水溶性壳聚糖水凝胶对糖尿病小鼠感染全层皮肤缺损创面的作用及其机制

目的探讨水溶性壳聚糖水凝胶对糖尿病小鼠感染全层皮肤缺损创面的作用及其机制。方法采用实验研究方法。采用循环冻融的方法制备由聚乙烯醇和明胶组成的对照水凝胶及由前述2种材料+水溶性壳聚糖组成的水溶性壳聚糖水凝胶。大体观察第1次冻融前后试管中2种敷料流动性, 并比较12孔板中2种敷料最终形态的外观差异。取细胞株L929和HaCaT, 均分别按照随机数字表法(分组方法下同)分为对照水凝胶组和水溶性壳聚糖水凝胶组, 分别加入相应敷料培养24 h, 采用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖活力。取兔血红细胞悬液, 分为生理盐水组、聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)组、对照水凝胶组和水溶性壳聚糖水凝胶组, 分别作相应处理后孵育1 h, 采用酶标仪检测红细胞的溶血程度。取24只11～14周龄雌性db/db小鼠, 在其背部制作全层皮肤缺损创面并在创面处滴加耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)液, 72 h后将小鼠分为空白对照组、磺胺嘧啶银水胶组、对照水凝胶组、水溶性壳聚糖水凝胶组, 分别作相应处理。伤后0(即刻)、7、14、21 d, 大体观察创面愈合情况并计算伤后14、21 d创面愈合率;伤后14 ...     

氧化铈纳米酶-甲基丙烯酸酐化明胶水凝胶在小鼠全层皮肤缺损感染创面修复中的作用

目的探讨氧化铈纳米酶-甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)水凝胶(以下简称复合水凝胶)在小鼠全层皮肤缺损感染创面修复中的作用。方法该研究为实验研究。采用水热法制备粒径为(116±9)nm的氧化铈纳米酶, 同时制备具有多孔网状结构且成胶性能良好的GelMA水凝胶。筛选出25 μg/mL氧化铈纳米酶可明显促进人皮肤成纤维细胞增殖和具有较高的超氧化物歧化酶活性, 将其加入GelMA水凝胶中制备复合水凝胶。计算用磷酸盐缓冲液(PBS)浸泡3、7 d后复合水凝胶中氧化铈纳米酶的释放百分比。将小鼠红细胞悬液分为用相应溶液处理的PBS组、Triton X-100组、氧化铈纳米酶组、GelMA水凝胶组及复合水凝胶组, 利用酶标仪检测处理1 h后红细胞的溶血情况。测定用PBS、氧化铈纳米酶、GelMA水凝胶及复合水凝胶培养耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和大肠埃希菌2 h后的细菌浓度。以上实验样本数均为3。取24只8周龄雄性BALB/c小鼠, 在背部对称位置各制备1个用MRSA感染的全层皮肤缺损创面。将小鼠分为不进行药物干预的对照组及滴加相应溶液的氧化铈纳米酶组、GelMA水凝胶组和复合水凝胶组, 每组...     

载P311微球的温敏壳聚糖水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响

目的探讨载P311微球的温敏壳聚糖水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响。方法采用实验研究方法。通过油包水乳化法制备聚乙烯醇/海藻酸钠微球(单纯微球)、P311微球及异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白(FITC-BSA)微球, 于光学显微镜/倒置荧光显微镜下观察形貌。制备壳聚糖溶液, 将壳聚糖溶液和β-磷酸甘油二钠水合物混合制备单纯温敏水凝胶, 在单纯温敏水凝胶中加入相应物质制备载单纯微球和载P311微球的温敏水凝胶, 观察4种液体在37 ℃时倾斜状态下的形态变化, 冷冻干燥后于扫描电子显微镜下观察微观形貌。取18只3～4周龄雄性SD大鼠, 分为不进行任何处理的正常组及于背部脊柱两侧分别制作1个全层皮肤缺损创面并进行相应处理的敷贴组、壳聚糖组、单纯水凝胶组、载单纯微球水凝胶组、载P311微球水凝胶组, 每组3只。取5组全层皮肤缺损大鼠, 于伤后0(即刻)、5、10、15 d 观察创面愈合情况, 计算伤后5、10、15 d创面愈合率;取5组全层皮肤缺损大鼠伤后15 d创面和创缘组织及正常组大鼠相同部位正常皮肤组织, 行苏木精-伊红染色观察组织学变化, 行免疫组织化学染色观测CD31及血管内...     

