半乳糖凝集素-3在邻苯二甲酸二丁酯致大鼠尿道下裂发生中的表达

目的 利用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)胚胎期暴露导致SD大鼠尿道下裂发生的动物模型,观察半乳糖凝集素-3(galectin-3)在尿道下裂与正常大鼠生殖结节中的差异表达,探讨其在DBP致大鼠尿道下裂发生中的作用.方法 SD孕鼠20只,随机分为2组,妊娠14～18 d(GD14～18)实验组和对照组分别给予DBP 800 mg/(kg·d)和大豆油2 ml/d灌胃,GD19剖宫产后统计子鼠数、雄性子鼠出生体质量(BW)及肛门生殖器距离(AGD)、尿道下裂发生率,取两组雄性子鼠生殖结节,运用免疫印迹法和免疫组织化学方法分析galectin-3的表达.结果 尿道下裂仅实验组发生,发生率为40%,每窝子鼠数、雄性子鼠BW及AGD/BW在实验组分别为(8.90±1.25)只、(5.12±0.24)g、(0.57±0.03)mm/g,在对照组分别为(13.20±1.46)只、(6.72±0.42)g、(0.66±0.07)mm/g,差异有统计学意义(P＜0.05);galectin-3在尿道下裂组的相对表达量为0.603±0.014(n=10),正常对照组为0.851±0.015(n=10),差异有统计学意义(P＜0.05);galectin-3主要定位于生殖结节上皮细胞,尿道下裂组染色强度明显弱于对照组.结论 染毒期间DBP对雄性子鼠有明显毒性作用,改变了生殖结节中galectin-3的表达,影响了上皮细胞增殖、凋亡及尿生殖褶的融合.     

邻苯二甲酸二丁酯诱导雄性大鼠发生尿道下裂的分子作用机制

目的探讨邻苯二甲酸二丁酯（DBP）孕晚期染毒诱导雄性大鼠发生尿道下裂的分子作用机制。方法雌鼠怀孕（GD）第14—18天，每天分别灌胃予大豆油，DBP500或每日800mg／kg体重，雄性仔鼠出生后（PND）第1天，鉴别出DBP染毒组中发生尿道下裂的雄性仔鼠，分组为雄性仔鼠对照组（A组），每日500mg／kg体重（H）（B组）和每日800mg／kg体重（H）（C组）。用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测阴茎组织中Shh，骨形态发生蛋白4（Bmp4）和雄激素受体（Ar）mRNA表达水平。用Westernblot测量阴茎组织中Ar蛋白表达水平。用放射免疫分析法测定血清睾酮（T）水平。结果B组在mRNA（Shh，Ar）表达水平和血清睾酮水平较对照组有明显的降低（P〈0．05），C组在mRNA（Shh，Bmp4，Ar）和蛋白（Ar）表达水平以及血清睾酮水平都较对照组有明显的降低（P〈0．05）。结论DBP通过对生殖结节（GT）生长发育早期的Shh信号系统，以及晚期的雄激素信号系统发生作用而影响GT的生长发育，诱导尿道下裂的发生。     

转录激活因子3在糖皮质激素与邻苯二甲酸二丁酯联合作用致大鼠尿道下裂发生中的表达变化

目的 利用糖皮质激素与邻苯二甲酸二丁酯(DBP)联合作用致大鼠尿道下裂,观察转录激活因子3(ATF3)在正常大鼠生殖结节(GT)与不同严重程度尿道下裂大鼠生殖结节中的差异表达,并探讨ATF3在尿道下裂发生中的作用机制.方法 将SD孕鼠加只随机均分为4组,在妊娠14～18 d(GD14～18)分别给予:A组:大豆油灌胃2 ml/d;B组:地塞米松(DXM)0.1 mg/(kg·d)皮下注射;C组:DBP 700 mg/(kg·d)灌胃;D组:DXM 0.1 mg,/(kg·d)皮下注射加DBP 700 mg/(kg·d)灌胃.GD19将各组孕鼠处死剖腹统计雄性仔鼠出生体质量(BW)及肛门生殖器间距离(AGD),取雄性仔鼠生殖结节,运用免疫印迹法和免疫组织化学方法分析ATF3的表达.结果 DXM单独作用于孕鼠仅表现为仔鼠BW下降,但与DBP组合作用却能显著增强DBP的致畸作用,导致雄性仔鼠BW及AGD/BW明显减少.ATF3在A组的蛋白相对表达量为0.351±0.012,B组为0.336±0.015,C组为0.603±0.014,D组为0.851±0.016,C组或D组与A组,以及C组与D组之间的差异均有统计学意义(P＜0.05);免疫组织化学结果显示ATF3主要定位于生殖结节的尿道上皮和侧翼间质,C组和D组免疫组织化学染色强度明显强于A组,而D组染色强于C组.结论 DXM联合DBP进一步增强了DBP的致畸作用,提示尿道下裂的发生是环境中多因素协同作用的结果,ATF3在对照组与实验组生殖结节中的表达有明显变化,且随着尿道下裂程度的加重而表达增高,ATF3的高表达影响了生殖结节的发育及尿生殖褶的融合,这可能是尿道下裂发生的机制之一.

