在小鼠磨牙牙胚发育中的研究

目的研究β-连环蛋白(β-catenin,β-cat)和E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达分布和意义。方法取胚胎13,15,16天(E13,E15,E16)和出生后1天、5天(P1,P5)的ICR小鼠,制备含上颌第一磨牙的各阶段牙胚发育标本,免疫组化二步法检测β-cat和E-cad在牙胚发育不同时期的表达。结果E13天牙胚处于蕾状期,E15天为帽状期,E16天为钟状早期,P1天处于钟状中期,P5天为钟状晚期。β-cat和E-cad在牙齿发育的各个阶段表达具有时空特异性,前者在各个阶段的成釉器上皮和其下方间充质中均表达,后者在釉质形成之前仅表达于成釉器上皮,之后在成牙本质细胞中也有表达。结论β-连环蛋白和E-钙粘蛋白参与牙胚发育的细胞形成与分化,表明细胞粘附和Wnt信号途径对牙胚发育具有调控作用。     

小鼠牙胚发育过程中collagenⅠ/Ⅲ的表达分布

目的:探讨collagenⅠ、Ⅲ在Balb/c小鼠牙胚发育各期的时间和空间分布特点,及两者在牙齿发育矿化中的作用。方法:用免疫组化方法检测小鼠牙胚发育各期collagenⅠ、Ⅲ的表达、分布。结果:collagenⅢ:出生前E13d小鼠牙胚蕾状期:口腔上皮细胞阳性表达( );E14~17d帽状期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞表达弱阳性;E18~19d和出生后P1d钟状期与分化期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性( );出生后P2~10d牙冠发育成熟期:成釉细胞、釉基质、成牙本质细胞、前期牙本质、牙乳头细胞、牙囊细胞、牙髓组织等均表达阳性( );P10~30d牙根发育成熟期:除上述细胞成分外,上皮根鞘、根周及根尖牙槽骨、牙骨质和牙周膜表达强阳性( )。collagenⅠ:在蕾状期无表达;帽状期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞表达阳性;钟状期与分化期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性;牙冠和牙根发育期:其分布和表达类似于collagenⅢ。结论:鉴于collagenⅠ、Ⅲ的表达和分布,表明它们均参与了牙胚和牙体硬组织的发育形成,但似乎cllagenⅢ的作用比collagenⅠ更为广泛。     

氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚中的表达

目的:研究氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚发育过程中的表达及分布,探讨其在牙齿发育过程中的作用.方法:提取小鼠牙胚中的总RNA并制备不同发育阶段的小鼠牙胚标本,应用RT-PCR和免疫荧光染色方法检测CLC-7在小鼠牙胚中的表达及分布.结果:RT-PCR检测发现新生小鼠牙胚有Clcn7 mRNA的表达.免疫荧光染色发现E18小鼠牙胚开始有CLC-7的表达,CLC-7存在于牙胚多种细胞,如内釉上皮层细胞、中间层细胞、星网状层细胞、牙乳头细胞、成釉细胞、成牙本质细胞.结论:CLC-7在小鼠牙胚中呈特异性空间分布,可能参与牙胚发育过程的调节.     

Runx2/cbfa1在人牙胚发育过程中的表达

观察核心因子Runx2/cbfa1在人牙胚发育过程中的表达,探讨cbfa1在牙齿发育过程中的作用。方法:制备人牙胚发育各期标本,免疫荧光法观察cbfa1在人牙胚发育过程中的表达情况。结果:在牙胚发育的不同时期均可见不同的时空表达模式。蕾状期表达比较广泛;帽状期内外釉上皮细胞和牙囊中呈强阳性表达,中间层也为强阳性,牙乳头为弱阳性;钟状早期,前成牙本质细胞处有强阳性表达;钟状中后期,成釉细胞为强阳性,成牙本质细胞为阴性,而牙囊部位仍为强阳性。结论:Runx2/cbfa1转录因子在人牙胚整个发育过程中的表达状况,提示该因子可能在牙胚各期的发育起一定作用,参与了各种成牙相关细胞的分化和硬组织的形成。     