单细胞RNA测序解析普通小鼠和糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面中CD34+细胞的类型与功能

目的单细胞RNA测序解析普通小鼠和糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面中CD34+细胞的类型与功能。方法该研究为实验研究。构建CD34+细胞谱系追踪小鼠, 实现CD34+细胞在荧光条件下可视化。取6只7～8周龄雄性CD34+细胞谱系追踪小鼠(设为糖尿病组), 腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病模型, 于小鼠13周龄时在其背部制备全层皮肤缺损创面;另取6只13周龄雄性CD34+细胞谱系追踪小鼠(设为对照组), 在其背部制备全层皮肤缺损创面。伤后4 d, 分别收集对照组3只小鼠和糖尿病组2只小鼠创面组织, 消化制备单细胞悬液, 采用荧光活化细胞分选法筛选出CD34+细胞后进行单细胞RNA测序, 采用R语言的Seurat 4.0.2程序通过降维可视化和细胞聚类分析CD34+细胞类型并筛选注释各CD34+细胞亚群的标记基因, 对2组小鼠创面组织间CD34+成纤维细胞(Fb)、平滑肌细胞、角质形成细胞(KC)、类软骨细胞的差异表达基因(DEG)进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)富集分析, 探索细胞功能。结果伤后4 d, 2组小鼠创面组织中CD34+细胞均包含7种细胞类型, 具体为内皮细...     

自体脂肪干细胞基质胶对兔耳全层皮肤缺损创面愈合及瘢痕增生的影响

目的探讨自体脂肪干细胞基质胶对兔耳全层皮肤缺损创面愈合及瘢痕增生的影响, 并分析其相关机制。方法采用实验研究方法。切取42只2～3个月龄雄性新西兰大白兔背部完整脂肪垫, 制备脂肪干细胞基质胶, 并于每只兔双耳腹侧制备全层皮肤缺损创面, 将左耳创面纳入脂肪干细胞基质胶组(以下简称基质胶组)、右耳创面纳入磷酸盐缓冲液(PBS)组, 分别注入自体脂肪干细胞基质胶和PBS。计算伤后7、14、21 d创面愈合率, 并于创面愈合后1、2、3、4个月行创面形成瘢痕组织(以下简称瘢痕组织)温哥华瘢痕量表(VSS)评分;行苏木精-伊红染色观测伤后7、14、21 d创面组织病理学改变和创面愈合后1、2、3、4个月瘢痕组织真皮厚度;行Masson染色观察伤后7、14、21 d创面组织和创面愈合后1、2、3、4个月瘢痕组织中胶原排布, 并计算胶原容积分数(CVF);采用免疫组织化学法观测伤后7、14、21 d创面组织中微血管计数(MVC)与创面愈合后1、2、3、4个月瘢痕组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达, 并行基质胶组瘢痕组织中α-SMA与TGF-β1表达相关性分...     

人脐带间充质干细胞联合自体Meek微型皮片移植在大面积烧伤患者中应用的前瞻性研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSC)联合自体Meek微型皮片移植对大面积烧伤患者的效果。方法采用前瞻性自身对照研究方法。2019年5月—2022年6月, 解放军联勤保障部队第九九〇医院收治的16例大面积烧伤患者符合入选标准, 按照剔除标准剔除3例患者, 最终纳入13例患者, 其中男10例、女3例, 年龄24～61(42±13)岁。共选择受试区20个(创面40个, 大小均为10 cm×10 cm)。采用随机数字表法将每个受试区中的2个相邻创面分为涂抹含hUCMSC透明质酸凝胶的hUCMSC+凝胶组及涂抹单纯透明质酸凝胶的单纯凝胶组, 每组20个创面, 随后2组创面均移植扩展比例为1∶6的自体Meek微型皮片。术后2、3、4周, 观察创面愈合情况并计算创面愈合率, 记录创面愈合时间。术后, 若创面出现脓性分泌物, 则采集创面分泌物标本行微生物培养。术后3、6、12个月, 采用温哥华瘢痕量表评估创面瘢痕增生情况。术后3个月, 取创面组织, 行苏木精-伊红(HE)染色观察皮肤组织形态学变化, 行免疫组织化学染色观察Ki67阳性和波形蛋白阳性表达情况并统计阳性细胞数。对数据行配对样本t检验...     