Abstract：

Objective To verify the differential expression of ATF3 in the genital tubercle (GT) of rats with hypospadias induced by maternal exposure to Di-n-butyl phthalate (DBP) or DBP + dexamethasone (DXM) in order to further explore the mechanism of hypospadias. Methods Forty pregnant SD rats were randomly divided into four groups which were given: group A, soybean oil oral gavage 2 ml/day;DBP (700 mg/kg gavage) + DXM (0. 1 mg/kg sc-injection) during gestational day (GD) 14-18. Pregnant rats were killed at GD 19, birth weight (BW) and anogenital distance (AGD) were recorded in the fetal rats, GT was harvested to verify the expression of ATF3 by Western blotting and immunohistochemistry. Results DXM alone had no effect except to reduce BW but could increase the teratogenic effect of DBP when combined with DBO. The BW and AGD/BW in group D were significantly lower than in group C. The expression of ATF3 had statisticall significant difference between groups C or D and group A, as well as between groups C and D (P ＜ 0. 05). ATF3 was mainly located in the urethral epithelium and mesenchyme. Conclusion These results suggests that exposure to common environmental chemicals in combination with environmental endocrine disrupters may increase the risk of male reproductive abnormalities,such as hypospadias. Up-regulation of ATF3 may affect urethral fold fusion, and then lead to the occurrence of hypospadias.     

转录激活因子3在糖皮质激素与邻苯二甲酸二丁酯联合作用致大鼠尿道下裂发生中的表达变化

Objective To verify the differential expression of ATF3 in the genital tubercle (GT) of rats with hypospadias induced by maternal exposure to Di-n-butyl phthalate (DBP) or DBP + dexamethasone (DXM) in order to further explore the mechanism of hypospadias. Methods Forty pregnant SD rats were randomly divided into four groups which were given: group A, soybean oil oral gavage 2 ml/day;DBP (700 mg/kg gavage) + DXM (0. 1 mg/kg sc-injection) during gestational day (GD) 14-18. Pregnant rats were killed at GD 19, birth weight (BW) and anogenital distance (AGD) were recorded in the fetal rats, GT was harvested to verify the expression of ATF3 by Western blotting and immunohistochemistry. Results DXM alone had no effect except to reduce BW but could increase the teratogenic effect of DBP when combined with DBO. The BW and AGD/BW in group D were significantly lower than in group C. The expression of ATF3 had statisticall significant difference between groups C or D and group A, as well as between groups C and D (P ＜ 0. 05). ATF3 was mainly located in the urethral epithelium and mesenchyme. Conclusion These results suggests that exposure to common environmental chemicals in combination with environmental endocrine disrupters may increase the risk of male reproductive abnormalities,such as hypospadias. Up-regulation of ATF3 may affect urethral fold fusion, and then lead to the occurrence of hypospadias.     