不同时期大鼠牙齿胚基各部分组织发育能力的研究

目的：比较不同发育时期牙胚各部分异位环境下的发育能力,为牙齿再生重组实验提供参考。方法：分离获取SD大鼠帽状期和钟状末期牙胚,分离成釉上皮与牙乳头间充质,分别将完整牙胚、牙间充质、成釉上皮剪碎后异位移植至同种异体大鼠肾被膜下。4周后取材,对移植物进行组织学观察。结果：帽状期牙胚碎组织块移植物中可见部分不规则的牙齿样结构形成。钟状末期牙问充质碎组织块移植组中既有牙本质牙髓复合体样结构形成,还能观察到大量骨样基质形成。而钟状末期成釉上皮碎组织块移植物生成的组织均为骨样的结构。结论：发育早期牙胚的碎组织较发育末期的牙胚碎组织具有更强的牙齿形成能力,所形成的牙齿结构完整包括釉质、牙本质以及牙髓且顺序正确,提示这个时期牙上皮和间充质之间信号网络所提供的微环境可以更加完善和充分地指导牙齿的发育。     

Early morphogenesis of heterodont dentition in minipigs

The minipig provides an excellent experimental model for tooth morphogenesis because its diphyodont and heterodont dentition resemble that of humans. However, little information is available on the processes of tooth development in the pig. The purpose of this study was to classify the early stages of odontogenesis in minipigs from the initiation of deciduous dentition to the late bell stage when the successional dental lamina begins to develop. To analyze the initiation of teeth anlagens and the structural changes of dental lamina, a three-dimensional (3D) analysis was performed. At the earliest stage, 3D reconstruction revealed a continuous dental lamina along the length of the jaw. Later, the dental lamina exhibited remarkable differences in depth, and the interdental lamina was shorter. The dental lamina grew into the mesenchyme in the lingual direction, and its inclined growth was underlined by asymmetrical cell proliferation. After the primary tooth germ reached the late bell stage, the dental lamina began to disintegrate and fragmentize. Some cells disappeared during the process of lamina degradation, while others remained in small islands known as epithelial pearls. The minipig can therefore, inter alia, be used as a model organism to study the fate of epithelial pearls from their initiation to their contribution to pathological structures, primarily because of the clinical significance of these epithelial rests.     

ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空表达

目的:研究ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空分布。方法:采用免疫组织化学方法和图像分析技术观察ADAM28在小鼠牙胚发育各期的表达分布及差异。结果:ADAM28在牙胚发育各时期均有不同程度的表达。帽状期开始即在口腔上皮及成釉器星网层细胞、基底膜、牙乳头细胞和牙囊细胞表达强阳性,到钟状晚期,成釉细胞、釉基质、上皮根鞘和牙乳头细胞阳性表达;至冠根硬组织发育期,成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘、成牙骨质细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞阳性表达。结论:ADAM28作为上皮和间充质间重要的信号分子,参与了从蕾状期到钟状晚期、从基质分泌到硬组织形成的牙冠、牙根形态发生过程,它可能在牙源性间充质细胞的早期形成、增殖与分化启动中发挥重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用。方法 :选择胎龄分别为 7、8、10、14周自愿终止妊娠的新鲜人胚胎各 4例 ,制作牙胚切片 ,将蕾状期、帽状期和钟状期牙胚切片 ,做免疫组化检测。结果 :bFGF在蕾状期上皮细胞强染 ,外胚间充质细胞少量弱染色 ;帽状期 ,bFGF在上皮细胞呈整体弱染色 ,牙乳头细胞染色更弱 ;钟状期 ,bFGF在内釉细胞呈强染色 ,牙乳头近切缘的外层细胞亦呈阳性染色 ,星网状层少量细胞弱染色。结论 :bFGF对人牙胚上皮细胞的增殖和分化起着促进作用 ;在人牙胚的钟状期 ,bFGF在促进内釉上皮细胞向成釉细胞转化以及牙乳头细胞向成牙本质细胞转化中起重要作用 ,促进牙胚发育成熟     

Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达研究

目的:检测Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达分布及变化规律,初步揭示Ddit3在小鼠牙胚发育中的作用。方法:取不同胚胎时间点的ICR妊娠小鼠,制备牙胚发育标本,通过免疫荧光和免疫组化的方法显示Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同时间点的表达分布。结果:Ddit3在牙胚发育的早期主要表达于胞浆中,从钟状期开始,Ddit3不仅在胞浆中有阳性表达,同时也微弱地表达于细胞核中。分布如下:在小鼠下颌第一磨牙发育的板状期,Ddit3几乎没有表达。在蕾状期,Ddit3主要表达于釉上皮的细胞质中,在牙外胚间充质细胞中几乎无表达。在帽状期,Ddit3的表达模式基本和蕾状期相同。在钟状期早期,Ddit3在成釉细胞、前成牙本质细胞和牙乳头胞质中呈阳性表达,在部分细胞核中也检测到了Ddit3的表达。钟状期晚期,Ddit3在新形成的硬组织周围的高柱状成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的胞浆中有阳性表达,在大多数成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的细胞核中也有表达。结论:Ddit3可能会调节成釉细胞和成牙本质细胞的分化及其硬组织的生物矿化。     

基质金属蛋白酶-8在人和大鼠牙胚发育钟状期的表达

目的　研究基质金属蛋白酶-8(MMP-8)在牙胚发育牙本质形成过程中的表达。方法　免疫组织化学方法检测MMP-8在人牙胚发育钟状期的表达;原位杂交方法检测MMP-8 mRNA在大鼠牙胚发育钟状期的表达。结果　 MMP-8在人牙胚钟状晚期硬组织形成期成牙本质细胞和牙本质基质阳性表达,近髓腔处,牙本质染色更深;MMP-8 mRNA在大鼠牙胚发育钟状早期个别分化的成牙本质细胞表达阳性,钟状晚期,即硬组织形成期,MMP-8mRNA在成牙本质细胞表达强阳性。结论　MMP-8可能参与了人和大鼠牙胚发育过程牙本质基质改建。     

Notch1蛋白在小鼠下颌切牙发育中的表达

目的探讨Notch1在小鼠下颌切牙牙胚发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌切牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌切牙牙胚自牙胚发育起始期至钟状晚期不同发育阶段组织Notch1的分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌切牙发育蕾状期牙胚的口腔侧上皮中表达,而在和间充质相邻的牙胚上皮中没有表达。从帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中没有表达。钟状期的唇侧颈环部位星网状层和部分牙上皮细胞也表达Notch1。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌切牙发育过程中的牙上皮,特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。     

釉质溶解素在人和大鼠牙胚发育过程中的表达

目的：检测釉质溶解素（enamelysin)mRNA在人和大鼠牙胚发育不同时期的表达,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法：采用原位杂交法。结果：人牙胚钟状早期未见釉质溶解素mRNA;钟状晚期,成釉细胞和成牙本质细胞表达阳性。釉质溶解素mRNA在大鼠牙齿发育早期表达阴性,在钟状晚期成釉细胞和成牙本质细胞表达阳性。结论：釉质溶解素m RNA在牙齿发育过程中的表达有时空特异性,提示它可能参与釉质和牙本质的形成。     

氯离子通道CIC-5在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的研究氯离子通道ClC-5在大鼠牙胚发育过程中的表达情况，探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法从不同发育阶段的大鼠牙胚中提取总RNA和蛋白，应用RT—PCR和Westem blot检测ClC-5在大鼠牙胚发育过程中mRNA和蛋白的表达情况。结果ClC-5在牙胚发育的过程中存在时空特异性表达，其mRNA和蛋白都主要在牙胚发育的钟状晚期表达。结论ClC-5在大鼠牙胚发育过程中的这种时空特异性表达，提示其可能在牙齿发育的过程中发挥一定的作用。