负载银和重组人碱性成纤维细胞生长因子的甲基丙烯酸酐化明胶水凝胶对兔深Ⅱ度烧伤创面的影响

目的探讨负载银和重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)的甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)水凝胶对兔深Ⅱ度烧伤创面的影响。方法采用实验研究方法。制备含不同浓度甲基丙烯酸酐(MA)的低浓度MA明胶(GelMA)材料、中浓度GelMA材料和高浓度GelMA材料, 加入光引发剂后分别制得低浓度GelMA水凝胶、中浓度GelMA水凝胶和高浓度GelMA水凝胶。采用核磁共振波谱仪检测前述3种浓度GelMA材料的氢核磁共振谱并根据波谱图计算其取代度, 采用场发射扫描电子显微镜(FESEM)检测前述3种浓度GelMA水凝胶的三维微观结构及孔径, 样本数均为9。根据前述筛选出的MA浓度合成含10种浓度银的GelMA(含银GelMA)溶液, 将每种浓度的含银GelMA溶液均分为3份, 加入光引发剂后分别暴露于紫外光下持续20、25、35 s, 制得相应的含银GelMA水凝胶。采用胶原酶降解法测定不同光交联时间含银GelMA水凝胶降解12、24、36、48 h的降解剩余率及彻底降解所需时长, 样本数为5。测定前述筛选出光交联时间下含10种浓度银GelMA水凝胶对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径反映其抑菌能...     

基于单细胞RNA测序探讨小鼠全层皮肤缺损创面中真皮成纤维细胞的生长因子调控网络

目的基于单细胞RNA测序探讨小鼠全层皮肤缺损创面中真皮成纤维细胞(dFb)的异质性与生长因子调控网络。方法采用实验研究方法。取5只8周龄雄性健康C57BL/6小鼠(鼠龄、性别、品系下同)正常皮肤组织, 另取5只背部全层皮肤缺损小鼠伤后7 d创面组织, 用胶原酶D和DNA酶Ⅰ消化组织获得细胞悬液, 用10x Genomics平台构建测序文库, 用Illumina Novaseq6000测序仪进行单细胞RNA测序。采用R4.1.1软件的Seurat 3.0程序分析获得2种组织细胞的基因表达矩阵, 采用按细胞群、细胞来源、标记皮肤中主要细胞基因分类的二维tSNE云图进行可视化展示。根据已有文献报道和CellMarker数据库检索情况, 分析2种组织细胞的基因表达矩阵中标志基因表达情况, 对各细胞群进行编号和定义。将基因表达矩阵和细胞分群信息导入R4.1.1软件的CellChat 1.1.3程序, 分析2种组织中细胞间通信以及创面组织血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)信号通路中的细胞间通信, 2种组织中FGF的各亚...     

三维生物打印抗菌型水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面的作用

目的探讨三维生物打印负载纳米银的甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面的作用。方法采用实验研究方法。采用扫描电子显微镜观察不同质量浓度的纳米银溶液中的纳米银颗粒的形态、粒径、分布和含不同终质量分数GelMA的含银GelMA水凝胶的孔隙结构, 并计算孔径大小。处理1、3、7、14 d, 采用质谱仪检测含终质量分数15% GelMA和终质量浓度10 mg/L纳米银的水凝胶的纳米银释放浓度。培养24 h, 检测含终质量浓度0(无纳米银)、25、50、100 mg/L纳米银的GelMA水凝胶对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌圈直径。取浙江大学医学院附属第二医院泌尿外科2020年7月收治的1名健康5岁男童包皮环切术后废弃包皮和该院整形外科2020年7月收治的1名健康23岁女性抽脂手术后废弃脂肪, 采用酶解法分别提取成纤维细胞(Fb)和脂肪干细胞(ASC)。将Fb分为仅有培养基的空白对照组和另加入含相应终质量浓度纳米银溶液的2 mg/L纳米银组、5 mg/L纳米银组、10 mg/L纳米银组、25 mg/L纳米银组、50 mg/L纳米银组, 培养48 h, 采用细胞计数试剂盒8...     