转录激活因子3在糖皮质激素与邻苯二甲酸二丁酯联合作用致大鼠尿道下裂发生中的表达变化

Objective To verify the differential expression of ATF3 in the genital tubercle (GT) of rats with hypospadias induced by maternal exposure to Di-n-butyl phthalate (DBP) or DBP + dexamethasone (DXM) in order to further explore the mechanism of hypospadias. Methods Forty pregnant SD rats were randomly divided into four groups which were given: group A, soybean oil oral gavage 2 ml/day;DBP (700 mg/kg gavage) + DXM (0. 1 mg/kg sc-injection) during gestational day (GD) 14-18. Pregnant rats were killed at GD 19, birth weight (BW) and anogenital distance (AGD) were recorded in the fetal rats, GT was harvested to verify the expression of ATF3 by Western blotting and immunohistochemistry. Results DXM alone had no effect except to reduce BW but could increase the teratogenic effect of DBP when combined with DBO. The BW and AGD/BW in group D were significantly lower than in group C. The expression of ATF3 had statisticall significant difference between groups C or D and group A, as well as between groups C and D (P ＜ 0. 05). ATF3 was mainly located in the urethral epithelium and mesenchyme. Conclusion These results suggests that exposure to common environmental chemicals in combination with environmental endocrine disrupters may increase the risk of male reproductive abnormalities,such as hypospadias. Up-regulation of ATF3 may affect urethral fold fusion, and then lead to the occurrence of hypospadias.     

邻苯二甲酸二丁酯致尿道下裂大鼠发育异常和阴茎病理学改变研究

目的邻苯二甲酸二丁酯（DBP）孕晚期染毒诱导子代雄鼠尿道下裂发生和探讨DBP致尿道下裂雄鼠发育异常和阴茎病理学改变。方法雌鼠怀孕14～18d，每天分别灌胃给予大豆油（A组），DBP500（B组）、800（C组）、1200（D组）mg／kg体重，分娩后统计仔鼠数和雄仔鼠体重。出生后（PND）7d测量雄仔鼠肛门生殖器距离（AGD），观察尿道下裂发生率和尿道下裂阴茎病理学改变。PND70,对尿道下裂雄仔鼠称重后解剖，评价发育情况。结果C组仔鼠数和雄仔鼠体重明显减少；D组出现孕鼠死亡和零产仔；尿道下裂仅C组发生。发生率为36．5％。PND7，B、C组雄仔鼠AGD和A组相比明显减小。阴茎连续性病理切片显示典型尿道下裂改变。解剖得尿道下裂雄仔鼠肝、肾、前列腺、睾丸、附睾脏器系数与A组相比明显减小，脑垂体脏器系数明显增大。结论800mg／kg体重DBP孕晚期染毒能高诱导雄仔鼠尿道下裂发生，DBP不仅损害雄仔鼠生殖系统，还引起发育异常。     

X染色体开放读码框架6在邻苯二甲酸二丁酯致雄性大鼠尿道下裂发生中的表达

目的 观察X染色体开放读码框架6(CXorf6)在邻苯二甲酸二丁酯(DBP)致大鼠尿道下裂发生中的作用.方法 于妊娠14～18 d(GD14～18)实验和对照组各10只孕鼠分别给予DBP 800 mg/(kg·d)和豆油2 ml/d灌胃,GD19剖宫产统计尿道下裂发生率,免疫印迹法和免疫组织化学法分析两组子鼠睾丸中CXorf6的表达.结果 尿道下裂仅实验组发生,发生率为40.7％;CXorf6在尿道下裂组的相对表达量为0.323±0.014(n=10),对照组为0.706±0.016(n=10),差异有统计学意义(P＜0.05);CXorf6主要定位于睾丸间质和支持细胞,尿道下裂组CXorf6着色细胞数量减少,染色强度弱于对照组.结论 DBP通过干预CXorf6的表达以影响睾丸的发育及雄激素的产生而导致尿道下裂的发生.     

邻苯二甲酸二丁酯诱导大鼠尿道下裂发生的阴茎组织差异蛋白质组分析

我们通过比较邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导尿道下裂与正常大鼠阴茎组织蛋白表达的差异，为阐明DBp导致尿道下裂的作用机制提供依据。[第一段]     

波形蛋白在邻苯二甲酸二丁酯诱导大鼠尿道下裂中的表达研究

目的 利用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)胚胎晚期暴露导致子代SD胎鼠发生尿道下裂的动物模型,检测波形蛋白(Vimentin)在尿道下裂与正常雄性胎鼠阴茎组织中的差异表达,以进一步探讨DBP诱导尿道下裂发生的作用机制.方法 妊娠14～18d SD大鼠20只,随机分为两组,实验组和对照组分别给予DBP和大豆油800mg/(kgod)灌胃,在妊娠19d (GD19),提取雄性胎鼠阴茎组织,用免疫印迹法检测Vimentin 蛋白的表达,用免疫组织化学方法分析其定位及染色情况.结果 Vimentin蛋白在尿道下裂雄性胎鼠中的相对表达量为0.583±0.031 (n =10),在对照组的相对表达量为0.702±0.054 (n =10),差异有统计学意义(P＜0.05).Vimentin蛋白主要定位于尿道上皮细胞,尿道下裂胎鼠染色强度较对照组明显减弱.结论 孕晚期大鼠暴露于DBP后改变了雄性胎鼠尿道组织中Vimentin的表达,影响了尿道上皮细胞的迁移和尿生殖褶的融合,这可能是尿道下裂发生的原因之一.     

邻苯二甲酸二丁酯导致雄性大鼠子鼠尿道下裂畸形及其机制研究

目的:邻苯二甲酸二丁酯(DBP)孕晚期染毒诱导雄性SD大鼠子鼠发生尿道下裂畸形,并进一步探讨DBP致雄性子鼠发生尿道下裂的分子作用机制。方法:孕鼠20只,怀孕14~18 d,随机分为对照组和DBP染毒组,每天分别予大豆油及DBP 750 mg/kg灌胃。出生后(PND)1 d,统计雄性子鼠中尿道下裂的发生率,观察尿道下裂雄性子鼠生殖结节的病理学改变。放射免疫法检测血清雄激素水平,实时荧光定量PCR和Western印迹检测生殖结节中雄激素受体(AR)、音猬因子(Shh)、骨形态发生蛋白4(Bmp4)和成纤维细胞成长因子8(Fgf8)的mRNA和蛋白表达水平。结果:对照组中无尿道下裂发生,DBP染毒组中雄性子鼠尿道下裂发生率为43.6%,病理学检查发现生殖结节典型的尿道下裂畸形。尿道下裂雄性子鼠的血清雄激素水平[(0.49±0.05)ng/ml]较对照组[(1.12±0.05)ng/ml]明显降低(P0.05),生殖结节中AR、Shh、Bmp4和Fgf8基因的mRNA水平(0.50±0.05、0.65±0.07、0.42±0.05、0.46±0.04)较对照组(1.00±0.12、1.00±0.15、1.00±0.13、1.00±0.12)明显降低(P0.05),蛋白水平(0.34±0.05、0.51±0.07、0.43±0.05、0.57±0.04)较对照组(1.00±0.09、1.00±0.12、1.00±0.11、1.00±0.13)明显降低(P0.05)。结论:孕晚期DBP染毒可以导致雄性子鼠发生尿道下裂畸形。DBP通过降低雄性子鼠血清雄激素水平和生殖结节中AR、Shh、Bmp4、Fgf8基因的表达,影响生殖结节的正常发育,是DBP导致尿道下裂畸形发生的可能机制。     

邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物MEHP对幼鼠睾丸组织TGF-β1表达和端粒酶活性的影响

目的:观察邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯(MEHP)对幼鼠睾丸组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达和端粒酶活性的影响,探讨DEHP和MEHP损害生精功能可能的机制。方法:生后2周龄的Wistar雄性幼鼠96只,随机分8组,每组12只。随机选择1组行生理盐水[0.9%NS0.2 ml/(kg.d),喂养3周]灌胃,作为正常对照组(NC组);再选1组行环磷酰胺[CTX 100 mg/(kg.d),喂养1周]灌胃,作为阳性对照组(PC组);余各组分别用DEHP、MEHP按低剂量[100 mg/(kg.d),喂养3周]、中剂量[200 mg/(kg.d),喂养2周]、高剂量[300 mg/(kg.d),喂养1周]灌胃制作动物模型。观察不同时期、不同剂量下睾丸组织精子形态变化,光镜下计数精子头部及畸形率;应用免疫组化SABC法及RT-PCR法检查睾丸组织TGF-β1的表达,并测定面密度;ELISA法检查睾丸组织中端粒酶活性。结果:①睾丸组织内精子形态变化:用药组精子数量减少,出现精子断头、无钩、双尾等畸形精子;在光镜下精子计数,与NC组比较,用药各组精子头部显著减少(P<0.05),畸形率增加(P<0.05),但高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②睾丸组织TGF-β1的表达变化:NC组低表达,DEHP及代谢产物MEHP染毒各组生精细胞内表达增多,PC组大量表达,阳性细胞呈黄褐色,主要分布于胞膜及胞质。NC组面密度为0.156 0±0.003 5、TGF-β1mRNA为1.51±0.20,PC组面密度为0.534 0±0.003 1、TGF-β1 mRNA为8.43±1.75;用药的DEHP组面密度均值为0.289 0±0.003 6、TGF-β1 mRNA为3.83±1.57,MEHP组面密度均值为0.284 0±0.003 1、TGF-β1 mRNA为3.51±1.41,用药各组与NC组、PC组比较差异有统计学意义(P<0.01),但高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05);③睾丸组织中端粒酶活性:与NC组比较,用药各组睾丸组织中端粒酶活性下降(P<0.05),高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DEHP及代谢产物MEHP对幼鼠生精功能有明显损害,其损害机制可能与DEHP及代谢产物MEHP诱导睾丸组织TGF-β1的表达水平升高、端粒酶活性降低有关。     