去铁胺对深部组织损伤小鼠巨噬细胞极化和创面愈合的调节机制

目的探讨去铁胺对深部组织损伤(DTI)小鼠巨噬细胞极化和创面愈合的影响及其作用机制。方法采用实验研究方法。取54只6～8周龄雄性C57BL/6J小鼠, 按随机数字表法分为DTI对照组、2 mg/mL去铁胺组、20 mg/mL去铁胺组, 每组18只。采用磁铁压迫法在小鼠背部制造DTI, 从伤后1 d开始, 每隔1 d在创缘皮下注射100 μL生理盐水或相应质量浓度的去铁胺溶液, 直至取材;另取6只不进行任何处理的小鼠为正常对照组。取3组DTI小鼠, 每组6只, 于伤后3、7、14 d观察创面变化并计算创面愈合率。于其他组伤后3 d取正常对照组小鼠正常皮肤组织(下同)和其余3组小鼠伤后7、14 d创面组织, 行苏木精-伊红(HE)染色观察组织形态。取正常对照组小鼠正常皮肤组织和其余3组小鼠伤后7 d创面组织, 行免疫组织化学染色观测CD206和CD11c阳性面积百分比, 分别采用实时荧光定量反转录PCR法及蛋白质印迹法检测CD206、CD11c和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA及蛋白表达。取正常对照组小鼠正常皮肤组织和DTI对照组、20 mg/mL去铁胺组小鼠伤后3、7、14 d创...     

石墨烯泡沫支架缓释netrin-1促进糖尿病大鼠创面愈合的研究

目的 研究石墨烯泡沫支架缓释神经轴突导向生长因子-1(netrin-1)促进糖尿病大鼠创面愈合的作用.方法 利用化学气相沉积(CVD)法制备三维石墨烯网状支架,并将其填充到水凝胶中,同时利用水凝胶负载netrin-1,制成缓释支架.将支架植入裸鼠背部,2周后检测组织损伤情况,明确支架材料的生物相容性.支架浸出液与内皮细...     

脐带间充质干细胞对皮肤创伤愈合影响的实验研究

目的:探讨脐带间充质干细胞(MSCs)对皮肤创伤愈合影响的实验研究。方法:在重度烧伤大鼠中抽取80例作为研究对象,从脐血内分离出MSCs,依据随机数字法分为MSCs胶原凝胶组、单纯MSCs组、胶原凝胶组和生理盐水组各20例,对其进行GFP荧光检测、FISH原位杂交检验、Western Blotting、Real-Time PCR检验创面组织内VEGF、Ang-1、Ang-2、Tie-1and-2Receptor Tyrosine Kinases基因与蛋白表达、血管生成情况。结果:相较于单纯MSCs组、胶原凝胶组和生理盐水组,MSCs胶原凝胶组皮肤愈合率最高(P0.05),且Ang-1、Ang-2、Tie-1and-2Receptor Tyrosine Kinases基因与蛋白表达最强(均P0.05),MVD数量最多(P0.05)。结论:脐带间充质干细胞应用于皮肤创伤移植,可促使创伤表面的新愈细胞修复和重建,提升创面愈合率,并改善创面愈合效果。     