先天性尿道下裂和单纯性阴茎下曲患者阴茎皮肤组织中雄激素受体表达研究

目的观察先天性尿道下裂和单纯性阴茎下曲患者阴茎皮肤组织中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达情况,探讨其在不同程度尿道下裂和阴茎下曲中的表达特征及规律。方法以2005年8月-2007年1月行矫正术的25例先天性尿道下裂和4例单纯性阴茎下曲患者为研究对象,采集阴茎背侧包皮、尿道口腹侧皮肤和尿道板组织。尿道下裂患者年龄1岁11个月～19岁,平均3岁7个月;阴茎下曲患者年龄3岁6个月～16岁,平均7岁1个月。以18例行包皮环切术患者的正常背、腹侧包皮作为对照。免疫组织化学染色观察并检测标本AR的表达水平和分布情况,行统计学分析。结果先天性尿道下裂、单纯性阴茎下曲和正常包皮组织中均有AR表达。正常阴茎背、腹侧包皮AR表达核阳性细胞率分别为62.94%±5.40%、62.87%±5.33%;先天性尿道下裂阴茎背侧包皮、尿道口腹侧皮肤及尿道板组织分别为59.00%±3.75%、58.46%±4.14%、52.30%±3.53%,AR表达均低于正常背、腹侧包皮(P<0.05);且尿道板组织AR表达显著低于自身背、腹侧包皮皮肤(P<0.05),自身背、腹侧包皮皮肤间差异无统计学意义(P>0.05)。与正常背、腹侧包皮比较:远、中段型尿道下裂阴茎背侧包皮AR表达差异无统计学意义(P>0.05),但尿道板组织AR表达显著降低(P<0.05);近段型背侧包皮、尿道口腹侧皮肤及尿道板组织AR表达均降低(P<0.05);下曲<45°者阴茎背侧包皮、尿道口腹侧皮肤AR表达差异无统计学意义(P>0.05),下曲≥45°者比较差异均有统计学意义(P<0.05),两组尿道板组织AR表达均降低(P<0.05)。单纯性尿道下曲患者阴茎背侧包皮、尿道口腹侧皮肤及尿道板组织AR表达核阳性细胞率分别为59.69%±2.73%、55.71%±1.67%、51.92%±1.87%,与正常包皮组织比较,AR表达呈减弱趋势。结论先天性尿道下裂及单纯性阴茎下曲阴茎皮肤组织AR表达低于正常阴茎,尿道板组织AR缺陷突出。     

邻苯二甲酸二丁酯诱导尿道下裂大鼠模型的建立及其作用机制

目的用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)诱导建立尿道下裂大鼠模型并在分子水平研究其导致尿道下裂的作用机制。方法将孕鼠在怀孕第12～19天用DBP(500mg/kg体重)连续每天灌胃建立仔代雄鼠尿道下裂模型，并将孕鼠在第19天行破宫产取仔代雄鼠的睾丸组织，用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测睾酮合成过程中限速酶细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3p羟基类固醇脱氢酶(3p-HSD)和细胞色素P45017α-羟化酶(P450c17)的mRNA含量水平，与正常对照组进行比较。结果DBP诱导的尿道下裂组胎鼠睾丸组织中P450scc、3β-HSD和P450c17的基因表达水平较正常对照组均有不同程度的下降，两组间差异比较均有统计学意义(P＜0．05)。结论DBP通过在性发育期干扰仔代雄鼠睾丸组织中睾酮的生物合成途径，降低了睾酮水平，导致大鼠出生后尿道下裂的出现。