原位交联含氧化石墨烯的甲基丙烯酸酐化明胶水凝胶对小鼠全层皮肤缺损创面血管化的影响

目的制备含氧化石墨烯(GO)的甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)水凝胶并探讨原位光聚合GO-GelMA复合水凝胶对小鼠全层皮肤缺损创面血管化的影响。方法采用实验研究方法。将0.2 mg/mL的GO溶液50 μL均匀涂抹于导电胶上, 烘干后于场发射扫描电子显微镜下观察GO的结构和大小。将人皮肤成纤维细胞(HSF)分为采用相应终质量浓度GO处理的0 μg/mL GO(不加GO溶液, 下同)组、0.1 μg/mL GO组、1.0 μg/mL GO组、5.0 μg/mL GO组、10.0 μg/mL GO组, 用酶标仪检测细胞培养48 h的吸光度值, 以此表示细胞增殖活性(样本数为6)。将HSF和人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分别分为采用相应终质量浓度GO处理的0 μg/mL GO组、0.1 μg/mL GO组、1.0 μg/mL GO组、5.0 μg/mL GO组, 采用划痕试验检测划痕后24、36 h HSF的迁移率(样本数为5)及划痕后12 h HUVEC的迁移率(样本数为3), 采用酶联免疫吸附测定法检测培养4、6、8 h后HSF分泌的血管内皮生长因子(VEGF)水平(样本数为3)。...     

脂肪间充质干细胞-壳聚糖凝胶复合物治疗大鼠深Ⅱ度烫伤创面实验研究

目的制备脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)与温敏氯化壳聚糖(chitosan chloride,CSCl)凝胶复合物,研究其生物相容性及对大鼠深Ⅱ度烫伤创面修复的可行性。方法取SPF级6周龄雄性SD大鼠皮下脂肪组织,采用酶原消化并差速贴壁法制备ADSCs。将CSCl、β-甘油磷酸钠和羟乙基纤维素按8∶2∶2.5比例混合,制作温敏CSCl凝胶;采用Live/Dead染色和细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法观察ADSCs在其中的存活和增殖情况。取SPF级8周龄雄性SD大鼠72只,采用开水接触烫伤法制备深Ⅱ度烫伤创面模型,随机分为3组,每组24只,A组为空白对照组,B组用温敏CSCl凝胶涂抹创面,C组用ADSCs/温敏CSCl凝胶复合物涂抹创面。术后3、7、14、21 d观察创面闭合情况并计算创面闭合率;术后7 d行HE染色观察炎性细胞数,21 d行HE染色观察新生表皮厚度;同时于术后7 d行CD31免疫组织化学染色观察新生微血管情况。结果 CSCl有温度敏感性,4℃为液态,37℃时成凝胶。Live/Dead染色和CCK-8法结果显示ADSCs在温敏CSCl凝胶中存活并持续增殖。大体观察示,术后各时间点C组创面闭合率均高于A、B组(P0.05)。HE染色示,术后7 d,3组大鼠创面修复进入纤维增生期,各组可见胶原沉积,真皮层可见炎性细胞浸润,C组炎性细胞数显著小于A、B组,B组小于A组(P0.01)。术后21 d,B、C组新生上皮及真皮层纤维结缔组织排列整齐,可见成纤维细胞及新生毛细血管;A组亦可见新生表皮覆盖,但真皮层纤维结缔组织排列较紊乱,见零星毛细血管。C组新生表皮厚度显著大于A、B组,B组大于A组(P0.01)。术后7 d,CD31免疫组织化学染色示各组均可见新生微血管,C组大鼠创面新生微血管数显著高于A、B组,B组高于A组(P0.05)。结论 ADSCs/温敏CSCl凝胶复合物具有良好的组织相容性,并且能加快大鼠深Ⅱ度烫伤创面修复。     

脂肪干细胞基质胶促进创面愈合的研究进展

近年来, 随着我国人口老龄化问题的凸显, 糖尿病足、压疮、血管性溃疡等慢性创面患者增多, 严重影响患者的生活质量, 加重患者家庭经济、护理负担, 成为临床上亟须解决的难题之一。有较多研究证实, 脂肪干细胞能有效促进创面愈合, 但需应用外源性蛋白酶, 且存在伦理等诸多问题, 限制了其在临床中的推广应用。脂肪干细胞基质胶是脂肪组织经过流体漩涡及絮凝沉淀获取的富含生物活性的细胞外基质及基质血管成分的凝胶状混合物, 其含有丰富的脂肪干细胞、造血干细胞、内皮祖细胞、巨噬细胞等。脂肪干细胞基质胶制备方法简单、制备时间短, 便于临床推广应用。国内外众多研究表明, 脂肪干细胞基质胶能够通过调节炎症反应、促进微血管重建及胶原合成有效促进创面愈合。因此, 该文总结了脂肪干细胞基质胶的制备及促进创面愈合的机制和存在的问题, 以期为临床慢性创面的治疗提供新的方法与思路。     

培养的人细胞、生物高聚物和生长因子用于裸鼠皮肤创面的愈合

实验以胶原-氨基葡聚糖(C-GAG)或胶原凝胶(C-GEL)为基质,两者分别内含培养的人成纤维细胞(HF)、培养的人表皮细胞(HK)制成C-GAG-HF-HK复合皮和C-GEL-HF-HK复合皮),探讨了这类复合皮移植的存活率及对创面收缩的影响。裸鼠背部去除2×2cm~2全层皮肤制成创面,设不植皮组、人断层皮肤异种植皮组和裸鼠自体移植组等3个对照组。按两种复合皮处理过程中培养液是否含胎牛血清(FBS)及在无血清培养液中是否含有成纤维细胞生长因子(bFGF)等条件,实验组分成6个     

康复新凝胶剂对小鼠创面组织修复的作用及相关机制探讨

目的:观察康复新凝胶剂对小鼠皮肤创面损伤的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:60只C57BL/6J小鼠随机分成模型组、康复新凝胶剂组(凝胶剂组)、林可霉素利多卡因凝胶剂组(林可霉素组),每组20只,采用全层皮肤切除法在C57BL/6J小鼠背部制备伤口,伤口造模后开始按组对应给药10d;于治疗第3、7、10天拍照观察伤口图像并计算创面愈合率;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血液中白细胞介素-6(IL-6)与转化生长因子-β(TGF-β)的含量;于治疗后第10天处死各组小鼠,苏木精-伊红染色法(HE)观察创面组织变化;免疫组化染色检测创面组织血管内皮生长因子(VEGF)、M1型巨噬细胞标志物(iNOS)与M2型巨噬细胞标志物(CD206)蛋白表达;荧光定量PCR(qRT-PCR)检测创面组织中IL-6、TGF-β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-10(IL-10)mRNA表达水平。结果:与模型组比较,康复新凝胶剂组小鼠于治疗后第3、7、10天伤口愈合较为明显,创面愈合率显著增加,差异有统计学意义(P0.05);血清中IL-6含量显著下降且TGF-β含量显著升高(P0.05)。治疗10d后,与模型组比较,康复新凝胶剂组小鼠创面炎性细胞浸润明显,新生致密肉芽组织,有大量新生毛细血管形成,同时VEGF阳性表达率显著增加(P0.05),IL-6、TNF-αmRNA表达水平显著下降(P0.05),IL-10、TGF-βmRNA表达水平显著升高(P0.05),iNOS阳性细胞数显著减少而CD206阳性细胞数显著增加(P0.05),且与林可霉素利多卡因凝胶剂作用等效。结论:康复新凝胶剂能够促进小鼠伤口愈合,减轻伤口部位炎症反应,其机制可能与创面巨噬细胞表型转化有关。     

姜黄素结合三维生物打印的甲基丙烯酸酐化明胶水凝胶可减少活性氧诱导的脂肪干细胞凋亡并提高糖尿病创面移植物的存活率

晚期糖基化终末产物(AGE)与AGE受体(AGER)相互作用, 可产生活性氧, 导致皮肤Fb和血管内皮细胞凋亡, 从而阻碍糖尿病创面愈合。浙江大学医学院附属第二医院韩春茂教授和王新刚教授团队在《Burns & Trauma》杂志发文《Curcumin?incorporated 3D bioprinting gelatin methacryloyl hydrogel reduces reactive oxygen species?induced adipose?derived stem cell apoptosis and improves implanting survival in diabetic wound》。该团队制备了一种含有姜黄素的三维生物打印甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)水凝胶支架, 将其植入脂肪干细胞(ADSC)并应用于小鼠糖尿病创面。通过结构表征、蛋白质印迹法、活性氧和细胞凋亡测定来评估其抗氧化和抗细胞凋亡活性, 并通过创面愈合实验评估了姜黄素通过AGE/AGER/核因子κB p65途径对细胞凋亡的潜在调节作用。通过扫描电子显微镜观察到, 质量分数10%的G...     

三七透明质酸钠凝胶对家兔椎板切除术后硬膜外瘢痕中胶原成分的影响

目的:探讨三七透明质酸钠凝胶在家兔术后硬膜外瘢痕组织形成过程中对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法:大耳白品系家兔96只,体重2.0～2.5kg,6月龄,雌雄各半,按照完全随机方法分为生理盐水组(A)、三七组(B)、透明质酸钠组(C)、三七透明质酸钠凝胶组(D),制作家兔椎板切除模型,分别在硬膜囊周围涂抹生理盐水、三七浓缩液、透明质酸钠、三七透明质酸钠凝胶各0.5ml,各组术后1、2、4、8周取材,Masson染色进行胶原生长情况的形态学观察,原位杂交方法分析Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果:Masson染色中胶原纤维的排列,生理盐水组三七透明质酸钠凝胶组比对照组更加规整。Ⅰ型胶原mRNA表达三七透明质酸钠凝胶组在用药4周时明显低于生理盐水组、透明质酸钠组、三七组(P0.01);Ⅲ型胶原mRNA表达三七透明质酸钠凝胶组在用药4周时明显高于生理盐水组、透明质酸钠组、三七组(P0.01)。结论:三七透明质酸钠凝胶对家兔术后硬膜外瘢痕具有改善胶原纤维的排列,降低瘢痕硬度,增加瘢痕弹性的作用。     

组织工程口腔黏膜固有层修复皮肤缺损的初步研究

目的探讨两种组织工程口腔黏膜固有层移植修复皮肤缺损的效果.方法分别以胶原凝胶和壳多糖-胶原凝胶为网架与体外培养的Wistar大鼠口腔黏膜成纤维细胞构建胶原凝胶口腔黏膜固有层(fibroblast-populated collagen lattice,FPCL)、壳多糖-胶原凝胶口腔黏膜固有层(fibroblast -populated chitosan collagen lattice,FPCCL),用BrdU标记其中的成纤维细胞后,移植修复同种异体大鼠背部全层皮肤圆形缺损.将36只21～25周龄Wistar大鼠分为FPCL组、FPCCL组及创口仅覆盖纱布的对照组,每组12只.术后行大体观察创面愈合情况;4、7、14和21 d 3组创面直径测量;组织学及免疫组织化学染色观察其组织修复情况.结果术后大鼠创面均无感染,创面结痂在14及17 d自然脱落,创面逐渐愈合,被新生表皮覆盖,术后21 d新生皮肤光滑,颜色与正常皮肤接近,无体毛.术后各时间点3组创面直径均逐渐变小,差异有统计学意义(P＜0.01),14 d以后,创口大小较稳定.术后7 d,FPCL组受植创面比FPCCL组受植创面和对照组创面小(P＜0.01).组织学观察:术后7 d,3组创面未完全表皮化;14、21 d,FPCL组、FPCCL组受植区完全表皮化,有钉突,对照组无明显钉突,表皮已分层,基底细胞层完整,最表面有角化物;真皮中新生胶原纤维细,含毛细血管.免疫组织化学染色显示,FPCL组、FPCCL组术后各时间点阳性成纤维细胞出现在肉芽组织的细胞密集处和新生真皮中,与新生肉芽组织共同参与了皮肤缺损的修复重建,未出现免疫排斥现象.结论口腔黏膜成纤维细胞作为修复皮肤缺损的种子细胞是可行和有效的,壳多糖胶原凝胶在限制受植区创面收缩变小方面优于单纯胶原凝胶.FPCL和FPCCL两组新生皮肤的质量优于对照组,两种组织工程口腔黏膜固有层作为皮肤缺损区永久性真皮替代物是可行和有效的.